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r r . -
.
4 5 - 3 c- 5 <Tombre : EVANGELINA LOPEZ
Matricula : 77327274.
/Carrera: BIOLOGIA.
Area de concentración: BIOLOGIA DE LA RERRODUCCION. d
Trimestre : Doceavo tr imestre.
Horas semana: 30 horas por semana.
Lugar donde se $levará a cabo : UNIDAD DE 'INV1;:JTIGACION BIOILTEDICA
DEL CENTROKEDICO NACIONAL, IMSS.
J T í tu l o d e l proyecto : CAPACITACION EN TECNICAS EXPERIMERTALES DE
LABORATORIO.
Fecha de i n i c i o : 15 de Hayo de 1982.
/Fecha de terminación: 15 de Noviembre de 1 9 8 2 ! I
/Nombre de l tutor , puesto y adscripción: .Dr. Carlos Kubli Garf iss, I
j e f e d e l laborator io de F i s i o l og í a Endócrina de In d iv i s ión de
Rldocrinologfa y Desarrol lo, a cargo d e l Dr. Adalberto Parra, d e l
Dr, Carlos Xubli Garf ias L%angelina LÓpez N ie to
S E R V I C I O S O C I A L
r
CBPACITACION EN TECNICAS EXPERIMENTALES DE LABORATORIO
Siempre que Be va a r e a l i z a r un proyecto experimental, es m u y im-
portante, antes que nada, tener bases de conocimiento de como se
l l evan EL cabo l a s técnicas de trabajo. La capacitación comienza
desde l a obscrvación detenida de como se rea l i zqn los exgerimen - t o s ( preparación de material , manejo de mater ia l quirúrgico, l a
tecnica de c i rug fa ), s in de jar pasar ningún de t a l l e ( orden, l i m - pieza ). Para e i f i n a l de l a capacitación ap l i car los conocimien-
t o s adquiridos, mediante l a práct ica continua de esas técnicas de
trabajo.
.
INTRODUCCION.
E1 pr inc ipa l punto de in te rés de l presente trabajo es l a Bio log ía
de l a Reproducción de l a ra ta ( hembra ). En e l se estudian aspec - t o s renroductivos como: c i c l o es t ra l , ovulación, h iper t ro f ia ová-
r i c a corn-ensatoria ( HOC y , y otros puntos de importancia repro - duct iva.
U intención de estudiar l o s aspectos renroductivos en
l a ra ta hembra, es para l l e g a r a comprender e l mecanismo por e l
cual l a act iv idad reoroductiva se produce y se mantiene en los m;"
míferos ( hembra ). Ya que esta c i c l i c i dad t i ene un a l t o grad0
adaptativo; ei lapso de v ida de los f o i i c u i o s ováricos, i n i c i o de
l a estimuiación gonudotrófica, que son severamente l imitados por
a t r e s i a o por ovulación. También, los Óvulos l iberados t ienen una
v ida media de menos de 24 horas en e l oviducto. Y o tros eventos
que pue3en se r l imitados, y& sea por inf luencia d e l medio externo
o interno ( luz, temperatura, stress, fnrmacos, etc. 1. A l mismo tiempo, se hace un sistema de ana l i s i s para
l o s pro;yectos de trabajo en experimentación. Con e l uso de compu-
tadoras y/o ecuaciones matemáticas, para procesar l o s datos que
se obtienen de l o s diversos experimentos. Teniendo una ventaja de
estudio que es l a de poder l l e g a r a sredec i r los resultados de
los nuevos experimentos. Lo que hace más simple y preciso e l ana-
l i s i s de l o s resultados.
En e l reporte f i n a l de este t rabajo se hará una breve
revisiÓn b ib l i o g rá f i ca de l o s primeros estudios que se hic ieron
con respecto a l o s aspectes renroductivos en cstudio y algunos t
más actuales. Estos estudios pueden proporcionar datos importan - t e s para e l estudio de l a Reproducción en otras especies de mamf-
f eros. c
..
.
ANTECEDENTES.
La h i pó f i s i s anter io r secreta t r e s hormonas prote ícas que t ienen
una in f luenc ia c r í t i c a sobre e l sistema reproductivo. 91ias Son:
FSH, LH y PRL. Otras son ACTH y TSH, que también intervienen en
e l sistema reproductivo indirectamente, pero no pueden ser consi-
deradas como verdaderas hormonas reproductivas.
I_
Estas hormonas s e uroducen en e l lóbulo anter ior de l a
h i pó f i s i s sobre contro l de factorea l iberadores transportados de l
hipotalamo v i a sistema porta hipotalamo-hipófisis.
En l a hembra, l a FCH promueve e l crecimiento y desarro-
l l o f o l i c u l a r en e l ovar io ; se Diemsa que estimula e l desarrol lo
d e l f o l f c u l o desde l a etapa antra l a l a preovulatoria. Esto prodg
c i r d cambios bioquimicos como e l incremento de oxígeno y s ín t es i s
de proteínas.
La LH estimula l a s ín t es i s de esteroides ( cuerpo IÚteo
teca, granulosa e i n t e r s t i c i o ). Una c i e r t a concentración basal
de LH es3 condición necesaria para l a s in t es i s de esteroides. Ia
LH est& estimulando la conversión de co l e s t e ro l a pregnenolona.
También induce un rápido y gran incremento de sangre para i r r i ga -
ción de:L ovario. ia LH induce ovulación. SU accidn ovuiatoria es-
t& separada de su accidn esteroidogénica. E l surgimiento de LH e s
t d controlado por un feedback pos i t ivo , que e j e r ce e l es t rad io l
sobre e l hipotalamo, causando una descarga de LHRF. I
La progesterona ( P ) mantiene e l embarazo en l a mayo - 1
r í a de 10s mamíferos. ia P y los estrógenos estimulan e l crecimi-
ento y clesarrollo d e l sistema lobulo-alveolar de l a gl6ndula mama
r i a y de l endometrio d e l Útero.
1
Los estrógenos intervienen en e l desarro l lo de l o s ca - rácteres sexuales secundarios de l a hembra, que incluyen l a s ma - mas, útero y e p i t e l i o vaginal.
L ....-
I
Las hormonas esteroides t ienen un gran e f e c t o sobre e l
comportamiento, por ejemglo, e l E es responsable de l a manifest2
ción del es tro o calor. LOS estrógenos son secretados por l a s cé-
lu l as de l a teca. La P es producid2 por l a granulosa, esnecialmeo
t e ?or l a granulosa iuteinizada de l cuerpo iúteo. 1i.n e i ovario
l a s hormonas esteroides son secretadas por un t i p o de cklulas en
->articu~.ar que son determinadas por la etapa d e l c i c l o ovárico.
Antes deb l a ovulación l a s cé lu las de l a granulosa, dentro Be l a
cavidad de l folículo, no contribuyen a l a secreción de esteroides
a l a vena ovárica y secreta grandes cantidades de P desaués de l a
ovulación.
2
CICLO ESTRAL DX LA KATA ( HEMBRA ). La ra ta gresenta ovulación expontdnea, también como en e l humano
y e l borrego. D i f i e r e de e l l o s por tener c i c l o s es t ra l es extrema-
damente cortog, existen ratas con c i c l o s de 4 y 5 días de dura - ción. Esto es porque e l caerpo lÚteo que se forma después de l a
ovulación nunca i i e g a a ser realmente funcional; pero s í l a cópu-
l a toma lugar en el estro, es to estimula e l desarrol lo de un cueg
PO iúteo funcional. LO que podría s i gn i f i c a r que e i animal puede
encontrarse en período de embarazo o pseudoembarazo. Otra di feren - c i a es ile que l o s eventos en e i c i c l o e s t r a l est& determinados
por e i ritmo diurno; l a ovulación, por ejemplo, siempre ocurre
después de media noche.
mayoría (le los eventos ováricos, utcrinos y vagina - l e s d e l c i c l o e s t r a l de lo. rata L'ueron estudiados por Long y 'Evans
en su monografia c lás ica ( Long and Evans, 1922). Ellos, y mds
tarde o t r o s investigadores, def inieron e l c i c l o e s t r a l como una
secuencia continua de eventos, con una gran v u i a c i ó n entre anima
l e o y c i c los , en la longitud de l a s var ias etapas, def inidas por
eventos vaginzles. Fo se observó l a var iab i l idad en e l tienpo de
i a ovulación y conducta de apareamiento con resaecto a l a co rn i f i -
c
cación para l a d i ferenc ia entre l o s c i c l o s de 4 y 5 días. kstwood (1939) m i d i 6 e l ?eso uterino y e l agua intraiu-
mina1 a través d e l c ic lo .
Boling e t . a l . (1971) y !!.andl y Zuckerman (1952) demos-
trarÓn cambios en e l tamaño de l o s folículos ovdricos durante e l
c i c l o . :;e ha observado un increaento l i n e a l en e l volumen de una
etapa dzida de f o l í cu l os , ocurFe durante e l ciclo con e l i n i c i o
d e l es tro d e l c i c l o -revio; e l volunen f o l i c u l a r f i n a l es mayor
en c i c l o s de 5 días que en l o s de 4 &{as. Los f o l í c u l o s crecen
m5s r i g i d o m t e s de la ovulación y esta ocurre de 6 a 12 horas
m8s t aril e.
Slandau et. a l . (1971) mostrarón que en un 759, de ratas
e l i n i c i o d e l es tro ocurrió entre l a s 4 Pk! y lOPK, y duró 14- ho - ras.,liJo se ia t i l i z i j e i f ro t i s vaginal como un c r i t e r i o importante.
LVerett (;l048) apuntó que l a ovulación ocurre durante
l a tercera noche en ratas c í c l i c a s de 4 días, y en l a noche si---
guiente en l a s de 5 días.
Everett r e f i r i ó (11361) que ex i s t e una ovulación temprana
(Young et. a l . , 1941) y una ovul3ción tar& (Long and Evans, 19-
22) con respecto a l es tro vaginal.
CONTROL BEL CICLO ZSTML.
Se ha v i s t o que l o s c i c l o s cesan s i l a h inó f i o i s es funcionalmen-
t e desconectada d e l hipotalamo. Pero no es necesario cortar e l tg 110 hiwo f i s ia r io nara esto. La act iv idad c i c l i c a normal deaende
de l a s conexiones entre e l hipotalamo anter ior , eminencia media y
-
, l a región preóptica. I
.
Uno de l o s In& importantes descubrinientos de l o s pasa - dos 30 años es e i liarnado "período c r í t i c o " , e i cual en la rata
generalniente ocurre a l a s 2 PM de l a tarde d e l proestro. Durante
este período se genera l a l iberaci6n de LHR? por e l hipotalanp en
suficierites cantidades para que se descargue una cuota uvolntoria
de gonL?dotrofinas hipof isiariws. La administración an este perío-
do de Nembutal barbiturato u otros agentes anéstesicos bloc-uean
i a ovulación normal, pero una estimuinción adecuada tiel área pre-
Óptica p p i d e inducir secreción de LHRF y restaura It1 ovulación
normal.
S í l o s estrógenos secretados por e i ovar io en e i proes - t r o temprano se inactivan por anticuernos o por anti-estrógenos
s in té t i cos , e3, e fecto es para bloq,uear l a l iberación de LIiRF, se-
creción 2.e LH y ovuizción. por i o que ?arete q.ue los es-trógenos
son i:~. señal para que e i iiinotaiamo i n i c i e l a secreción de LH~IF
durante e i geríodo c r í t i c o .
Existen evidencias indirectas que a->opn nue l a secre -
5- 3- hidroxiesteroide deshidrogenasa f o l i - ción fie estrógenos se incrementa un dia antes d e l proestro junto
con un incremento de
cular (I?qkin e t . al. , 15166).
E l contenido de LHRF en e l hipotalamo baja de gran mane
ra en la trzrde &el Troestro (IPOmirez y Sawyer, l565), as1 como e l
contenido de LF y FSH en l a hinó f i s i s ( mills and Schwarte, 1961;
Schmartz and Bartosik, 15162; Schmrtz and Ce ldere l l i , 1965; MaCl&
ntock arte. 9chwartz, 1068; Ca l i f a r i s et. al.. 1967; Goldman and Na - hesh, 1968). Los n ive l e s incrementaüos de LH y FJH aparecen en el
plmna durante e l período c r í t i c o (McCann and Rgmirez, 1964.; ;>chg
artz and Ca ldere l l i , 1965; McClintock and 3chwartz, 1968). índ i - cando WL incremento en e l rango de l iberación de esas lyonadotrofi - nas, 6sLa l iberac ión puede ser nrcveniria por inyección de barb i tc
ra to ant;es de l a s 2PET d e l proestro (Cchwartz and Caldere l l i , 1965; McClintock ana Cchwartz, 1968).
t
Olfyake (1968) publicó que l a secreción de estrógenos dg cae y ia secreción de P se eleva, después del surgimiento de ia
liberación de LH, no antes. Por io que se apoya la evidencia de la secreción de P en ei proestro.
OBEJTIVOS.
L. Aprender técnicas experimentales, como conocimiento
básico en realización de groyectos de trabajo.
2. Habilitación en el manejo general del equipo de lab2
rat orio .
3. Auxiliar eii los proyectos de trabajo, como aplica - ción directa de l principal objetivo.
PRGGIIAHIL Y METODGLOGIA DE TRABAJO.
ia capcitación de trabajo llevará el siguiente orden:
- Efanejo y cuidado de animales de Laboratorio.
- Toma y lectura de muestras de frotis vaginales, pare
determinar el ciclo estral en l a rata hembra.
- Ovariectomfa ( bilateral y unilateral ).
- implantación de cánulas.
- Detección de ovuiación.
- Registro de cntracción uterina normal.
- Kanejo general del equipo de laboratorio: ldicrosco - pi0 de contraste de fases, i7iicroscopio de disección,
Báscula, Balanza, Horno, Centrífuga, polfgrafo, etc.
- Preparación de soluciones.
Cada me:t l l e g a un l o t e de l O i i animales d e l b i o t e r i o general. Son
ratas hembras adultas. A l o s cuales se l e s procede con e l s iguien
t e mktotio de trabajo:
- Se l e s r eg i s t ra su peso corporal a su l leeada.
- Para l a i dent i f i cac ión indiv idual de cada animal, estos
son marcados mediante una técnica en donde se l e s per fo - r a l a s ore jas ( explicación en e i reporte f i n a l 1.
- De lunes a sábado se l es toman muestras de f r o t i s vagi-
nales.
- De lunes a v iernes se leen l a s muestras de f r o t i s vagi-
niales. para determinar c i c l o estral .
- La inplantación de c&ulas se l l e v a a cabo en ratas que
t ienen c i c l o s es t ra i es precisos y de 4 días. EII l a eta-
pd de diestro.
- EU e i d ía d e l es t ro se detecta i a ovulación.
- La ovariectomia un i la te ra l se r e a l i z a para e i experimen - t o de H iper t ro f ía Ovárica Comyensatoria ( HOC >.
- Conforme avanzan l o s proyectos de trabajo se aprende a
manejar l o s equipos de trabajo -ara los exnerimentos.
CRONOGRAMA DE A C T I V I N D E S .
Actividades de rutina:
. Tiempo
8-9 AB?
9-10
10-11
11-13 : 30 Pivl
Act iv idad
Toma de muestras de f r o t i s vaginales
-vado de mater ia l de v i d r i o y c i rug fa
u t i l i z ado e i d í a anterior.
Lectura de mues;$ras de f r o t i s vaginales
para r e g i s t r a r l a secuencia de eventos de l c i c l o
estra l .
Real ización d e l experimento en turno. Se l l e v a
a cabo en és t e tiempo, porque más tarde puede
ocurr i r e l cambio de estadio d e l c i c l o estra l .
Se recoge e l mater ia l u t i l i zado , dejando e l la-
borator io en orden y limpio.
BIBLIOGRAFIA.
. Austin, C. R. and Short, B. V. ( 1978 1. Hormones in
Reproduction. Reproducción en marnife-
ros. Ed. Cambridge University Press.
Book, 3. London.
Austin, C. R. and S h o r t , 3. V. ( 1979 1. Mechanisms of
Hormone Action. Reproduction in mamma
1s. Ed. Cambridge University mess.
Book, 7. London.
Schwa-tz, Neena iJ. ( 1969 ). "A Hodel f o r the Regula - tion of Ovulation in the .Hat**. Recent
Progress in Hormone Research. Ed. Aca - demit Press. Vo l . 25 pol-43.
UMIVERSIDAD fi i r o w y k YSTRPOLITANA
.) INFORME FIN4L DE SERVICIr) SOCIRL
T U T O R :
Dr. C a r l o s R u b l i G a r f i a s
Alumna :
E v a n g e l i n a Ldpez Nieto
M a t r i c u l a : 7 7 3 2 7 2 7 4
C i t u l o :
C I P A C I T A C I O N EN TECNIC4S EXPERIYEYTALES D E
LABCIRAT9RI3
México, D.F. a 15 de Noviembre de 1982.
Y
Dr. Pompilio Huizar
Secretario Académico de la División de Ciencias Biológicas y de la Salud. P R E S E N T E.
Por medio de la presente le comunico a usted, el término del periddo de
Servicio Social, correspondiente a la fecha 15 de Mayo al 15 de Noviem bre del año en curso. Participando en la Tutoría; como Tutor Externo el Dr. Carlos Kubli, y como Tutor Interno el Dr. Alejandro Reyes .
-
-
Desarrollado en l a Unidad de Investigaci6n Biomédica del Centro Médico Nacional IMSS. Con el proyecto denominado "CAPACITACION EN TECNICAS EXPERIMENTALES DE LABORATORIO".
Agradeciendo fervilmente su atención, me despido de usted:
A T E N T A M E N T E
EVANGELYNA LOPEZ NIETO.
r
UNIDAD DE INVESTIGACION BlOMEDlCA DEL C.M.N.
Doctor Pompilio Huizar Secretario Académico de la División de Ciencias Biológicas de la Salud P r e s e n t e
Estimado doctor Huizar:
Me dirijo +i usted con la finalidad de comunicarle que la BIOL. EVANGELINA LOPEZ NIETO, ha realizado su trabajo de tesis para obtener el grado de Licenciatura en la carrera de Biólogo, bajo la dirección del Dr. Carlos Kubli como tutor externo, de la División de Endocrinologm y Reproducción y el que escribe como tutor interno. El titulo de dicha tesis es "CAPACITA- CION EN WCNICAS EXPERIMENT ALES DE LABORATORIO".
I
Asimismo, la Srita. López Nieto termina su servicio social, el cual realizó en el periodo comprendido del 15 de mayo al 15 de noviembre de 1982, en esta Unidad de Investigación Bio- médica.
. Se extiende la presente constancia paralos fines a que haya lu- gar.
' Atentamente\
D de w a d e s
con copia: . . ,
,
I .
t '
UNIVERSIDAD A'JTONOYA YETR3POLITANA
INFORME FIN4L DE SERVICIO SOCIRL
TUTOR :
Dr. C a r l o s Kubl i Gsrfias
Aluiona:
E v a n g e l i n s López Nieto
M a t r i c u l a : 77327274
. . T í t u l o :
CAPACITACION EN TECNICAS EXPERIYEYTALES DE
LABORATOR13
.
México D.F . 15 d e Novienbre 2 2 1392.
1 c.
I i -- l -
INTRODUCCION.
Este t r a b a j o ha t e n i d o como p r i n c i p a l o b j e t i v o : I
I _ . a d q u i r i r a d i e s t r a m i e n t o en d i v e r s a s t é c n i c a s
I experimentales. Las cuales son b s s i c a s en proyectos de
i n v e s t i g a c i ó n q u e s e r e a l i z a n en l a b o r a t o r i o s de - f i s i o l o s í a endócrina. Para e l l o , e s n e c e s a r i o t e n e r
c o n o c i m i e n t o s b a s i c o s de a n a t o m l a , f i s i o l o g l a y
I I - b iologlci r e p r o d u c t i v a de l a s e s p e c i e s que s e tomen t I - cono modelos experimentales. t
La c a p a c i t a c i d n s e i n i c i a con l a o b s e r v a c i d n
detenida de los procedimientos para l l e v a r a cabo cada
t é c n i c a e x p e r i m e n t a l y t e rmina c o n l a p r á c t i c a
continua d e l o observado.
En e s t e i n f o r m e , c a d a e j e r c i c i o e x p e r i m e n t a l
p r e s e n t a una breve introducción que informa sobre el
propds i to p r i n c i p a l de t r a b a j o . S e dan l i s t a d o s I-
c o m p l e t o s d e n a t e r i a l . L o s p r o c e d i a i e n t o s
c exper imenta les e s t á n d e s c r i t o s en forma d e t a l l a d a .
L También p r e s e n t a a lgunas o b s e r v a c i o n e s p e r t i n e n t e s c
L.
F.
i-
\ para cada m é t o d o , a s 1 como, e o que p r o y e c t o i de
investigación s e aplican e s t a s t é c n i c a s .
._
A l misno tiempo, s e r e a l i z a un sistema de a n a l i s i s
8.. p a r a los p r o y e c t o s d e t r a b a j o , c o n e l u s 4 de
L- cosputadoris y/o ecdaciones nitemdticas, para procesar r"
.... los d a t o s que s e obt ienen en cada experimento. En el
presente informe no s e reporta e s t e p u n t o . ~ E s t e e s e l panorama g e n e r a l que p r e s e n t a e s t e
t r a b a j o , que t i e n e como f inal idad l a pos ib le c o n s u l t a
del mismo.
ANTECEDENTES.
La r a t a henbra presenta ovulación espontánea, como
e l huliano y o t r a s e s p e c i e s . S i n enbsrgo , t i e n e e l
c i c l o e s t r a l nuy c o r t o , ya que dura d e cuatro a c i n c o
d l a s ( B u t c h e r e t a1.,1975). E s t o e s porque e l cuerpo
l á t e o nunca l l e g a a s e r realmente f u n c i o n a l . O t r a
d i f e r e n d a e s de que los e v s n t e s en e l c i c l o e s t r a l
e s t a n d e t e r m i n a d o s p o r un r i t m o c i r c á d i c o : l a
o v u l a c i ó n , por e jemplo , s iempre o c u r r e 'después de
media noche. La luz cont inua eventualmente abole e l
c i c l o , l l e v a n d o a una c o n d i c i ó n de e s t r o v a g i n a l
p e r s i s t e n t e s i n o v u l a c i ó n ( C i t e b l o u , 1 9 6 8 ) . La
obscuridad continua podría p r o d u c i r anes t ro , o c i c l o s
con eventos que l l e g a n a e s t a r f u e r a de f a s e con e l
tiempo r e a l del d la (Hoffniann, 1 9 6 7 ) .
.
E l c i c l o e s t r a l presenta c u a t r o e t a p a s : d i e s t r o ,
proes t ro , e s t r o y metaestro. La a2yorla de l o s eventos
o v s r i c o s , uter inos y va:inales del c i c l o e s t r a l d e l a
r a t a f u e r o n e s t u d i i d o s p o r L o n 3 y E v a n s en su
I
I
I
-2-
, monografla c lás ica Long y EVdns ( 1922 ) . Ellos, y mas
._ tarde otros investiqadores, definieron e l c i c l o estral
-. como una secuencia continua de eventos, de f in idos por
observaciones de l e p i t e l i o v a g i n a l . Existe una gran
variación entre animales y c i c l o s , y en l a longitud de
las va r i as etapas. No s e observó v a r i a b i l i d a d en e l
tiempo d e ovulación y conducts d e apareamiento con
respecto a l a cornif icaci6n v a 3 i n a l pars di ferenciar a
c
I
m”
- . c
las ratas con c i c l o s de cuatro y cinco dlas.
Blandaer e t a l . (1971 ) mostraron que en un 75% de
ratas e l i n i c i o del estro ocurrió entra l a s 4 P H y 10
PM, y duró 1 4 horas. Everett r e f i r i ó (1961 ) que ex is te
una ovubacidn temprana y una t a r d l a (Long y Evans, *
1922) con respecto a l estro v a g i n a l .
La ovariectomla o administración de un’antagonista
d e e s t r ó g e n o s impide l a c o r n i f i c a c i ó n v a g i n a l , i-
l i b e r a r i ón de LH y ovulac ión, s i se r e a l i z a en e l
p roes t ro temprano. Lawton y Sawyer (1968 ) indicaron
que l a h i p o f i s e c t o m l a se debe l l e v a r a cabo mfis
temprano que l a ovar iectomla para producir blCqueo \
completo de l a secreción de estróqenos en e l d l a intes
del proestro. Hoxard y Breinkley (1981) reportaron que
l a ovar iectoa l i uni lateral o hemiovariectomla res l i l ta
; ! -
c
I
?-
L-
en u n 3 h i p e r t r o f i a c o m p e n s a t o r i s de3 o v a r i o
reamente.
c re -3-
L_
Por o t r o lado, s e ha reportado que un d l a antes de
que l a r a t a e n t r e en e s t r o , 2n l a msilani del proes t ro ,
l a secrecibn de 17-beta-estradiol de los f o l l c u l o s en
d e s a r r o l l o a lcanzan su p i c o maximo. Disparhdose e l
surgimiento ovula tor io de LH en i a tarde del proes t ro ,
y o c u r r e l a o v u l a c i b n en l a s pr imeras horas de l a
ma3ana s iguiente .
So ha v i s t o que l o s c i c l o s cesan s i l a h i p o f i s i s
e s funcionalmente desconectada del hipotalamo. Pero no
es necesar io c o r t a r e l t a l l o h i p o f i s i a r i o para e s t o .
E x i s t e un , , p e r í o d o c r í t i c o " , e l c u a l , en l a r a t a
g e n e r a l m e n t e o c u r r e s l a s 2 P M de l a t a r d e d e l
proes t re . Durante e s t e perlodo se genera l a l i b e r a c i b n
de LHRF por e l h i p o t a l a n o en s u f i c i e n t e s c a n t i d a d e s
p a r a q u e s e d e s c a r g u e una c u o t a o v u l a t o r i a de
g o n a d o t r o f i n a s h i p o f i s i i r i a s . La a d m i n i s t r a c i ó n en
e s t e per lodo de Nembutal u o t r o s agentes snes t8s icos
bloquean l a ovulacibn normal, pero una e s t i m u l a c i b n
adecuada d e l area prebpt ica puede producir secretion
. d e LHRF y res taura l a ovulacián normal. Por l o que s e
puede c o n c l u i r , que 13 a c t i v i d s d c i c l i c a n o r n a l
depende de l a s c o n e x i o n e s e n t r e e l h i p o t a l a n o , l a
eminencis media y l a reqibn orebpt ica .
- 4 -
OBJETIVOS. ,
1 . A d q u i r i r a d i e s t r a a i e n t o en e l manejo de
t é c n i c a s e x p e r i m e n t a l e s , p a r a l a r e a l i z a c i ó n de
proyectos de inves t iqac i6n .
2 . A p l i c a r los conocimientos sdquiridos en
l a búsqueda d e nueva información en e l campo de l a
invest igación c i e n t l f i c a .
3. Apoyar en los proyectos de i n v e s t i g i c i o n ,
y a s í , c o m p l e t a r l a c s p a c i t a c i ó n en las d i v e r s a s
t é c n i c a s experimentales.
PROGRAMA, DE TRABAJO.
E l programa de t r a b a j o a b a r c a r - y s e g u i r
s i s u i e n t e s t é c n i c a s experimentales:
- Manejo y cuidado de animales de l aborator io .
- Toaa, l e c t u r a y r e s i s t r o de f r o t i s vaginales.
l a s
- Ovariectomla ( b i l a t e r a l y u n i l a t e r a l ) .
- Implantación de c h u l a s .
. - Detección de ovulación.
- Apareamiento entre r a t a s hembras y nachos.
- . M a n e j o 3 e n e r a l d e l e q u i p o de l a b o r a t o r i o :
m i c r o s c o p i o de c o n t r a s t e d e f a s e s , microscopio de
d isecc ión , b i lanza i n a l l t i c i , centr í fuTa .
-5-
C U I D A D O Y MANEJO DE 4NINALES DE LABORATORIO.
En u n l a b o r a t o r i o de i n v e s t i g a c i ó n sieropre e s
necesario tener y seguir un programa de t r a b a j o , para
e l manejo, cuidado e i d e n t i f i c a c i ó n de l o s s n i r a l e s .
E l laborator io d e Desarrollo y Crecimiento se r i s e por
e l s i g u i e n t e pro3rama de a c t i v i d a d e s de r u t i n a y
técn icas de t r a b a j o experimental.
Cada mes s e r e c i b e u n l o t e de 100 a n i m a l e s ,
provenientes d s l b i o t e r i o general. Estos a n i a a l e s son
r a t a s hembras, a l b i n a s , v i rsenes , de l a cepa Sprague
Dawley. Y machos de l a misma cepa. Deben s e r animales
maduros I sexualmente (de t r e s o cuatro meses). Tener
un peso corporal i n i c i a l entre 170 y 300 srarnos.
Los animales se colocan en c a j a s de poliuretano de
h 7 x 3 7 cm., en grupos d e ocho. Su alimentación cons is te
de a l imento e s p e c i a l para roedores marca P u r i n a , y
agua ad l i b i t u m .
4-
Los animales permanecen en un c u a r t o v e n t i l a d o y ! c cerrado. J
Para s u i d e n t i f i c a c i 6 n , los animales deben s e r
marcados a s u l leqada y seguir un orden d e nuneracibn
en s u acomodaci6n por qrupos ( mls a d e l a n t 4 s e
describe ) .
El laborator io s i o ( u 2 las s iquientes 3ctividades de
r(. ' I
I -6- I
!
....
c
rutina:
-Recepcibn mensual de animales.
-Registro de peso corporal a su llegada.
- M a r c a j e d e l o s a n i m a l e s p a r a s u
identificación.
-Calibio de agu3 y alinentación, diariamente.
-Toma de nuestras de frotis vqinales, diario.
-Aseo da cajas, cada tercer día.
TECNICA DE YARCAJE.
La nlarcición de los animales ha sursido como un
medio para diferenciarlos e identificarlos. As1 como
para seguir la historia d e argunos aspectos d e
investigación, que en un momento dado, van a servir
para seleccionar aquellos animales que servirán para
los experimentos.
MATERIAL.
- Cámara de anestesia. - Eter. - Balanza para pesar animales. - Perforsdora. - Csjis con tapas. - Tarjetis para etiquetar 12s cajas.
- Papel pira reqistro de paso corporal - 7 7
TECNICR.
Se toma e l primer animal y s e coloca en l a cámara
de anestes ia . Se saca cuando s e encuentra anestesiado.
Luego s e coloca en l a balanza y s e r e g i s t r a su peso
c corporal .
- C o n l a mano i z q u i e r d a s e toma sl animal por e l
d o r s o , mirándolo de f r e n t e . Con l a nano derecha s e I
toma l a perforadora y s e marcan l a s o r e j a s del animal,
siguiendo el código d e l a Figura 1.
Los animales ya niarcados s e co locan en una c a j a ,
h a s t a q u e s e r e c u p e r a n de l a a n e s t e s i a . E s t e
procedimiento s e sigue para todos los animales.
Las c a j a s deben i r etiguetndss con los números de
los animales, sexo y l a fecha de recepción. ( mes y a30
). Como s e observa en l a f igura 11. 1-
D I S C U S I O N .
Como s e puode o b s e r v a r e l c b d i ~ o e s muy c l a r o y
s e n c i l l o de r e a l i z a r . Además, se t r a t a de hacnr .I un
m í n i m o de perforaciones con e l p r o p ó s i t o de no $aAar
d e m a s i s d o a l o s a n i m a l e s . E l número máximo de
perforaciones es d e s e i s , por ejemplo e l número 9 = 30
30 10 10 6 3 , y s610 se numeran del 1 a l 100. En caso
de e x i s t i r v i l.ob,? i11yc)c 3 . 3 1 0 3 > . ? i i ? t - ~ , m ? -
1
a
.,.,
I '
c
c *..
F I G U R A CODISO DE
.
1. MARCACION.
IZQUIERDI DERECHO
: . , : . , . , . P
.. ..
I..
I 3 r c ~ - % ? I 1 n 1 , s i n o que s e m a r c a comenzando
nuevamente desde e l 1.
Se ha observado que d e s p u é s de u n t i e n p o , s e
borran l a s p e r f o r a c i o n e s de algunos animales, p o r lo
que e s necesario volver a marcarlos.
Hemos podido comprobar, después de mucho tiempo, - "
que é s t e método de m a r c a j e ha dado m u y b u 2 n o s c
.-. / - r e s u l t a d o s ; s e puede r e a l i z a r fác i lmente y no se ha
tenido n i n g ú n problema para i d e n t i f i c a r los animales .
I - Tampoco les a f e c t a s u conducta n i en s u func ibn . C. - Siendo importante para r e g i s t r a r d i v e r s o s datos de
manera i n d i v i d u a l , como: p e s o c o r p o r a l , peso de P
a l q u n o s ' ó r g a n o s i n t e r n o s , e n f e r m e d a d , c o n d u c t a
deformada, muerte y o t r o s aspectos de importancia. Y
c
-. Por i o t a n t o , e s t a t é c n i c a e s ú t i l y vent-ajosa
P para los p r i n c i p a l e s o b j e t i v o s de t r a b a j o , y pueden
< - I F
- I C
s e r v i r como e j e m p l o en o t r o s l a b o r 3 t o r i o s de
invest igación.
En o t r o s laborator ios rea l izan o t r a s técnica? para
i d e n t i f i c a r a los a n i a a l e s , por ejemplo ut i l iz 'n un
plumón para marcar l a c o l a d e l animal . Cons is te en
hacer f r a n j a s gruesas o delsadas alrededor de la c o l a
d e l an imal , s i q u i e n d o un código d e n a r c a j e . Tiiene
auchas desvrnt3 jas ; s e pueden b o r r i r fac i ln3ntS con e l
c., tiempo, puede c r e a r confusión, e t c .
re F-
* -10- i -
c-
Otras gentes rea l izan I n misma t é c n i c a , s o l o que \...
s e r i g e n p o r o t r o c 6 d i g o . Hacen un mayor ndmero de
perforaciones , s e hacen en d i f e r e n t e s s i t i o s d e l a s
c o r e j a s .
... I
P
i
c
TOMA DE MUESTRAS DE FROTIS VAGINALES.
La r a t a hembra pasa a t ravés de un c i c l o e s t r a l de
- actividad sexual cada cuatro o cinco d ías . Aunque e s t e
7- c i c l o d i f i e r e e l c i c l o menstrual en v a r i a s formas,
presentan e l mismo mecanismo hormonal. E l p r e s e n t e -1
r- i
r
r e p o r t e c o n c i e r n e en su t o t a l i d a d a l e s t u d i o de l a
regulacidn d e l c i c l o s e x u a l de l a r a t a hembra. Ver
L f igura 5.
F
-. c
L
c
MATERIAL.
- Tres vasos d e precipitado.
- Caja de espera.
ii - Gotero mediano.
c
I .
.-
c
c
- Charola con l a m i n i l l a s .
- Gasas.
- Solución s a l i n a al 0.95.
- A~ua des t i lada .
-. - Gotas d r Clorsafenicol para l o s o jos ( o p t i t i v o ) .
r' - Guantes de c i rug13 , L. .
-10- f'. c-
TECNICA.
Primero se i d e n t i f i c a e l número d e l a n i m a l . Con
l o s dedos pulgar e lnd i c e de l a nano i zqu ie rda , se
levanta d e 13 co l a l i g e ramente a l a r a t a ( d e t a l
manera q u e sus puntos de apoyo sesn 13s p a t a s
de lanteras ) ; apoyando suavemente l o s dedos niedio,
a n u l a r y menique sobre l a r eg ión dorso lumbar d e l
animal, dejando l a va3 ina a1 descubierto. F i g u r a s 2 y
_- 3.
En l a v a g i n a se introduce un gotero de p u n t a roma I
I
( l i m p i a ) , con solución sal ina, teniendo cuidado de no
estimular e l cerv ix (de o tro modo,se co r r e e l r i e s g o .. de provocar un pseudoembarazo).
h. Una vez que e l gotero esta adentro, se presiona e l
bulbo de l go te ro y l a solución salina l l egs a l a luz
v a g i n a l , p a r a que a r r a s t r e i l a s c é l u l a s que s e
encuentran en e s t a . Con e l g o t e r o s e absorve l a
.-
.... c
L
P solución . L De l a solución recuperada, s e co loca una gota de
l a muestra en e l portaobjetos. Se procede a l a v a r e l c
1 1 c.
4 -. c
gotero d e l a s i qu i en t e manera: t r e s veces COD a g u a
d e s t i l ada , dos veces con solución salina y se desecha
en e l tercer vaso. Se vue lve a poner solución $317 el
L. . g o t e r o . Se coloci a l 3 n i n a l en l a ca j a de espera, . .
, r. - 1 1 -
, ,
.. 1
hasta tomir l a m e s t r a ? e todos l o s animales de cada
caja. Terminmdo de toaar las muestras de cada caja se
regresan a su c a j a do oriqen.
La t o m de nuestras de f r o t i s vasinales se rea l i za
de lunes a ssbado a las 8 A:4. Se dejan secar y luego
se leen en e l nicroscopio.
Se debe v i g i l a r que los animales no presenten
i n f e c c i ó n ( o c u l a r o v a g i n a l ) o anomalfa en su
coqducta . Algunos animales sue len p r e s en t a r l a
enfermedad l l a m a d a o t i t i s , que afecta e l sentido del
e q u i l i b r i o ( o i d o s ) . En e s t e c a s o , p o r s e r u n a
enfermedad contagiosa, se sacr i f i ca a l an ima l .
PREPARACION DE LAMINILLAS PA R A MUESTRAS m FROTIS. Según e l ndmero d e a n i m a l e s ex i s tentes , s.srá e l
ndmero de l a ~ ~ i n i l i a s que s e p r e p a r e n . L o s
portaobejetos deben estar limpios y secos.
MATERIAL,
- Portaobjetos.
- Gotero.
- Cera.
- Plumón m3rcador.
,F - Vmo de precipitado.
- Charola forrada y p a p e l .
-12-
t h 4
i
I
FiTura 3. Vista de Erente de la toxa de frotis vaqin.ii.
-13-
- P a r r i l l a .
-. TECNICA.
r.. Se pone un poco de c e r a en pn vaso a c a l e n t a r ,
- h a s t a que s e funda l a c e r a . Se a l e j a de l a p a r r i l l a ,
para que s e e n f r l e un poco. Se introduce l a base de l a c
parte superior d o un gotero mediano. Y con l a misma s e
van h a c i e n d o c l r c u l o s s o b r e e l p o r t a o b j e t o s .
C. Constantemente s e debe c a l e n t a r l a cera para quo no s e
-- fusione.
La l a m i n i l l a t i e n e 2 5 c l r c u l o s , c a d a u n o
corresponde a l a inuestra de un d l a . Es d e c i r , cont i rne
*^
L
F
b 25 muestras de f r o t i s vaqinales . kuego s e numeran l a s <I
L
c l a m i n i l l a s , según e l ndmero de a n i a a l e s . Se colocan en
- . una charola forrada en orden consecutivo ( .1.. .- n ) , y
, s e c u b r e n con un papel que debe t e n e r l a f e c h a de I
L_
c.
1 l -
i n i c i o de torna de muestras.
A l f i n a l de cada senana de tornar muestras s e marca
c una barra negra. Cuando ha muerto o s e ha s a c r i f i c a d o
i u n a n i m a l s e c r u z a e l n d m e r o d e l a n i m a l
correspondiente, en caso que e x i s t a n muestras de dos
a n i a a l e s . S i solo e x i s t e n n u e s t r a s de un animal, s e
desecha l a l a m i n i l l a .
v
!
..- c C I C L O ESTRAL DE LA R A T A HEMBRA.
E l c i c l o e s t r a l ha s i d o d e f i n i d o como una
secuencia continua de eventos, d e f i n i d o s por eventos
v a s i n a l e s y hormonales. Las e t a p a s s e suceden una a
o t r a en forma ordena5s, y cads una e s t a c a r a c t e r i z a d a
por d i f e r e n c i a s h i s t o l ó g i c a s del f lu ido vaginal .
Las razones por l a s que s e e s c o g i ó e l f r o t i s
v a g i n a l como un v a l o r fundamontal en l a s t é c n i c a s
exper i renta les son las s iguientes : ( 1 ) Cada una de las
e t a p a s marcada por cambios en e l f r o t i s v a s i n a l e s
aproximadamente c o n s t a n t e en l o n g i t u d , en todos los
a n i m a l e s , (2) Las " e t a p a s v a g i n a l e s " constituyen e l
único método r e a l de reconocer la5 s u b d i v i s i o n e s d e l *
c ic lo e s t r a l en todos los animales que c i c l a n .
F r o t i s Vaginal.
D i e s t r o . Corresponde a l a e tapa de l e u c o c i t o s
l i b r e de c é l u l a s e p i t e l i a l e s . Se observan abundantes
i e u c o c i t o s q u o s o n e l e m e n t o s p e q u e n o s ,
po l imorfonuc leares , con núcleo anular en l a r a t a . Los
l e u c o i i t o s s e observan en g r u p o s . Dura aproximadamente
18 horas.
Etapa 1 - e tapa que corresponde a 1 p r o e s t r o de
Heape. Se observa g r a n núniero de c é l u l a s e p i t e l i a l e s
p e q u e 3 a s , r e d o n d a s y n u c l e a d a s , d o s p s r i e n c i a
-15:
notablemente uniforme en su tima,?o. Siempre aparecen
solas y no en grupos . Su promedio de duracidn e s de 12
horas.
Durante e s t a e t a p a l a s h e m b r a s n o a c e p t a n
c o p u l a c i ó n , s e def ienden e l l a s m i s r a s de c u a l q u i e r
agresión de los machos. En algunos c a s o s , s i n embargo,
c e r c a de l a mitad de l a e t s p i , y en mds casos a l f i n a l
de e l l a , los animales s e aparean.
E t a p r i 2 - l a s c é l u l a s d e l a E t a p a 1 son
reemplazadas p o r o t r a s c é l u l a s l a r g a s , d e l g a d a s ,
t r a n s p a r e n t e s , no-nucleadas, elementos como esca las -
l a s células corn i f i cadas . Por e s t a raz6n l a Etapa 2 se
d e s i a n a - c o m o l a " e t a p a de c é l u l a c o r n i f i c a d a " o
"Estro". La nues t ra s e observa o p a c a , b lanquecina y
granular.
La hembra muestra s i g n o s de " c a l o r " . E n e s t e
per íodo hay usualniente un o l o r p e c u l i a r debido a l a
secreción vaginstl, l a c u a l e s uri s i g n o de a t r a c c i ó n
para e l macho. . Etapa 3- l a cual también puede s e r nombrada 'etapa
de c é l u l a s corn i f i cadas tardía1* . No puede separarse de
l a Etapa 2 , e l f ro t i s vasinal e s i d é n t i c o , aunque no
t i e n e e l mismo ndnero d e c e l u l a s c o r n i f i c a d a s . Se
c a r a c t e r i z a p o r q u e l o s a n i m a l e s e n e s t a e t a p a no
aceptan nionta. E l promedio de l o n q i t u d de l a s Etapas 2
-16-
. . ,, i
y 3 e s de 30 horas.
Etapa 4 - llamada metaestro o l a e tapa de c é l u l a s
l e u c o c i t o s - c o r n i f i c a d a s , l a s d l t i m a s c é l u l a s
desparecen nias tarde. La muestra s e observa como una
s u b s t a n c i a de c o n s i s t e n c i a caseosa, crenosa y f luido
incrementido.
Antes de que l a s c é l u l a s corni f icadas desapirezcan
completamente reaparecen l a s c é l u l a s e p i t e i i a i e s , as1
d u r a n t e e s t e p e r l o d o h a y t r e s t i p o s de c é l u l a s
( c o r n i f i c a d a s , n o - c o r n i f i c a d a s y l e u c o c i t o s ) . Esta
etapa dura 6 horas, y p o d r l a reconocerse como l a etapa
de t r a n s i c i ó n a l a condición de reposo (caracter izsda
por migraci6.n de l e u c o c i t o s ) . Observar l a f igura 4.
Ciclo Uterino. r
Etapa 1 . E l o t e r o l l e g a 3 e s t a r d i s t e n d i d o con
f l u i d o cerca del f i n a l de l a etapa.
Etapa 2 . Alcanza más d i s t e n c i d n en l a p a r t e
t e m p r a n a d e l a e t a p a y e n t o n c e s r e q r e s i o n a ;
degeneración vacuolar del e p i t e l i o que a lgunas %.'3ces \
se i n i c i a .
Etapa 3 . E l e p i t e l i o sufre degeneración vacuolar.
E t a p a 4 . La d e s r n e r a c i ú n v a c u o l a r a l canqa S U
a l t u r a y procede a l a regeneraciún.
Diestro. E p i t e l i o resenerado.
-17-
I
..
Cic lo Ovárico.
E t a p a 1 . C r e c i a i e n t o y d e s a r r o l l o de los
f o l l c u l o s ; e l cuerpo lú teo que precede a l a ovulacidn
muestra caabios degenerativos de l a s grasas . Secrecidn
de estrógenos.
Etapa 2 . Largos f o l l c u l o s de G r i f f ; d v u l o en
maduración.
Etapa 3 . Ovulación, secrecidn de f lu ido a l espacio
per iovar ia l .
Etapa 4. Cuerpo lú teo jóven, con cavidad c e r r a d a ;
f o l l c u l o más pequeqo, óvulo en oviducto.
D i e s t r o . Cuerpo l 6 t e o comple tanente rormado y
normalmente funcional .
C i c l o de l l c a l o r f l ,
Los animales se aparean a1 f i n a l de l a Etapa 1 y
pr inc ip ios de l a Etapa 2 .
REGISTRO DS LECTURAS DE MUESTRAS DE FROTIS VAGINALES.
E l c i c l o r e p r o d u c t i v o de los niamiferos hembra e s
llamado c i c l o e s t r a l . El cual e s t 3 dividido en c u a t r o
p e r í o d o s : d i e s t r o , p r o e s t r o , e s t r o y metaestro. Cada
perlodo e s t a d e f i n i d o por eventos qu- ocurren en e l
-1%-
Figura 4. Etapas del ciclo v q i n a l ( ftotis Vaiinal) .
~~
D I E S T R O P R O E S T R O r
I I
'I
I. .
ovario maduro. En resuaen, l o s eventos reproduct ivos
e s p e c l f i c o s están asociados con cada perlodo es t ra l ,
l a duracidn de cada cual v a r í a grandemente en l o s
di ferentes mamlferos.
MATERIAL .
- Microscopio de contraste de fases.
- Dos vasos de precipitado.
- Gotero chico de plást ico.
- Papel seda.
- Block milimétrico y marcador.
- Solucidn s a l i n a o agua bidesti lada.
TECNICA .
Se pone u n a gota be s o l u c i d n o a g u a , en cada
muestra que se va a l e e r . Con e l f i n de resuspender
las c é lu l as que se han secado. Después s e q u i t a e l
e x c e so de agua , con e l go t e ro , y se desecha en un
vaso. Se observa l a !nuestra en e l microscopio y se
r e g i s t r a en e l c u a d e r n o , según l a e t a p a que
corresponde e l d l a . Ver f i q u r a 6.
i - i ! -
Existen varios t ipos de grá f icas , al3rinas de e l l a s
se observan cono en l a f igura 7 , se.pueden explicar de i - ! l a s isuiente nanera:
-. i 'c
-20- / L .
!
Animal No. Observaciones
1 , 9 , 1 1 , 1 3 , 1 6 Cic lo de cuatro d i a s .
2 C ic lo con e s t r o de dos d i s s .
3 , 1 7 9 19
4,6,20 Cic lo irre3ulzir.
5 C i c l o con d i e s t r o p e r s i s t e n t e
Cic lo de c inco d i a s . .
P o s i b l e pseu3oembarazo.
7 Ciclo con e s t r o p e r s i s t e n t e .
8,18 Muerte p o r enfermedad, marcada
c o n R I P y u n c l r c u l o n e g r o en e l número que
- . L .
i d e n t i f i c a a1 animal.
9 , 1 1 C a n u l a d a s , e n d i e s t r o C A N , y ',
s a c r i f i c a d a s a los dos d las RIP.
1 0 , 1 4 , 1 6 Ovariectomíi b i l a t e r a l OVX. B1L.y
c l r c u l o a z u l en e l número del animal.
11,15 R e g i s t r o de contracción u t e r i n a ,
c l r c u l o rojo.
12 Ovariectoala u n i l a t e r a l OUL f a s e
1 , s a c r i f i c i o a los quince d ías R I P . f a s e 2.
15 Apareamiento en proestro , r e s i s t r o
de contraccidn u t e r i n i a los d i e z d las c i r c u l o r o j o .
Con e s t i úe todolos l i s e , p u r d r contro lar de minera
p a r t i c u l a r 3 cada i n i n a l . Esto s i r v e p3ra se lecc ionar
-21-
!-
, s. !,,, I
I I'
. - -
i3"ias del ciclo estral.
Figura 5. Cambios Hormonales en el ciclo estral de l a rata.
Figura 6. Manera en que se grafican las lecturas de f fot is
c
LI . c
I -
C
I
m -4
4
<
aquellos animales que c i c l e n en forma r e g u l a r . Para
e s t o e s n e c e s a r i o t e n e r por lo menos dos c i c l o s
regis trados .
D I S C U S I O N .
Existen d i f e r e n c i a s con respecto a l a r e a l i z a c i d n
de e s t a s t é c n i c a s . En re lac ibn con l a toma de muestras
e l procediniento e s s i m i l a r en muchos l a b o r a t o r i o s ,
s o l o que en a lgunos no u t i l i z a n un gotero para tomar
l a s muestras, s ino una pipeta Pasteur. Se ha observado
que frecuentemente l a p i p e t a da?a a los s n i a a l e s y
comunmente produce un pseudoembarazo. Otra d i f e r e n c i a
e s de que inmediatamente de que se toma l a muestra,
é s t a e s observada, por l o que solo e x i s t e una muestra
en cada p o r t a o b j e t o s , l a c u a l s e desecha luego de
o b s e r v a r s e . La t é c n i c a r e p o r t a d s o f r e c e d i v e r s a s
venta jas : en cada portaobjetos pueden e x i s t i r hasta 25
muestras , aproximadanente u n D e s , con ass de c i n c o
c i c l o s ; l a s sues t ras pueden quardarse por mucho t ieapo
y s e puedrn o b s e r v a r v a r i a s v e c e s , p a r a a c l a r a r
d i v e r s a s dudas. Cada l a m i n i l l a e s individual , lo cual
permite seguir l a h i s t o r i a d e l a actividad c i c l i c a de
cada aninial.
Tanibién e x i s t e n d i f e r e n c i a s con r e s p e c t o a 1
r e g i s t r o de l e c t u r a s . En o t r o s l i b o r a t o r i o s l a s
I I
F
, . .
lecturas se registran por medio de letras (que
corresponden a 13 letra inicial del nombre de rada
etapa del ciclo). Observanos una clara ventaja sobre
este método, y es de que Q W medio de las gráficas se
puede observar la continuidad del ciclo estral. Así
podernos seleccionhr aquellos animales con ciclos
continuos y resulares psra ejercicios experimentales
precisos.
OVARIECTOMIA BILATERAL.
También mal llamada castración. Los efectos de l a
ovariectopfa bilateral han sido menos estudiados rn 1s
hembra que en el macho, porque los efectos de l a
ovariectomla son impresionantemente consistentes en
muchas especies. La ovariectomfa en l a s hembras
resulta E n una cesacibn conpleta de 13 actividad
sexual, del ciclo estral y aparente falta de toda
motivation sexual.
. MATERIAL.
- Csrnara de anestesia. - Nantrnedores de anestesia. - Risuradora. - Resucitsdor.
-25-
- Eter .
- Material de c i r u g l a . Aguja e h i l o .
- Pipeta de 10 m l .
- Balanza para pesar animales.
- Balanza para pesar brganos.
- Gasas.
- Papel para r e g i s t r o de datos.
- T a r j e t a s para e t iquetar c a j a s .
- Cinta y regla (en alsunos casos ) .
TECNICA.
Se toma una r a t a del grupo experimental. Se coloca
el a n i m a l en una cámara d o a n e s t r s i s . Se d e j a e l
animal p o r poco tiempo, hasta que pierda e l r e f l e j o d e
pos tura y quede f l á c i d o . Se saca y se colóca sobre l a
balanza para pesar a n i m a l e s , r e g i s t r a n d o su p e s o
c o r p o r a l . Se r a s u r a l a p a r t e v e n t r a l d e l a n i n a l ,
procurando no dsaar l a s g l a n d u l a s mamar ias . P i r a
mantener dormido 31 animal, e s necesario co locar le un
mantenedor de anes tes ia en hoc ico y n a r i z , h a s t C que
termine 13 diseccibn.
i-
\
S e i n i c i a l a d i s e c c i 6 n h a c i e n d o u n c o r t e
l o n g i t u d i n a l a t r a v é s de la p i e l por a r r i b a d q los
s e n i t a l e s y por abajo d-1 d i a f r a g s 3 . EnseSulds se haze
un c o r t e s i m i l a r a t ravés de l a nusculaturi abdominal.
r# - 2 6 -
Con unas pinzas curvas, chicas, se sostiene e l extreao
s u p e r i o r d e l c o r t e ( p i e l y rndsculo), con o t ras se
l o c a l i z a l a g r a s a p e r iu t e r i na y s e descubren los
cuernos uter inos . Se j a l a con g e n t i l e z a e l cuerno
uterino de un lado hasta l l e ga r a l ovario ( l a ! g l ándu la
no se debe daqar) . Con unas pinzas se toma l a gras.i
per i ova r i ca , por a r r i b a d e l o va r i o . Se remueve l a
g l á n d u l a , cortando por abajo del oviducto. E l ovario
se coloca en un p l a t o de t e f l b n , cubriéndolo con l a
g r a s a , para e v i t a r que s e seque. Se remueve la
g l a n d u l a d e l o t r o l a d o , s i g u i e n d o e l m i s 9 0
procedimiento. Ver f i 3uras 8 y 9. Ahora, se sutura
por planos e l corte . Luego, se disecan los ovarios, se
pesan y s e r e g i s t r a su peso . Ver apénd i ce . Los
animales ya avar iectomizados s e co locan. e n c a j a s
formando grupos de ocho y se e t ique ta cada caja con
l os datos correspondientes, f i 3 u r a 11.
i
DISCUSION.
La ovariectomfa b i l a t e r a l se rea l i za con e l f i n de
observar l os e fectos de algunas hormonas adainistradas
después de l a ovariectoala. Tzabiéi ?at-? v ? r i f i ? ? r s i
realmente c,.san l o s zi.cl.s.>s. ?,.--: C ~ , ~ . L ? S -ro?h?i-to.>.:, -1
peso de l o s ovarios no se ha registrado, oor l o que a l
ser removidos se desechan.
-27-
r -
L
c
O t r o p r o p O s i t o e s t e n e r grupos c o n t r o l p a r a
comparar e l peso hamedo y seco de los ovarios , para lo
m a l s i es neceswio r e g i s t r a r s u peso.
Los grupos c o n t r o l , también pueden s e r v i r para
c o m p a r a r l o s c o n g r u p o s d e a n i m a l e s
hemiovariectonizados, estableciendo l a re lac i6n entre
e l peso norms1 de un ovario y de u n o con h i p e r t r o f i a
compensadora.
En algunos casos , se r e g i s t r d t s a b i é n e l diámetro
de l a p e l v i s y l a l o n s i t u d d e l cuerpo. Tonando coa0
punto de re ferenc ia 2 . 5 ca. p o r abajo del es tern611 , y
desde los o r i f i c i o s externos del oido hasta l a última
P & g i b ? k d e p e l a j e ( i n i c i o d e l a c o l a ) ,
respectivamente . En l a mayoría de l o s laborator ios l a ovar iec tomía
b i l a t e r a l s e r e a l i z a p o r l o s f l a n c o s , e s d e c i r ,
l a t e r a l . Se hacen dos i n c i s i o n e s , una cada lado d e l
ánlaiab, s i m i l a r a l a hemiovar iec toa la . S in embargo,
W a u l t a más simple l a ovariectomla a n ive l v e n t r a l , ya
que s 6 l o s e hace un c o r t e . De manera que s e dsaa >enos
a l animal.
4-
\
i O V A R I E C T O : 4 1 4 UNILATER4L.
También 1 l s . n a d i h e a i o v a r i e c t o m l i . H a s i d o
(-e -23-
I
I I I
I I I
I I I
!
Ir
L
, -
1 -
- -
establec ido como resul t ido de l a observaci6n c l í n i c a y
p o s t - m o r t e m , que d i f e r e n t e s ó r s a n o s , cuando son
p~movidos en forma p a r c i a l , t ienen un marcado poder de
crecimiento compensatorio.
La ovariectomía u n i l a t e r a l (OUL) durante e l c i c l o
e s t r a l , en muchas especies r e s u l t a en u n 3 h i p e r t r o f i a
c o ~ ~ p e n s a d o r a d e l o v a r i o remanente. E s t e e j e r c i c i o
experimental se divide en d o s f a s e s : fase 1 O U L y f a s e
2 s a c r i f i c i o después de quince d ías .
MATERIAL.
- Cámara de anes tes ia .
MantenePores de anestes ia .
- Rasurakra . - Resucitador.
- Eter .
- Pipets de 10 ml. - Material de c i r u g í a . Aguja e h i l o . - Gasas. - Balanza para pesar animales.
- Balan23 para pesar órganos.
- Plato de t e f l ó n .
- Jaula individual de espera. i - R-cipiente de ovarios (para g u w d a r en horno ) .
- Papel para r e g i s t r o de datos.
- T a r j e t a s para e t iquetar c a j a s .
TECNICA (Fase 1 ) .
Se tomi una r a t s del grupo experimental. Se coloca
en l a cániara de a n e s t e s i a , hasta que se quede f l s c i d o .
Se s a c a a1 a n i m a l , s e pesa y s e r e 3 i s t r a su peso
c o r p o r a l . Se rasura e l f lanco derecho del ani l ia l , por
a r r i b a de l a p e l v i s . Se c o l o c a e l mantenedor de
a n e s t e s i a . Se coloca a l animal en una posici6n comoda
para l a disección.
Se hace un c o r t e longitudinal a t ravés de l a p i e l ,
e n t r e l a c i n t u r a p d l v i c a y l a ú l t ima c o s t i l l a , de
aprdximac$aiente 1 cm. Despues se-hace un c o r t e s imi lar
a t r a v é s de l a musculatura abdominal. Con unas pinzas
s e sost iene l a p i e l y músculo, y con o t r a s s e l o c a l i z a
l a g r a s a p e r i o v a r i c a . Ja lSndola a l e x t e r i o r para
c o r t a r por debajo del oviducto como en l a f igura 9 . Se
c o l o c a e l ovario en un p l a t o d e tef ldn y se cubre con
l a grasa. Se procede a c e r r a r los planos d e l c o r t e .
. Después s e c o l o c a en una c a j a , hasta que se recupere
totalmente de l a anes tes ia .
E.1 s i g u i e n t e p s s o e s d i s e c a r e l ovario removido
(derecho), s e r e g i s t r a su peso húmedo y s e guarda en
e l horno. Después de ocho dias y d u r - i n t o t r e s dlas
m s s s e r e g i s t r a s u p e s o s e c o . A l t e r m i n a r d e
-30-
hemiovariectornizar t odos
experimental se ordenan en
cada caja. Fisura 11 .
S A C R I F I C I O .
Este procedimiento se
l o s animales d e l grupo
grupos de ocho etiquetando
1
e a l i z a despué
d í a s de haber real izado l a OUL.
de quince
MATERIAL .
- Cámara de anestesia.
- Eter. Acetona.
- Ba l anza para pesar anivales.
- Balanza para pesar 6rganos. - - G u i l l o t i n a .
- Rasuradora.
- Bolsas para cadáveres y cabezas.
- Material de c irugfa. Bisturl.
- Gasas.
- Plato de te f l6n.
- Balanza para equi l ibrar tubos de centrifusaci6n.
- Tubos de v i d r i o de 13x100 y de 12x75 numerados.
- Vaso de precipitado de 200 m l .
- Pipetas Pasteur. Aplicadores.
- Centrffu3a.
- Hielo seco y noraal.
-31-
, .>
I... , ..- C .
._ r-
L
I".
-_ I-.
L
L
r . L
c
L <
c
- Etiquetas, papel parafilm y papellpara registro de datos.
T E C N I C A (Fase 2).
Del lote de los aninales OUL, se toma una rata y
se coloca en la c4liar.a de anestesia, y se deja hasta
que muera. Se saca de la cámara y se registra su peso
corporal. Se decapita al animal en la guillotina e
inmediatamente se colecta, en un tubo grande, la
sangre que sale del cuello (apr6x. 10 mi.). Se pone el
tubo en hielo normal, para evitar descomposicibn.
Se rasura el flanco izquierdo del animal, por
arriba de la. pelvis. Se remueve el ovario izquierdo %
siguiendo el mismo procedimiento de OULI. Se diseca el
ovario y se reqistra su peso hámedo. LÓs ovarios
removidos se colocan en un horno eléctrico. Después se
registra el peso seco de l os misnos.
A l mismo tiempo se hipofisectomiza a la rata, para
i registrar el peso húnedo de la glándula hipofisis n i
DISCUSION.
La OUL se lleva a cabo, en la aayorfa de los
laboritorios, siguiendo el mismo procedimientb, y
alqunas veces, con l o s mismos fines. El osjetivo es
observar el efecto que resulta de la removición del
5c -32-
!
I
I ' I
1 - i i :
- o v a r i o derecho sobre e l i zqu ie rdo . Y es tab l e ce r l a
relacidn de su peso húmedo con e l seco.
Las di ferencias que se pueden observar con o t r o s
repor tes sobr i O U L , es d e que e l s a c r i f i c i o de los
animales se rea l i za en d i f e rentes tiempos, es d e c i r ,
alsunos l o real izan a l o s dos dlas, otros a los cinco,
y has ta después de q u i n c e d l a s . E n e s t e c a s o
pa r t i cu la r solo se han sacr i f icado l o s animales a los
quince dlas de rea l i zarse l a OUL.
La OUL se r e a l i z ó en etapas de f in idas del c i c l o
e s t r a l , hasta formar grupos de 60 animsles en cada
e tapa d e l c i c l o ( 2 4 0 an ima l e s ) , a d i f e r e n c i a de
a lgunos repor tes en donde no se cons ide ra ron l a s
etapas del c i c l o e s t ra l . Solo se tom8 en consideracidn
e l e f ec to de l a removicidn del ovario.
En éste, y los demás reportes, e l e fec to de l a OUL
result8 en un incremento en tsmalio, por l o tanto , en
peso d e l ovar io remanente ( izquierdo). Otros trabajos
reportan un incremento en cuerpos lúteos y dvulos. E l
peso incrementa probablemente por resultado de mayores
ovulaciones y lu t e in i zac idn post -ovulator ia en esos
animales. Con respec to a l a r e lac idn del peso de l a
h i p d f i s i s s e obs e r v o que no f u 6 a f e c t a d o p o r l a
hemiovariectomla.
.
-33-
O V U L A C I O N .
Un dla antes de que l a r a t a entre en e s t r o , en l a
maflana del proestro , l a secrecidn de 17-beta-estradiol
de los f o l l c u l o s en desarrol lo alcanzan su pico ráxirno
(ver f igura 5 ) . Disparándose e l surqimiento ovulatorio
de LH en la tarde del proestro , y ocurre l a ovuiac i6n
en las primeras horas de l a maflana del e s t r o .
MATERIAL.
- Camara de anes tes ia .
- Eter .
- Rasbradora.
- Balanza para pesar animales.
- Cajas de p e t r i . r
- Material de c i rugía . Aquja e h i l o .
- Bolsas para cadáveres.
- Gasas.
- Portsobejetos. I 7 , - Dos agujas de c i ruqla .
- Microscopio de contraste de f a s e s .
- Pipeta de 10 m l .
- Frascos chicos con tapa.
- b(atr5z de 100 ml.
- Papel p a r a f i l n , e t i q u e t i s , maskin-t ipe y papel
-34-
i
-c
.
para r e g i s t r o de datos.
- Solución s a l i n a .
- Formo1 a l 10%.
TECNICA.
Para v e r i f i c a r l a ovulación s e s e l e c c i o n a n r a t a s
en e s t r o . Se toma una r a t a del grupo experimental y se
coloca en l a camara de a n e s t e s i a , hasta que muera. Se
s a c a de l a cámara para r e g i s t r a r s u peso c o r p o r a l .
Ahora s e r a s u r a l a r e g i ó n v e n t r a l d e l a n i m a l .
Enseguida s e i n i c i a l a d i s e c c i ó n haciendo u n c o r t e
longitudinal a t r a v é s de l a p i e l , p o r a r r i b a de los
g e n i t a l e s . Luego s e hace o t ro s o r t e s imi lar a t ravés
de l a musculatura abdominal. Con ayuda de unas pinzas
s e l o c a l i z a i a g r a s a p e r i u t e r i n a , en e s t e c a s o e s
importante no dañar los cuernos uterinos para observar
s u condic ión . Ya observada y registrada 13 condición
u t e r i n a , se j a l a con gent i leza e l cuerno uterino de un
lado h a s t a l o c a l i z a r a l ovario. Se remeve e l ovario
junto con e l oviducto y parte d e l cuerno u t e r i n o ( e l
t e r c i o d i s t a l o v á r i c o , ver f i s u r a s 8 y 9 ) . Se coloca
en l a c a j a de p e t r i con solución s a l i n a , cubriéndose
con 13 grasa p e r i o v a r i c a . Se remueve e l o v a r i o del
o t r o lado. LUISO, en l a c a j a d e p e t r i se marca e1 lado
d e l o v a r i o ( I - i z q u i e r d o ; D-derecho) . Se s i T u e e s t e
-35-
I c- - procedimiento para l o s demás animales.
Ahora s e procede a d i s e c a r e l o v i d u c t o p a r a
observar a l microscopio los bvulos. Se toma e l o va r i o
del lado derecho y se separa e l oviducto (entre ovario
y cuerno uterino). Lue30 se coloca en un portaobjetos,
se l oca l i za e l ánpula y se mrca con un clrculo. Sobre
e l oviducto se pone otro portaobjetos, se l l ando los en
ambos lados con naskin-tape. Se marca e l papel con l a
l e t r a i n i c i a l de l lado que corresponde (D o I ). Se
observa en e l microscopio, para contar los bvulos. Se
r e s i s t r a e l dato . Para contar los bvulos en forma
a i s l a d a hacemos l o sisuiente: se q u i t a n los se l l o s de
los por taob j e t os , y e l porta ob j e t os que cubre e l
o v i d u c t o . Con l a a y u d a d e l mismo, se de l im i ta e l
ampula del resto del oviducto. Con i g u j a de ciru?;la se
pincha e l ámpula para a i s la r l os Ovulos. Se pone agua
natural sobre l o s Svulos a i s l ados y se observan al
microscopio para contar los . Se r e g i s t r a e l dato. Se
procede de i 3 u a l mane ra para anbos lados y para los
demás ovarios.
Los Ovulos a i s l ados se f i j a n en formo1 a l 1 0 % .
Ahora se disecan l os ovarios para f i j a r s e en foraol en
f r ascos bien se l l ados . Se e t iquetan con los da tos
debidos.
-36-
Figura 8. Vista ventral de l a disección para . remover ovarios, oviducto y utero.
tercio uroximal 1
del ovario tercio distal del ova*
Fiqura 9. Niveles de corte Mra renover qlánduias. r.
DISCUSION.
P a r a d e t e c t a r o comprobar l a o v u l a c i ó n , e s
necesar io s esu i r l a continuidad de l o s eventos del
c i c l o es t ra l de l a ra ts , ya que este aétodo se rea l i za
en una e tapa d e f i n i d a d e l c i c l o . Por l o que e s
inportante que e l an ima l c i c l e normalmente y de manera
precisa.
La razón por l a que l o s óvulos se cuentan en e l
á m p u l a y a i s l a d o s , e s porque algunas veces en e l
ámpu la no se aprecian en su t o t a l i d a d , y a que s e
esconden.entre l o s t e j i dos del oviducto. Y y a aislados
se pueden apreciar mejor. Esto se prueba a l comparar
los datos reqistrados para ambos dasos.
La observación de l a condición uter ins es con e l
fin de observar si coincide su condición con l a etapa
del c i c l o .
CANULACION.
La canulaci6n es un i e d i o , en c i e r t o s métodos
exper imentales, pars administrar diversas sustancias
como fsrmacos, hormonas u otros.
MATERIAL.
- Cámara de anestesix.
- Mantenedores de anestesia.
-3a-
r
' I.
- Eter .
- Rasuradora.
- Resucitador.
- Balanza para pesar animales.
- 2 j e r ingas de 1 m l . con asuja d e l no. 12
- Gasas, cubrebocas.
- Material de c i r u g l a . Ao;uja e h i l o . B i s t u r l .
- Cánula ( de s i l á s t i c e s t é r i l ) .
- P a r r i l l a .
- Jaulas individuales.
- Guantes para c i r u g l a .
- Solución s a l i n a e s t e r i l i z a d a ( t i b i a ) .
- Cronómetro. *a
- Papel para r e 3 i s t r o de datos.
r
TECNICA.
Se toma una r a t a del grupo para experimentar . Se
a n e s t e s i a a l animal. Se r e g i s t r a el tiempo i n i c i a l de
l a a n e s t e s i a . Se rasura l a parte por a r r i b a del hombro
y a b a j o de l a o r e j a d e l a n i n a l . La co1ocac ión ;de l
animal debe s e r colioda. Enseguida, s e hace u n c o r t e
con e l b i s t u r l , debe s e r p r o f u n d o , de nanera que
a t r a v i e s e p i e l y m ó s c u l o . S e i d e n t i f i c a l a i e n ,
y u 3 u l i r , con l a n y u d i de u n 3 t i j e r a s rect'as se debe
d isecar . Para e v i t a r que l a ven3 s e seque, se Done u n
I
%
-39-
poco de s o l u c i 6 n s a l i n a t i b i a . Con unas p i n z a s de
d i s e c c i b n curvas se pasan dos h i l o s cortos por debajo
de l a vena. E l h i l o que queda cercano a l a c a b e z a , s e
anuda a l a vena. Se toman l a s terminales de e s t e h i l o ,
ja lándolas h i c i a a r r i b a . Se pone e l dedo lndice ( d r l a
mano i z q u i e r d a ) por d e b a j o de l a vena. Con unas
t i j e r a s s e hace u n c o r t e pequefío a 45 grados en l a
vena (procurando no c o r t a r l a ) , s in perder de v i s t a e l
c o r t e se introduce l a cánula a t ravés de 6 1 . Con unas
pinzas s e empuja hasta que 1leo;ue a l corazbn. Se puede
v e r i f i c a r cuando observanos que l a cánula s e c o n t r a e
a l ritmo de los l a t i d o s del coraz6n. En l a parte f i n a l
e x t e r i o r de l a c á n u l a s e c o l o w una j e r i n g a con v
s o l u c i 6 n s a l i n a t i b i a , con e l f i n d e p r o b a r l a
permeabilidad de l a c á n u l a . Se hace un nudo a l h i l o
q u e queda en direction a l h o a b r o , s e prueba 1 3
permeabilidad, s e hace o t ro nudo y s e vuelve a probar
l a permeabi l idad. Se cortan l a s puntas de e s t e h i l o .
En l a p a r t e f i n a l de l a cánula s e c o l o c a o t r a h i l o
c o r t o c o n a g u j a . Inmediatamente s e hace un c o r t e
pequelo en l a cabeza, y pur debajo de l a p i e l s e pasa
l a a g u j a h a s t a que salpla a t ravés del corte hecho en
l a cabeza . S e s u t u r a e l c o r t e que se h i z d en e l
c u e l l o . Se c o r t a 11 canula de 113nera que quede a 13
a l t u r s de l a nar iz . La punta debe e s t a r bien s e l l a d a
1
-40-
n
con h i l o . Cada r a t a canulada se c o l o c a en una j a u l a
individual debidamente et iquetada, f igura 11.
DISCUSION.
La c a n u i a c i d n ha s i d o lin buen n e d i o p a r a l a
rea l izac ión d e diversos experiaentos en donde s e deben
administrar hormonas o fármaos, por v l a i n t r a v e n o s a .
En a l s u n o s l a b o r a t o r i o s l a t s c n i c a p r e s e n t a o t r a s
inovaciones. Porque en e s t e caso los animales, algunas
v e c e s s e q u i t a n l a c á n u l a . P o r l o que ha s i d o
necesario reformar o suaar o t r o s procedimientos para
mejorar l o s resul tados . Estos han s ido c o r t a r l a s uílas
de l a s p a t a s d e l a n t e r a s , pero s e h a o b s e r v a d o q u e i
t a m b i é n s e l a q u i t a n ; c u b r i r l a c á n u l a con o t r o
mater ia l más r e s i s t e n t e para 'ev i tar que s e - l a q u i t e n , ,- l a c u a l si ha dado nuy buenos r e s u l t a d o s en o t r o s
laborator ios .
APAREAMIENTO. I n J
En l a hembra, e l proestro e s e l per íodo c r í t i c o
para e l apareamiento. La conducta sexual e s t á mediada
por n i v e l e s h o r n o n i l e s , cuindo s e producen 3r4ndes
c a n t i d a d e s d e p r o 3 e s t e r o n i y s e n i v e l i n con los
estrógenos.
íi -41-
MATERIAL.
- Hembras maduras sexualmente, en proestro .
- Machos maduros.
TECNICA.
Se se lecc ionan l a s heúibras necesar ias en proes t ro ,
por medio de l a s l e c t u r a s de f r o t i s req is t radas . Se
colocan en tres c a j a s formando grupos de s e i s en cada
una . A l a s 3 P Y s e ponen dos nachos en cada c a j a ,
f i g u r a 1 1 . Pernanecen juntos por 24 horas.
A l a s 3 PM de l s i g u i e n t e d la s e separan l o s nachos
de l a s hembras. Inmediatamente de toman muestras de
f r o t i s v a g i n a l e s de l a s hembras apareadas. El posible
embarazo s e apoya en l a p r e s e n c i a de espermatozoides
en l a n u e s t r a v a g i n a l . Luego se toman y se r e g i s t r a n
diariamente f r o t i s vas ina les .de e s t o s animales. Con e l
f i n de seguir s u c i c l o .
. DISCUSION.
El o b j e t i v o d e l a p a r e a m i e n t o e s e m b a r a z a r un
núnero determinado de r a t a s hembras, para experimentos
donde s e estudian l a s respuestas de 6 t e r o s prsqados a
d i f e r e n t e s p e r l o d o s ( 5 , 1 0 , 1 5 y 19 d l i s , y despues
de l p w t o ) . Se ha observado que solo pocas helibras se
- 4 2 -
r
embarazan ( d e l 40 a 502), pero no s e sabe e l porque.
En o t r o l a b o r a t o r i o s e l apareamiento se r e a l i z a ,
colocando una hembra y un macho en u n 3 s o l a c a j a , y
siernpre se embarazan. Pero s e r l a necesario disponer d e
un ndmero mayor de c a j a s y l u g a r para r e a l i z a r l o de
e s t a n a n e r a . Y para e s t e c a s o s e n e c e s i t a n muchas
hembras embarazadas, y a s 1 no es posible . L a s hembras
no embarazadas s e l e s da un perlodo de descanso (15
dlas) para volverse a aparear.
L.. CONCLUSIONES.
c
..., c
-.
c j
....
.i Se ha podido l l e g a r a l a conclusidn d e que no solo
los c o n o c i m i e n t o s t e 6 r i c o s pueden s e r v i r para l a
rea l izac ión de i n v e s t i s i c i o n e s en algún canpo de l a
c i e n c i a , s i n o q u e e s n e c e s a r i o l l e v a r l o a l a
prác t i ca . Por e s t o h i s ido p o s i b l e poder c u n p l i r con
e l p r i n c i p a l o b j e t i v o de e s t e t r a b a j o , que es e l
adquir ir habi l idad de manejar l a s d i v e r s a s t é c n i c a s
a-
I experimentales d e laborator io . 1
.J
La forma d s t r a b a j o , l a d i s p o n i b i l i d a d d e l
mater ia l necesario para t r a b a j a r , los f i c t o r e s orden y
l i m p i e z a , y l a i n t r o d u c c i ó n d- nuevas i d e a s e
r e a l i z i c i 5 n de cad3 e j e r c i c i o experimental , también
h m sido notableaento irnportantss para c u n p l i r con e l
? l a
' e -43-
1 ... i
b
1
' ...* i o , , j
- l a s técn icas . E l mejo r equipo t a m b i h ha hecho posible
una mayor c o n c e n t r a c i ó n en l a v a l o r a c i 6 n de los h
I C r e s u l t a d o s e x p e r i m e n t a l e s , en vez del s ixn i f i cado de
ob je t ivo pr incipal de e s t e informe.
Aunque muchos de los procedimientos incluidos en
e s t e informe s e han hecho en o t r o s l a b o r a t o r i o s de
u
f i s i o l o q l a por u n t i empo c o n s i d e r a b l e , r e c i e n t e s
progresos en equipo han permitido e l r e f i n a l i e n t o de
l o s datos obtenidos. E l uso de s i s t e a a s de r e s i s t r o
modernos que s e han u t i l i z a d o en e l p r o c e s o de
resultados d r l a s t é c n i c a s r e a l i z a d a s , reconoce que
t a l e s r e g i s t r o s no son d i s p o n i b l e s en todos los
laborator ios de i n v e s t i ~ a c i ó n . ~r
/
RESUMEN.
!
I
E l p r i n c i p a l o b j e t i v o d e e s t e i n f o r m e ha s i d o 1 - I' a d q u i r i r a d i e s t r a m i e n t o e n d i v e r s a s t é c n i c a s
e x p e r i m e n t a l e s y a p o y a r en los p r o y e c t o s d e
investigación. La base de la mayorla de los e j e r c i c i o s
experimentales aqui r e p o r t a d o s , fueron i n i c i a l m r n t e
r e a l i z a d o s p o r Lon3 y Evans en s u monoqrafía c l ' l s $ c i
(Long and Evans, l r j 2 2 ) .
1: 1 -
r-
I.
c ?
, * L
c
En tod3s 11s t ec r i i c i s se u t i l i z i r ó n r a t i s 5i.?.nbras
virqnnes a lb inas de l a cepi Suraque Diwley ds 90 d l i s
, 4 4 -
de edad. Con u n p e s o e n t r e 2 0 0 y 300 3 r a n o s . S e
marcaron para s u i d e n t i f i c a c i d n y s e nantuvieron en
c a j a s formando g r u p o s de ocho animales en cada una.
Sus c i c l o s e s t r a l e s fueron registrados por t o m d i a r i a
de f r o t i s vaginales , y solo aquellos que tuvieron dos
o más c i c l o s c o n s i s t e n t e s de c u a t r o d l a s fueron
ut l izados . En todas l a s t é c n i c a s s e u t i l i z 6 e l e t e r
?.u-o ? i ? s t e 3 i i . Ta.?or, los i1F.o- o b % ? ? i d o s fveron
reTistrados (peso corpora l , nuerte , e t c . ) . El o b j e t i v o
p r i n c i p a l s e pudo r e a l i z a r con l a p r á c t i c a constante ,
logrando as1 l a capacitación en l a s técn icas d e s c r i t a s
en e s t e informe. E s t o s e r v i r á para l a rea l izac ión de
nuevos proyectos de invzst igacibn.
APENDICE.
A n s t o a l a d e l a p a r a t o r e p r o d u c t o r de Is r a t a
hembra . Los o v a r i o s e s t á n d e n t r o d e u n p e q u e l o
e s p s c i o , c o m p l e t a a e n t e c e r r a d o , e l e s p a c i o
. p e r i o v a r i a l , l a s p a r e d e s d e l c u a l e s t e n fornadas
principalmente de l a nenibrana p e r i o v a r i s l . El e s p a c i o
no t i e n e c o n e x i ó n c o n l a c a v i d a d p e r i t o n e a l . El
oviducto s e foraa de ocho a doce pl iegues , los c u a l e s
s e p u e d e n d i v i d i r zn d o s grupos, uno d i s t 3 1 y o t r o
proximal. Los p l i e j u e s de l a p a r t e d i s t a l s e muoven
-45-
l ibremente , t ieqen paredes muy delsadas y dis ten4 idas .
La p a r t e p r o x i a a l no SI abre a l extremo d e l cuerno
u t e r i n o , s i n o como l o ha d e s c r i t o F i s c h e l , e s a t r a v é s
de l a p s p i l a l i q e r s a e n t e l i t e r a l a l e x t r e l i o d e l
cuerno . Las paredes de los cuernos u t e r i n o s e s t s n
f u s i o n a d a s en sus p a r t e s m5s b a j a s , pero s u l ú n i n a
e s t 5 independiente una de o t r a , a b r i é n d o s e h a s t a l a
vagins a t r a v é s de o r i f i c i o s separados. Esos o r i f i c i o s
e x t e r n o s de los c a n a l e s c e r v i c a l e s e s d l f i c i l
d e t e c t a r l o s o n t r e los plieques de la porción v a s i n a l
junto d e l c é r v i x . Ver f i g u r a 10.
Coma d i s e c a r un ovario . Con ayuda de unas pinzas y
unas t i j e r a s s e quitan los residuos de grasa y t e j i d o s
que rodean a1 o v a r i o . Sobre un papel a b s o r v e n t e se
pasa v a r i a s veces e l o v a r i o , con e l f i n de q u i t a r l a
sangre que tenKa impregnada, p a r a proceder a pesar lo .
8-
17- -E2. 17-beta -es t radio l .
J
FSH. Hormona e s t i m u l a n t e de l f o l í c u l o , s i g l a s en
i n g l é s .
LH. Hormoni l u t e i n i z a n t e , siqlas en i n q l e s
-46- " r
Mantenedor de a n e s t e s i a . F r a s c o pequeflo C O D
algodan impregnado con eter.
OUL. Ovariectomla Uni- lateral .
OVX. BIL. Ovariectomla B i l a t e r a l .
P 4 . Progesterona.
PROL. Prolac t ina .
Sutura de un c o r t e . Con unas pinzas s e sos t iene e l
extrerso s u p e r i o r d e l c o r t e , s e hace pasar una aguja
con h i l o atravesando ambos lados d e l c o r t e muscular ,
luego s e s o s t i e n e e l extremo i n f e r i o r y s e pasa l a
aguja d e igual nianera que en e l o t ro extremo. Se hacan
d o s nudos f u e r t e s par?. asegurar l a sutura. Se procede
de igual forma para c e r r a r e l c o r t e hecho en l a p i e l .
/
j: C .
1 ... I : -.
Porcion vaqinal del
orificio externo ci-
I-
cervix
1 .. 2
l a v Tins. 4 Fiqura 10. Ariatomk de l a p r a t o reuro?uctor de l a rata hembra.
'i
Figura 11. %delos pxa etiquetar en (iifwentes ejerciceios experimentales.
.
...
Figura 11,
i . .
-50- r
ovx> B I L . I
DIMEDBO PELVIC0
Fechi:
PESO. OVARIO
LONGITUD OBSERVACIONES D I
d
I
,-
Fecha : O U L 2
S A C R I F DI C I Fecba:
-, I
I ._
- I - I .
.. ' I
. .- ~~ ~ I P E S O
OVARIO HIPOFISIS O B S E R V A C I O N E S HWEDO DE
IZYJIERDO
:
* - F ,...
' . P. -S E. C. O
Fecha:
Hora :
-+---- I
Fecha:
'lora:
Fechs: Hora:
Fecha:
Hora : Fechs:
Hora: I I
Q V Fecha : U L A C I O N
::
?
CANULACION
TIEMPO TIEMPO FINAL DE TOTAL DE
ANESTESIA ANESTESIA
, -.. i i ..x
c I I ' I
Fecha:
O B S E R V A C I O N E S
i. i. .. .. ,,,. . . , .
B I B L I O C R A F I A .
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i
-51-