petrifilm [modo de compatibilidade] - ufersa · coliformes coliformes totais termotoleran tes...
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25/5/2010
1
Universidade Federal Rural do Semi-Árido – UFERSADepartamento de Ciências AnimaisCurso de Medicina VeterináriaMonitoria de Microbiologia Geral
Maria Rociene AbrantesJean Berg
Introdução
Microrganismos indicadores
Qualidade dos alimentos
Vida de prateleira Segurança
Patógenosalimentares
Sanificação dos alimentos
Introdução
IndicadoresMicrorganismo e/ou
produto do metabolismo
Presença em certos níveis
Avaliar a qualidade e predizer a vida de
prateleira
Não pode ser afetados por outros
microrganismo
Ser detectável
Concentração/crescimento: qualidade
do produto
Quantificado e distinguível de
microrganismos
Microrganismos IndicadoresContagem
padrão
Mesófilas
Psicotróficas
Termófilos
Contagem
Bolores
Leveduras
Contagem de coliformes
Coliformes totais
Termotolerantes
CONTAGEM PADRÃO
7°c/10 D
PSICROTRÓFICOS
MESÓFILOS
35º/24/48hs.
55°C/24 hs.
TERMÓFILOS
Contagem total de aeróbios mesófilosÉ o método mais utilizado como indicador geral de
populações bacterianas em alimentos.
Utilizado
Obter informações
Práticas de manufaturas
Matéria prima
Condições de processamento
Vida de prateleira
Não diferencia tipos de bactérias
Não é um indicador de segurança
25/5/2010
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Método de análise
Contagem padrão em
placas
Plaqueamentoem
profundidade
Superfície
Filtração em membrana
Ága
rPa
drã
o p
ara
Con
tage
m
(PC
A) • 35±1º
• 48±2h
Material requerido para a análise
Preparação da amostra e diluições seriada
Diluente• Água
peptonada 0,1% ou tampão fosfato pH 7,2
Tubos• 9ml de(H2Op)
ou TB pipetas
Material requerido para a análise
Plaqueamento em profundidade• Placas de petri• PCA
Plaqueamento em superfície• PCA• Alça de espalhamento
(alça de Drigalski)
Filtração em membranas• PCA• Membranas de 47mm,
porosidade de 0,45µm, brancas e quadriculadas
• Bomba de váquo• Pinças e provetas
Incubação• Com termômetro calibrado• Estufa regulada a 35±1º
Procedimentos
Procedimentos
Preparação das amostras
Homogenizaçãodo conteúdo e
retirada da unidade analítica
Preparação da primeira diluição
Preparação de diluições seriadas
seriadas
IMPORTANTE !!!
• Assegurar que a área de trabalho esteja limpo e todo material esteja disponível
• Inocular 1ml de cada diluição em placas de petri
Inoculação
• 12 a 15ml de PCA, misturar, distribuir as placas em bancadas frias e planas
Adição do meio de cultura
• Inverter e incubar as placas
Incubação
• 25 a 250 colônias com auxílio de uma lupa e um contador de colônia
Contagem das colônias e cálculos dos resultados
Plaqueamento em profundidade
25/5/2010
3
Plaqueamento em superfície
• Inicialmente colocar placas com PCA em estufas ou em capelas de fluxo laminar
Preparação das placas
• 0,1 ml nas superfície das placas e espalhar
Inoculação
• 15 min, inverter e incubar
Incubação
• Segue os mesmos procedimentos, multiplica por 10 os resultados
Contagem das colônias e cálculos dos resultados
Diluições
Sample HomogenateDilution Blanks Containing 90 ml Diluent
10 ml 10 ml 10 ml 10 ml
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5
(1:10) (1:100) (1:1000)(1:10000)
(1:100000)
Plating
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5
Put 1 ml of Each Dilution into Empty Petri-Dish
1 ml1 ml1 ml1 ml1 ml1 ml 1 ml1 ml1 ml1 ml
Método em petrifilm
Inoculação• 1ml de cada diluição separadas no centro
da área circular do filme inferior
Incubação• Após um minuto
Contagem das colônias e cálculos dos resultados • 25 a 250 colônias
• É composto por dois filmes estéreis, reidratáveis, impregnados por substânciageleificantes solúveis em água fria, pelo meio de cultura e por um indicador dettetrazólio.
CONSIDERAÇÕES FINAIS
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