adaptação do modelo experimental de colestase extra
TRANSCRIPT
70 - Acta Cirúrgica Brasileira - Vol 19 (1) 2004
Battochio APR, e col.
1. Trabalho realizado no Laboratório Experimental do Departamento de Pediatria, FMB, UNESP.2. Biomédica, doutoranda do Curso de Pós-Graduação do Departamento de Pediatria da FMB/UNESP.3. Nutricionista, doutoranda do Curso de Pós-Graduação do Departamento de Pediatria da FMB/UNESP.4. Nutricionista, doutoranda do Curso de Pós-Graduação do Departamento de Clínica Médica da FMB/UNESP.5. Nutricionista, doutoranda do Curso de Pós-Graduação do Departamento de Clínica Médica da FMB/UNESP.6. Prof. Assistente Dr., responsável pela disciplina de Hepatologia Infantil, do Departamento de Pediatria da FMB/UNESP
12 - INFORME TÉCNICO
Adaptação do modelo experimental de colestase extra-hepática em ratos jovens1
Ana Paula Ronquesel Battochio2 , Adriane Gasparino dos Santos3 , Cynthia R. Matos Silva4 ,Analícia S. Rocha5 , Cláudio A. R. Coelho6
Battochio APR, Santos AG, Silva CRM, Rocha AS, Coelho CAR. Adaptação do modelo experimental de colestaseextra-hepática em ratos jovens. Acta Cir Bras [serial online] 2004 Jan-Fev;19(1). Disponível emURL: http://www.scielo.br/acb.
RESUMO – Os autores descrevem a adaptação da técnica de ligadura e ressecção do ducto biliar comum descrita naliteratura, enfatizando suas vantagens na recuperação pós-cirúrgica. Este trabalho foi realizado no LaboratórioExperimental do Departamento de Pediatria da FMB-UNESP.
DESCRITORES - Colestase. Cirurgia experimental. Ligadura e ressecção do ducto biliar comum.
Introdução
A colestase, caracterizada pela diminuiçãoou ausência do fluxo biliar, ou de algumde seus componentes, é a condição hepa-tobiliar mais comum no período neonatale nos primeiros meses de vida. A defi-ciência da secreção de sais biliares resultaem má absorção de lipídios e vitaminaslipossolúveis1,2. O grande interesse noestudo de doenças colestáticas ocorredevido aos altos índices de mortalidade.Algumas doenças colestáticas, como aatresia de vias biliares, apresentam 100%de mortalidade quando não tratada e é aprincipal indicação de transplante hepá-tico na infância3. Com base nesses princí-pios, modelos experimentais em animaisde laboratório que simulam colestasehumana têm sido muito úteis na elucidaçãode diferentes etapas da patogênese dacolestase4. Várias técnicas para o desen-volvimento de colestase tem sido descri-tas, sobretudo em ratos, baseadas em: 1)obstrução aguda e completa do ductobiliar comum5; 2) colestase induzida porendotoxinas6; 3) colestase induzida porestinilestradiol6.
O modelo favorito para colestase extra-hepática utiliza ratos submetidos àligadura do ducto biliar comum, tendocomo conseqüência, na maioria das vezes,um quadro de fibrose biliar secundária7.Este modelo de colestase extra-hepáticaem ratos5 produz alterações estruturais efuncionais múltiplas, semelhantes às en-contradas em outras causas de colestase8,pois resultam em prejuízo funcional dacaptação hepatocelular, excreção canali-cular e transporte de sais biliares e devários outros ânions orgânicos9.
Analisando e desenvolvendo o modeloadotado pela literatura5, a equipe de Hepa-tologia do Departamento de Pediatria –UNESP, elaborou uma adaptação no ma-nuseio deste procedimento cirúrgico.
Objetivo
Descrever a adaptação da técnica da liga-dura e ressecção do ducto biliar comum(descrita por Cameron e Oakley5) realizadano Laboratório Experimental do Depar-tamento de Pediatria da Faculdade deMedicina de Botucatu (FMB)-UNESP,enfatizando suas vantagens.
Métodos
O estudo da técnica da ligadura e ressec-ção do ducto biliar comum foi divididobasicamente em duas áreas:
l Teórica
Introdução ao procedimento cirúrgico emanejo dos animais, baseado em estudospublicados5 e na Comissão de Ensino doColégio Brasileiro de ExperimentaçãoAnimal (COBEA)10.
l Prática em ratos
O procedimento cirúrgico da ligadura eressecção do ducto biliar comum foi reali-zado em ratos machos (Wistar), com 21dias de vida pós-natal (recém desma-mados) e peso médio de 45 gramas. Noprocedimento foram utilizados:
a) Material cirúrgico:
Ø Luvas cirúrgicas; Gazes; Fios paraligadura e sutura.
b) Instrumentos cirúrgicos:
Acta Cirúrgica Brasileira - Vol 19 (1) 2004 - 71
Adaptação do modelo experimental de colestase extra-hepática em ratos jovens
Os animais foram operados pelas pós-graduandas do grupo de Hepatologia doCurso de Pediatria. O preparo pré e pós-operatório foi realizado conforme as roti-nas do Biotério do Departamento de Pe-diatria da FMB-UNESP, sendo o projetopreviamente aprovado pela Comissão deÉtica na Experimentação Animal, UNESP(CEEA). A técnica da ligadura e ressecçãodo ducto biliar comum descrita porCameron e Oakley (1932)5 está apresen-tada nos Quadros 1, 2 e 3.
As figuras 3C e 3D diferem apenas quantoo manuseio, porém não diferem no proce-dimento cirúrgico (dissecção e ressecçãodo ducto biliar comum).
Discussão
O procedimento cirúrgico da ligadura eressecção do ducto biliar exige alto graude qualidade técnica, paciência, concen-tração, e treinamento contínuo. A qualida-de técnica, importante em qualquer atocirúrgico, se torna ainda mais importantequando se trata da realização de delicadasintervenções cirúrgicas e o sucesso édeterminado pelas condições fisiológicase metabólicas do animal.
A adaptação da técnica da ligadura eressecção do ducto biliar comum, realizadano presente trabalho, além de demonstrara possibilidade de se reproduzir com maisfacilidade e agilidade, apresenta uma taxade mortalidade, no momento do procedi-mento cirúrgico, menor do que os animaissubmetidos à técnica anterior5. Além dis-so, notou-se que o quadro pós-operatóriodesses animais foi muito satisfatórioquanto à sua recuperação; com retornoalimentar normal mais rapidamente ediminuição do risco de infecção devido amenor manipulação do animal.
Estes dados puderam ser observadosdurante experimentos realizados nos últi-mos anos no Laboratório Experimental doDepartamento de Pediatria FMB-UNESP.Estes trabalhos foram objeto de disser-tações de mestrado e teses de doutoradoque tiveram como objetivo determinar oefeito dos fatores moduladores das suple-mentações vitamínicas11,12, produtos natu-rais13 e dietas com baixo e alto teor de gor-dura14 sobre as conseqüências nutricio-nais e hepáticas da colestase obstrutivacrônica e também estudo da correlação eregressão múltipla entre indicadoresnutricionais e hepáticos15.
FIGURA 1 - Instrumentos cirúrgicos:1: Porta-agulhas de Mayo-Hegar; 2: Agulha curva cilíndrica; 3:Porta-agulhas de Mayo-Hegar combinado com lâmina para tricotomia; 4: Bisturi com lâminapermutável; 5: Tesoura cirúrgica reta com ponta fina; 6: Tesoura Metzenbaum; 7: Pinça reta componta fina; 7. Pinça curva com ponta fina; 8: Pinça anatômica.
QUADRO 1 – Manejo do animal, noções de bioterismo, técnica anestésica
Ia. Peso do animal utilizando-se a balança digital Mettler Toledo (modelo PB 3002,peso máximo = 3,100 g, peso mínimo = 0,5 g, sensibilidade de 0,1 g).
Ib. Anestesia intraperitonial com pentobarbital na dose de 30mg/kg.
Ic. Posicionamento dos animais em decúbito dorsal horizontal na mesa operatória.
IIa. Tricotomia da parede abdominal anterior.
IIb. Incisão da pele na linha mediana, desde o apêndice xifóide até a cicatriz umbilical(foto A).
IIc. Exposição das camadas musculares e a linha Alba.
IId. Incisão da linha Alba do mesmo tamanho da abertura da pele
IIe. Abertura do peritônio com tesoura e exposição dos órgãos abdominais
IIf. Exposição dos órgãos (estômago, fígado e intestino delgado) e do ducto biliarcomum com abaixamento do duodeno (foto B).
QUADRO 2 - Técnica da abordagem abdominal
IIIa. Dissecção do ducto biliar comum desde abaixo da entrada do último ductobiliar até sua porção distal, próxima ao duodeno.
IIIb. Dupla ligadura do ducto biliar comum, sendo colocadas as ligaduras o maisproximal e o mais distalmente possível (foto C).
IIIc. Ressecção da porção do ducto biliar comum entre as duas ligaduras (foto D).
IIId. Fechamento da parede abdominal com sutura contínua
QUADRO 3 - Abordagem, dissecção e ressecção do ducto biliar
72 - Acta Cirúrgica Brasileira - Vol 19 (1) 2004
Battochio APR, e col.
Referências
1. Poupon R, Chazouilleres O, Poupon RE.Chronic cholestatic diseases. J Hepatol2000; 32(1):129-40.
2. Spraul AD, Cosson C, Couturier M,Hadchouel M, Legrand A, Lemonnier F. etal. Standard treatment of tocopherol inalagille patients with severe cholestasis isinsufficient. Pediatr Res 2001; 49:232-6.
3. Sokol RRJ, Mack C. Etiopathogenesis ofbiliary atresia. Semin Liver Dis 2001;21(4):517-24.
4. Reichen J. Pharmacologic treatment ofcholestasis. Semin Liver Dis 1993; 13:302-15.
5. Cameron GR, Oakley CL. Ligation of thecommon bile duct. J Pathol Bacteriol 1932;35:369-99.
6. Arresse M, Yanan MA, Suchy F.Hepatobiliary transport: molecularmechanisms of development and cholestase.Pediatr Res 2001; 44:141-7.
7. Greim H, Trülzsch D, Roboz J, Dressler K,Czygan P, Hutterer F, Schaffner F, Popper
FIGURA 2 - Demonstração do procedimento cirúrgico daligadura e ressecção do ducto biliar comum realizado segundo atécnica descrita na literatura5 realizada no LaboratórioExperimental do Departamento de Pediatria, FMB-UNESP. 2A.Incisão da pele na linha mediana, desde o apêndice xifóide até acicatriz umbilical. 2B. Exposição dos órgãos (estômago, fígadoe intestino delgado) e do ducto biliar comum com abaixamentodo duodeno. 2C. Dupla ligadura do ducto biliar comum, sendocolocadas às ligaduras o mais proximal e o mais distalmentepossível. 2D. Ressecção da porção do ducto biliar comum entreas duas ligaduras.
FIGURA 3 - Adaptações do procedimento cirúrgico da ligadura e ressecçãodo ducto biliar comum realizadas no Laboratório Experimental doDepartamento de Pediatria, FMB-UNESP. A técnica adaptada (Figura 3) pelogrupo de Hepatologia do Departamento de Pediatria da UNESP consiste nosmesmos princípios descritos por Cameron e Oakley, 19325, diferindo nositens 2A e 2B da figura 2 (ou IIb e IIf do Quadro 2). 3A. Incisão da pele nalinha mediana de aproximadamente 1 cm. 3B. Abertura do peritônio comtesoura reta sem a exposição dos órgãos abdominais, seguindo diretamentepara a exposição do ducto biliar comum com abaixamento do duodeno, apartir da localização do fígado. 3C. Dupla ligadura do ducto biliar comum,sendo colocadas as ligaduras o mais proximal e o mais distalmente possível.3D. Ressecção da porção do ducto biliar comum entre as duas ligaduras.
H. Bile acids in normal rat livers and inthose after bile duct ligation.Gastroenterology 1972; 63:837-45.
8. Sherlock S. Cholestasis. In: Sherlock S.Diseases of the liver and biliary system.8ed. Boston: Blackwell ScientificPublication, 1989. p 248-72.
9. Bolder U; To-Nu HT; Schteingart CD; FrickE, Hofmann AF. Hepatocyte transport ofbile acids and organics anionss inendotoxemic rats: impaired uptake andsecretion. Gastroenterology 1997;112:214-25.
10. Comissão de Ensino do Colégio Brasileirode Experimentação Animal (COBEA) –Manual para técnica em bioterismo; 1996.
11. Silva CRM. Efeitos da suplementação devitamina C sobre efeitos decorrentes dasalterações nutricionais da cirrose biliarsecundária: estudo experimental em ratosjovens. [Dissertação de Mestrado].Universidade Estadual Paulista – Faculdadede Medicina de Botucatu; 2002.
12. Eduardo LHPR. Efeitos da administraçãode vitamina A hidrossolúvel sobre as lesões
e a disfunção hepática na colestase obstru-tiva: estudo experimental em ratos jovens.[Dissertação de Mestrado]. UniversidadeEstadual Paulista – Faculdade de Medicinade Botucatu; 2002.
13. Suzigan MI. Efeitos hepatoprotretor doextrato aquoso de picão (Bidens pilosa L.)na hepatopatia causada por colestaseobstrutiva: estudo experimental em ratosjovens. [Dissertação de Mestrado].Universidade Estadual Paulista – Faculdadede Medicina de Botucatu; 1999.
14. Santos AR. Efeitos de dietas com baixo ecom alto treor de gordura sobre o estadonutricional na colestase obstrutiva: estudoexperimental em ratos jovens. [Dissertaçãode Mestrado]. Universidade Estadual Paulista– Faculdade de Medicina de Botucatu; 2003.
15. Santos AG. Estudo da correlação e regressãomúltipla entre indicadores nutricionais e delesão hepática na colestase obstrutiva crôni-ca: estudo experimental em ratos jovens.[Dissertação de Mestrado]. UniversidadeEstadual Paulista – Faculdade de Medicinade Botucatu; 2003.
Acta Cirúrgica Brasileira - Vol 19 (1) 2004 - 73
Adaptação do modelo experimental de colestase extra-hepática em ratos jovens
Battochio APR, Santos AG, Silva, CRM, Santos AR, Coelho CAR. Adaptation of experimental model of extra-hepaticcholestasis in young rats. Acta Cir Bras [serial online] 2004 Jan-Feb;19(1). Available from URL: http://www.scielo.br/acb.
ABSTRACT - The authors describe the adaptation of the technique of ligature and resection of the common bileduct described in the literature, emphasizing their advantages in the postnatal-surgical recovery. This work wasaccomplished at the Experimental Laboratory of the Department of Pediatrics of FMB-UNESP.
KEY WORDS - Cholestasis. Experimental surgery. Ligature and resection of the common bile duct.
Conflito de interesse: nenhum
Fontes de financiamento: Fapesp, Capes e CNPq
Correspondência:
Ana Paula Ronquesel Battochio
Rua José Dal Farra, 1103
18603-790 Botucatu – SP
Tel: (14)6823-5736
Data do recebimento: 24/11/2003
Data da revisão: 18/12/2003
Data da aprovação: 06/01/2004
Fotos coloridas disponíveis em www.scielo.br/acb