caracterizaÇÃo das proteÍnas

REITORIA DE GRADUAÇÃO

ENFERMAGEM

ELIZABETH DE ARAÚJO PRAXEDES

HELOÍSA HELENA DE MEDEIROS SILVA

JACIARA MELO DO NASCIMENTO NUNES

ZORILDE ADRIANA RODRIGUES ALBUQUERQUE

CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS

Prática 1 - Caracterização de ovo albumina

Prática 2- Precipitação salina do ovo-albumina

Prática3- Precipitação por ácido

NATAL

2010

ELIZABETH DE ARAÚJO PRAXEDES

HELOÍSA HELENA DE MEDEIROS SILVA

JACIARA MELO DO NASCIMENTO NUNES

ZORILDE ADRIANA RODRIGUES ALBUQUERQUE

CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS

Prática 1 - Caracterização de ovo albumina

Prática 2- Precipitação salina do ovo-albumina

Prática3- Precipitação por ácido

Relatório solicitado pelo curso de enfermagem da

.......................sobre a caracterização de

proteínas, para nota na disciplina de processos

biológicos.

ORIENTADOR:

NATAL

2010

OBJETIVOS

Esse relatório tem como finalidade a caracterização de proteínas,

através de diferentes métodos, como caracterização do ovo albumina,

caracterização por precipitação salina e por fim, a precipitação por ácido.

Analisando assim, as cores resultantes de cada procedimento.

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO...........................................................................................05

2 CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS......................................................06

2.1 PRÁTICA 1 - CARACTERIZAÇÃO DA OVOALBUMINA..........................06.

2.1.1 Procedimento experimental.................................................................06

2.1.2 Resultados e discussões.....................................................................07

2.2 PRÁTICA 2 - PRECIPITAÇÃO SALINA DA OVOALBUMINA...................08

2.2.1 Procedimento experimental..................................................................08

2.2.2 Resultados e discussões......................................................................09

2.3 PRÁTICAS 3- PRECIPITAÇÃO POR ÁCIDO.............................................09

2.3.1 Procedimento experimental...................................................................09

2.3.2 Resultados e discussões.......................................................................10

3 CORES DOS EXPERIMENTOS....................................................................11

4 QUETIONAMENTOS.....................................................................................12

5 CONCLUSÃO.................................................................................................13

6 REFERÊNCIAS..............................................................................................14

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INTRODUÇÃO

A detecção de proteínas em materiais biológicos envolve reações

especificas com determinados reativos, os quais originam substâncias

coloridas que absorvem luz na região visível, permitindo a sua quantificação.

Dentre os métodos utilizados, situa-se o método do biureto, que é

baseado na reação do sulfato de cobre em meio alcalino (reativo do biureto),

com proteínas e peptídeos (no mínimo tripeptídeos). O nome do método

provém do fato de que a uréia aquecida dará reação positiva, com

desprendimento de amônia.

O método da precipitação protéica que envolve supressão de cargas

sobre a superfície protéica pelos íons do sal de carga oposta, a eliminação do

invólucro de água em torno da molécula protéica. Os íons do sal altamente

hidrofílicos passam a competir com as cargas protéicas pelas moléculas da

água, resultando na desidratação das moléculas protéicas causando a

precipitação. E por fim, a precipitação por ácido, onde ocorre a desnaturação e

precipitação de proteínas positivamente carregadas. Alterando assim a

estrutura das proteínas.

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CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS

PRÁTICA 1-CARACTERIZAÇÃO DA OVOALBUMINA

Essa prática tem como objetivo identificar ligações peptídicas

através de testes colorimétricos.

1-Procedimento experimental

a) Materiais utilizados:

Tubos de ensaio;

Água destilada;

Uréia;

Ovoalbumina;

Hidróxido de sódio (NaOH);

Sulfato de cobre (CuSo4);

Pipetas graduadas;

Aquecedor elétrico.

b) Procedimentos

Numeramos os três tubos de ensaio de 1 a 3.

No tubo 1,colocamos 2 ml de água destilada;

No tubo 2,colocamos uma pequena quantidade de uréia (com a

ponta da espátula), aquecemos brandamente e adicionamos 2ml de água

destilada;

No tubo 3, colocamos 2ml de solução de ovoalbumina, e por fim,

adicionamos o reativo de biureto em cada tubo (5 gotas de hidróxido de sódio e

5 gotas de sulfato de cobre), aguardamos alguns segundos e agitamos.vale a

pena salientar que quando colocamos as primeiras gotas de hidróxido de sódio

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não observamos nenhuma cor, porém quando adicionamos 5 gotas de sulfato

de cobre, foi essencial para que as cores surgissem, identificando assim as

cores.

Observamos os seguintes resultados:

2 - Resultados e discussões

Nesse experimento podemos observar que o primeiro tubo ficou azul

pelo fato da mistura de água destilada com o reativo de biureto,como o cobre

em suas reações desenvolve uma cor azul, aqui não seria diferente, a água

com o cobre ficaria azul.

O segundo tubo ficou rosa, pois dependendo da complexidade da

proteína ou dos peptídeos em questão, a cor do produto da reação na

presença do biureto varia substancialmente, sendo assim, proteínas dão

colocaração violeta como no tubo 3, e os peptídeos dão coloração rosa, como

tubo 2.

A intensidade da cor depende exclusivamente da concentração de

proteínas. Para que a reação de biureto seja positiva, há necessidade da

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presença de pelo menos duas ligações peptídicas na molécula. Como por

exemplo, o tubo de ensaio 3.

PRÁTICA 2 - PRECIPITAÇÃO SALINA DA OVOALBUMINA

Essa pratica tem como objetivo caracterizar a proteína por saturação salina.

1 - Procedimento experimental

a) Materiais utilizados:

Ovoalbumina;

Sulfato de amônia (75%);

Hidróxido de sódio (2,5N);

Sulfato de cobre;

Tubos de ensaio;

Pipetas graduadas;

Funil;

Papel filtro;

Garra de madeira.

b) Procedimentos:

Utilizamos um tubo de ensaio e colocamos 5ml de solução de

ovoalbumina lentamente.Adicionamos 10 ml de solução de sulfato de amônia a

75%, também de forma lenta, até que todo o conteúdo estivesse no tubo.

Misturamos por inversão suavemente.

Aguardamos 10 minutos, e filtramos para um novo tubo de ensaio.

Com o filtrado obtido, fizemos a reação de biureto: Pipetamos 2 ml

do filtrado para um outro tudo de ensaio e adicionamos o reativo de biureto

(5 gotas de hidróxido de sódio e 5 gotas de sulfato de cobre).

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2-Resultados e discussões:

Na precipitação salina, o tubo ficou azul negativa: Azul por causa do

sulfato de cobre e negativa por não conter duas ligações peptídicas, pois houve

o filtramento da proteína.

PRÁTICA 3 - PRECIPITAÇÃO POR ÁCIDO

Essa pratica, tem como objetivo caracterizar a proteína por

desnaturação.

1- Procedimento experimental

a) Materiais utilizados:

Ovoalbumina;

Solução ácida (HCl)

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Tubos de ensaio;

Pipetas graduadas.

b) Procedimentos:

Utilizamos um tubo de ensaio e colocamos 5 ml de solução

ovoalbumina lentamente. Adicionamos 3 gotas de ácido lentamente e já

pudermos observar a mudança na estrutura da proteína.

2- Resultados e discussões:

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As proteínas são compostas por 4 estruturas especificas:Estrutura

primária, secundaria terciária e quartenária. A desnaturação da proteína ocorre

quando se rompe sua estrutura terciária. Quando a proteína foi submetida ao

ácido clorídrico, ocorreu o rompimento das ligações peptídicas e ou a perda da

estruturas terciária. Dessa maneira ocorreu uma alteração na estrutura,

tornando sua função praticamente inerte. Ficando assim, com esse aspecto

branco.

CORES DOS EXPERIMENTOS

Prática 1:

Tudo 1:Azul

Tubo 2: Rosa

Tubo 3:Violeta

Prática 2:Tubo 4: Azul

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Prática 3:

Tubo 5:Branco

QUESTIONAMENTOS

1) Qual o objetivo de realizar a reação do biureto com a uréia

aquecida e com a ovoalbumina?

Resposta: O objetivo de realizarmos a reação de biureto com a

uréia aquecida é o fato de o biureto ser um composto que se forma pela

condensação de moléculas de uréia com liberação de uma molécula de

amônia. Esta condensação ocorre pelo aquecimento. Esse composto em

contato com o sulfato de cobre em meio alcalino desenvolve uma coloração

violeta. Sendo fundamental para a visualização das proteínas. Usamos o

ovoalbumina para identificarmos as proteínas presentes, através da sua

coloração, pois este alimento é rico em proteínas, sendo fácil a visualização.

2) Explique o que você observou na experiência 2. O que ficou retido

no papel filtro?

Resposta: Observamos que ao filtrar o ovoalbumina com o sulfato

de amônia a 75%, o experimento ficou uma cor clara opaca, porém ao

adicionarmos a reação de biureto, ele mudou de cor, para um azul negativo.

O componente retido no papel foi o ovoalbumina.

3) Por que a reação de biureto foi negativa para o filtrado obtido?

Resposta: Porque ao filtrar a substância, a ovoalbumina ficou retida

no papel filtro, sendo assim o líquido resultante do filtrado ficou negativo, pelo

fato de não conter as duas ligações peptídicas.

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CONCLUSÃO

Com esse relatório concluímos que existem diferentes métodos para

identificar as proteínas como pela saturação salina, reação de biureto e até

pela precipitação por ácido, através da desnaturação, podemos fazer esse

último método em casa de forma simples e prática, através da clara do ovo e

algum tipo de ácido.

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REFERÊNCIAS

Reação de caracterização de proteínas. Disponível em

http://www2.ucg.br/cbb/professores/19/Nutricao/Bioquimica/Reacao%20de%20

Biureto.pdf, acesso em 3 de setembro de 2010.

Experimentos de química. Disponível em

http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_proteinas/reacoes_cor

adasdois.htm acesso em 3 de setembro de 2010.

WILSON, Roberto. Biologia atual. 13 º Ed.1995