a proteína tub é regulada por insulina, leptina e pelo ... · adiposo epididimal (tae) de animais...

RESUMO RESULTADOS

MÉTODOS

Apoio Financeiro: FAPESP .

CONCLUSÕES

A proteína tub é regulada por insulina, leptina e pelo estado nutricional em hipotálamo e em

tecido adiposo de camundongos C57BL/6J

Santos, A.C; Quaresma, P.G.F; Weissman, L; Caricilli, A.M; Mendes, M.C; Cesquini; Saad, MJA; Prada,PO. 1,2 Departamento de Clínica Médica da Faculdade de Ciências Médicas –

UNICAMP, Campinas, SP.2Faculdade de Ciências Aplicadas – UNICAMP,Limeira, SP - Brasil

Caracterização do modelo de restrição calórica

Extração de tecidos e “Westernblotting”

Camundongos C57

Implantação de cânula

no ventrículo lateral

para injeções I.C.V.

Extração dos tecidos

após estímulo I.C.V..

Homogeneização do

tecidos e quantificação

de proteínas

Imunoprecipitação e

aplicação em gel de

poliacrilamida.

Transferência para

membrana de

poliacrilamida.

Bloqueio,

incubação com

anticorpos

primário e

secundário e

reação com kit

de

quimioluminesc

ência.

Densitometria

óptica das bandas.

Regulação da fosforilação em tirosina da tub em

hipotálamo de animais controles

Regulação da tub em Hipotálamo

Regulação da tub induzida por insulina e leptina em tecido adiposo branco

Animais Controles Animais DIO Animais db/db

Tecido Adiposo Epidididmal

A inibição da expressão da tub altera a regulação de proteínas ligadas à lipogênese e lipólise induzidas por insulina

Animais com RC

Camundongos tubby são obesos na idade adulta.

Recentemente demonstramos insulina (INS) e leptina

induzem fosforilação em tirosina (pTYR) da tub in vivo em

hipotálamo. Os objetivos do estudo são: a) investigar a

regulação da tub induzida por INS e leptina (LEP) in vivo

em hipotálamo de animais com obesidade induzida por

dieta (DIO) ou em restrição calórica (RC); b) investigar a

regulação da tub induzida por INS e LEP in vivo em tecido

adiposo epididimal (TAE) de animais DIO.

A RC (60 dias) reduziu a adiposidade e aumentou a

fosforilação em tirosina da tub induzida por INS. Em

paralelo, aumentou a fosforilação do IR, IRS-1 e Akt após

injeção intracerebroventricular (ICV) de INS. Neste mesmo

modelo, a injeção ICV de LEP aumentou a pTYR da tub,

em paralelo à ativação da via OBR/JAK2/STAT3 em

hipotálamo. Em contraste, em animais obesos o inverso

ocorreu. A pTYR da tub induzida por INS também foi

investigada no TAE e estava reduzida em animais com DIO

e em db/db após injeção na veia cava de INS. Após inibição

da expressão da tub com ASO (IP) houve aumento da

expressão e fosforilação de proteínas ligadas à lipólise e

redução da modulação das proteínas ligadas à lipogênese.

Peso Corpóreo Massa de Tecido Adiposo Epididimal

semanas

Massa de Tecido Adiposo Retroperitonial Massa de Tecido Adiposo

Mesentérico

CTL RC

Insulina Leptina ICV CTL DIO

Insulina

ICV

- + + CTL DIO

Leptina

ICV

+ +

Restrição Calórica Dieta Hiperlipídica

Sinalização Clássica da Insulina e da Leptina em hipotálamo de animais em RC ou em DIO

Leptina ICV

ICV

CTL RC

Tecido Adiposo Epidididmal Tecido Adiposo Epidididmal

PI3K

P IRS1/2

P AKT

STAT3 P

núcleo

FOXO1

P

STA

T3

P

P

JAK2

OBR Leptina

P P

P

IR

Insulina

P FOXO1

TUB TYR TYR

PO4 PO4

Efeitos Anorexigênicos

neuropeptídeos

TUB

Restrição Calórica Dieta Hiperlipídica

?

Núcleos do Hipotálamo

Tecido Adiposo Epidididmal

Insulina ICV

Proteínas ligadas à Lipogênese Proteínas ligadas à Lipólise

IP: IP:

SENSE ASO

Expressão da tub

IP:

- + - + +

TUB TYR TYR

PO4 PO4

Hipotálamo

Modulação da Ingestão alimentar

PI3K

P IRS1/2

P AKT

P

STA

T3

P

P

JAK2

OBR Leptina

P P

P

IR

Insulina

TUB TYR TYR

PO4 PO4

RC DIO

TUB TYR TYR

PO4 PO4

TUB TYR TYR

PO4 PO4

Tecido adiposo

IR

Insulina

Lipogênese e Lipólise

Insulina (veia cava)

Insulina (veia cava)

Insulina (veia cava)

Insulina Leptina