antecedentes de biologia celular

7/22/2019 Antecedentes de Biologia Celular

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COMPETENCIA GENRICA:Resuelve problemas biolgicos a

partir de los principios de la biologacelular vinculados con los avancescientficos y tecnolgicos en un

contexto personal y social.


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COMPETENCIA PARTICULAR: Emplea mtodos

y tcnicas citolgicas para caracterizar lasclulas de los seres vivos.

RAP 1: Maneja sistemticamente elmicroscopio compuesto para su uso en casosprcticos


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LOS SERES VIVOS CONSTITUYEN UN SISTEMAALTAMENTE COMPLEJO, CAPAZ DE METABOLIZARMEDIANTE EL INTERCAMBIO DE MATERIA Y ENERGA

CON EL MEDIO QUE LOS RODEA, DEAUTORREGULARSE, REPRODUCIRSE, ADAPTARSE,RESPONDER A LOS ESTMULOS DEL AMBIENTE,CRECER Y HASTA MOVERSE, CARACTERSTICAS QUESOLO PUEDEN IDENTIFICARSE A PARTIR DEL NIVELCELULAR, PUES STA ES LA UNIDAD DEINTEGRACIN MS PEQUEA QUE PUEDE VIVIR CONINDEPENDENCIA.


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TEORA CELULAR ROBERTO HOOKE 1665) SE LE ATRIBUYE HABER UTILIZADO POR PRIMERA VEZ EL TRMINO CLULA.

ANTON VAN LEEUWENHOECK 1668) OBSERV CLULAS VIVAS, LO QUE REVEL UN MUNDO CULTO LLRNO DE

ORGANISMOS MICROSCOPICOS MOVILES PERFECCION EL TALLADO DE LAS LENTES CON LAS CUALES OBSERV

PEQUEOS ANIMALES.
http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Jan_Verkolje_-_Antonie_van_Leeuwenhoek.jpghttp://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:HOOKE_Robert.jpghttp://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:RobertHookeMicrographia1665.jpg


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BRISSEAU MIRBEL 1800) ESTABLECI DEFINITIVAMENTE EL TRMINO DE CLULA EN HONOR DE

HOOKE.

ROBERT BROWN 1831) REPORT EL DESCUBRIMIENTO DE UNA ESTRUCTURA RODEADA EN LAS

CLULAS DE LAS EPIDERMIS DE LAS ORQUDEAS: NUCLEO CELULAR.
http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Brown.robert.jpghttp://commons.wikimedia.org/wiki/File:Charles-Fran%C3%A7ois_Brisseau-Mirbel.jpg


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PERO TUVIERON QUE PASAR DOS SIGLOS, HASTA 1938 SE ELABORARA LATEORA CELULAR DE LA CONSTITUCIN DE LOS SERES VIVOS.

EL BOTNICO MATTHIAS SHLEIDENY EL ZOOLOGO THEODOR SCHWANN.

POSTULADOS DE LA TEORA : 1.-TODOS LOS ORGANISMOS ESTN FORMADOS DE CLULAS.

2.- LA CLULA ESLA UNIDAD FUNCIONAL DE LOS SERES VIVOS.

3.-LA CLULA ES LA UNIDAD DE ORIGEN.
http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:TheodorSchwann.jpghttp://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Matthias_Jacob_Schleiden.jpg


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Hasta el siglo XIX el microscopio pticocomenz a ser ampliamente utilizado para laobservacin de clulas.

Y esto lleva a la aparicin de la BiologaCelular

Y su nacimiento est marcado por dospublicaciones: la del btaninco Matthias

Schleiden en 1938 y del zoologo TheodorSchwann en 1939


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-Louis Pasteur - Gregorio Mendel -


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El microscopio, su principal propsito es elaumento visual, mediante objetivos quefacilitan al ojo humano la formacin de unaimagen ntida en la retina cuando el ojo est

pticamente cerca de un objeto para podervisualizarlo con claridad.


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PRESERVACIN DE CULTIVOS CONUNA CAPA DE ACEITE MINERAL


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Permite aumentar las imgenes de las clulas hasta1.000 veces y resolver detalles de tan solo 0.2.

Requiere de tres elementos para visualizar: 1.-Se debe enfocar una luz brillante sobre el

espcimen, mediante las lentes del condensador. 2.-El espcimen debe estar cuidadosamente

preparado, para permitir que lo atraviese. 3.-Se debe alinear un sistema apropiado de lentes.


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Sistema ptico OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo. OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta. CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin. DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

Sistema mecnico SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin. CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular,

..

REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar losobjetivos.

TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y micromtrico queconsigue el enfoque correcto.


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1.-Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo ybajar la platina completamente. Si el microscopio se recogicorrectamente en el uso anterior, ya debera estar en esascondiciones.

2.-Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzasmetlicas.

3.-Comenzar la observacin con el objetivo de 10x (ya est enposicin) o colocar el de 40 aumentos (40x)

3.-Para realizar el enfoque: Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin,

empleando el tornillo macromtrico. Esto debe hacerse mirandodirectamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo deincrustar el objetivo en la preparacin pudindose daar alguno deellos o ambos.

Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamenteel objetivo de la preparacin con el tornillo macromtrico y, cuandose observe algo ntida la muestra, girar el micromtrico hastaobtener un enfoque fino.


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4.-Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada ysuele ser suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoquefino. Si al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferiblevolver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin . El objetivo de40x enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que

ocurran percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan lasprecauciones anteriores.

5.-Empleo del objetivo de inmersin: -Bajar totalmente la platina. -Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que

nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que colocar el

aceite. -Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino

entre ste y el de. -Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz. -Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de

inmersin.

-Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que lalente toca la gota de aceite.


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-Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajoentre el objetivo de inmersin y el riesgo de accidente es muy grande.

-Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya nose puede volver a usar el objetivo 100x sobre esa zona, pues se mancharade aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina

y repetir la operacin. -Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se

coloca el objetivo de menor aumento girando el revlver. En estemomento ya se puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se deberetirar con el objetivo de inmersin en posicin de observacin.

-Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel

especial .


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MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONESAl finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin deobservacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del borde dela misma y dejarlo cubierto con su funda.

Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su fundapara evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, sedebe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.

Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavementecon un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica.

No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio.

Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en elobjetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos recomendable).

En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si elaceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla dealcohol-acetona o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplicanestos disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin.

No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico,platina, revlver y condensador).

El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la

preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivoagarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a travs delocular.

Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido,secarlo.

Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica y, alacabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos


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Tabla 3.1. AumentoTotal

Microscopio

Lenteobjetiv

o

Lenteocular

Ampliacin total

Microscopios pticos

Debil seco 10x x 10x = l00x

Fuerte seco 40x x 10x = 400x

Aceite de inmersin 100x

x 10x = 1000x


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El diseo de este instrumento, tambin llamado lupabinocular, pues se utiliza para ofrecer una imagenestereoscpica(3D) de la muestra. Para ello, y como ocurreen la visin binocularconvencional, es necesario que los dosojos observen la imagen con ngulos ligeramente distintos.Obviamente todos los microscopios estereoscpicos, pordefinicin, deben ser binoculares (con un ocular para cadaojo), por lo que a veces se confunden ambos trminos.

Existen dos tipos de diseo, denominados respectivamenteconvergente(o Greenough) y de objetivo comn(o Galileo).

Es utilizado en botnica, disecciones de animales, etc.
http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Imagen_estereosc%C3%B3pica&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Imagen_estereosc%C3%B3pica&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/wiki/Visi%C3%B3n_binocularhttp://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Objetivo_convergente&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Objetivo_com%C3%BAn&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Objetivo_com%C3%BAn&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Objetivo_com%C3%BAn&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Objetivo_com%C3%BAn&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Objetivo_convergente&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/wiki/Visi%C3%B3n_binocularhttp://es.wikipedia.org/wiki/Visi%C3%B3n_binocularhttp://es.wikipedia.org/wiki/Visi%C3%B3n_binocularhttp://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Imagen_estereosc%C3%B3pica&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Imagen_estereosc%C3%B3pica&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Imagen_estereosc%C3%B3pica&action=edit&redlink=1


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Los colorantes fluorescentes utilizados para teir las clulas, sedetectan con ayuda de un microscopio de fluorescencia. Este essimilar al microscopio ptico, excepto que las luz atraviesa dossistemas de filtro.

1.- Filtra la luz antes de que alcance el espcimen y solo deja pasarlas longitudes de onda, que excitan al colorantes fluorescenteusado.

2.-Bloquea esta luz y solo deja pasar las longitudes de ondaemitidas por el colorante fluorescente. Los objetos teidos se ven decolor brillante sobre un fondo oscuro.

Fluorocromo: son aquellas que imparten la fluorescencia


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Son numerosas las aplicaciones de la

microscopa de fluorescencia, notablementeen biologa y medicina.

Marcaje de molculas en clulas y tejidospara su caracterizacin e identificacin.

Estudio de clulas normales y patolgicas.

Estudios inmunolgicos. Mineraloga.


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Es en un principio similar a un microscopio de ptico, peroemplea un haz de electrones en lugar de un haz de luz, ybobinas magnticas para enfocar el haz en lugar de lentes decristal, el espcimen que se coloca en el vaco, debe ser muydelgado. Por lo general, el contraste se introduce tiendo el

espcimen con metales pesados electrodensos que absorbeno dispersan localmente electrones y se eliminan del hazcuando este atraviesa la muestra . Tiene un aumento til dehasta un milln de veces.

Utilizado en muestras biolgicas . Ampliacin de 2 nm.


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El campo claro es la forma ms simple de microscopa donde la luz pasa atravs de o reflejada del espcimen. La iluminacin no se altera poraditamentos que cambien las propiedades de la luz (como polarizadores ofiltros).

APLICACIONES: En aplicaciones biolgicas, las observaciones de campo claro son usadas

ampliamente para tinciones o pigmentos naturales o especmenes altamentecontrastados montados en un porta objetos. El espcimen es iluminadodesde abajo y observado desde arriba. El espcimen aparece brillante, peroms oscuro que el brillante fondo. Esta tcnica es ampliamente usada enpatologa para ver secciones de tejidos fijos o pelculas celulares/frotis. Elcampo claro no es muy til para clulas vivas sin teir o secciones de tejidosin teir, como en la mayora de los casos, la luz pasa a travs de muestras

transparentes o traslucida con poca o sin definicin de la estructura. La luz es reflejada desde muestras opacas y esto es explotado en los

ambientes industriales donde las imgenes de campo claro son usadas parala inspeccin de obleas (WAFERS) y tarjetas de cristal lquido.

Resolucin de 1000 a 3000


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TIPOS DE MICROSCOPIA AMPLIACIN MXIMATIL ASPECTO DE LA MUESTRA APLICACIONES TILESCampo claro 1000-2000 Especmenes teidos o sin

teir, las bacteriasgeneralmente, aparecen alcolor del colorante

Para aspectosmorfolgicos, gruesos debacterias, levaduras,mohos, algas y protozoos

Campo oscuro 1000-2000 Generalmente sin teiraparecen brillantes,iluminadas sobre un fondo

oscuro

Para microorganismos queexhiban algn aspectomorfolgico caracterstico

en vivo y en suspensin enun liquido, por ejemploespiroquetas

Fluorescente 1000-2000 Brillante y coloreado; colordel colorante fluorescente

Tcnicas de diagnostico enlas que el colorantefluorescente revela suidentidad

Fase de contraste 1000-2000 Grados variables de

oscurecimiento

Para examen de

estructuras celulares enclulas vivas deorganismos mas grandes:levaduras, algas, protozoosy algunas bacterias

Electrnico 200,000-400,000 Se ven en pantallafluorescente

Examen de virus y de laestructura de las clulasmicrobianas


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Para proporcionar un material adecuado para elexamen microscpico se siguen dos tcnicasgenerales.

1.- Suspensin de los organismos en un liquido

2.- Hace uso de pelculas o frotes desecados, fijosy teidos de la muestra.


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- Preparacin hmeda. Se realiza colocando una gota de lasuspensin de microorganismos entre un porta y uncubreobjetos.Se observa directamente.

- Preparacin fijada. Se coloca una suspensin homognea de

microorganismos en una gota de agua sobre elportaobjetos y se fija (mediante calor o agentes qumicos) ydespus se tien mediante diferentes tcnicas. Estaspreparaciones se observan sin cubreobjetos y, habitualmente,con objetivos de inmersin.


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Para observar las caractersticas morfolgicas de las bacterias , laspreparaciones fijas y teidas son las que se usan con mayor frecuencia.

Las ventajas de este procedimiento:

A) Las clulas son visibles ms claramente.

B) En las preparaciones teidas las diferencias entre clulas de especiesdiferentes y dentro de la misma especie se demuestran mediante soluciones

colorantes apropiadas. Los pasos esenciales en la preparacin de un frote fijo y teido:

A) Hacer el frotis

B) La fijacin

C) La aplicacin de una o ms colorantes.

Coloraciones microbiolgicas

Acido

Neutro

Bsico.


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Esta tcnica diferencial es una de las uso ms comn en microbiologa. Esteprocedimiento , el frote bacteriano teido se somete a las solucionessiguientes en el orden que se indica: cristal violeta, solucin de yodo, alcohol

(decolorante) y safranina . Pertenecen a dos grupos: bacterias grampositivas, que retienen el cristal

violeta y aparece color violeta profundo; las bacterias gram-negativas quepierden el cristal violeta y por el contraste de la safranina aparecen rojas.

Soluciones aplicadas porsu orden Gram-positivas Gram-negativas1.-Cristal violeta Las bacterias se tien en

violetaLas bacterias se tien envioleta

2.-Solucin yodo Complejo CV-I se formadentro de las bacterias;las bacteriaspermanecen violeta

Complejo CV-I se formadentro de las bacterias,las bacteriaspermanecen violeta

3.- Alcohol Las paredes celulares sedeshidratan, hayretraccin de los poros ,la permeabilidaddisminuye, el complejoCV-I no puede salir de labacteria , permanecenvioleta

Extraccin de lpidos delas paredes celulares,aumento de porosidad,CV-I sale de la bacteria

4.- Safranina Las bacterias noafectadas permanecenvioleta

Las bacterias toman estecolorante y se tien derojo


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CARACTERISTICAS GRAMPOSITIVAS GRAMNEGATIVASComposicin de lapared celular

Baja en lpidos(1-4%) Alta en lpidos(11-22%)

Susceptible a lapenicilina

Mas susceptible Menos susceptible

Inhibicin porcolorantes bsicos; ej:azul violeta

Inhibicin notable Menor inhibicin

Necesidades nutritivas Muchas especiesrealmente complejas

Realmente simples

Resistencia a ladesintegracin pormedios fijos

Mas resistentes Menos resistentes


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Otro mtodo de coloracin diferencial de ampliouso, sobre todo para el gnero Mycobacterium, enla tincin para cidorresistencia. La preparacinbacteriana fijada se somete a las soluciones

siguientes en el orden que se seala: fucsinafenicada(calentada),cido alcohol y azul demetileno.

Las bacterias teidas por este mtodo se clasificancomo cidorresistentes si retienen la fucsinafenicada y aparecen rojas.

No cidorresistentes si el cido alcohol las decoloray se tien de azul de metileno


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Es un mtodo habitual para el examen de frotis sanguneos, cortes histolgicos y otro tipo de muestrasbiolgicas. Este mtodo tiene utilidad sobre todo para poner de manifiesto las rickettsiaslocalizadas dentro delas clulas huspedes

Hidratar.

Aplicar solucin de trabajo de Giemsa

Deshidratar con alcohol absoluto

Aclarar con xilol

Estos poliorganismos adquieren una coloracin diferencial y se ven dentro del citoplasma de la clula husped.La tcnica de Giemsa est formada por varios colorantes: los tintes neutros utilizados combinan el azul demetileno como tinte bsico y la eosina como tinte cido, lo que da una amplia gama de colores

azul II-eosina, 3 g; azulII, 0.8 g; glicerina, 250 ml; alcoholmetlico. La preparacin se seca al aire y se fijacon alcoholabsoluto. Se aade una gotadel colorantea 1 ml de aguay se cubre la preparacin durante 10minutos. Se lava, se seca al aire
http://es.wikipedia.org/wiki/Frotishttp://es.wikipedia.org/wiki/Cortes_histol%C3%B3gicoshttp://es.wikipedia.org/wiki/Rickettsiahttp://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedia/3333/azulhttp://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedia/1396/alcoholhttp://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedia/1396/alcoholhttp://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedia/10991/gotahttp://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedia/5467/colorantehttp://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedia/1049/aguahttp://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedia/1263/airehttp://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedia/1263/airehttp://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedia/1049/aguahttp://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedia/5467/colorantehttp://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedia/10991/gotahttp://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedia/1396/alcoholhttp://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedia/1396/alcoholhttp://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedia/3333/azulhttp://es.wikipedia.org/wiki/Rickettsiahttp://es.wikipedia.org/wiki/Cortes_histol%C3%B3gicoshttp://es.wikipedia.org/wiki/Cortes_histol%C3%B3gicoshttp://es.wikipedia.org/wiki/Cortes_histol%C3%B3gicoshttp://es.wikipedia.org/wiki/Frotis


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-Gota de maneval A (rojo congo) -Con un asa microbiologica tomar una pequea muestra, colocarla sobre la

gota y mezclarla, con esta hacer movimientos giratorios.

-Expander la solucin de manera que quede una pelcula delgada.

-Dejar secar a temperatura ambiente.

-Cubrir la preparacin con maneval B (fucsina)

-Lavar suavemente con agua. -Observar al microscopio, las cpsulas se observan incoloros, el espacio

intercelular de color oscuro y las clulas bacterianas de color rojo.

Bacterias con capsula: Pasteurella, klipsiella, Bacillus, Escherischia.


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Es una tcnica de tincin diferencialrpida y econmica, usada para la identificacin demicroorganismos patgenos, como M. tuberculosiso el gnero Apicomplexa (coccidiosintestinales) entre otros.

-Microorganismos ac. alcohol resistentes

-La coloracin de fucsina fenicada (1 colorante)

-Se aplica en presencia de calor(se combina con los componentes de la paredcelular).

-Se aplica alcohol cido(decolorante)Bacterias no ac. alcohol resistentes son decoloradas fcilmente, por lo que sevuelven a teir con azul de metileno.

Bacterias ac. Alcohol resistentes, color rojo.

Bacterias no ac. Alcohol resistentes, color azul
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_diferencialhttp://es.wikipedia.org/wiki/Mycobacterium_tuberculosishttp://es.wikipedia.org/wiki/Mycobacterium_tuberculosishttp://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_diferencial


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sta y la siguiente variantes son para preparaciones citolgicas.

Hacer un frotisde la muestra.

La fijacin al calor asegurar de que el frotis quede adherido al portaobjetos. Un frotis muy delgado puede darleresultados falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse del portaobjetosdurante la tincin.

Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de tincin con los extendidos hacia arriba. Nunca tia msde 12 portaobjetos a la vez.

Dejar el frotis sobre el puente de tincin.

Aplicar fucsina-fenicada.

Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5 minutos. Mantenga el calor durante este perodo.

Calentar con un mechero hasta la emisin de vapores (3-5 minutos). Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre y tia la pared celular de la bacteria. No deje que

hierva o se seque el colorante.

Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua corriente fra hasta que toda la tincin libre quede lavada.Lave suavemente de manera que el extendido no se barra del portaobjetos. Retire el exceso de agua.

Decolorar con alcohol-cido.

Cubra cada portaobjetos con la solucin decolorante, tal como alcohol cido y mantngalo sobre el portaobjetosdurante 7 minutos. Si no se decolora suficientemente, el contenido del esputo que no son bacilos TBC puedepermanecer teido. Enjuague con agua una vez ms los portaobjetos y quite el exceso de agua. Si los portaobjetos anestn rosa, aplique una cantidad adicional de la solucin decolorante de 1 a 3 minutos.

Aplicar azul de metileno (1 minuto).

Aplique la solucin de contraste, azul de metileno, durante 1 minuto.

Enjuagar con agua

Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada portaobjetos hasta drenar el exceso de agua. Finalmente,coloque cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire.

Ahora coloquele una pequeita gota de aceite de inmersin y haga la observacin al microscopio con 100 x 100
http://es.wikipedia.org/wiki/Frotishttp://es.wikipedia.org/wiki/Portaobjetoshttp://es.wikipedia.org/wiki/Portaobjetoshttp://es.wikipedia.org/wiki/Frotis


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La pared celular de las bacterias tiene una ligera carganegativa, por eso utilizamos colorantes bsicos que seadhieran a su pared y as poder observarlos, pero en el casode la tincin negativa, utilizamos un colorante cido (Tintachina o Nigrosina), de forma que las bacterias repelen el

colorante en vez de absorberlo, y por tanto veremos todo elcampo teido y veremos las bacterias como zonas brillantesen las cuales no penetr el colorante.


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Colocar en un portaobjetos una pequeacantidad de hongos.

Colocar colorante azul-lactofenol Colocar el cubreobjetos Llevar al microscopio


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Las bacterias u otros organismos que se desarrollan enmedios de laboratorio, se llaman cultivos.

Las diferentes especies de bacterias que se desarrollan en lamisma clase de medios de cultivo pueden tener aspectos muydiferentes, y por tanto el conocimiento de la apariencia, o delas caractersticas del cultivo de las sp. es til para reconocer

a ciertos tipos de bacterias.


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La poblacin microbiana de nuestro ambiente es grande y compleja. -Partes de nuestro cuerpo: cavidad bucal, conducto intestinal y la

piel, en donde se encuentran en cantidades extraordinarias. Ej: -Un simple estornudo puede dispersar de 10 000 a 100 000

bacterias. -Un gramo de bacterias fecales contiene millones de bacterias. Al igual que nuestro ambiente, aire, agua, suelo.


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El cultivo puro representa las condicionesartificiales para el desarrollo de las bacteriasy otros microorganismos y las condicionesimpuestas, mediante el manejo de

laboratorio.


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Tcnica de siembra por estras en placa y Tcnica de siembra por difusin enplaca.

Con un asa bacteriolgica, se pasa una porcin de la muestra a la superficiede un medio de cultivo hecha a base de agar y se siembra en el medio ya sea

por estras o por difusin.


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El principio de la tcnica de la placa vertida es la dilucin(adelgazamento) de la muestra en tubos conagar fundido y enfriado.

1.- Se hacen diluciones en ms de un tubo, para obtener colonias bien aisladas.

2.- El medio se mantiene al estado lquido a una temperatura de 450C para permitir que el inculo sedistribuya adecuadamente en el medio.

3.- Una vez sembrado el medio se pone en cajas, de cajas de Petri, se deja solidificar y se incuba.

Como algunos organismos quedan atrapados entre el agar, se observarn colonias tanto en lasuperficie como entre el medio cuando este solidifique.


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Se usan generalmente cuando el tipo de bacteria que queremosaislar se encuentra en muy pequeas cantidades y se desarrolla conmayor lentitud que muchas de las otras especies.


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Si el microorganismo que se busca en un cultivo mixto se encuentra enmayor cantidad que cualquiera que los otros microorganismo, es posibleobtenerlo en cultivo puro mediante una serie de diluciones en tubo. Cuandola muestra este muy diluida contendr solamente la bacteria que buscamos.


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Para poder obtener un solo microorganismo de una preparacin en gotasuspendida, se necesita equipo especial, como el micromanipulador,adaptado a un microscopio. Este aparato permite al operador controlar losmovimientos de una micropipeta dentro de una gota pendiente de talmanera que se pueda tomar una sola clula dentro del tubo y pasarla a unmedio de cultivo.


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RESIEMBRA PERIDICA A MEDIOS FRESCOS.

Los cultivos de bacterias se pueden mantener en tubos de medio en los quehan sido cultivados mediante pasos peridicos a medios frescos.

Cuando se va a emplear este procedimiento para mantener una coleccin decultivos, se deben determinar tres cosas.

1.- El medio de cultivo apropiado para usarlo con cada cultivo.

2.- La temperatura apropiada para mantener los cultivos.

3.- El tiempo que se necesita para hacer las resiembras.


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BACTERIA MEDIO TIEMPO DERESIEMBRA INCUBACINTEM 0C ALMACENAMIENTO 0CNeisseria sp. Agar Cristina

tripticasa1 mes 35 35

Bacillus sp. Agar

nutroitivo

12 meses o

mas

28 10

Pseudomonas sp.

Agarnutritivo

3 meses 28 10

Clostridiumsp.

Medio decarne cocida

6 meses oms

28 Del cuarto

Mycobacterium sp. Agar glicerol 4 meses 30 10


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Muchas bacterias se preservan biencubriendo el agar en que estn creciendocon aceite mineral estril.

PRESERVACIN DE CULTIVOS POR SECADO


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PRESERVACIN DE CULTIVOS POR SECADORPIDO EN CONGELACIN

Es el procedimiento ms eficaz para la preservacin de cultivos. Las clulas se secan rpidamente, mientras son congeladas, mediante las

siguientes etapas.

1.- La suspensin de clulas se pone en pequeos frascos que se sumergenen una mezcla de hielo seco y alcohol(-78 0C).

2.- Los frascos se conectan inmediatamente a una lnea de alta vaco , y

una vez que se termin el secado cada frasco se sella bajo condiciones devaco.


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Nitrgeno lquido(temperatura a -1980

C). Este procedimiento lasclulas se congelan con un agente protector (glicerol o dimetilsulfxidico). Los especmenes congelados se guardan enrefrigeradores con nitrgeno lquido.


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1.- Su apariencia (caractersticas de desarrollo) 2.- Crecimiento en diferentes medios de cultivo

3.-Color y olor

1.- Tipo de colonias en agar (cultivo en placa) 2.- Desarrollo en agar inclinado 3.- Desarrollo en caldo 4.- Desarrollo en gelatina por picadura


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Los medios de cultivo pueden clasificarsesegn diferentes criterios, pero los msimportantes son aquellos que se basan en: a) Su consistencia b) Su utilizacin c) Su composicin d) Su origen
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1) Medios lquidos:Son los que se presentan en este estado, denominndose por esta

razn caldos. El medio lquido ms utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuestoprincipalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmentecuando se pretende la obtencin de una suspensin bacteriana de una determinadaconcentracin.

2) Medios slidos:Se preparan a partir de los medios lquidos, agregndoles un agentegelificante. Los ms utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una protena animalobtenida de los huesos. Agar-agar:Es un polmero de azcares obtenido de algasmarinas. La proporcin de agarosa a agaropectina en el agar vara segn el alga deorigen.

3) Medios semislidos:Se preparan a partir de los medios lquidos, agregando a stosun agente solidificante en una proporcin menor que para preparar medios slidos. Unode sus usos es la investigacin de la movilidad de las bacterias


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1) Medios comunes:Son aquellos que poseen los componentes mnimos para que puedaproducirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales. Elmedio ms conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar comn, que resulta de laadicin de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agartripticase de soja, etc.

2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, adems de las sustancias nutritivasnormales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento demicroorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otrosproductos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichosfactores. En ocasiones es posible aadir suplementos artificiales a los medios paraproducir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc)El gonococo, porejemplo, necesita cistina y cistena para su crecimiento. Estas sustancias son aportadaspor la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate).

3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertasbacterias contenidas en una poblacin polimicrobiana. El fundamento de estos mediosconsiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbianaespecfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza parafavorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.

Cuando las sustancias aadidas a un medio selectivo impiden


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4) Medios inhibidores:Cuando las sustancias aadidas a un medio selectivo impidentotalmente el crecimiento de una poblacin microbiana, se denomina inhibidor. Losmedios inhibidores podran considerarse como una variante ms restrictiva de losmedios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por adicin desustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el desarrollode una poblacin determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey que permite elcrecimiento de los grmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Grampositivos.

5) Medios diferenciales:Se utilizan para poner en evidencia caractersticas bioqumicasque ayuden a diferenciar gneros o especies. La adicin de un azcar fermentable o unsustrato metabolizable se utilizan para este fin

6) Medios de identificacin:Son los destinados a comprobar alguna cualidad especficaque puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Estos medioshan de poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de losmicroorganismos, el sustrato especfico que vaya a ser metabolizado y el indicadorque nos muestre el resultado. El agar Kligler, el medio de Simmons y en general,cualquier medio al que se le haya aadido un elemento diferencial de unmicroorganismo.


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1) Medios complejos:Fueron los primeros utilizados, y los ms empleados se preparan apartir de tejidos animales, y ms raramente de vegetales. Su composicin no esexactamente definida, y por consiguiente no es rigurosamente constante. Esto puede

tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales, donde la reproductibilidadno podr ser exacta. En la prctica corriente estos medios dan excelentes resultados yson los ms empleados.

2) Medios sintticos: Son aquellos que contienen en su composicin exclusivamentesustancias qumicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporcionesdeterminadas, resultando un medio de composicin perfectamente definida.

3) Medios semisintticos: El gran nmero de factores de crecimiento exigidos paraciertos grmenes hace que la fabricacin de un medio sinttico para estos grmenes seaimposible o demasiado cara. En este caso se aportan los factores de crecimiento bajo laforma de un extracto orgnico complejo (extracto de levadura, extracto de tejidos,etc.).Ciertos grmenes no crecen en ningn medio por muy enriquecido que est ste,hacindolo exclusivamente en clulas vivas con unas caractersticas determinadas.

Ejemplos de este tipo son, aparte de los virus, las Chlamydias, Rickettsias, etc.


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MATERIAL CRUDO CARACTERSTICAS VALOR NUTRITIVOEXTRACTO DE CARNE EXTRACTO ACUOSO DE

CARNE DE RESCONCENTRADO ENPASTA

CARBOHIDRATOS,COMPUESTOSORGNICOSNITROGENADOS,VITAMINAS SOLUBLES ENAGUA Y SALES

PEPTONA ES EL PTODUCTO QUERESULTA DE LADIGESTIN DEMATERAILESPROTEINICOS: CARNE,CASENA Y GELATINA

FUENTE PRINCIPAL DENITRGENO; PUEDECONTENER TAMBINALGUNAS VITAMINAS YALGUNOSCARBOHIDRATOS

AGAR ALGAS MARINAS SE USA COMO AGENTESOLIDIFICANTE DE LOSMEDIOS DE CULTIVO

EXTRACTO DE LEVADURA SOLUCIN ACUOSA DELEVADURA

RICA EN VITAMINA B,NITROGENO ORGNICO.


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FORMADA POR UNA DOBLE CAPA DE MOLCULAS DE LPIDOS. ALGUNAS PROTENAS SE PUEDEN LOCALIZAR TOTALMENTE DENTRO DE LA

CAPA DE LPIDOS.

LOS CARBOHIDRATOS SE ENCUENTRAN ASOCIADOS A LAS PROTENAS YTAMBIEN A LOS FOSFOLPIDOS EN LA PARTE EXTERIOR DE LA CLULA.

FUNCIN: AISLA A LA CLULA DEL EXTERIOR.

SELECCIONA EL PASO DE SUSTANCIAS.

ALGUNAS PROTENAS ACTUAN COMO BOMBAS Y CANALES EN EL PASO DESUSTANCIAS.


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ES LA PARTE GELATINOSA DEL CITOPLASMA. CONSTITUIDA FUNDAMENTALMENTE POR AGUA, PROTENAS,

CARBOHIDRATOS ,LPIDOS, MINERALES Y RICA EN ENZIMAS.

CONTIENE DISTINTOS ORGNULOS CELULARES Y EL CITOESQUELETO(MICROTUBULOS Y MICROFILAMENTOS.

FUNCIN: FACILITA EL TRANSPORTE DE DIVERSAS SUSTANCIAS.


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ESTRUCTURA PEQUEA Y ESFERICA SITUADA EN EL INTERIOR DEL NCLEO. CONSTITUIDO POR CIERTAS REGIONES DE DETERMINADOS CROMOSOMAS Y

TIENE COMO FUNCIN LA REPLICACIN DE CIDO RIBONUCLEICO.

FUNCIN: LA PRODUCCIN Y ENSAMBLAJE DE RIBOSOMAS, PARTICIPA DEMANERA INDIRECTA EN LA SISTESIS DE PROTEINAS.


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SU FORMA PUEDE SER ESFERICA U OVOIDE.

POSEE UNA DOBLE MEMBRANA CELULAR QUE SEPARA AL CITOPLASMA DELLLAMADO NUCLEOPLASMA.

PRESENTA UNOS POROS POR LOS CUALES PASAN LAS SUSTANCIAS DELCITOPLASMA AL NCLEO Y VICEVERSA.

FUNCIN: ES EL CENTRO DE INFORMACION DE LA CLULA Y CONTIENE EL DNA.
http://images.google.com.mx/imgres?imgurl=http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/cellnucleus.jpg&imgrefurl=http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/nucleo.html&usg=__3XKmKAHkZInUWEEtByeKuewExDc=&h=270&w=300&sz=14&hl=es&start=11&tbnid=Yqlg6eDq38Y8bM:&tbnh=104&tbnw=116&prev=/images?q=NUCLEO+CELULAR&gbv=2&hl=es


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FORMADO POR VESICULAS O CISTERNAS, RODEADAS POR MEMBRANAS YCOMUNICADAS ENTRE SI Y CON LA MEMBRANA NUCLEAR Y PLASMTICA.

RER: SOBRE SU MEMBRANA EXTERNA SE UNEN LOS RIBOSOMAS.

REL: NO POSEE RIBOSOMAS.

FUNCIN:

RER: SNTESIS, ALMACENAMIENTO Y GLUCOSILACIN DE PROTENAS.

REL: SSTESIS DE LPIDOS Y ALMACENAMIENTO DE CALCIO E INTERVIENE ENEL METABOLISMO.

FUNCIONES MUY RELACIONADAS CON EL APARATO DE GOLGI.


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FORMADO POR UNA SERIE DE SACOS APLANADOS LLAMADOS CISTERNAS,REGULARMENTE DE CUATRO A SIETE EN CADA UNO.

LAS CISTERNAS RELACIONADAS CON EL NCLEO RECIBEN EL NOMBRE DECARA CIS Y LAS LOCALIZADAS MAS CERCA DEL EXTERIOR SE DENOMINANCISTERNAS DE CARA TRANS.

FUNCIN:

AGREGAR MOLECULAS DE AZUCAR A LAS PROTENAS SISTETIZADAS Y SUEMPAQUETAMIENTO Y PARA FORMAR GRANULOS DE SECRESIN YLISOSOMAS.


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SON MACROMOLCULAS COMPACTAS CON MEMBRANA.

SE PUEDEN ENCONTRAR PEGADOS AL RETICULO ENDOPLASMTICO, LIBRES OAGRUPADOS FORMANDO POLIRRIBOSOMAS.

QUIMICAMENTE FORMADOS POR PROTENAS.

FUNCIN: INTERVIENEN EN LA SSTESIS PROTEICA. SU ARN SE ORIGINA A PARTIR DEL NUCLEOLO.


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ESTRUCTURAS OVALADAS O ESFERICAS RODEADAS DE MEMBRANA.

FUNCIN: SIRVEN PARA ALMACENAR ENZIMAS DIGESTIVAS HIDROLTICAS, CAPACES DE

DESTRUIR UNA GRAN VARIEDAD DE SUSTANCIAS, COMO GRASAS, PROTENASY CIDOS NUCLEICOS, Y CONVERTIRLOS EN MOLECULAS MAS PEQUEAS QUEPUEDEN SER ASIMILADAS.

SU FUNCION ES LA DIGESTIN DEL MATERIAL ALIMETICIO QUE SE ALMACENAEN LAS CLULAS.


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ORGNULOS RODEADOS DE DOBLE MEMBRANA.

LA MEMBRANA INTERNA PRESENTA UNAS FORMACIONES DENOMINADASCRESTAS, HACIA EL INTERIOR DE LA MATRIZ MITOCONDRIAL.

FUNCIN: LLEVA A CABO LA RESPIRACIN CELULAR, POR MEDIO DE REACCIONES DE

OXIDACIN Y PRODUCCION DE ATP.


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SE ENCUENTRAN ESTRUCTURAS EN FORMA DE PELOS LLAMADOS CILIOS.

OTRAS PRESENTAN UNA O DOS ESTRUCTURAS MAS LARGAS LLAMADASFLAGELOS.

SE ENCUENTRAN EN LA SUPERFICIE DE LA MEMBRANA CELULAR.

FUNCIN: DAN MOVILIDAD A LA CLULA O A SUSTANCIAS QUE ESTN EN CONTACTO

CON AQUELLA.


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SON ESTRUCTURAS DE FORMA REDONDA, LIMITADOS POR UNA MEMBRANASENCILLA.

FUNCIN: PARTICIPAN EN LA OXIDACIN DE ALGUNOS COMPUESTOS.


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ESTRUCTURAS LOCALIZADAS CERCA DEL NCLEO.

TIENEN ESTRUCTURAS CILNDRICAS, HUECAS Y CORTAS.

LA PARED DE LOS CENTRIOLOS ESTA FORMADA POR NUEVE TRIPLETES DEMICROTBULOS.

FUNCIN: GENERAN LOS MICROTBULOS Y EL HUSO MITTICO EN LA DIVISINCELULAR.


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SE ENCUENTRAN EN DIFERENTES TIPOS DE CELULAS, ESPECIALMENTE EN LASPLANTAS.

SON VESICULAS ALARGADAS RODEADAS DE MEMBRANA Y TIENEN FORMA DESACO.

FUNCION:

EN LAS CLULAS ANIMALES CONSTITUYEN EL REA DE DIGESTIN DEPARTCULAS Y LQUIDOS.

EN LAS CLULAS VEGETALES SON REA DE ALMACENAMIENTO.


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RODEADO A LA MEMBRANA CELULAR, EN CLULAS VEGETALES.

ES UNA ESTRUCTURA RGIDA, GRUESA, RESISTENTE, INCOLORA, PERMEABLE ALOS GASES Y EL AGUA.

COMPUESTA PRINCIPALMENTE POR CELULOSA.

FUNCIN: PROTEGE A LA CLULA VEGETAL Y ES PERMEABLE A LA MAYORA DE LAS

MOLCULAS.

DA FORMA A LA CLULA VEGETAL Y CONSTITUYE EL ESQUELETO DE LAPLANTA.


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SON ORGANELOS NICOS EN LAS PLANTAS.

SEGN LA COLORACIN QUE ADOPTAN RECIBEN LOS NOMBRES DE:CLOROPASTOS,

LEUCOPLASTOS Y CROMOPLASTOS.

CLOROPLASTO

TIENE TRES ESTRUCTURAS INTERNAS FORMADAS POR PLEGAMIENTOS DE LA

MEMBRANA: LA GRANA, LAS LAMELAS Y EL ESTROMA.FUNCIN:LA FOTOSNTESIS


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ES IMPORTANTE QUE EL ALUMNO CONOZCA A LA CLULA YTIPOS DE CLULAS, POR EL CUAL ESTAMOS CONSTITUIDOSTODOS LOS SERES VIVOS (UNICELULARES Y PLURICELULARES)Y DONDE SE LLEVAN A CABO TODOS LOS MECANISMOS DEAUTOPERPETUACIN: COMO NUTRICIN, RESPIRACIN,REPRODUCCIN, EXCRESIN, SECRESIN, ADAPTABILIDAD,HOMEOSTASIS, ETC., DENTRO DE UN ORGANISMO.

YA QUE ES UNA ESCUELA CON PERFL FSICO-MATEMTICO,ES IMPORTANTE TENER UN CONOCIMIENTO GENERAL DEBIOLOGA BSICA.

antecedentes de biologia celular

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