vinicius de lima. o modelo de estudo: inseto hematófago obrigatório hemíptero da família...

Vinicius de Lima

O modelo de estudo: Inseto hematófago obrigatório Hemíptero da família Reduviidae e

subfamília Triatominae Importância para a saúde pública

mundial – Transmissor do T. cruzi.

Idéia geral do funcionamento da UCP

UCP em rhodnius prolixus Alimentação sanguínea = muitos ROS Teoria dos vampiros UCP seria uma adaptação ao estresse

oxidativo?

UCP na termogênese Descrita em vários organismos como

uma proteína termogênica Poderia esta ser responsável pela

geração de calor em órgãos tais como o músculo de vôo?

Genômica Busca do(s) gene(s) para UCP no

genoma de Rhodnius prolixus usando seqüências de UCP de outros insetos

Montagem do gene usando o algorítimo GeneWise

Confirmação filogenética usando o programa MEGA 4.

Experimentos de bancada: Elaboração de iniciadores específicos

para UCP de Rhodnius prolixus RT-PCR – Confirmação da expressão

gênica em determinados órgãos -> Alvos como Intestino médio posterior, corpo gorduroso e músculo de vôo

RT-qPCR para análise de quantificação da expressão gênica

Fabricação de um peptídeo sintético a partir da seqüência de UCP e posterior síntese de anticorpo policlonal

Western Blotting / imunohistoquímica nesses órgãos analisados sob situação de jejum, alimentação sanguínea e vôo.

RNAi – Análise de fenótipo por microscopia de fluorescência: marcação de ROS

Calorimetria do músculo de vôo

Rhdnius prolixus possuirá UCP em seu genoma.

Essa(s) UCP(s) deve(m) ser expressa(s) nos três órgãos analisados.

Suas expressões tanto gênicas quanto protéicas devem sofrer regulações em função do estado fisiológico do inseto

UCP deve proteger, principalmente os intestinos, de um estresse oxidativo mediado pela presença do grupo Heme

UCP deve aumentar a produção de calor no músculo de vôo e sem esta o vôo deve ser comprometido

Ausência de UCP deve resultar em possível morte ou não postura de ovos

Em dois anos:Insect Biochemistry and Molecular

Biology,Journal of Insect Science, Isect

Physiologyou Journal of Biological Chemistry