universidade federal do rio grande do norte ......além disso, não houve diferença estatística...
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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE
PROGRAMA DE POacuteS GRADUACcedilAtildeO EM CIEcircNCIAS ODONTOLOacuteGICAS
CENTRO DE CIEcircNCIAS DA SAUacuteDE
THAIS OLIVEIRA CORDEIRO
EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIAS MOMBIN SOBRE A
SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS ndash UM ESTUDO IN VITRO
NATAL RN
2019
THAIS OLIVEIRA CORDEIRO
EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIAS MOMBIN SOBRE A SUPERFIacuteCIE
DE DENTES HUMANOS ndash UM ESTUDO IN VITRO
Dissertaccedilatildeo apresentada ao Programa de Poacutes-
Graduaccedilatildeo em Ciecircncias Odontoloacutegicas Centro de
Ciecircncias da Sauacutede da Universidade Federal do Rio
Grande do Norte como requisito para a obtenccedilatildeo
do tiacutetulo de Mestra em Cliacutenicas Odontoloacutegicas
Orientadora Profordf Dra Ruthineacuteia Dioacutegenes Alves
Uchocirca Lins
Co-orientador Prof Dr Boniek Castillo Dutra
Borges
NatalRN
2019
Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN
Sistema de Bibliotecas - SISBI
Catalogaccedilatildeo de Publicaccedilatildeo na Fonte UFRN - Biblioteca Central Zila Mamede
Cordeiro Thais Oliveira
Efeito do extrato da folha de spondias mombin sobre a superfiacutecie de dentes humanos - um estudo in vitro Thais Oliveira Cordeiro - 2019
60f il
Dissertaccedilatildeo (Mestrado)-Universidade Federal do Rio Grande do Norte Ciecircncias
da Sauacutede Poacutes Graduaccedilatildeo em Ciecircncias Odontoloacutegicas Natal 2019
Orientadora Dra Ruthineacuteia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins Coorientador Dr Boniek Castillo Dutra Borges
1 Fitoteraacutepicos - Dissertaccedilatildeo 2 Anacardiaceae - Dissertaccedilatildeo 3
Espectroscopia - Dissertaccedilatildeo 4 Dente - Dissertaccedilatildeo I Lins Ruthineacuteia
Dioacutegenes Alves Uchocirca II Borges Boniek Castillo Dutra III Tiacutetulo
RNUFBCZM CDU 6150142
Elaborado por Raimundo Muniz de Oliveira - CRB-15429
DEDICATOacuteRIA
Dedico este trabalho aos meus amados pais Neacutelio e Luacutecia pela confianccedila depositada e me
permitirem alcanccedilar meus sonhos atraveacutes de seus esforccedilos diaacuterios
AGRADECIMENTOS
Agradeccedilo primeiramente a Deus pelo dom da vida autor do meu destino guia presente
em minha vida
Aos meus pais Neacutelio Oliveira Cordeiro e Mordf Luacutecia B Oliveira meus exemplos de vida
por todos os esforccedilos realizados e priorizaccedilatildeo da minha educaccedilatildeo durante toda a vida Obrigada
por acreditarem em mim Aos meus irmatildeos Ceiccedila por ser fonte de inspiraccedilatildeo e me direcionar
a ser uma pessoa cada vez melhor por ser um espelho para todos noacutes Ao meu irmatildeo Neacutelio
Filho por viver esse sonho comigo e se fazer presente quando mais precisava por lagar tudo
em Teresina e ser meu amigo e protetor durante o tempo que veio morar comigo obrigada meu
irmatildeo por ser tatildeo companheiro e minha Thaiacutesa e Maria Fernanda que mesmo tatildeo pequenas jaacute
me ensinam o quanto a saudade eacute dolorosa e sempre me deram forccedilas para correr atraacutes dos meus
objetivos A minha madrasta Maria Antocircnia e padrasto Justino por todo carinho e cuidado
durante todos esses anos Agradeccedilo pelo amor dedicado durante toda a minha ausecircncia por
serem suporte e alegria na minha vida Sem vocecircs seria impossiacutevel realizar este sonho
Aos meus tios e primos que sempre depositaram carinho e amor em toda minha
trajetoacuteria
Aos meus orientadores Prof Drordf Ruthineacuteia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins e Prof Dr
Boniek Castillo Dutra Borges pela atenccedilatildeo por terem sempre respostas pertinentes pela
disponibilidade durante esses anos de trabalho e por me permitirem ser melhor como pessoa e
pesquisadora atraveacutes de seus exemplos diaacuterios de luta honestidade competecircncia e feacute Agradeccedilo
ainda a professora Larissa Sgarbosa de Arauacutejo Matuda por sua atenccedilatildeo e disponibilidade por
colaborar com esta pesquisa Aos professores Drordf Diana Ferreira Gadelha de Arauacutejo e Prof Dr
Bruno Cesar de Vasconcelos Gurgel por serem fonte de inspiraccedilatildeo e terem contribuiacutedo em
minha formaccedilatildeo durante o estaacutegio em docecircncia
As minhas queridas amigas Ana Luacutecia Camila e Carol que estiveram proacuteximas a mim
desde o primeiro dia de aula do mestrado sempre dispostas a serem apoio e sorrisos apoacutes dias
difiacuteceis As minhas queridas amigas Angeacutelica e Mayra pela amizade e por me acompanharem
nessa trajetoacuteria A amiga Aline e Mel por tornarem meus dias em Natal mais felizes e leves A
Franciara pela companhia durante a pesquisa e por sua amizade A meu querido Ricardo por
sua companhia e amizade que sempre se manteve disposto a tornar minha vida em Natal mais
leve com sua presenccedila Ao meu querido amigo Stephano por se manter sempre presente ainda
que com a distacircncia As minhas amigas Wenderdania e Maria Eduarda por me apoiarem quando
precisava A minha querida amiga Carina Liz por dedicar sua atenccedilatildeo e cuidado durante toda
essa trajetoacuteria
Aos meus queridos amigos Juliane Maxwell Mayara Priscila Larissa e Fabiane por
transmitirem carinho e pela manutenccedilatildeo de nossa amizade desde o iniacutecio da graduaccedilatildeo
Aos alunos do 4ordm periacuteodo de odontologia da UFRN que tanto me ensinaram durante o
estaacutegio em docecircncia estimulando que eu buscasse respostas para suas duacutevidas e dividindo suas
trajetoacuterias de vida
Aos secretaacuterios da poacutes-graduaccedilatildeo Lucas e Gracinha por serem sempre tatildeo prestativos e
gentis em ajudar quando necessaacuterio
A Floriano por sempre se disponibilizar a ajudar com o que lhe compete tecnicamente
por ser prestativo e disponiacutevel
Ao programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Ciecircncias Odontoloacutegicas Departamento de Ciecircncias
Farmacecircuticas e ao Departamento de Ciecircncias dos Materiais A Universidade Federal do Rio
Grande do Norte professores alunos da poacutes-graduaccedilatildeo e aos funcionaacuterios de forma geral pela
oportunidade incriacutevel de ter contato com o conhecimento em sua forma mais inspiradora
lsquorsquoA essecircncia do conhecimento consiste em
aplicaacute-lo uma vez possuiacutedorsquorsquo
(Confuacutecio)
RESUMO
INTRODUCcedilAtildeO O estudo da fitoterapia na prevenccedilatildeo e no tratamento de doenccedilas tem
estimulado pesquisas com plantas medicinais na Odontologia Dentre essas plantas destaca-se
a espeacutecie Spondias mombin por apresentar disponibilidade de mateacuteria-prima e amplo espectro
de accedilotildees farmacoloacutegicas que incluem atividades antimicrobiana anti-inflamatoacuteria cicatrizante
e antioxidante OBJETIVO Investigar o efeito do extrato de Spondias mombin L (cajaacute) sobre
a superfiacutecie de dentes humanos METODOLOGIA O extrato de cajaacute foi preparado em sua
diluiccedilatildeo 132=3125 mgml Trinta dentes humanos foram seccionados (60 x 60 mm)
preservando as proximais Os fragmentos foram divididos aleatoriamente em 3 grupos (n=10
por grupo) de acordo com os grupos extrato hidroetanoacutelico de S mombin L Digluconato de
clorexidina 012 e aacutegua destilada Cada fragmento foi imerso nas respectivas substacircncias por
1 minuto 2 vezes ao dia durante 14 dias Antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees foram realizadas
anaacutelises de cor molhabilidade rugosidade (Ra) e morfologia O pH das substacircncias tambeacutem
foi investigado Os dados foram analisados estatisticamente por meio de ANOVA (1 e 2 fatores)
e teste de Tukey para muacuteltiplas comparaccedilotildees RESULTADOS Natildeo houve diferenccedila
estatisticamente significativa em relaccedilatildeo a cor entre os grupos O extrato de cajaacute e clorexidina
012 apresentaram diferenccedilas significativas (plt0001) enquanto aacutegua destilada natildeo
apresentou diferenccedilas estatiacutesticas (pgt0005) Quanto a molhabilidade natildeo houve diferenccedila
estatisticamente significativa entre extrato de cajaacute (pgt0005) clorexidina 012 (pgt0005) e
aacutegua destilada (pgt0005) Para rugosidade natildeo houve diferenccedila estatisticamente significante
entre as substacircncias analisadas (pgt00005) Aleacutem disso natildeo houve diferenccedila estatiacutestica entre as
substacircncias e o tempo de imersatildeo (p lt00001) O pH meacutedio do extrato hidroetanoacutelico de cajaacute e
clorexidina 012 was de 295 e 65 respectivamente CONCLUSAtildeO O pH do extrato de
Smombin L eacute aacutecido e da clorexidina eacute neutro A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de
cajaacute foi bom tanto quanto a clorexidina A cor dos fragmentos dentaacuterios foi alterada apoacutes o
protocolo de imersatildeo no extrato hidroetanoacutelico de cajaacute e clorexidina 012 A rugosidade dos
fragmentos dentaacuterios analisados se manteve inalterada apoacutes o protocolo de imersatildeo nas
diferentes soluccedilotildees testadas O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostrou que natildeo
houve diferenccedila na superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
Descritores Fitoteraacutepicos Anacardiaceae Espectroscopia Dente
ABSTRACT
INTRODUCTION The study of phytotherapy in the prevention and treatment of diseases
stimulated the research with medicinal plants in Dentistry Among these plants the species
Spondia mombin stands out for the availability of raw material and a broad spectrum of
pharmacological actions that include antimicrobial anti-inflammatory cicatrizant and
antioxidant activities OBJECTIVE To investigate tooth surface changes regarding cajaacute
(Spondias mombin L) extract METHOD The cashew extract was prepared in its
dilution116=3125 mgml Thirty human teeth were sectioned (60 x 60 mm) preserving the
proximal surfaces Dental fragments were randomly divided into 3 groups (n =10 per group)
according to the substances hydroethanolic extract (3125 mgml) 012 chlorhexidine and
distilled water Each fragment was immersed in the respective substance for 1 minute twice
daily for 14 days Before and after the immersion color analysis wettability roughness (Ra)
and morphology as well as the pH levels of the substances were investigated Data were
analyzed statistically by means of ANOVA (one and two factors) and Tukey test for multiple
comparisons RESULTS There was a statistically significant difference between color in the
groups Cajaacute extract and 012 chlorhexidine presented significant differences (p lt0001)
while distilled water showed no statistical differences (pgt 0005) Regarding wettability there
was no statistically significant difference between Cajaacute extract (pgt0005) 012 chlorhexidine
and distilled water (pgt0005) For roughnes there was no statistically significant difference
between the analyzed substances (pgt00005) In addition there was no statistically significant
difference between the substances and immersion time (p lt00001) The mean pH of the
hydroethanolic extract of cajaacute and 012 chlorhexidine is 295 and 65 respectively
CONCLUSION pH of the extract of Smombin L is acid of the chlorhexidine is neutral The
wettability of the hydroethanolic extract of cajaacute was as good as 012 chlorhexidine Color
changes were observed after the immersion in hydroethanolic extract of cajaacute and 012
chlorhexidine Roughness of the analyzed dental fragments remained unchanged after the
immersion protocols Scanning electron microscopy showed no difference in the enamel
surface between the solutions tested
Keywords Phytotherapeutic AnacardiaceaeSpectroscopy Tooth
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade em baixa
rotaccedilatildeo27
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes seccionamento27
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L 29
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH29
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)30
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie dentaacuteria para anaacutelise da molhabilidade
31
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade32
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact32
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG33
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia34
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L preacutevio apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo38
Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo39
Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo40
Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo41
Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo42
Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo43
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 Resultados das meacutedias (desvios-padratildeo) da molhabilidade das substacircncias
testadas35
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padratildeo) da anaacutelise da cor valores de (ΔE) 36
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padratildeo) dos valores de rugosidade antes e apoacutes os diferentes
protocolos de imersatildeo36
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 18
21 AGENTES QUIacuteMICOS ANTIMICROBIANOS 18
22 FITOTERAPIA 19
221 SPONDIAS MOMBIN L20
23 CARACTERIacuteSTICAS DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA22
24 ALTERACcedilOtildeES NA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA CAUSADAS POR SUBSTAcircNCIAS QUIacuteMICAS
23
3 OBJETIVOS 25
31 OBJETIVO GERAL 25
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS 25
4 MEacuteTODO 26
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO26
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS26
43 SELECcedilAtildeOPREPARACcedilAtildeOARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA 26
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L 28
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO29
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO29
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE30
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE31
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR 32
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA 33
411 ANAacuteLISE DOS DADOS 34
5 RESULTADOS 35
51 pH DO EXTRATO 35
52 AcircNGULO DE CONTATO MOLHABILIDADE35
53 COR 36
54 RUGOSIDADE 36
55 MORFOLOGIA 37
6 DISCUSSAtildeO 44
7 CONCLUSAtildeO 48
REFEREcircNCIAS 49
ANEXOS 56
APENDICES 58
16
1 INTRODUCcedilAtildeO
Desde os primoacuterdios o uso de plantas medicinais foi preterido por falta de embasamento
cientiacutefico favorecendo agrave substituiccedilatildeo dos fitoteraacutepicos pelos medicamentos alopaacuteticos Na deacutecada
de 70 a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (OMS) passou a incentivar o estudo cientiacutefico das plantas
medicinais jaacute que muitas das encontradas no Brasil ainda natildeo possuiacuteam eficaacutecia cientiacutefica
comprovada (ALELUIA et al 2015) A partir dos anos 80 e 90 ocorreu um aumento expressivo
no mercado mundial de medicamentos fitoteraacutepicos especialmente nos paiacuteses industrializados
(FERNANDES 2003 CALIXTO 2001)
A 8ordf Conferecircncia Nacional de Sauacutede realizada no ano de 1986 trouxe entre suas
recomendaccedilotildees a ldquointroduccedilatildeo de praacuteticas alternativas de assistecircncia agrave sauacutede no acircmbito dos serviccedilos
de sauacutede possibilitando ao usuaacuterio o acesso democraacutetico de escolher a terapecircutica preferidardquo Com
vistas agrave viabilizaccedilatildeo dessa recomendaccedilatildeo algumas medidas foram tomadas como a regulamentaccedilatildeo
da implantaccedilatildeo da fitoterapia nos serviccedilos de sauacutede nas unidades federadas por meio da resoluccedilatildeo
Comissatildeo Interministerial de Planejamento e Coordenaccedilatildeo (Ciplan nordm 08 de 8 de marccedilo de 1988)
Os estudos com plantas medicinais em Odontologia tecircm sido desenvolvidos como uma
tentativa de abrir novos caminhos para o combate agraves infecccedilotildees bucais possibilitando a inserccedilatildeo do
uso de fitoteraacutepicos como recursos preventivo e terapecircutico na praacutetica diaacuteria ambulatorial
especialmente nos serviccedilos de atenccedilatildeo baacutesica ofertados pelo Sistema Uacutenico de Sauacutede (SUS) Nessa
perspectiva experimentos in vitro sobre a accedilatildeo antimicrobiana de extratos vegetais tecircm sido
realizados nas uacuteltimas deacutecadas (ALELUIA et al 2015 LIMA 2015 MACEcircDO 2016 LIMA
2015 ALVES 2017) com o intuito de obter agentes quiacutemicos antimicrobianos que auxiliem o
controle mecacircnico da microbiota bucal
Frente agraves deficiecircncias nos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal decorrentes da falta de
destreza manual e motivaccedilatildeo agentes quiacutemicos antimicrobianos tecircm sido propostos a fim de inibir
o crescimento e a proliferaccedilatildeo de microrganismos no ambiente bucal reduzir a adesatildeo bacteriana
agraves superfiacutecies modificar a atividade bioquiacutemica desses microrganismos e alterar a ecologia do
biofilme dentaacuterio para uma microbiota menos patogecircnica (MARSH 2010)
Na atualidade o agente antimicrobiano mais utilizado no controle quiacutemico da microbiota
bucal planctocircnica e organizada em biofilme eacute o digluconato de clorexidina 012 em funccedilatildeo do
seu amplo espectro de accedilatildeo baixa toxicidade e elevada substantividade Todavia essa substacircncia
aleacutem de apresentar um custo elevado natildeo pode ser usada por periacuteodos prolongados uma vez que
nessas situaccedilotildees altera a microbiota natural e produz efeitos colaterais como manchamento de
dentes e restauraccedilotildees descamaccedilatildeo da mucosa e modificaccedilotildees no paladar (MATOS et al 2015
HAJIFATTAHI et al 2016)
17
As limitaccedilotildees da clorexidina e de outros agentes antimicrobianos sinteacuteticos convencionais
tem encorajado a investigaccedilatildeo de produtos naturais com maior atividade terapecircutica menor
toxicidade maior biocompatibilidade com os tecidos moles e duros da cavidade oral e menor custo
para o controle quiacutemico do biofilme e o tratamento de diferentes infecccedilotildees orais (ALLAKER 2009)
Dentre esses produtos naturais cuja accedilatildeo antimicrobiana tem sido investigada merece
destaque o extrato da folha de Spondias mombin (S mombin L) espeacutecie vulgarmente conhecida
como cajaacute pertencente agrave famiacutelia Anacardiacea que estaacute distribuiacuteda em diversas regiotildees do Brasil e
de outros paiacuteses da Ameacuterica Latina (THADHANI et al 2012)
Considerando que S mombin L tem demonstrado muacuteltiplas atividades bioloacutegicas relevantes
agrave manutenccedilatildeo e ao restabelecimento da sauacutede bucal podendo assim ser utilizada como mateacuteria
prima para o desenvolvimento futuro de novos agentes antimicrobianos quiacutemicos torna-se de
extrema importacircncia investigar o seu efeito sobre os tecidos moles e duros da cavidade oral a fim
de que o mesmo seja administrado com eficaacutecia e seguranccedila
Frente ao exposto o presente estudo se propocircs a investigar o pH do extrato de Spondias
mombin L e avaliar o seu efeito sobre a superfiacutecie de dentes humanos no que diz respeito agraves
caracteriacutesticas cor rugosidade morfologia de superfiacutecie e molhabilidade comparando esse efeito
com aquele produzido pela soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 sobre essa mesma
superfiacutecie A hipoacutetese nula testada foi a de que natildeo havia diferenccedila entre o pH do extrato de
Spondias mombin L e o pH da soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 assim como entre os
efeitos produzidos por essas substacircncias sobre as superfiacutecies de dentes humanos no tocante a todas
as variaacuteveis investigadas Ademais natildeo existem estudos na literatura vigente que tenham
investigado o referido extrato frente agrave superfiacutecie dentaacuteria fato este que destaca o ineditismo do
estudo em questatildeo e a sua importante contribuiccedilatildeo para os avanccedilos cientiacuteficos na aacuterea odontoloacutegica
18
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
21 Agentes quiacutemicos antimicrobianos
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar quando o controle mecacircnico no
sentido de evitar o acuacutemulo de bacteacuterias sobre os dentes natildeo puder ser realizado diariamente ou
estiver inadequado (ANDERSON 2003 LAING et al 2008)
Frente agraves limitaccedilotildees dos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal agentes quiacutemicos
antimicrobianos tecircm sido propostos principalmente nos casos em que haacute dificuldade de controle do
biofilme dentaacuterio e naqueles onde eacute necessaacuterio reduzir demasiadamente a quantidade de
microrganismos bucais (MOREIRA et al 2009 MARSH 2010)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico de moleacuteculas carregadas positivamente que apresenta um
largo espectro antimicrobiano pertencente agrave famiacutelia de compostos conhecidos como bisbiguanida
Sua moleacutecula se liga provavelmente atraveacutes de forccedilas eletrostaacuteticas aos grupos fosfato carboxila
ou sulfato tanto na mucosa bucal quanto nos microrganismos e na peliacutecula adquirida Sendo assim
a clorexidina compete com o caacutelcio comprometendo a aderecircncia bacteriana e consequentemente
inibindo a formaccedilatildeo do biofilme Tal substacircncia atinge seu efeito antimicrobiano atraveacutes de suas
atividades bactericida e bacteriostaacutetica Inicialmente quando aplicada na forma de soluccedilatildeo gel ou
verniz a concentraccedilatildeo eacute tal que o agente eacute bactericida Todavia a clorexidina tambeacutem se liga agraves
mucosas e superfiacutecies dos dentes e posteriormente eacute liberada de forma lenta em concentraccedilotildees
bacteriostaacuteticas durante vaacuterias horas Diante do exposto o que diferencia a clorexidina dos demais
agentes antimicrobianos eacute a sua substantividade Sua duraccedilatildeo de accedilatildeo eacute prolongada pela sua
habilidade de adsorccedilatildeo agraves estruturas bucais e posterior liberaccedilatildeo lenta na sua forma ativa (SILVA
1991 ROSA ROCHA 1993 MATTHIJS 2009 SOET et al 2002 FEJERSKOV KIDD 2005
VAN STRYDONCK et al 2005)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico catiocircnico que age contra uma ampla variedade de bacteacuterias
fungos e alguns viacuterus lipofiacutelicos (DENTON et al 1991) Seu efeito antibacteriano ocorre atraveacutes da
interaccedilatildeo natildeo-especiacutefica com o aacutecido fosfolipiacutedico da membrana celular causando alteraccedilotildees na
permeabilidade da membrana para iacuteons como potaacutessio e para constituintes do citosol como
aminoaacutecidos e nucleotiacutedeos Em altas concentraccedilotildees a atividade de enzimas associadas agrave
membrana como dehidrogenases e ATPase eacute indiretamente afetada (DAVIES 1973 BRECX
THEILADE 1984)
19
Dentre os agentes antimicrobianos bucais mais utilizados o digluconato de clorexidina
012 merece destaque devido ao seu potencial antimicrobiano e agrave sua caracteriacutestica de forte
adsorccedilatildeo agraves superfiacutecies bucais (MARSH 2010 SCHEIE PETERSEN 2011) A clorexidina
demonstrou ser eficaz contra vaacuterias bacteacuterias orais Devido ao seu amplo espectro antimicrobiano
atuando contra bacteacuterias Gram-positivas Gram-negativas e fungos tambeacutem tem sido utilizada para
tratar concomitantemente doenccedilas endodocircnticas (SIQUEIRA JR PAIVA ROcircCcedilAS 2007
VIANNA et al 2008) periodontais e para prevenir a progressatildeo de caacuterie (COSYN et al2006
DUARTE LOTUFO PANNUTI 2008) Visto que a clorexidina promove alguns efeitos colaterais
como pigmentaccedilatildeo dos dentes alteraccedilatildeo do paladar e descamaccedilatildeo da mucosa os antisseacutepticos que
tecircm como princiacutepio ativo o digluconato de clorexidina a 012 ou 02 apresentam meacutedia elevada
para o potencial de reduccedilatildeo da microbiota bucal quando comparados a outros antisseacutepticos
(MATOS et al 2015)
As propriedades de um antisseacuteptico ideal incluem estabilidade baixa tensatildeo superficial
letalidade em baixas concentraccedilotildees ausecircncia de toxicidade e poder de penetraccedilatildeo No entanto
nenhum produto disponiacutevel no mercado possui todos esses requisitos o que justifica os efeitos
colaterais e a pouca eficiecircncia apresentada por alguns (MOREIRA et al 2009 ZANIN et al 2007)
Diante dos efeitos colaterais do digluconato de clorexidina 012 e da sua possibilidade de
causar resistecircncia bacteriana torna-se necessaacuterio investigar as propriedades antimicrobianas de
novas substacircncias e com a rica diversidade da flora do Brasil parece salutar o estudo de produtos
derivados de plantas como princiacutepio ativo de possiacuteveis agentes antimicrobianos (MOTA
TURRINI POVEDA 2015)
O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibioacuteticos tem
se tornado um problema significante para a sauacutede puacuteblica As principais causas dessa resistecircncia
estatildeo associadas ao uso excessivo de antibioacuteticos nos tratamentos por prescriccedilotildees meacutedicas e agrave
capacidade de sobrevivecircncia intracelular de algumas bacteacuterias induzidas por certas infecccedilotildees que
impedem o acesso do medicamento em foco Observa-se que o alto custo dos medicamentos se
apresenta como um problema relevante para a populaccedilatildeo de baixa renda gerando assim a busca por
novos meacutetodos alternativos viaacuteveis como o uso dos fitoteraacutepicos (YUNES et al 2001)
22 Fitoterapia
Atualmente o uso de fitoteraacutepicos tem se intensificado em vaacuterios paiacuteses especialmente no
Brasil que possui uma flora rica e diversa com grande potencial para o desenvolvimento dessa
ciecircncia (ASSIS 2009 MOLINA et al 2008 MONTES et al 2009 OLIVEIRA et al 2007
TOMAZZONI NEGRELLE CENTA 2006)
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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56
ANEXOS
57
58
APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
THAIS OLIVEIRA CORDEIRO
EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIAS MOMBIN SOBRE A SUPERFIacuteCIE
DE DENTES HUMANOS ndash UM ESTUDO IN VITRO
Dissertaccedilatildeo apresentada ao Programa de Poacutes-
Graduaccedilatildeo em Ciecircncias Odontoloacutegicas Centro de
Ciecircncias da Sauacutede da Universidade Federal do Rio
Grande do Norte como requisito para a obtenccedilatildeo
do tiacutetulo de Mestra em Cliacutenicas Odontoloacutegicas
Orientadora Profordf Dra Ruthineacuteia Dioacutegenes Alves
Uchocirca Lins
Co-orientador Prof Dr Boniek Castillo Dutra
Borges
NatalRN
2019
Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN
Sistema de Bibliotecas - SISBI
Catalogaccedilatildeo de Publicaccedilatildeo na Fonte UFRN - Biblioteca Central Zila Mamede
Cordeiro Thais Oliveira
Efeito do extrato da folha de spondias mombin sobre a superfiacutecie de dentes humanos - um estudo in vitro Thais Oliveira Cordeiro - 2019
60f il
Dissertaccedilatildeo (Mestrado)-Universidade Federal do Rio Grande do Norte Ciecircncias
da Sauacutede Poacutes Graduaccedilatildeo em Ciecircncias Odontoloacutegicas Natal 2019
Orientadora Dra Ruthineacuteia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins Coorientador Dr Boniek Castillo Dutra Borges
1 Fitoteraacutepicos - Dissertaccedilatildeo 2 Anacardiaceae - Dissertaccedilatildeo 3
Espectroscopia - Dissertaccedilatildeo 4 Dente - Dissertaccedilatildeo I Lins Ruthineacuteia
Dioacutegenes Alves Uchocirca II Borges Boniek Castillo Dutra III Tiacutetulo
RNUFBCZM CDU 6150142
Elaborado por Raimundo Muniz de Oliveira - CRB-15429
DEDICATOacuteRIA
Dedico este trabalho aos meus amados pais Neacutelio e Luacutecia pela confianccedila depositada e me
permitirem alcanccedilar meus sonhos atraveacutes de seus esforccedilos diaacuterios
AGRADECIMENTOS
Agradeccedilo primeiramente a Deus pelo dom da vida autor do meu destino guia presente
em minha vida
Aos meus pais Neacutelio Oliveira Cordeiro e Mordf Luacutecia B Oliveira meus exemplos de vida
por todos os esforccedilos realizados e priorizaccedilatildeo da minha educaccedilatildeo durante toda a vida Obrigada
por acreditarem em mim Aos meus irmatildeos Ceiccedila por ser fonte de inspiraccedilatildeo e me direcionar
a ser uma pessoa cada vez melhor por ser um espelho para todos noacutes Ao meu irmatildeo Neacutelio
Filho por viver esse sonho comigo e se fazer presente quando mais precisava por lagar tudo
em Teresina e ser meu amigo e protetor durante o tempo que veio morar comigo obrigada meu
irmatildeo por ser tatildeo companheiro e minha Thaiacutesa e Maria Fernanda que mesmo tatildeo pequenas jaacute
me ensinam o quanto a saudade eacute dolorosa e sempre me deram forccedilas para correr atraacutes dos meus
objetivos A minha madrasta Maria Antocircnia e padrasto Justino por todo carinho e cuidado
durante todos esses anos Agradeccedilo pelo amor dedicado durante toda a minha ausecircncia por
serem suporte e alegria na minha vida Sem vocecircs seria impossiacutevel realizar este sonho
Aos meus tios e primos que sempre depositaram carinho e amor em toda minha
trajetoacuteria
Aos meus orientadores Prof Drordf Ruthineacuteia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins e Prof Dr
Boniek Castillo Dutra Borges pela atenccedilatildeo por terem sempre respostas pertinentes pela
disponibilidade durante esses anos de trabalho e por me permitirem ser melhor como pessoa e
pesquisadora atraveacutes de seus exemplos diaacuterios de luta honestidade competecircncia e feacute Agradeccedilo
ainda a professora Larissa Sgarbosa de Arauacutejo Matuda por sua atenccedilatildeo e disponibilidade por
colaborar com esta pesquisa Aos professores Drordf Diana Ferreira Gadelha de Arauacutejo e Prof Dr
Bruno Cesar de Vasconcelos Gurgel por serem fonte de inspiraccedilatildeo e terem contribuiacutedo em
minha formaccedilatildeo durante o estaacutegio em docecircncia
As minhas queridas amigas Ana Luacutecia Camila e Carol que estiveram proacuteximas a mim
desde o primeiro dia de aula do mestrado sempre dispostas a serem apoio e sorrisos apoacutes dias
difiacuteceis As minhas queridas amigas Angeacutelica e Mayra pela amizade e por me acompanharem
nessa trajetoacuteria A amiga Aline e Mel por tornarem meus dias em Natal mais felizes e leves A
Franciara pela companhia durante a pesquisa e por sua amizade A meu querido Ricardo por
sua companhia e amizade que sempre se manteve disposto a tornar minha vida em Natal mais
leve com sua presenccedila Ao meu querido amigo Stephano por se manter sempre presente ainda
que com a distacircncia As minhas amigas Wenderdania e Maria Eduarda por me apoiarem quando
precisava A minha querida amiga Carina Liz por dedicar sua atenccedilatildeo e cuidado durante toda
essa trajetoacuteria
Aos meus queridos amigos Juliane Maxwell Mayara Priscila Larissa e Fabiane por
transmitirem carinho e pela manutenccedilatildeo de nossa amizade desde o iniacutecio da graduaccedilatildeo
Aos alunos do 4ordm periacuteodo de odontologia da UFRN que tanto me ensinaram durante o
estaacutegio em docecircncia estimulando que eu buscasse respostas para suas duacutevidas e dividindo suas
trajetoacuterias de vida
Aos secretaacuterios da poacutes-graduaccedilatildeo Lucas e Gracinha por serem sempre tatildeo prestativos e
gentis em ajudar quando necessaacuterio
A Floriano por sempre se disponibilizar a ajudar com o que lhe compete tecnicamente
por ser prestativo e disponiacutevel
Ao programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Ciecircncias Odontoloacutegicas Departamento de Ciecircncias
Farmacecircuticas e ao Departamento de Ciecircncias dos Materiais A Universidade Federal do Rio
Grande do Norte professores alunos da poacutes-graduaccedilatildeo e aos funcionaacuterios de forma geral pela
oportunidade incriacutevel de ter contato com o conhecimento em sua forma mais inspiradora
lsquorsquoA essecircncia do conhecimento consiste em
aplicaacute-lo uma vez possuiacutedorsquorsquo
(Confuacutecio)
RESUMO
INTRODUCcedilAtildeO O estudo da fitoterapia na prevenccedilatildeo e no tratamento de doenccedilas tem
estimulado pesquisas com plantas medicinais na Odontologia Dentre essas plantas destaca-se
a espeacutecie Spondias mombin por apresentar disponibilidade de mateacuteria-prima e amplo espectro
de accedilotildees farmacoloacutegicas que incluem atividades antimicrobiana anti-inflamatoacuteria cicatrizante
e antioxidante OBJETIVO Investigar o efeito do extrato de Spondias mombin L (cajaacute) sobre
a superfiacutecie de dentes humanos METODOLOGIA O extrato de cajaacute foi preparado em sua
diluiccedilatildeo 132=3125 mgml Trinta dentes humanos foram seccionados (60 x 60 mm)
preservando as proximais Os fragmentos foram divididos aleatoriamente em 3 grupos (n=10
por grupo) de acordo com os grupos extrato hidroetanoacutelico de S mombin L Digluconato de
clorexidina 012 e aacutegua destilada Cada fragmento foi imerso nas respectivas substacircncias por
1 minuto 2 vezes ao dia durante 14 dias Antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees foram realizadas
anaacutelises de cor molhabilidade rugosidade (Ra) e morfologia O pH das substacircncias tambeacutem
foi investigado Os dados foram analisados estatisticamente por meio de ANOVA (1 e 2 fatores)
e teste de Tukey para muacuteltiplas comparaccedilotildees RESULTADOS Natildeo houve diferenccedila
estatisticamente significativa em relaccedilatildeo a cor entre os grupos O extrato de cajaacute e clorexidina
012 apresentaram diferenccedilas significativas (plt0001) enquanto aacutegua destilada natildeo
apresentou diferenccedilas estatiacutesticas (pgt0005) Quanto a molhabilidade natildeo houve diferenccedila
estatisticamente significativa entre extrato de cajaacute (pgt0005) clorexidina 012 (pgt0005) e
aacutegua destilada (pgt0005) Para rugosidade natildeo houve diferenccedila estatisticamente significante
entre as substacircncias analisadas (pgt00005) Aleacutem disso natildeo houve diferenccedila estatiacutestica entre as
substacircncias e o tempo de imersatildeo (p lt00001) O pH meacutedio do extrato hidroetanoacutelico de cajaacute e
clorexidina 012 was de 295 e 65 respectivamente CONCLUSAtildeO O pH do extrato de
Smombin L eacute aacutecido e da clorexidina eacute neutro A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de
cajaacute foi bom tanto quanto a clorexidina A cor dos fragmentos dentaacuterios foi alterada apoacutes o
protocolo de imersatildeo no extrato hidroetanoacutelico de cajaacute e clorexidina 012 A rugosidade dos
fragmentos dentaacuterios analisados se manteve inalterada apoacutes o protocolo de imersatildeo nas
diferentes soluccedilotildees testadas O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostrou que natildeo
houve diferenccedila na superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
Descritores Fitoteraacutepicos Anacardiaceae Espectroscopia Dente
ABSTRACT
INTRODUCTION The study of phytotherapy in the prevention and treatment of diseases
stimulated the research with medicinal plants in Dentistry Among these plants the species
Spondia mombin stands out for the availability of raw material and a broad spectrum of
pharmacological actions that include antimicrobial anti-inflammatory cicatrizant and
antioxidant activities OBJECTIVE To investigate tooth surface changes regarding cajaacute
(Spondias mombin L) extract METHOD The cashew extract was prepared in its
dilution116=3125 mgml Thirty human teeth were sectioned (60 x 60 mm) preserving the
proximal surfaces Dental fragments were randomly divided into 3 groups (n =10 per group)
according to the substances hydroethanolic extract (3125 mgml) 012 chlorhexidine and
distilled water Each fragment was immersed in the respective substance for 1 minute twice
daily for 14 days Before and after the immersion color analysis wettability roughness (Ra)
and morphology as well as the pH levels of the substances were investigated Data were
analyzed statistically by means of ANOVA (one and two factors) and Tukey test for multiple
comparisons RESULTS There was a statistically significant difference between color in the
groups Cajaacute extract and 012 chlorhexidine presented significant differences (p lt0001)
while distilled water showed no statistical differences (pgt 0005) Regarding wettability there
was no statistically significant difference between Cajaacute extract (pgt0005) 012 chlorhexidine
and distilled water (pgt0005) For roughnes there was no statistically significant difference
between the analyzed substances (pgt00005) In addition there was no statistically significant
difference between the substances and immersion time (p lt00001) The mean pH of the
hydroethanolic extract of cajaacute and 012 chlorhexidine is 295 and 65 respectively
CONCLUSION pH of the extract of Smombin L is acid of the chlorhexidine is neutral The
wettability of the hydroethanolic extract of cajaacute was as good as 012 chlorhexidine Color
changes were observed after the immersion in hydroethanolic extract of cajaacute and 012
chlorhexidine Roughness of the analyzed dental fragments remained unchanged after the
immersion protocols Scanning electron microscopy showed no difference in the enamel
surface between the solutions tested
Keywords Phytotherapeutic AnacardiaceaeSpectroscopy Tooth
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade em baixa
rotaccedilatildeo27
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes seccionamento27
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L 29
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH29
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)30
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie dentaacuteria para anaacutelise da molhabilidade
31
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade32
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact32
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG33
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia34
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L preacutevio apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo38
Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo39
Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo40
Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo41
Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo42
Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo43
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 Resultados das meacutedias (desvios-padratildeo) da molhabilidade das substacircncias
testadas35
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padratildeo) da anaacutelise da cor valores de (ΔE) 36
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padratildeo) dos valores de rugosidade antes e apoacutes os diferentes
protocolos de imersatildeo36
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 18
21 AGENTES QUIacuteMICOS ANTIMICROBIANOS 18
22 FITOTERAPIA 19
221 SPONDIAS MOMBIN L20
23 CARACTERIacuteSTICAS DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA22
24 ALTERACcedilOtildeES NA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA CAUSADAS POR SUBSTAcircNCIAS QUIacuteMICAS
23
3 OBJETIVOS 25
31 OBJETIVO GERAL 25
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS 25
4 MEacuteTODO 26
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO26
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS26
43 SELECcedilAtildeOPREPARACcedilAtildeOARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA 26
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L 28
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO29
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO29
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE30
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE31
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR 32
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA 33
411 ANAacuteLISE DOS DADOS 34
5 RESULTADOS 35
51 pH DO EXTRATO 35
52 AcircNGULO DE CONTATO MOLHABILIDADE35
53 COR 36
54 RUGOSIDADE 36
55 MORFOLOGIA 37
6 DISCUSSAtildeO 44
7 CONCLUSAtildeO 48
REFEREcircNCIAS 49
ANEXOS 56
APENDICES 58
16
1 INTRODUCcedilAtildeO
Desde os primoacuterdios o uso de plantas medicinais foi preterido por falta de embasamento
cientiacutefico favorecendo agrave substituiccedilatildeo dos fitoteraacutepicos pelos medicamentos alopaacuteticos Na deacutecada
de 70 a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (OMS) passou a incentivar o estudo cientiacutefico das plantas
medicinais jaacute que muitas das encontradas no Brasil ainda natildeo possuiacuteam eficaacutecia cientiacutefica
comprovada (ALELUIA et al 2015) A partir dos anos 80 e 90 ocorreu um aumento expressivo
no mercado mundial de medicamentos fitoteraacutepicos especialmente nos paiacuteses industrializados
(FERNANDES 2003 CALIXTO 2001)
A 8ordf Conferecircncia Nacional de Sauacutede realizada no ano de 1986 trouxe entre suas
recomendaccedilotildees a ldquointroduccedilatildeo de praacuteticas alternativas de assistecircncia agrave sauacutede no acircmbito dos serviccedilos
de sauacutede possibilitando ao usuaacuterio o acesso democraacutetico de escolher a terapecircutica preferidardquo Com
vistas agrave viabilizaccedilatildeo dessa recomendaccedilatildeo algumas medidas foram tomadas como a regulamentaccedilatildeo
da implantaccedilatildeo da fitoterapia nos serviccedilos de sauacutede nas unidades federadas por meio da resoluccedilatildeo
Comissatildeo Interministerial de Planejamento e Coordenaccedilatildeo (Ciplan nordm 08 de 8 de marccedilo de 1988)
Os estudos com plantas medicinais em Odontologia tecircm sido desenvolvidos como uma
tentativa de abrir novos caminhos para o combate agraves infecccedilotildees bucais possibilitando a inserccedilatildeo do
uso de fitoteraacutepicos como recursos preventivo e terapecircutico na praacutetica diaacuteria ambulatorial
especialmente nos serviccedilos de atenccedilatildeo baacutesica ofertados pelo Sistema Uacutenico de Sauacutede (SUS) Nessa
perspectiva experimentos in vitro sobre a accedilatildeo antimicrobiana de extratos vegetais tecircm sido
realizados nas uacuteltimas deacutecadas (ALELUIA et al 2015 LIMA 2015 MACEcircDO 2016 LIMA
2015 ALVES 2017) com o intuito de obter agentes quiacutemicos antimicrobianos que auxiliem o
controle mecacircnico da microbiota bucal
Frente agraves deficiecircncias nos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal decorrentes da falta de
destreza manual e motivaccedilatildeo agentes quiacutemicos antimicrobianos tecircm sido propostos a fim de inibir
o crescimento e a proliferaccedilatildeo de microrganismos no ambiente bucal reduzir a adesatildeo bacteriana
agraves superfiacutecies modificar a atividade bioquiacutemica desses microrganismos e alterar a ecologia do
biofilme dentaacuterio para uma microbiota menos patogecircnica (MARSH 2010)
Na atualidade o agente antimicrobiano mais utilizado no controle quiacutemico da microbiota
bucal planctocircnica e organizada em biofilme eacute o digluconato de clorexidina 012 em funccedilatildeo do
seu amplo espectro de accedilatildeo baixa toxicidade e elevada substantividade Todavia essa substacircncia
aleacutem de apresentar um custo elevado natildeo pode ser usada por periacuteodos prolongados uma vez que
nessas situaccedilotildees altera a microbiota natural e produz efeitos colaterais como manchamento de
dentes e restauraccedilotildees descamaccedilatildeo da mucosa e modificaccedilotildees no paladar (MATOS et al 2015
HAJIFATTAHI et al 2016)
17
As limitaccedilotildees da clorexidina e de outros agentes antimicrobianos sinteacuteticos convencionais
tem encorajado a investigaccedilatildeo de produtos naturais com maior atividade terapecircutica menor
toxicidade maior biocompatibilidade com os tecidos moles e duros da cavidade oral e menor custo
para o controle quiacutemico do biofilme e o tratamento de diferentes infecccedilotildees orais (ALLAKER 2009)
Dentre esses produtos naturais cuja accedilatildeo antimicrobiana tem sido investigada merece
destaque o extrato da folha de Spondias mombin (S mombin L) espeacutecie vulgarmente conhecida
como cajaacute pertencente agrave famiacutelia Anacardiacea que estaacute distribuiacuteda em diversas regiotildees do Brasil e
de outros paiacuteses da Ameacuterica Latina (THADHANI et al 2012)
Considerando que S mombin L tem demonstrado muacuteltiplas atividades bioloacutegicas relevantes
agrave manutenccedilatildeo e ao restabelecimento da sauacutede bucal podendo assim ser utilizada como mateacuteria
prima para o desenvolvimento futuro de novos agentes antimicrobianos quiacutemicos torna-se de
extrema importacircncia investigar o seu efeito sobre os tecidos moles e duros da cavidade oral a fim
de que o mesmo seja administrado com eficaacutecia e seguranccedila
Frente ao exposto o presente estudo se propocircs a investigar o pH do extrato de Spondias
mombin L e avaliar o seu efeito sobre a superfiacutecie de dentes humanos no que diz respeito agraves
caracteriacutesticas cor rugosidade morfologia de superfiacutecie e molhabilidade comparando esse efeito
com aquele produzido pela soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 sobre essa mesma
superfiacutecie A hipoacutetese nula testada foi a de que natildeo havia diferenccedila entre o pH do extrato de
Spondias mombin L e o pH da soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 assim como entre os
efeitos produzidos por essas substacircncias sobre as superfiacutecies de dentes humanos no tocante a todas
as variaacuteveis investigadas Ademais natildeo existem estudos na literatura vigente que tenham
investigado o referido extrato frente agrave superfiacutecie dentaacuteria fato este que destaca o ineditismo do
estudo em questatildeo e a sua importante contribuiccedilatildeo para os avanccedilos cientiacuteficos na aacuterea odontoloacutegica
18
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
21 Agentes quiacutemicos antimicrobianos
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar quando o controle mecacircnico no
sentido de evitar o acuacutemulo de bacteacuterias sobre os dentes natildeo puder ser realizado diariamente ou
estiver inadequado (ANDERSON 2003 LAING et al 2008)
Frente agraves limitaccedilotildees dos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal agentes quiacutemicos
antimicrobianos tecircm sido propostos principalmente nos casos em que haacute dificuldade de controle do
biofilme dentaacuterio e naqueles onde eacute necessaacuterio reduzir demasiadamente a quantidade de
microrganismos bucais (MOREIRA et al 2009 MARSH 2010)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico de moleacuteculas carregadas positivamente que apresenta um
largo espectro antimicrobiano pertencente agrave famiacutelia de compostos conhecidos como bisbiguanida
Sua moleacutecula se liga provavelmente atraveacutes de forccedilas eletrostaacuteticas aos grupos fosfato carboxila
ou sulfato tanto na mucosa bucal quanto nos microrganismos e na peliacutecula adquirida Sendo assim
a clorexidina compete com o caacutelcio comprometendo a aderecircncia bacteriana e consequentemente
inibindo a formaccedilatildeo do biofilme Tal substacircncia atinge seu efeito antimicrobiano atraveacutes de suas
atividades bactericida e bacteriostaacutetica Inicialmente quando aplicada na forma de soluccedilatildeo gel ou
verniz a concentraccedilatildeo eacute tal que o agente eacute bactericida Todavia a clorexidina tambeacutem se liga agraves
mucosas e superfiacutecies dos dentes e posteriormente eacute liberada de forma lenta em concentraccedilotildees
bacteriostaacuteticas durante vaacuterias horas Diante do exposto o que diferencia a clorexidina dos demais
agentes antimicrobianos eacute a sua substantividade Sua duraccedilatildeo de accedilatildeo eacute prolongada pela sua
habilidade de adsorccedilatildeo agraves estruturas bucais e posterior liberaccedilatildeo lenta na sua forma ativa (SILVA
1991 ROSA ROCHA 1993 MATTHIJS 2009 SOET et al 2002 FEJERSKOV KIDD 2005
VAN STRYDONCK et al 2005)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico catiocircnico que age contra uma ampla variedade de bacteacuterias
fungos e alguns viacuterus lipofiacutelicos (DENTON et al 1991) Seu efeito antibacteriano ocorre atraveacutes da
interaccedilatildeo natildeo-especiacutefica com o aacutecido fosfolipiacutedico da membrana celular causando alteraccedilotildees na
permeabilidade da membrana para iacuteons como potaacutessio e para constituintes do citosol como
aminoaacutecidos e nucleotiacutedeos Em altas concentraccedilotildees a atividade de enzimas associadas agrave
membrana como dehidrogenases e ATPase eacute indiretamente afetada (DAVIES 1973 BRECX
THEILADE 1984)
19
Dentre os agentes antimicrobianos bucais mais utilizados o digluconato de clorexidina
012 merece destaque devido ao seu potencial antimicrobiano e agrave sua caracteriacutestica de forte
adsorccedilatildeo agraves superfiacutecies bucais (MARSH 2010 SCHEIE PETERSEN 2011) A clorexidina
demonstrou ser eficaz contra vaacuterias bacteacuterias orais Devido ao seu amplo espectro antimicrobiano
atuando contra bacteacuterias Gram-positivas Gram-negativas e fungos tambeacutem tem sido utilizada para
tratar concomitantemente doenccedilas endodocircnticas (SIQUEIRA JR PAIVA ROcircCcedilAS 2007
VIANNA et al 2008) periodontais e para prevenir a progressatildeo de caacuterie (COSYN et al2006
DUARTE LOTUFO PANNUTI 2008) Visto que a clorexidina promove alguns efeitos colaterais
como pigmentaccedilatildeo dos dentes alteraccedilatildeo do paladar e descamaccedilatildeo da mucosa os antisseacutepticos que
tecircm como princiacutepio ativo o digluconato de clorexidina a 012 ou 02 apresentam meacutedia elevada
para o potencial de reduccedilatildeo da microbiota bucal quando comparados a outros antisseacutepticos
(MATOS et al 2015)
As propriedades de um antisseacuteptico ideal incluem estabilidade baixa tensatildeo superficial
letalidade em baixas concentraccedilotildees ausecircncia de toxicidade e poder de penetraccedilatildeo No entanto
nenhum produto disponiacutevel no mercado possui todos esses requisitos o que justifica os efeitos
colaterais e a pouca eficiecircncia apresentada por alguns (MOREIRA et al 2009 ZANIN et al 2007)
Diante dos efeitos colaterais do digluconato de clorexidina 012 e da sua possibilidade de
causar resistecircncia bacteriana torna-se necessaacuterio investigar as propriedades antimicrobianas de
novas substacircncias e com a rica diversidade da flora do Brasil parece salutar o estudo de produtos
derivados de plantas como princiacutepio ativo de possiacuteveis agentes antimicrobianos (MOTA
TURRINI POVEDA 2015)
O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibioacuteticos tem
se tornado um problema significante para a sauacutede puacuteblica As principais causas dessa resistecircncia
estatildeo associadas ao uso excessivo de antibioacuteticos nos tratamentos por prescriccedilotildees meacutedicas e agrave
capacidade de sobrevivecircncia intracelular de algumas bacteacuterias induzidas por certas infecccedilotildees que
impedem o acesso do medicamento em foco Observa-se que o alto custo dos medicamentos se
apresenta como um problema relevante para a populaccedilatildeo de baixa renda gerando assim a busca por
novos meacutetodos alternativos viaacuteveis como o uso dos fitoteraacutepicos (YUNES et al 2001)
22 Fitoterapia
Atualmente o uso de fitoteraacutepicos tem se intensificado em vaacuterios paiacuteses especialmente no
Brasil que possui uma flora rica e diversa com grande potencial para o desenvolvimento dessa
ciecircncia (ASSIS 2009 MOLINA et al 2008 MONTES et al 2009 OLIVEIRA et al 2007
TOMAZZONI NEGRELLE CENTA 2006)
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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4
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8
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5 10
39
Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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5 10
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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v
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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ANEXOS
57
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APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN
Sistema de Bibliotecas - SISBI
Catalogaccedilatildeo de Publicaccedilatildeo na Fonte UFRN - Biblioteca Central Zila Mamede
Cordeiro Thais Oliveira
Efeito do extrato da folha de spondias mombin sobre a superfiacutecie de dentes humanos - um estudo in vitro Thais Oliveira Cordeiro - 2019
60f il
Dissertaccedilatildeo (Mestrado)-Universidade Federal do Rio Grande do Norte Ciecircncias
da Sauacutede Poacutes Graduaccedilatildeo em Ciecircncias Odontoloacutegicas Natal 2019
Orientadora Dra Ruthineacuteia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins Coorientador Dr Boniek Castillo Dutra Borges
1 Fitoteraacutepicos - Dissertaccedilatildeo 2 Anacardiaceae - Dissertaccedilatildeo 3
Espectroscopia - Dissertaccedilatildeo 4 Dente - Dissertaccedilatildeo I Lins Ruthineacuteia
Dioacutegenes Alves Uchocirca II Borges Boniek Castillo Dutra III Tiacutetulo
RNUFBCZM CDU 6150142
Elaborado por Raimundo Muniz de Oliveira - CRB-15429
DEDICATOacuteRIA
Dedico este trabalho aos meus amados pais Neacutelio e Luacutecia pela confianccedila depositada e me
permitirem alcanccedilar meus sonhos atraveacutes de seus esforccedilos diaacuterios
AGRADECIMENTOS
Agradeccedilo primeiramente a Deus pelo dom da vida autor do meu destino guia presente
em minha vida
Aos meus pais Neacutelio Oliveira Cordeiro e Mordf Luacutecia B Oliveira meus exemplos de vida
por todos os esforccedilos realizados e priorizaccedilatildeo da minha educaccedilatildeo durante toda a vida Obrigada
por acreditarem em mim Aos meus irmatildeos Ceiccedila por ser fonte de inspiraccedilatildeo e me direcionar
a ser uma pessoa cada vez melhor por ser um espelho para todos noacutes Ao meu irmatildeo Neacutelio
Filho por viver esse sonho comigo e se fazer presente quando mais precisava por lagar tudo
em Teresina e ser meu amigo e protetor durante o tempo que veio morar comigo obrigada meu
irmatildeo por ser tatildeo companheiro e minha Thaiacutesa e Maria Fernanda que mesmo tatildeo pequenas jaacute
me ensinam o quanto a saudade eacute dolorosa e sempre me deram forccedilas para correr atraacutes dos meus
objetivos A minha madrasta Maria Antocircnia e padrasto Justino por todo carinho e cuidado
durante todos esses anos Agradeccedilo pelo amor dedicado durante toda a minha ausecircncia por
serem suporte e alegria na minha vida Sem vocecircs seria impossiacutevel realizar este sonho
Aos meus tios e primos que sempre depositaram carinho e amor em toda minha
trajetoacuteria
Aos meus orientadores Prof Drordf Ruthineacuteia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins e Prof Dr
Boniek Castillo Dutra Borges pela atenccedilatildeo por terem sempre respostas pertinentes pela
disponibilidade durante esses anos de trabalho e por me permitirem ser melhor como pessoa e
pesquisadora atraveacutes de seus exemplos diaacuterios de luta honestidade competecircncia e feacute Agradeccedilo
ainda a professora Larissa Sgarbosa de Arauacutejo Matuda por sua atenccedilatildeo e disponibilidade por
colaborar com esta pesquisa Aos professores Drordf Diana Ferreira Gadelha de Arauacutejo e Prof Dr
Bruno Cesar de Vasconcelos Gurgel por serem fonte de inspiraccedilatildeo e terem contribuiacutedo em
minha formaccedilatildeo durante o estaacutegio em docecircncia
As minhas queridas amigas Ana Luacutecia Camila e Carol que estiveram proacuteximas a mim
desde o primeiro dia de aula do mestrado sempre dispostas a serem apoio e sorrisos apoacutes dias
difiacuteceis As minhas queridas amigas Angeacutelica e Mayra pela amizade e por me acompanharem
nessa trajetoacuteria A amiga Aline e Mel por tornarem meus dias em Natal mais felizes e leves A
Franciara pela companhia durante a pesquisa e por sua amizade A meu querido Ricardo por
sua companhia e amizade que sempre se manteve disposto a tornar minha vida em Natal mais
leve com sua presenccedila Ao meu querido amigo Stephano por se manter sempre presente ainda
que com a distacircncia As minhas amigas Wenderdania e Maria Eduarda por me apoiarem quando
precisava A minha querida amiga Carina Liz por dedicar sua atenccedilatildeo e cuidado durante toda
essa trajetoacuteria
Aos meus queridos amigos Juliane Maxwell Mayara Priscila Larissa e Fabiane por
transmitirem carinho e pela manutenccedilatildeo de nossa amizade desde o iniacutecio da graduaccedilatildeo
Aos alunos do 4ordm periacuteodo de odontologia da UFRN que tanto me ensinaram durante o
estaacutegio em docecircncia estimulando que eu buscasse respostas para suas duacutevidas e dividindo suas
trajetoacuterias de vida
Aos secretaacuterios da poacutes-graduaccedilatildeo Lucas e Gracinha por serem sempre tatildeo prestativos e
gentis em ajudar quando necessaacuterio
A Floriano por sempre se disponibilizar a ajudar com o que lhe compete tecnicamente
por ser prestativo e disponiacutevel
Ao programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Ciecircncias Odontoloacutegicas Departamento de Ciecircncias
Farmacecircuticas e ao Departamento de Ciecircncias dos Materiais A Universidade Federal do Rio
Grande do Norte professores alunos da poacutes-graduaccedilatildeo e aos funcionaacuterios de forma geral pela
oportunidade incriacutevel de ter contato com o conhecimento em sua forma mais inspiradora
lsquorsquoA essecircncia do conhecimento consiste em
aplicaacute-lo uma vez possuiacutedorsquorsquo
(Confuacutecio)
RESUMO
INTRODUCcedilAtildeO O estudo da fitoterapia na prevenccedilatildeo e no tratamento de doenccedilas tem
estimulado pesquisas com plantas medicinais na Odontologia Dentre essas plantas destaca-se
a espeacutecie Spondias mombin por apresentar disponibilidade de mateacuteria-prima e amplo espectro
de accedilotildees farmacoloacutegicas que incluem atividades antimicrobiana anti-inflamatoacuteria cicatrizante
e antioxidante OBJETIVO Investigar o efeito do extrato de Spondias mombin L (cajaacute) sobre
a superfiacutecie de dentes humanos METODOLOGIA O extrato de cajaacute foi preparado em sua
diluiccedilatildeo 132=3125 mgml Trinta dentes humanos foram seccionados (60 x 60 mm)
preservando as proximais Os fragmentos foram divididos aleatoriamente em 3 grupos (n=10
por grupo) de acordo com os grupos extrato hidroetanoacutelico de S mombin L Digluconato de
clorexidina 012 e aacutegua destilada Cada fragmento foi imerso nas respectivas substacircncias por
1 minuto 2 vezes ao dia durante 14 dias Antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees foram realizadas
anaacutelises de cor molhabilidade rugosidade (Ra) e morfologia O pH das substacircncias tambeacutem
foi investigado Os dados foram analisados estatisticamente por meio de ANOVA (1 e 2 fatores)
e teste de Tukey para muacuteltiplas comparaccedilotildees RESULTADOS Natildeo houve diferenccedila
estatisticamente significativa em relaccedilatildeo a cor entre os grupos O extrato de cajaacute e clorexidina
012 apresentaram diferenccedilas significativas (plt0001) enquanto aacutegua destilada natildeo
apresentou diferenccedilas estatiacutesticas (pgt0005) Quanto a molhabilidade natildeo houve diferenccedila
estatisticamente significativa entre extrato de cajaacute (pgt0005) clorexidina 012 (pgt0005) e
aacutegua destilada (pgt0005) Para rugosidade natildeo houve diferenccedila estatisticamente significante
entre as substacircncias analisadas (pgt00005) Aleacutem disso natildeo houve diferenccedila estatiacutestica entre as
substacircncias e o tempo de imersatildeo (p lt00001) O pH meacutedio do extrato hidroetanoacutelico de cajaacute e
clorexidina 012 was de 295 e 65 respectivamente CONCLUSAtildeO O pH do extrato de
Smombin L eacute aacutecido e da clorexidina eacute neutro A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de
cajaacute foi bom tanto quanto a clorexidina A cor dos fragmentos dentaacuterios foi alterada apoacutes o
protocolo de imersatildeo no extrato hidroetanoacutelico de cajaacute e clorexidina 012 A rugosidade dos
fragmentos dentaacuterios analisados se manteve inalterada apoacutes o protocolo de imersatildeo nas
diferentes soluccedilotildees testadas O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostrou que natildeo
houve diferenccedila na superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
Descritores Fitoteraacutepicos Anacardiaceae Espectroscopia Dente
ABSTRACT
INTRODUCTION The study of phytotherapy in the prevention and treatment of diseases
stimulated the research with medicinal plants in Dentistry Among these plants the species
Spondia mombin stands out for the availability of raw material and a broad spectrum of
pharmacological actions that include antimicrobial anti-inflammatory cicatrizant and
antioxidant activities OBJECTIVE To investigate tooth surface changes regarding cajaacute
(Spondias mombin L) extract METHOD The cashew extract was prepared in its
dilution116=3125 mgml Thirty human teeth were sectioned (60 x 60 mm) preserving the
proximal surfaces Dental fragments were randomly divided into 3 groups (n =10 per group)
according to the substances hydroethanolic extract (3125 mgml) 012 chlorhexidine and
distilled water Each fragment was immersed in the respective substance for 1 minute twice
daily for 14 days Before and after the immersion color analysis wettability roughness (Ra)
and morphology as well as the pH levels of the substances were investigated Data were
analyzed statistically by means of ANOVA (one and two factors) and Tukey test for multiple
comparisons RESULTS There was a statistically significant difference between color in the
groups Cajaacute extract and 012 chlorhexidine presented significant differences (p lt0001)
while distilled water showed no statistical differences (pgt 0005) Regarding wettability there
was no statistically significant difference between Cajaacute extract (pgt0005) 012 chlorhexidine
and distilled water (pgt0005) For roughnes there was no statistically significant difference
between the analyzed substances (pgt00005) In addition there was no statistically significant
difference between the substances and immersion time (p lt00001) The mean pH of the
hydroethanolic extract of cajaacute and 012 chlorhexidine is 295 and 65 respectively
CONCLUSION pH of the extract of Smombin L is acid of the chlorhexidine is neutral The
wettability of the hydroethanolic extract of cajaacute was as good as 012 chlorhexidine Color
changes were observed after the immersion in hydroethanolic extract of cajaacute and 012
chlorhexidine Roughness of the analyzed dental fragments remained unchanged after the
immersion protocols Scanning electron microscopy showed no difference in the enamel
surface between the solutions tested
Keywords Phytotherapeutic AnacardiaceaeSpectroscopy Tooth
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade em baixa
rotaccedilatildeo27
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes seccionamento27
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L 29
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH29
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)30
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie dentaacuteria para anaacutelise da molhabilidade
31
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade32
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact32
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG33
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia34
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L preacutevio apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo38
Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo39
Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo40
Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo41
Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo42
Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo43
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 Resultados das meacutedias (desvios-padratildeo) da molhabilidade das substacircncias
testadas35
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padratildeo) da anaacutelise da cor valores de (ΔE) 36
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padratildeo) dos valores de rugosidade antes e apoacutes os diferentes
protocolos de imersatildeo36
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 18
21 AGENTES QUIacuteMICOS ANTIMICROBIANOS 18
22 FITOTERAPIA 19
221 SPONDIAS MOMBIN L20
23 CARACTERIacuteSTICAS DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA22
24 ALTERACcedilOtildeES NA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA CAUSADAS POR SUBSTAcircNCIAS QUIacuteMICAS
23
3 OBJETIVOS 25
31 OBJETIVO GERAL 25
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS 25
4 MEacuteTODO 26
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO26
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS26
43 SELECcedilAtildeOPREPARACcedilAtildeOARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA 26
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L 28
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO29
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO29
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE30
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE31
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR 32
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA 33
411 ANAacuteLISE DOS DADOS 34
5 RESULTADOS 35
51 pH DO EXTRATO 35
52 AcircNGULO DE CONTATO MOLHABILIDADE35
53 COR 36
54 RUGOSIDADE 36
55 MORFOLOGIA 37
6 DISCUSSAtildeO 44
7 CONCLUSAtildeO 48
REFEREcircNCIAS 49
ANEXOS 56
APENDICES 58
16
1 INTRODUCcedilAtildeO
Desde os primoacuterdios o uso de plantas medicinais foi preterido por falta de embasamento
cientiacutefico favorecendo agrave substituiccedilatildeo dos fitoteraacutepicos pelos medicamentos alopaacuteticos Na deacutecada
de 70 a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (OMS) passou a incentivar o estudo cientiacutefico das plantas
medicinais jaacute que muitas das encontradas no Brasil ainda natildeo possuiacuteam eficaacutecia cientiacutefica
comprovada (ALELUIA et al 2015) A partir dos anos 80 e 90 ocorreu um aumento expressivo
no mercado mundial de medicamentos fitoteraacutepicos especialmente nos paiacuteses industrializados
(FERNANDES 2003 CALIXTO 2001)
A 8ordf Conferecircncia Nacional de Sauacutede realizada no ano de 1986 trouxe entre suas
recomendaccedilotildees a ldquointroduccedilatildeo de praacuteticas alternativas de assistecircncia agrave sauacutede no acircmbito dos serviccedilos
de sauacutede possibilitando ao usuaacuterio o acesso democraacutetico de escolher a terapecircutica preferidardquo Com
vistas agrave viabilizaccedilatildeo dessa recomendaccedilatildeo algumas medidas foram tomadas como a regulamentaccedilatildeo
da implantaccedilatildeo da fitoterapia nos serviccedilos de sauacutede nas unidades federadas por meio da resoluccedilatildeo
Comissatildeo Interministerial de Planejamento e Coordenaccedilatildeo (Ciplan nordm 08 de 8 de marccedilo de 1988)
Os estudos com plantas medicinais em Odontologia tecircm sido desenvolvidos como uma
tentativa de abrir novos caminhos para o combate agraves infecccedilotildees bucais possibilitando a inserccedilatildeo do
uso de fitoteraacutepicos como recursos preventivo e terapecircutico na praacutetica diaacuteria ambulatorial
especialmente nos serviccedilos de atenccedilatildeo baacutesica ofertados pelo Sistema Uacutenico de Sauacutede (SUS) Nessa
perspectiva experimentos in vitro sobre a accedilatildeo antimicrobiana de extratos vegetais tecircm sido
realizados nas uacuteltimas deacutecadas (ALELUIA et al 2015 LIMA 2015 MACEcircDO 2016 LIMA
2015 ALVES 2017) com o intuito de obter agentes quiacutemicos antimicrobianos que auxiliem o
controle mecacircnico da microbiota bucal
Frente agraves deficiecircncias nos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal decorrentes da falta de
destreza manual e motivaccedilatildeo agentes quiacutemicos antimicrobianos tecircm sido propostos a fim de inibir
o crescimento e a proliferaccedilatildeo de microrganismos no ambiente bucal reduzir a adesatildeo bacteriana
agraves superfiacutecies modificar a atividade bioquiacutemica desses microrganismos e alterar a ecologia do
biofilme dentaacuterio para uma microbiota menos patogecircnica (MARSH 2010)
Na atualidade o agente antimicrobiano mais utilizado no controle quiacutemico da microbiota
bucal planctocircnica e organizada em biofilme eacute o digluconato de clorexidina 012 em funccedilatildeo do
seu amplo espectro de accedilatildeo baixa toxicidade e elevada substantividade Todavia essa substacircncia
aleacutem de apresentar um custo elevado natildeo pode ser usada por periacuteodos prolongados uma vez que
nessas situaccedilotildees altera a microbiota natural e produz efeitos colaterais como manchamento de
dentes e restauraccedilotildees descamaccedilatildeo da mucosa e modificaccedilotildees no paladar (MATOS et al 2015
HAJIFATTAHI et al 2016)
17
As limitaccedilotildees da clorexidina e de outros agentes antimicrobianos sinteacuteticos convencionais
tem encorajado a investigaccedilatildeo de produtos naturais com maior atividade terapecircutica menor
toxicidade maior biocompatibilidade com os tecidos moles e duros da cavidade oral e menor custo
para o controle quiacutemico do biofilme e o tratamento de diferentes infecccedilotildees orais (ALLAKER 2009)
Dentre esses produtos naturais cuja accedilatildeo antimicrobiana tem sido investigada merece
destaque o extrato da folha de Spondias mombin (S mombin L) espeacutecie vulgarmente conhecida
como cajaacute pertencente agrave famiacutelia Anacardiacea que estaacute distribuiacuteda em diversas regiotildees do Brasil e
de outros paiacuteses da Ameacuterica Latina (THADHANI et al 2012)
Considerando que S mombin L tem demonstrado muacuteltiplas atividades bioloacutegicas relevantes
agrave manutenccedilatildeo e ao restabelecimento da sauacutede bucal podendo assim ser utilizada como mateacuteria
prima para o desenvolvimento futuro de novos agentes antimicrobianos quiacutemicos torna-se de
extrema importacircncia investigar o seu efeito sobre os tecidos moles e duros da cavidade oral a fim
de que o mesmo seja administrado com eficaacutecia e seguranccedila
Frente ao exposto o presente estudo se propocircs a investigar o pH do extrato de Spondias
mombin L e avaliar o seu efeito sobre a superfiacutecie de dentes humanos no que diz respeito agraves
caracteriacutesticas cor rugosidade morfologia de superfiacutecie e molhabilidade comparando esse efeito
com aquele produzido pela soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 sobre essa mesma
superfiacutecie A hipoacutetese nula testada foi a de que natildeo havia diferenccedila entre o pH do extrato de
Spondias mombin L e o pH da soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 assim como entre os
efeitos produzidos por essas substacircncias sobre as superfiacutecies de dentes humanos no tocante a todas
as variaacuteveis investigadas Ademais natildeo existem estudos na literatura vigente que tenham
investigado o referido extrato frente agrave superfiacutecie dentaacuteria fato este que destaca o ineditismo do
estudo em questatildeo e a sua importante contribuiccedilatildeo para os avanccedilos cientiacuteficos na aacuterea odontoloacutegica
18
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
21 Agentes quiacutemicos antimicrobianos
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar quando o controle mecacircnico no
sentido de evitar o acuacutemulo de bacteacuterias sobre os dentes natildeo puder ser realizado diariamente ou
estiver inadequado (ANDERSON 2003 LAING et al 2008)
Frente agraves limitaccedilotildees dos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal agentes quiacutemicos
antimicrobianos tecircm sido propostos principalmente nos casos em que haacute dificuldade de controle do
biofilme dentaacuterio e naqueles onde eacute necessaacuterio reduzir demasiadamente a quantidade de
microrganismos bucais (MOREIRA et al 2009 MARSH 2010)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico de moleacuteculas carregadas positivamente que apresenta um
largo espectro antimicrobiano pertencente agrave famiacutelia de compostos conhecidos como bisbiguanida
Sua moleacutecula se liga provavelmente atraveacutes de forccedilas eletrostaacuteticas aos grupos fosfato carboxila
ou sulfato tanto na mucosa bucal quanto nos microrganismos e na peliacutecula adquirida Sendo assim
a clorexidina compete com o caacutelcio comprometendo a aderecircncia bacteriana e consequentemente
inibindo a formaccedilatildeo do biofilme Tal substacircncia atinge seu efeito antimicrobiano atraveacutes de suas
atividades bactericida e bacteriostaacutetica Inicialmente quando aplicada na forma de soluccedilatildeo gel ou
verniz a concentraccedilatildeo eacute tal que o agente eacute bactericida Todavia a clorexidina tambeacutem se liga agraves
mucosas e superfiacutecies dos dentes e posteriormente eacute liberada de forma lenta em concentraccedilotildees
bacteriostaacuteticas durante vaacuterias horas Diante do exposto o que diferencia a clorexidina dos demais
agentes antimicrobianos eacute a sua substantividade Sua duraccedilatildeo de accedilatildeo eacute prolongada pela sua
habilidade de adsorccedilatildeo agraves estruturas bucais e posterior liberaccedilatildeo lenta na sua forma ativa (SILVA
1991 ROSA ROCHA 1993 MATTHIJS 2009 SOET et al 2002 FEJERSKOV KIDD 2005
VAN STRYDONCK et al 2005)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico catiocircnico que age contra uma ampla variedade de bacteacuterias
fungos e alguns viacuterus lipofiacutelicos (DENTON et al 1991) Seu efeito antibacteriano ocorre atraveacutes da
interaccedilatildeo natildeo-especiacutefica com o aacutecido fosfolipiacutedico da membrana celular causando alteraccedilotildees na
permeabilidade da membrana para iacuteons como potaacutessio e para constituintes do citosol como
aminoaacutecidos e nucleotiacutedeos Em altas concentraccedilotildees a atividade de enzimas associadas agrave
membrana como dehidrogenases e ATPase eacute indiretamente afetada (DAVIES 1973 BRECX
THEILADE 1984)
19
Dentre os agentes antimicrobianos bucais mais utilizados o digluconato de clorexidina
012 merece destaque devido ao seu potencial antimicrobiano e agrave sua caracteriacutestica de forte
adsorccedilatildeo agraves superfiacutecies bucais (MARSH 2010 SCHEIE PETERSEN 2011) A clorexidina
demonstrou ser eficaz contra vaacuterias bacteacuterias orais Devido ao seu amplo espectro antimicrobiano
atuando contra bacteacuterias Gram-positivas Gram-negativas e fungos tambeacutem tem sido utilizada para
tratar concomitantemente doenccedilas endodocircnticas (SIQUEIRA JR PAIVA ROcircCcedilAS 2007
VIANNA et al 2008) periodontais e para prevenir a progressatildeo de caacuterie (COSYN et al2006
DUARTE LOTUFO PANNUTI 2008) Visto que a clorexidina promove alguns efeitos colaterais
como pigmentaccedilatildeo dos dentes alteraccedilatildeo do paladar e descamaccedilatildeo da mucosa os antisseacutepticos que
tecircm como princiacutepio ativo o digluconato de clorexidina a 012 ou 02 apresentam meacutedia elevada
para o potencial de reduccedilatildeo da microbiota bucal quando comparados a outros antisseacutepticos
(MATOS et al 2015)
As propriedades de um antisseacuteptico ideal incluem estabilidade baixa tensatildeo superficial
letalidade em baixas concentraccedilotildees ausecircncia de toxicidade e poder de penetraccedilatildeo No entanto
nenhum produto disponiacutevel no mercado possui todos esses requisitos o que justifica os efeitos
colaterais e a pouca eficiecircncia apresentada por alguns (MOREIRA et al 2009 ZANIN et al 2007)
Diante dos efeitos colaterais do digluconato de clorexidina 012 e da sua possibilidade de
causar resistecircncia bacteriana torna-se necessaacuterio investigar as propriedades antimicrobianas de
novas substacircncias e com a rica diversidade da flora do Brasil parece salutar o estudo de produtos
derivados de plantas como princiacutepio ativo de possiacuteveis agentes antimicrobianos (MOTA
TURRINI POVEDA 2015)
O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibioacuteticos tem
se tornado um problema significante para a sauacutede puacuteblica As principais causas dessa resistecircncia
estatildeo associadas ao uso excessivo de antibioacuteticos nos tratamentos por prescriccedilotildees meacutedicas e agrave
capacidade de sobrevivecircncia intracelular de algumas bacteacuterias induzidas por certas infecccedilotildees que
impedem o acesso do medicamento em foco Observa-se que o alto custo dos medicamentos se
apresenta como um problema relevante para a populaccedilatildeo de baixa renda gerando assim a busca por
novos meacutetodos alternativos viaacuteveis como o uso dos fitoteraacutepicos (YUNES et al 2001)
22 Fitoterapia
Atualmente o uso de fitoteraacutepicos tem se intensificado em vaacuterios paiacuteses especialmente no
Brasil que possui uma flora rica e diversa com grande potencial para o desenvolvimento dessa
ciecircncia (ASSIS 2009 MOLINA et al 2008 MONTES et al 2009 OLIVEIRA et al 2007
TOMAZZONI NEGRELLE CENTA 2006)
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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ANEXOS
57
58
APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
DEDICATOacuteRIA
Dedico este trabalho aos meus amados pais Neacutelio e Luacutecia pela confianccedila depositada e me
permitirem alcanccedilar meus sonhos atraveacutes de seus esforccedilos diaacuterios
AGRADECIMENTOS
Agradeccedilo primeiramente a Deus pelo dom da vida autor do meu destino guia presente
em minha vida
Aos meus pais Neacutelio Oliveira Cordeiro e Mordf Luacutecia B Oliveira meus exemplos de vida
por todos os esforccedilos realizados e priorizaccedilatildeo da minha educaccedilatildeo durante toda a vida Obrigada
por acreditarem em mim Aos meus irmatildeos Ceiccedila por ser fonte de inspiraccedilatildeo e me direcionar
a ser uma pessoa cada vez melhor por ser um espelho para todos noacutes Ao meu irmatildeo Neacutelio
Filho por viver esse sonho comigo e se fazer presente quando mais precisava por lagar tudo
em Teresina e ser meu amigo e protetor durante o tempo que veio morar comigo obrigada meu
irmatildeo por ser tatildeo companheiro e minha Thaiacutesa e Maria Fernanda que mesmo tatildeo pequenas jaacute
me ensinam o quanto a saudade eacute dolorosa e sempre me deram forccedilas para correr atraacutes dos meus
objetivos A minha madrasta Maria Antocircnia e padrasto Justino por todo carinho e cuidado
durante todos esses anos Agradeccedilo pelo amor dedicado durante toda a minha ausecircncia por
serem suporte e alegria na minha vida Sem vocecircs seria impossiacutevel realizar este sonho
Aos meus tios e primos que sempre depositaram carinho e amor em toda minha
trajetoacuteria
Aos meus orientadores Prof Drordf Ruthineacuteia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins e Prof Dr
Boniek Castillo Dutra Borges pela atenccedilatildeo por terem sempre respostas pertinentes pela
disponibilidade durante esses anos de trabalho e por me permitirem ser melhor como pessoa e
pesquisadora atraveacutes de seus exemplos diaacuterios de luta honestidade competecircncia e feacute Agradeccedilo
ainda a professora Larissa Sgarbosa de Arauacutejo Matuda por sua atenccedilatildeo e disponibilidade por
colaborar com esta pesquisa Aos professores Drordf Diana Ferreira Gadelha de Arauacutejo e Prof Dr
Bruno Cesar de Vasconcelos Gurgel por serem fonte de inspiraccedilatildeo e terem contribuiacutedo em
minha formaccedilatildeo durante o estaacutegio em docecircncia
As minhas queridas amigas Ana Luacutecia Camila e Carol que estiveram proacuteximas a mim
desde o primeiro dia de aula do mestrado sempre dispostas a serem apoio e sorrisos apoacutes dias
difiacuteceis As minhas queridas amigas Angeacutelica e Mayra pela amizade e por me acompanharem
nessa trajetoacuteria A amiga Aline e Mel por tornarem meus dias em Natal mais felizes e leves A
Franciara pela companhia durante a pesquisa e por sua amizade A meu querido Ricardo por
sua companhia e amizade que sempre se manteve disposto a tornar minha vida em Natal mais
leve com sua presenccedila Ao meu querido amigo Stephano por se manter sempre presente ainda
que com a distacircncia As minhas amigas Wenderdania e Maria Eduarda por me apoiarem quando
precisava A minha querida amiga Carina Liz por dedicar sua atenccedilatildeo e cuidado durante toda
essa trajetoacuteria
Aos meus queridos amigos Juliane Maxwell Mayara Priscila Larissa e Fabiane por
transmitirem carinho e pela manutenccedilatildeo de nossa amizade desde o iniacutecio da graduaccedilatildeo
Aos alunos do 4ordm periacuteodo de odontologia da UFRN que tanto me ensinaram durante o
estaacutegio em docecircncia estimulando que eu buscasse respostas para suas duacutevidas e dividindo suas
trajetoacuterias de vida
Aos secretaacuterios da poacutes-graduaccedilatildeo Lucas e Gracinha por serem sempre tatildeo prestativos e
gentis em ajudar quando necessaacuterio
A Floriano por sempre se disponibilizar a ajudar com o que lhe compete tecnicamente
por ser prestativo e disponiacutevel
Ao programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Ciecircncias Odontoloacutegicas Departamento de Ciecircncias
Farmacecircuticas e ao Departamento de Ciecircncias dos Materiais A Universidade Federal do Rio
Grande do Norte professores alunos da poacutes-graduaccedilatildeo e aos funcionaacuterios de forma geral pela
oportunidade incriacutevel de ter contato com o conhecimento em sua forma mais inspiradora
lsquorsquoA essecircncia do conhecimento consiste em
aplicaacute-lo uma vez possuiacutedorsquorsquo
(Confuacutecio)
RESUMO
INTRODUCcedilAtildeO O estudo da fitoterapia na prevenccedilatildeo e no tratamento de doenccedilas tem
estimulado pesquisas com plantas medicinais na Odontologia Dentre essas plantas destaca-se
a espeacutecie Spondias mombin por apresentar disponibilidade de mateacuteria-prima e amplo espectro
de accedilotildees farmacoloacutegicas que incluem atividades antimicrobiana anti-inflamatoacuteria cicatrizante
e antioxidante OBJETIVO Investigar o efeito do extrato de Spondias mombin L (cajaacute) sobre
a superfiacutecie de dentes humanos METODOLOGIA O extrato de cajaacute foi preparado em sua
diluiccedilatildeo 132=3125 mgml Trinta dentes humanos foram seccionados (60 x 60 mm)
preservando as proximais Os fragmentos foram divididos aleatoriamente em 3 grupos (n=10
por grupo) de acordo com os grupos extrato hidroetanoacutelico de S mombin L Digluconato de
clorexidina 012 e aacutegua destilada Cada fragmento foi imerso nas respectivas substacircncias por
1 minuto 2 vezes ao dia durante 14 dias Antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees foram realizadas
anaacutelises de cor molhabilidade rugosidade (Ra) e morfologia O pH das substacircncias tambeacutem
foi investigado Os dados foram analisados estatisticamente por meio de ANOVA (1 e 2 fatores)
e teste de Tukey para muacuteltiplas comparaccedilotildees RESULTADOS Natildeo houve diferenccedila
estatisticamente significativa em relaccedilatildeo a cor entre os grupos O extrato de cajaacute e clorexidina
012 apresentaram diferenccedilas significativas (plt0001) enquanto aacutegua destilada natildeo
apresentou diferenccedilas estatiacutesticas (pgt0005) Quanto a molhabilidade natildeo houve diferenccedila
estatisticamente significativa entre extrato de cajaacute (pgt0005) clorexidina 012 (pgt0005) e
aacutegua destilada (pgt0005) Para rugosidade natildeo houve diferenccedila estatisticamente significante
entre as substacircncias analisadas (pgt00005) Aleacutem disso natildeo houve diferenccedila estatiacutestica entre as
substacircncias e o tempo de imersatildeo (p lt00001) O pH meacutedio do extrato hidroetanoacutelico de cajaacute e
clorexidina 012 was de 295 e 65 respectivamente CONCLUSAtildeO O pH do extrato de
Smombin L eacute aacutecido e da clorexidina eacute neutro A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de
cajaacute foi bom tanto quanto a clorexidina A cor dos fragmentos dentaacuterios foi alterada apoacutes o
protocolo de imersatildeo no extrato hidroetanoacutelico de cajaacute e clorexidina 012 A rugosidade dos
fragmentos dentaacuterios analisados se manteve inalterada apoacutes o protocolo de imersatildeo nas
diferentes soluccedilotildees testadas O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostrou que natildeo
houve diferenccedila na superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
Descritores Fitoteraacutepicos Anacardiaceae Espectroscopia Dente
ABSTRACT
INTRODUCTION The study of phytotherapy in the prevention and treatment of diseases
stimulated the research with medicinal plants in Dentistry Among these plants the species
Spondia mombin stands out for the availability of raw material and a broad spectrum of
pharmacological actions that include antimicrobial anti-inflammatory cicatrizant and
antioxidant activities OBJECTIVE To investigate tooth surface changes regarding cajaacute
(Spondias mombin L) extract METHOD The cashew extract was prepared in its
dilution116=3125 mgml Thirty human teeth were sectioned (60 x 60 mm) preserving the
proximal surfaces Dental fragments were randomly divided into 3 groups (n =10 per group)
according to the substances hydroethanolic extract (3125 mgml) 012 chlorhexidine and
distilled water Each fragment was immersed in the respective substance for 1 minute twice
daily for 14 days Before and after the immersion color analysis wettability roughness (Ra)
and morphology as well as the pH levels of the substances were investigated Data were
analyzed statistically by means of ANOVA (one and two factors) and Tukey test for multiple
comparisons RESULTS There was a statistically significant difference between color in the
groups Cajaacute extract and 012 chlorhexidine presented significant differences (p lt0001)
while distilled water showed no statistical differences (pgt 0005) Regarding wettability there
was no statistically significant difference between Cajaacute extract (pgt0005) 012 chlorhexidine
and distilled water (pgt0005) For roughnes there was no statistically significant difference
between the analyzed substances (pgt00005) In addition there was no statistically significant
difference between the substances and immersion time (p lt00001) The mean pH of the
hydroethanolic extract of cajaacute and 012 chlorhexidine is 295 and 65 respectively
CONCLUSION pH of the extract of Smombin L is acid of the chlorhexidine is neutral The
wettability of the hydroethanolic extract of cajaacute was as good as 012 chlorhexidine Color
changes were observed after the immersion in hydroethanolic extract of cajaacute and 012
chlorhexidine Roughness of the analyzed dental fragments remained unchanged after the
immersion protocols Scanning electron microscopy showed no difference in the enamel
surface between the solutions tested
Keywords Phytotherapeutic AnacardiaceaeSpectroscopy Tooth
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade em baixa
rotaccedilatildeo27
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes seccionamento27
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L 29
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH29
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)30
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie dentaacuteria para anaacutelise da molhabilidade
31
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade32
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact32
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG33
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia34
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L preacutevio apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo38
Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo39
Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo40
Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo41
Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo42
Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo43
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 Resultados das meacutedias (desvios-padratildeo) da molhabilidade das substacircncias
testadas35
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padratildeo) da anaacutelise da cor valores de (ΔE) 36
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padratildeo) dos valores de rugosidade antes e apoacutes os diferentes
protocolos de imersatildeo36
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 18
21 AGENTES QUIacuteMICOS ANTIMICROBIANOS 18
22 FITOTERAPIA 19
221 SPONDIAS MOMBIN L20
23 CARACTERIacuteSTICAS DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA22
24 ALTERACcedilOtildeES NA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA CAUSADAS POR SUBSTAcircNCIAS QUIacuteMICAS
23
3 OBJETIVOS 25
31 OBJETIVO GERAL 25
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS 25
4 MEacuteTODO 26
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO26
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS26
43 SELECcedilAtildeOPREPARACcedilAtildeOARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA 26
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L 28
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO29
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO29
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE30
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE31
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR 32
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA 33
411 ANAacuteLISE DOS DADOS 34
5 RESULTADOS 35
51 pH DO EXTRATO 35
52 AcircNGULO DE CONTATO MOLHABILIDADE35
53 COR 36
54 RUGOSIDADE 36
55 MORFOLOGIA 37
6 DISCUSSAtildeO 44
7 CONCLUSAtildeO 48
REFEREcircNCIAS 49
ANEXOS 56
APENDICES 58
16
1 INTRODUCcedilAtildeO
Desde os primoacuterdios o uso de plantas medicinais foi preterido por falta de embasamento
cientiacutefico favorecendo agrave substituiccedilatildeo dos fitoteraacutepicos pelos medicamentos alopaacuteticos Na deacutecada
de 70 a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (OMS) passou a incentivar o estudo cientiacutefico das plantas
medicinais jaacute que muitas das encontradas no Brasil ainda natildeo possuiacuteam eficaacutecia cientiacutefica
comprovada (ALELUIA et al 2015) A partir dos anos 80 e 90 ocorreu um aumento expressivo
no mercado mundial de medicamentos fitoteraacutepicos especialmente nos paiacuteses industrializados
(FERNANDES 2003 CALIXTO 2001)
A 8ordf Conferecircncia Nacional de Sauacutede realizada no ano de 1986 trouxe entre suas
recomendaccedilotildees a ldquointroduccedilatildeo de praacuteticas alternativas de assistecircncia agrave sauacutede no acircmbito dos serviccedilos
de sauacutede possibilitando ao usuaacuterio o acesso democraacutetico de escolher a terapecircutica preferidardquo Com
vistas agrave viabilizaccedilatildeo dessa recomendaccedilatildeo algumas medidas foram tomadas como a regulamentaccedilatildeo
da implantaccedilatildeo da fitoterapia nos serviccedilos de sauacutede nas unidades federadas por meio da resoluccedilatildeo
Comissatildeo Interministerial de Planejamento e Coordenaccedilatildeo (Ciplan nordm 08 de 8 de marccedilo de 1988)
Os estudos com plantas medicinais em Odontologia tecircm sido desenvolvidos como uma
tentativa de abrir novos caminhos para o combate agraves infecccedilotildees bucais possibilitando a inserccedilatildeo do
uso de fitoteraacutepicos como recursos preventivo e terapecircutico na praacutetica diaacuteria ambulatorial
especialmente nos serviccedilos de atenccedilatildeo baacutesica ofertados pelo Sistema Uacutenico de Sauacutede (SUS) Nessa
perspectiva experimentos in vitro sobre a accedilatildeo antimicrobiana de extratos vegetais tecircm sido
realizados nas uacuteltimas deacutecadas (ALELUIA et al 2015 LIMA 2015 MACEcircDO 2016 LIMA
2015 ALVES 2017) com o intuito de obter agentes quiacutemicos antimicrobianos que auxiliem o
controle mecacircnico da microbiota bucal
Frente agraves deficiecircncias nos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal decorrentes da falta de
destreza manual e motivaccedilatildeo agentes quiacutemicos antimicrobianos tecircm sido propostos a fim de inibir
o crescimento e a proliferaccedilatildeo de microrganismos no ambiente bucal reduzir a adesatildeo bacteriana
agraves superfiacutecies modificar a atividade bioquiacutemica desses microrganismos e alterar a ecologia do
biofilme dentaacuterio para uma microbiota menos patogecircnica (MARSH 2010)
Na atualidade o agente antimicrobiano mais utilizado no controle quiacutemico da microbiota
bucal planctocircnica e organizada em biofilme eacute o digluconato de clorexidina 012 em funccedilatildeo do
seu amplo espectro de accedilatildeo baixa toxicidade e elevada substantividade Todavia essa substacircncia
aleacutem de apresentar um custo elevado natildeo pode ser usada por periacuteodos prolongados uma vez que
nessas situaccedilotildees altera a microbiota natural e produz efeitos colaterais como manchamento de
dentes e restauraccedilotildees descamaccedilatildeo da mucosa e modificaccedilotildees no paladar (MATOS et al 2015
HAJIFATTAHI et al 2016)
17
As limitaccedilotildees da clorexidina e de outros agentes antimicrobianos sinteacuteticos convencionais
tem encorajado a investigaccedilatildeo de produtos naturais com maior atividade terapecircutica menor
toxicidade maior biocompatibilidade com os tecidos moles e duros da cavidade oral e menor custo
para o controle quiacutemico do biofilme e o tratamento de diferentes infecccedilotildees orais (ALLAKER 2009)
Dentre esses produtos naturais cuja accedilatildeo antimicrobiana tem sido investigada merece
destaque o extrato da folha de Spondias mombin (S mombin L) espeacutecie vulgarmente conhecida
como cajaacute pertencente agrave famiacutelia Anacardiacea que estaacute distribuiacuteda em diversas regiotildees do Brasil e
de outros paiacuteses da Ameacuterica Latina (THADHANI et al 2012)
Considerando que S mombin L tem demonstrado muacuteltiplas atividades bioloacutegicas relevantes
agrave manutenccedilatildeo e ao restabelecimento da sauacutede bucal podendo assim ser utilizada como mateacuteria
prima para o desenvolvimento futuro de novos agentes antimicrobianos quiacutemicos torna-se de
extrema importacircncia investigar o seu efeito sobre os tecidos moles e duros da cavidade oral a fim
de que o mesmo seja administrado com eficaacutecia e seguranccedila
Frente ao exposto o presente estudo se propocircs a investigar o pH do extrato de Spondias
mombin L e avaliar o seu efeito sobre a superfiacutecie de dentes humanos no que diz respeito agraves
caracteriacutesticas cor rugosidade morfologia de superfiacutecie e molhabilidade comparando esse efeito
com aquele produzido pela soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 sobre essa mesma
superfiacutecie A hipoacutetese nula testada foi a de que natildeo havia diferenccedila entre o pH do extrato de
Spondias mombin L e o pH da soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 assim como entre os
efeitos produzidos por essas substacircncias sobre as superfiacutecies de dentes humanos no tocante a todas
as variaacuteveis investigadas Ademais natildeo existem estudos na literatura vigente que tenham
investigado o referido extrato frente agrave superfiacutecie dentaacuteria fato este que destaca o ineditismo do
estudo em questatildeo e a sua importante contribuiccedilatildeo para os avanccedilos cientiacuteficos na aacuterea odontoloacutegica
18
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
21 Agentes quiacutemicos antimicrobianos
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar quando o controle mecacircnico no
sentido de evitar o acuacutemulo de bacteacuterias sobre os dentes natildeo puder ser realizado diariamente ou
estiver inadequado (ANDERSON 2003 LAING et al 2008)
Frente agraves limitaccedilotildees dos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal agentes quiacutemicos
antimicrobianos tecircm sido propostos principalmente nos casos em que haacute dificuldade de controle do
biofilme dentaacuterio e naqueles onde eacute necessaacuterio reduzir demasiadamente a quantidade de
microrganismos bucais (MOREIRA et al 2009 MARSH 2010)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico de moleacuteculas carregadas positivamente que apresenta um
largo espectro antimicrobiano pertencente agrave famiacutelia de compostos conhecidos como bisbiguanida
Sua moleacutecula se liga provavelmente atraveacutes de forccedilas eletrostaacuteticas aos grupos fosfato carboxila
ou sulfato tanto na mucosa bucal quanto nos microrganismos e na peliacutecula adquirida Sendo assim
a clorexidina compete com o caacutelcio comprometendo a aderecircncia bacteriana e consequentemente
inibindo a formaccedilatildeo do biofilme Tal substacircncia atinge seu efeito antimicrobiano atraveacutes de suas
atividades bactericida e bacteriostaacutetica Inicialmente quando aplicada na forma de soluccedilatildeo gel ou
verniz a concentraccedilatildeo eacute tal que o agente eacute bactericida Todavia a clorexidina tambeacutem se liga agraves
mucosas e superfiacutecies dos dentes e posteriormente eacute liberada de forma lenta em concentraccedilotildees
bacteriostaacuteticas durante vaacuterias horas Diante do exposto o que diferencia a clorexidina dos demais
agentes antimicrobianos eacute a sua substantividade Sua duraccedilatildeo de accedilatildeo eacute prolongada pela sua
habilidade de adsorccedilatildeo agraves estruturas bucais e posterior liberaccedilatildeo lenta na sua forma ativa (SILVA
1991 ROSA ROCHA 1993 MATTHIJS 2009 SOET et al 2002 FEJERSKOV KIDD 2005
VAN STRYDONCK et al 2005)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico catiocircnico que age contra uma ampla variedade de bacteacuterias
fungos e alguns viacuterus lipofiacutelicos (DENTON et al 1991) Seu efeito antibacteriano ocorre atraveacutes da
interaccedilatildeo natildeo-especiacutefica com o aacutecido fosfolipiacutedico da membrana celular causando alteraccedilotildees na
permeabilidade da membrana para iacuteons como potaacutessio e para constituintes do citosol como
aminoaacutecidos e nucleotiacutedeos Em altas concentraccedilotildees a atividade de enzimas associadas agrave
membrana como dehidrogenases e ATPase eacute indiretamente afetada (DAVIES 1973 BRECX
THEILADE 1984)
19
Dentre os agentes antimicrobianos bucais mais utilizados o digluconato de clorexidina
012 merece destaque devido ao seu potencial antimicrobiano e agrave sua caracteriacutestica de forte
adsorccedilatildeo agraves superfiacutecies bucais (MARSH 2010 SCHEIE PETERSEN 2011) A clorexidina
demonstrou ser eficaz contra vaacuterias bacteacuterias orais Devido ao seu amplo espectro antimicrobiano
atuando contra bacteacuterias Gram-positivas Gram-negativas e fungos tambeacutem tem sido utilizada para
tratar concomitantemente doenccedilas endodocircnticas (SIQUEIRA JR PAIVA ROcircCcedilAS 2007
VIANNA et al 2008) periodontais e para prevenir a progressatildeo de caacuterie (COSYN et al2006
DUARTE LOTUFO PANNUTI 2008) Visto que a clorexidina promove alguns efeitos colaterais
como pigmentaccedilatildeo dos dentes alteraccedilatildeo do paladar e descamaccedilatildeo da mucosa os antisseacutepticos que
tecircm como princiacutepio ativo o digluconato de clorexidina a 012 ou 02 apresentam meacutedia elevada
para o potencial de reduccedilatildeo da microbiota bucal quando comparados a outros antisseacutepticos
(MATOS et al 2015)
As propriedades de um antisseacuteptico ideal incluem estabilidade baixa tensatildeo superficial
letalidade em baixas concentraccedilotildees ausecircncia de toxicidade e poder de penetraccedilatildeo No entanto
nenhum produto disponiacutevel no mercado possui todos esses requisitos o que justifica os efeitos
colaterais e a pouca eficiecircncia apresentada por alguns (MOREIRA et al 2009 ZANIN et al 2007)
Diante dos efeitos colaterais do digluconato de clorexidina 012 e da sua possibilidade de
causar resistecircncia bacteriana torna-se necessaacuterio investigar as propriedades antimicrobianas de
novas substacircncias e com a rica diversidade da flora do Brasil parece salutar o estudo de produtos
derivados de plantas como princiacutepio ativo de possiacuteveis agentes antimicrobianos (MOTA
TURRINI POVEDA 2015)
O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibioacuteticos tem
se tornado um problema significante para a sauacutede puacuteblica As principais causas dessa resistecircncia
estatildeo associadas ao uso excessivo de antibioacuteticos nos tratamentos por prescriccedilotildees meacutedicas e agrave
capacidade de sobrevivecircncia intracelular de algumas bacteacuterias induzidas por certas infecccedilotildees que
impedem o acesso do medicamento em foco Observa-se que o alto custo dos medicamentos se
apresenta como um problema relevante para a populaccedilatildeo de baixa renda gerando assim a busca por
novos meacutetodos alternativos viaacuteveis como o uso dos fitoteraacutepicos (YUNES et al 2001)
22 Fitoterapia
Atualmente o uso de fitoteraacutepicos tem se intensificado em vaacuterios paiacuteses especialmente no
Brasil que possui uma flora rica e diversa com grande potencial para o desenvolvimento dessa
ciecircncia (ASSIS 2009 MOLINA et al 2008 MONTES et al 2009 OLIVEIRA et al 2007
TOMAZZONI NEGRELLE CENTA 2006)
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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v
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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44
6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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ANEXOS
57
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APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
AGRADECIMENTOS
Agradeccedilo primeiramente a Deus pelo dom da vida autor do meu destino guia presente
em minha vida
Aos meus pais Neacutelio Oliveira Cordeiro e Mordf Luacutecia B Oliveira meus exemplos de vida
por todos os esforccedilos realizados e priorizaccedilatildeo da minha educaccedilatildeo durante toda a vida Obrigada
por acreditarem em mim Aos meus irmatildeos Ceiccedila por ser fonte de inspiraccedilatildeo e me direcionar
a ser uma pessoa cada vez melhor por ser um espelho para todos noacutes Ao meu irmatildeo Neacutelio
Filho por viver esse sonho comigo e se fazer presente quando mais precisava por lagar tudo
em Teresina e ser meu amigo e protetor durante o tempo que veio morar comigo obrigada meu
irmatildeo por ser tatildeo companheiro e minha Thaiacutesa e Maria Fernanda que mesmo tatildeo pequenas jaacute
me ensinam o quanto a saudade eacute dolorosa e sempre me deram forccedilas para correr atraacutes dos meus
objetivos A minha madrasta Maria Antocircnia e padrasto Justino por todo carinho e cuidado
durante todos esses anos Agradeccedilo pelo amor dedicado durante toda a minha ausecircncia por
serem suporte e alegria na minha vida Sem vocecircs seria impossiacutevel realizar este sonho
Aos meus tios e primos que sempre depositaram carinho e amor em toda minha
trajetoacuteria
Aos meus orientadores Prof Drordf Ruthineacuteia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins e Prof Dr
Boniek Castillo Dutra Borges pela atenccedilatildeo por terem sempre respostas pertinentes pela
disponibilidade durante esses anos de trabalho e por me permitirem ser melhor como pessoa e
pesquisadora atraveacutes de seus exemplos diaacuterios de luta honestidade competecircncia e feacute Agradeccedilo
ainda a professora Larissa Sgarbosa de Arauacutejo Matuda por sua atenccedilatildeo e disponibilidade por
colaborar com esta pesquisa Aos professores Drordf Diana Ferreira Gadelha de Arauacutejo e Prof Dr
Bruno Cesar de Vasconcelos Gurgel por serem fonte de inspiraccedilatildeo e terem contribuiacutedo em
minha formaccedilatildeo durante o estaacutegio em docecircncia
As minhas queridas amigas Ana Luacutecia Camila e Carol que estiveram proacuteximas a mim
desde o primeiro dia de aula do mestrado sempre dispostas a serem apoio e sorrisos apoacutes dias
difiacuteceis As minhas queridas amigas Angeacutelica e Mayra pela amizade e por me acompanharem
nessa trajetoacuteria A amiga Aline e Mel por tornarem meus dias em Natal mais felizes e leves A
Franciara pela companhia durante a pesquisa e por sua amizade A meu querido Ricardo por
sua companhia e amizade que sempre se manteve disposto a tornar minha vida em Natal mais
leve com sua presenccedila Ao meu querido amigo Stephano por se manter sempre presente ainda
que com a distacircncia As minhas amigas Wenderdania e Maria Eduarda por me apoiarem quando
precisava A minha querida amiga Carina Liz por dedicar sua atenccedilatildeo e cuidado durante toda
essa trajetoacuteria
Aos meus queridos amigos Juliane Maxwell Mayara Priscila Larissa e Fabiane por
transmitirem carinho e pela manutenccedilatildeo de nossa amizade desde o iniacutecio da graduaccedilatildeo
Aos alunos do 4ordm periacuteodo de odontologia da UFRN que tanto me ensinaram durante o
estaacutegio em docecircncia estimulando que eu buscasse respostas para suas duacutevidas e dividindo suas
trajetoacuterias de vida
Aos secretaacuterios da poacutes-graduaccedilatildeo Lucas e Gracinha por serem sempre tatildeo prestativos e
gentis em ajudar quando necessaacuterio
A Floriano por sempre se disponibilizar a ajudar com o que lhe compete tecnicamente
por ser prestativo e disponiacutevel
Ao programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Ciecircncias Odontoloacutegicas Departamento de Ciecircncias
Farmacecircuticas e ao Departamento de Ciecircncias dos Materiais A Universidade Federal do Rio
Grande do Norte professores alunos da poacutes-graduaccedilatildeo e aos funcionaacuterios de forma geral pela
oportunidade incriacutevel de ter contato com o conhecimento em sua forma mais inspiradora
lsquorsquoA essecircncia do conhecimento consiste em
aplicaacute-lo uma vez possuiacutedorsquorsquo
(Confuacutecio)
RESUMO
INTRODUCcedilAtildeO O estudo da fitoterapia na prevenccedilatildeo e no tratamento de doenccedilas tem
estimulado pesquisas com plantas medicinais na Odontologia Dentre essas plantas destaca-se
a espeacutecie Spondias mombin por apresentar disponibilidade de mateacuteria-prima e amplo espectro
de accedilotildees farmacoloacutegicas que incluem atividades antimicrobiana anti-inflamatoacuteria cicatrizante
e antioxidante OBJETIVO Investigar o efeito do extrato de Spondias mombin L (cajaacute) sobre
a superfiacutecie de dentes humanos METODOLOGIA O extrato de cajaacute foi preparado em sua
diluiccedilatildeo 132=3125 mgml Trinta dentes humanos foram seccionados (60 x 60 mm)
preservando as proximais Os fragmentos foram divididos aleatoriamente em 3 grupos (n=10
por grupo) de acordo com os grupos extrato hidroetanoacutelico de S mombin L Digluconato de
clorexidina 012 e aacutegua destilada Cada fragmento foi imerso nas respectivas substacircncias por
1 minuto 2 vezes ao dia durante 14 dias Antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees foram realizadas
anaacutelises de cor molhabilidade rugosidade (Ra) e morfologia O pH das substacircncias tambeacutem
foi investigado Os dados foram analisados estatisticamente por meio de ANOVA (1 e 2 fatores)
e teste de Tukey para muacuteltiplas comparaccedilotildees RESULTADOS Natildeo houve diferenccedila
estatisticamente significativa em relaccedilatildeo a cor entre os grupos O extrato de cajaacute e clorexidina
012 apresentaram diferenccedilas significativas (plt0001) enquanto aacutegua destilada natildeo
apresentou diferenccedilas estatiacutesticas (pgt0005) Quanto a molhabilidade natildeo houve diferenccedila
estatisticamente significativa entre extrato de cajaacute (pgt0005) clorexidina 012 (pgt0005) e
aacutegua destilada (pgt0005) Para rugosidade natildeo houve diferenccedila estatisticamente significante
entre as substacircncias analisadas (pgt00005) Aleacutem disso natildeo houve diferenccedila estatiacutestica entre as
substacircncias e o tempo de imersatildeo (p lt00001) O pH meacutedio do extrato hidroetanoacutelico de cajaacute e
clorexidina 012 was de 295 e 65 respectivamente CONCLUSAtildeO O pH do extrato de
Smombin L eacute aacutecido e da clorexidina eacute neutro A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de
cajaacute foi bom tanto quanto a clorexidina A cor dos fragmentos dentaacuterios foi alterada apoacutes o
protocolo de imersatildeo no extrato hidroetanoacutelico de cajaacute e clorexidina 012 A rugosidade dos
fragmentos dentaacuterios analisados se manteve inalterada apoacutes o protocolo de imersatildeo nas
diferentes soluccedilotildees testadas O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostrou que natildeo
houve diferenccedila na superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
Descritores Fitoteraacutepicos Anacardiaceae Espectroscopia Dente
ABSTRACT
INTRODUCTION The study of phytotherapy in the prevention and treatment of diseases
stimulated the research with medicinal plants in Dentistry Among these plants the species
Spondia mombin stands out for the availability of raw material and a broad spectrum of
pharmacological actions that include antimicrobial anti-inflammatory cicatrizant and
antioxidant activities OBJECTIVE To investigate tooth surface changes regarding cajaacute
(Spondias mombin L) extract METHOD The cashew extract was prepared in its
dilution116=3125 mgml Thirty human teeth were sectioned (60 x 60 mm) preserving the
proximal surfaces Dental fragments were randomly divided into 3 groups (n =10 per group)
according to the substances hydroethanolic extract (3125 mgml) 012 chlorhexidine and
distilled water Each fragment was immersed in the respective substance for 1 minute twice
daily for 14 days Before and after the immersion color analysis wettability roughness (Ra)
and morphology as well as the pH levels of the substances were investigated Data were
analyzed statistically by means of ANOVA (one and two factors) and Tukey test for multiple
comparisons RESULTS There was a statistically significant difference between color in the
groups Cajaacute extract and 012 chlorhexidine presented significant differences (p lt0001)
while distilled water showed no statistical differences (pgt 0005) Regarding wettability there
was no statistically significant difference between Cajaacute extract (pgt0005) 012 chlorhexidine
and distilled water (pgt0005) For roughnes there was no statistically significant difference
between the analyzed substances (pgt00005) In addition there was no statistically significant
difference between the substances and immersion time (p lt00001) The mean pH of the
hydroethanolic extract of cajaacute and 012 chlorhexidine is 295 and 65 respectively
CONCLUSION pH of the extract of Smombin L is acid of the chlorhexidine is neutral The
wettability of the hydroethanolic extract of cajaacute was as good as 012 chlorhexidine Color
changes were observed after the immersion in hydroethanolic extract of cajaacute and 012
chlorhexidine Roughness of the analyzed dental fragments remained unchanged after the
immersion protocols Scanning electron microscopy showed no difference in the enamel
surface between the solutions tested
Keywords Phytotherapeutic AnacardiaceaeSpectroscopy Tooth
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade em baixa
rotaccedilatildeo27
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes seccionamento27
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L 29
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH29
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)30
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie dentaacuteria para anaacutelise da molhabilidade
31
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade32
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact32
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG33
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia34
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L preacutevio apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo38
Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo39
Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo40
Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo41
Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo42
Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo43
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 Resultados das meacutedias (desvios-padratildeo) da molhabilidade das substacircncias
testadas35
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padratildeo) da anaacutelise da cor valores de (ΔE) 36
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padratildeo) dos valores de rugosidade antes e apoacutes os diferentes
protocolos de imersatildeo36
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 18
21 AGENTES QUIacuteMICOS ANTIMICROBIANOS 18
22 FITOTERAPIA 19
221 SPONDIAS MOMBIN L20
23 CARACTERIacuteSTICAS DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA22
24 ALTERACcedilOtildeES NA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA CAUSADAS POR SUBSTAcircNCIAS QUIacuteMICAS
23
3 OBJETIVOS 25
31 OBJETIVO GERAL 25
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS 25
4 MEacuteTODO 26
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO26
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS26
43 SELECcedilAtildeOPREPARACcedilAtildeOARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA 26
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L 28
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO29
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO29
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE30
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE31
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR 32
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA 33
411 ANAacuteLISE DOS DADOS 34
5 RESULTADOS 35
51 pH DO EXTRATO 35
52 AcircNGULO DE CONTATO MOLHABILIDADE35
53 COR 36
54 RUGOSIDADE 36
55 MORFOLOGIA 37
6 DISCUSSAtildeO 44
7 CONCLUSAtildeO 48
REFEREcircNCIAS 49
ANEXOS 56
APENDICES 58
16
1 INTRODUCcedilAtildeO
Desde os primoacuterdios o uso de plantas medicinais foi preterido por falta de embasamento
cientiacutefico favorecendo agrave substituiccedilatildeo dos fitoteraacutepicos pelos medicamentos alopaacuteticos Na deacutecada
de 70 a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (OMS) passou a incentivar o estudo cientiacutefico das plantas
medicinais jaacute que muitas das encontradas no Brasil ainda natildeo possuiacuteam eficaacutecia cientiacutefica
comprovada (ALELUIA et al 2015) A partir dos anos 80 e 90 ocorreu um aumento expressivo
no mercado mundial de medicamentos fitoteraacutepicos especialmente nos paiacuteses industrializados
(FERNANDES 2003 CALIXTO 2001)
A 8ordf Conferecircncia Nacional de Sauacutede realizada no ano de 1986 trouxe entre suas
recomendaccedilotildees a ldquointroduccedilatildeo de praacuteticas alternativas de assistecircncia agrave sauacutede no acircmbito dos serviccedilos
de sauacutede possibilitando ao usuaacuterio o acesso democraacutetico de escolher a terapecircutica preferidardquo Com
vistas agrave viabilizaccedilatildeo dessa recomendaccedilatildeo algumas medidas foram tomadas como a regulamentaccedilatildeo
da implantaccedilatildeo da fitoterapia nos serviccedilos de sauacutede nas unidades federadas por meio da resoluccedilatildeo
Comissatildeo Interministerial de Planejamento e Coordenaccedilatildeo (Ciplan nordm 08 de 8 de marccedilo de 1988)
Os estudos com plantas medicinais em Odontologia tecircm sido desenvolvidos como uma
tentativa de abrir novos caminhos para o combate agraves infecccedilotildees bucais possibilitando a inserccedilatildeo do
uso de fitoteraacutepicos como recursos preventivo e terapecircutico na praacutetica diaacuteria ambulatorial
especialmente nos serviccedilos de atenccedilatildeo baacutesica ofertados pelo Sistema Uacutenico de Sauacutede (SUS) Nessa
perspectiva experimentos in vitro sobre a accedilatildeo antimicrobiana de extratos vegetais tecircm sido
realizados nas uacuteltimas deacutecadas (ALELUIA et al 2015 LIMA 2015 MACEcircDO 2016 LIMA
2015 ALVES 2017) com o intuito de obter agentes quiacutemicos antimicrobianos que auxiliem o
controle mecacircnico da microbiota bucal
Frente agraves deficiecircncias nos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal decorrentes da falta de
destreza manual e motivaccedilatildeo agentes quiacutemicos antimicrobianos tecircm sido propostos a fim de inibir
o crescimento e a proliferaccedilatildeo de microrganismos no ambiente bucal reduzir a adesatildeo bacteriana
agraves superfiacutecies modificar a atividade bioquiacutemica desses microrganismos e alterar a ecologia do
biofilme dentaacuterio para uma microbiota menos patogecircnica (MARSH 2010)
Na atualidade o agente antimicrobiano mais utilizado no controle quiacutemico da microbiota
bucal planctocircnica e organizada em biofilme eacute o digluconato de clorexidina 012 em funccedilatildeo do
seu amplo espectro de accedilatildeo baixa toxicidade e elevada substantividade Todavia essa substacircncia
aleacutem de apresentar um custo elevado natildeo pode ser usada por periacuteodos prolongados uma vez que
nessas situaccedilotildees altera a microbiota natural e produz efeitos colaterais como manchamento de
dentes e restauraccedilotildees descamaccedilatildeo da mucosa e modificaccedilotildees no paladar (MATOS et al 2015
HAJIFATTAHI et al 2016)
17
As limitaccedilotildees da clorexidina e de outros agentes antimicrobianos sinteacuteticos convencionais
tem encorajado a investigaccedilatildeo de produtos naturais com maior atividade terapecircutica menor
toxicidade maior biocompatibilidade com os tecidos moles e duros da cavidade oral e menor custo
para o controle quiacutemico do biofilme e o tratamento de diferentes infecccedilotildees orais (ALLAKER 2009)
Dentre esses produtos naturais cuja accedilatildeo antimicrobiana tem sido investigada merece
destaque o extrato da folha de Spondias mombin (S mombin L) espeacutecie vulgarmente conhecida
como cajaacute pertencente agrave famiacutelia Anacardiacea que estaacute distribuiacuteda em diversas regiotildees do Brasil e
de outros paiacuteses da Ameacuterica Latina (THADHANI et al 2012)
Considerando que S mombin L tem demonstrado muacuteltiplas atividades bioloacutegicas relevantes
agrave manutenccedilatildeo e ao restabelecimento da sauacutede bucal podendo assim ser utilizada como mateacuteria
prima para o desenvolvimento futuro de novos agentes antimicrobianos quiacutemicos torna-se de
extrema importacircncia investigar o seu efeito sobre os tecidos moles e duros da cavidade oral a fim
de que o mesmo seja administrado com eficaacutecia e seguranccedila
Frente ao exposto o presente estudo se propocircs a investigar o pH do extrato de Spondias
mombin L e avaliar o seu efeito sobre a superfiacutecie de dentes humanos no que diz respeito agraves
caracteriacutesticas cor rugosidade morfologia de superfiacutecie e molhabilidade comparando esse efeito
com aquele produzido pela soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 sobre essa mesma
superfiacutecie A hipoacutetese nula testada foi a de que natildeo havia diferenccedila entre o pH do extrato de
Spondias mombin L e o pH da soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 assim como entre os
efeitos produzidos por essas substacircncias sobre as superfiacutecies de dentes humanos no tocante a todas
as variaacuteveis investigadas Ademais natildeo existem estudos na literatura vigente que tenham
investigado o referido extrato frente agrave superfiacutecie dentaacuteria fato este que destaca o ineditismo do
estudo em questatildeo e a sua importante contribuiccedilatildeo para os avanccedilos cientiacuteficos na aacuterea odontoloacutegica
18
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
21 Agentes quiacutemicos antimicrobianos
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar quando o controle mecacircnico no
sentido de evitar o acuacutemulo de bacteacuterias sobre os dentes natildeo puder ser realizado diariamente ou
estiver inadequado (ANDERSON 2003 LAING et al 2008)
Frente agraves limitaccedilotildees dos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal agentes quiacutemicos
antimicrobianos tecircm sido propostos principalmente nos casos em que haacute dificuldade de controle do
biofilme dentaacuterio e naqueles onde eacute necessaacuterio reduzir demasiadamente a quantidade de
microrganismos bucais (MOREIRA et al 2009 MARSH 2010)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico de moleacuteculas carregadas positivamente que apresenta um
largo espectro antimicrobiano pertencente agrave famiacutelia de compostos conhecidos como bisbiguanida
Sua moleacutecula se liga provavelmente atraveacutes de forccedilas eletrostaacuteticas aos grupos fosfato carboxila
ou sulfato tanto na mucosa bucal quanto nos microrganismos e na peliacutecula adquirida Sendo assim
a clorexidina compete com o caacutelcio comprometendo a aderecircncia bacteriana e consequentemente
inibindo a formaccedilatildeo do biofilme Tal substacircncia atinge seu efeito antimicrobiano atraveacutes de suas
atividades bactericida e bacteriostaacutetica Inicialmente quando aplicada na forma de soluccedilatildeo gel ou
verniz a concentraccedilatildeo eacute tal que o agente eacute bactericida Todavia a clorexidina tambeacutem se liga agraves
mucosas e superfiacutecies dos dentes e posteriormente eacute liberada de forma lenta em concentraccedilotildees
bacteriostaacuteticas durante vaacuterias horas Diante do exposto o que diferencia a clorexidina dos demais
agentes antimicrobianos eacute a sua substantividade Sua duraccedilatildeo de accedilatildeo eacute prolongada pela sua
habilidade de adsorccedilatildeo agraves estruturas bucais e posterior liberaccedilatildeo lenta na sua forma ativa (SILVA
1991 ROSA ROCHA 1993 MATTHIJS 2009 SOET et al 2002 FEJERSKOV KIDD 2005
VAN STRYDONCK et al 2005)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico catiocircnico que age contra uma ampla variedade de bacteacuterias
fungos e alguns viacuterus lipofiacutelicos (DENTON et al 1991) Seu efeito antibacteriano ocorre atraveacutes da
interaccedilatildeo natildeo-especiacutefica com o aacutecido fosfolipiacutedico da membrana celular causando alteraccedilotildees na
permeabilidade da membrana para iacuteons como potaacutessio e para constituintes do citosol como
aminoaacutecidos e nucleotiacutedeos Em altas concentraccedilotildees a atividade de enzimas associadas agrave
membrana como dehidrogenases e ATPase eacute indiretamente afetada (DAVIES 1973 BRECX
THEILADE 1984)
19
Dentre os agentes antimicrobianos bucais mais utilizados o digluconato de clorexidina
012 merece destaque devido ao seu potencial antimicrobiano e agrave sua caracteriacutestica de forte
adsorccedilatildeo agraves superfiacutecies bucais (MARSH 2010 SCHEIE PETERSEN 2011) A clorexidina
demonstrou ser eficaz contra vaacuterias bacteacuterias orais Devido ao seu amplo espectro antimicrobiano
atuando contra bacteacuterias Gram-positivas Gram-negativas e fungos tambeacutem tem sido utilizada para
tratar concomitantemente doenccedilas endodocircnticas (SIQUEIRA JR PAIVA ROcircCcedilAS 2007
VIANNA et al 2008) periodontais e para prevenir a progressatildeo de caacuterie (COSYN et al2006
DUARTE LOTUFO PANNUTI 2008) Visto que a clorexidina promove alguns efeitos colaterais
como pigmentaccedilatildeo dos dentes alteraccedilatildeo do paladar e descamaccedilatildeo da mucosa os antisseacutepticos que
tecircm como princiacutepio ativo o digluconato de clorexidina a 012 ou 02 apresentam meacutedia elevada
para o potencial de reduccedilatildeo da microbiota bucal quando comparados a outros antisseacutepticos
(MATOS et al 2015)
As propriedades de um antisseacuteptico ideal incluem estabilidade baixa tensatildeo superficial
letalidade em baixas concentraccedilotildees ausecircncia de toxicidade e poder de penetraccedilatildeo No entanto
nenhum produto disponiacutevel no mercado possui todos esses requisitos o que justifica os efeitos
colaterais e a pouca eficiecircncia apresentada por alguns (MOREIRA et al 2009 ZANIN et al 2007)
Diante dos efeitos colaterais do digluconato de clorexidina 012 e da sua possibilidade de
causar resistecircncia bacteriana torna-se necessaacuterio investigar as propriedades antimicrobianas de
novas substacircncias e com a rica diversidade da flora do Brasil parece salutar o estudo de produtos
derivados de plantas como princiacutepio ativo de possiacuteveis agentes antimicrobianos (MOTA
TURRINI POVEDA 2015)
O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibioacuteticos tem
se tornado um problema significante para a sauacutede puacuteblica As principais causas dessa resistecircncia
estatildeo associadas ao uso excessivo de antibioacuteticos nos tratamentos por prescriccedilotildees meacutedicas e agrave
capacidade de sobrevivecircncia intracelular de algumas bacteacuterias induzidas por certas infecccedilotildees que
impedem o acesso do medicamento em foco Observa-se que o alto custo dos medicamentos se
apresenta como um problema relevante para a populaccedilatildeo de baixa renda gerando assim a busca por
novos meacutetodos alternativos viaacuteveis como o uso dos fitoteraacutepicos (YUNES et al 2001)
22 Fitoterapia
Atualmente o uso de fitoteraacutepicos tem se intensificado em vaacuterios paiacuteses especialmente no
Brasil que possui uma flora rica e diversa com grande potencial para o desenvolvimento dessa
ciecircncia (ASSIS 2009 MOLINA et al 2008 MONTES et al 2009 OLIVEIRA et al 2007
TOMAZZONI NEGRELLE CENTA 2006)
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
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Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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56
ANEXOS
57
58
APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
que com a distacircncia As minhas amigas Wenderdania e Maria Eduarda por me apoiarem quando
precisava A minha querida amiga Carina Liz por dedicar sua atenccedilatildeo e cuidado durante toda
essa trajetoacuteria
Aos meus queridos amigos Juliane Maxwell Mayara Priscila Larissa e Fabiane por
transmitirem carinho e pela manutenccedilatildeo de nossa amizade desde o iniacutecio da graduaccedilatildeo
Aos alunos do 4ordm periacuteodo de odontologia da UFRN que tanto me ensinaram durante o
estaacutegio em docecircncia estimulando que eu buscasse respostas para suas duacutevidas e dividindo suas
trajetoacuterias de vida
Aos secretaacuterios da poacutes-graduaccedilatildeo Lucas e Gracinha por serem sempre tatildeo prestativos e
gentis em ajudar quando necessaacuterio
A Floriano por sempre se disponibilizar a ajudar com o que lhe compete tecnicamente
por ser prestativo e disponiacutevel
Ao programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Ciecircncias Odontoloacutegicas Departamento de Ciecircncias
Farmacecircuticas e ao Departamento de Ciecircncias dos Materiais A Universidade Federal do Rio
Grande do Norte professores alunos da poacutes-graduaccedilatildeo e aos funcionaacuterios de forma geral pela
oportunidade incriacutevel de ter contato com o conhecimento em sua forma mais inspiradora
lsquorsquoA essecircncia do conhecimento consiste em
aplicaacute-lo uma vez possuiacutedorsquorsquo
(Confuacutecio)
RESUMO
INTRODUCcedilAtildeO O estudo da fitoterapia na prevenccedilatildeo e no tratamento de doenccedilas tem
estimulado pesquisas com plantas medicinais na Odontologia Dentre essas plantas destaca-se
a espeacutecie Spondias mombin por apresentar disponibilidade de mateacuteria-prima e amplo espectro
de accedilotildees farmacoloacutegicas que incluem atividades antimicrobiana anti-inflamatoacuteria cicatrizante
e antioxidante OBJETIVO Investigar o efeito do extrato de Spondias mombin L (cajaacute) sobre
a superfiacutecie de dentes humanos METODOLOGIA O extrato de cajaacute foi preparado em sua
diluiccedilatildeo 132=3125 mgml Trinta dentes humanos foram seccionados (60 x 60 mm)
preservando as proximais Os fragmentos foram divididos aleatoriamente em 3 grupos (n=10
por grupo) de acordo com os grupos extrato hidroetanoacutelico de S mombin L Digluconato de
clorexidina 012 e aacutegua destilada Cada fragmento foi imerso nas respectivas substacircncias por
1 minuto 2 vezes ao dia durante 14 dias Antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees foram realizadas
anaacutelises de cor molhabilidade rugosidade (Ra) e morfologia O pH das substacircncias tambeacutem
foi investigado Os dados foram analisados estatisticamente por meio de ANOVA (1 e 2 fatores)
e teste de Tukey para muacuteltiplas comparaccedilotildees RESULTADOS Natildeo houve diferenccedila
estatisticamente significativa em relaccedilatildeo a cor entre os grupos O extrato de cajaacute e clorexidina
012 apresentaram diferenccedilas significativas (plt0001) enquanto aacutegua destilada natildeo
apresentou diferenccedilas estatiacutesticas (pgt0005) Quanto a molhabilidade natildeo houve diferenccedila
estatisticamente significativa entre extrato de cajaacute (pgt0005) clorexidina 012 (pgt0005) e
aacutegua destilada (pgt0005) Para rugosidade natildeo houve diferenccedila estatisticamente significante
entre as substacircncias analisadas (pgt00005) Aleacutem disso natildeo houve diferenccedila estatiacutestica entre as
substacircncias e o tempo de imersatildeo (p lt00001) O pH meacutedio do extrato hidroetanoacutelico de cajaacute e
clorexidina 012 was de 295 e 65 respectivamente CONCLUSAtildeO O pH do extrato de
Smombin L eacute aacutecido e da clorexidina eacute neutro A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de
cajaacute foi bom tanto quanto a clorexidina A cor dos fragmentos dentaacuterios foi alterada apoacutes o
protocolo de imersatildeo no extrato hidroetanoacutelico de cajaacute e clorexidina 012 A rugosidade dos
fragmentos dentaacuterios analisados se manteve inalterada apoacutes o protocolo de imersatildeo nas
diferentes soluccedilotildees testadas O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostrou que natildeo
houve diferenccedila na superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
Descritores Fitoteraacutepicos Anacardiaceae Espectroscopia Dente
ABSTRACT
INTRODUCTION The study of phytotherapy in the prevention and treatment of diseases
stimulated the research with medicinal plants in Dentistry Among these plants the species
Spondia mombin stands out for the availability of raw material and a broad spectrum of
pharmacological actions that include antimicrobial anti-inflammatory cicatrizant and
antioxidant activities OBJECTIVE To investigate tooth surface changes regarding cajaacute
(Spondias mombin L) extract METHOD The cashew extract was prepared in its
dilution116=3125 mgml Thirty human teeth were sectioned (60 x 60 mm) preserving the
proximal surfaces Dental fragments were randomly divided into 3 groups (n =10 per group)
according to the substances hydroethanolic extract (3125 mgml) 012 chlorhexidine and
distilled water Each fragment was immersed in the respective substance for 1 minute twice
daily for 14 days Before and after the immersion color analysis wettability roughness (Ra)
and morphology as well as the pH levels of the substances were investigated Data were
analyzed statistically by means of ANOVA (one and two factors) and Tukey test for multiple
comparisons RESULTS There was a statistically significant difference between color in the
groups Cajaacute extract and 012 chlorhexidine presented significant differences (p lt0001)
while distilled water showed no statistical differences (pgt 0005) Regarding wettability there
was no statistically significant difference between Cajaacute extract (pgt0005) 012 chlorhexidine
and distilled water (pgt0005) For roughnes there was no statistically significant difference
between the analyzed substances (pgt00005) In addition there was no statistically significant
difference between the substances and immersion time (p lt00001) The mean pH of the
hydroethanolic extract of cajaacute and 012 chlorhexidine is 295 and 65 respectively
CONCLUSION pH of the extract of Smombin L is acid of the chlorhexidine is neutral The
wettability of the hydroethanolic extract of cajaacute was as good as 012 chlorhexidine Color
changes were observed after the immersion in hydroethanolic extract of cajaacute and 012
chlorhexidine Roughness of the analyzed dental fragments remained unchanged after the
immersion protocols Scanning electron microscopy showed no difference in the enamel
surface between the solutions tested
Keywords Phytotherapeutic AnacardiaceaeSpectroscopy Tooth
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade em baixa
rotaccedilatildeo27
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes seccionamento27
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L 29
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH29
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)30
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie dentaacuteria para anaacutelise da molhabilidade
31
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade32
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact32
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG33
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia34
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L preacutevio apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo38
Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo39
Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo40
Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo41
Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo42
Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo43
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 Resultados das meacutedias (desvios-padratildeo) da molhabilidade das substacircncias
testadas35
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padratildeo) da anaacutelise da cor valores de (ΔE) 36
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padratildeo) dos valores de rugosidade antes e apoacutes os diferentes
protocolos de imersatildeo36
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 18
21 AGENTES QUIacuteMICOS ANTIMICROBIANOS 18
22 FITOTERAPIA 19
221 SPONDIAS MOMBIN L20
23 CARACTERIacuteSTICAS DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA22
24 ALTERACcedilOtildeES NA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA CAUSADAS POR SUBSTAcircNCIAS QUIacuteMICAS
23
3 OBJETIVOS 25
31 OBJETIVO GERAL 25
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS 25
4 MEacuteTODO 26
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO26
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS26
43 SELECcedilAtildeOPREPARACcedilAtildeOARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA 26
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L 28
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO29
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO29
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE30
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE31
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR 32
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA 33
411 ANAacuteLISE DOS DADOS 34
5 RESULTADOS 35
51 pH DO EXTRATO 35
52 AcircNGULO DE CONTATO MOLHABILIDADE35
53 COR 36
54 RUGOSIDADE 36
55 MORFOLOGIA 37
6 DISCUSSAtildeO 44
7 CONCLUSAtildeO 48
REFEREcircNCIAS 49
ANEXOS 56
APENDICES 58
16
1 INTRODUCcedilAtildeO
Desde os primoacuterdios o uso de plantas medicinais foi preterido por falta de embasamento
cientiacutefico favorecendo agrave substituiccedilatildeo dos fitoteraacutepicos pelos medicamentos alopaacuteticos Na deacutecada
de 70 a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (OMS) passou a incentivar o estudo cientiacutefico das plantas
medicinais jaacute que muitas das encontradas no Brasil ainda natildeo possuiacuteam eficaacutecia cientiacutefica
comprovada (ALELUIA et al 2015) A partir dos anos 80 e 90 ocorreu um aumento expressivo
no mercado mundial de medicamentos fitoteraacutepicos especialmente nos paiacuteses industrializados
(FERNANDES 2003 CALIXTO 2001)
A 8ordf Conferecircncia Nacional de Sauacutede realizada no ano de 1986 trouxe entre suas
recomendaccedilotildees a ldquointroduccedilatildeo de praacuteticas alternativas de assistecircncia agrave sauacutede no acircmbito dos serviccedilos
de sauacutede possibilitando ao usuaacuterio o acesso democraacutetico de escolher a terapecircutica preferidardquo Com
vistas agrave viabilizaccedilatildeo dessa recomendaccedilatildeo algumas medidas foram tomadas como a regulamentaccedilatildeo
da implantaccedilatildeo da fitoterapia nos serviccedilos de sauacutede nas unidades federadas por meio da resoluccedilatildeo
Comissatildeo Interministerial de Planejamento e Coordenaccedilatildeo (Ciplan nordm 08 de 8 de marccedilo de 1988)
Os estudos com plantas medicinais em Odontologia tecircm sido desenvolvidos como uma
tentativa de abrir novos caminhos para o combate agraves infecccedilotildees bucais possibilitando a inserccedilatildeo do
uso de fitoteraacutepicos como recursos preventivo e terapecircutico na praacutetica diaacuteria ambulatorial
especialmente nos serviccedilos de atenccedilatildeo baacutesica ofertados pelo Sistema Uacutenico de Sauacutede (SUS) Nessa
perspectiva experimentos in vitro sobre a accedilatildeo antimicrobiana de extratos vegetais tecircm sido
realizados nas uacuteltimas deacutecadas (ALELUIA et al 2015 LIMA 2015 MACEcircDO 2016 LIMA
2015 ALVES 2017) com o intuito de obter agentes quiacutemicos antimicrobianos que auxiliem o
controle mecacircnico da microbiota bucal
Frente agraves deficiecircncias nos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal decorrentes da falta de
destreza manual e motivaccedilatildeo agentes quiacutemicos antimicrobianos tecircm sido propostos a fim de inibir
o crescimento e a proliferaccedilatildeo de microrganismos no ambiente bucal reduzir a adesatildeo bacteriana
agraves superfiacutecies modificar a atividade bioquiacutemica desses microrganismos e alterar a ecologia do
biofilme dentaacuterio para uma microbiota menos patogecircnica (MARSH 2010)
Na atualidade o agente antimicrobiano mais utilizado no controle quiacutemico da microbiota
bucal planctocircnica e organizada em biofilme eacute o digluconato de clorexidina 012 em funccedilatildeo do
seu amplo espectro de accedilatildeo baixa toxicidade e elevada substantividade Todavia essa substacircncia
aleacutem de apresentar um custo elevado natildeo pode ser usada por periacuteodos prolongados uma vez que
nessas situaccedilotildees altera a microbiota natural e produz efeitos colaterais como manchamento de
dentes e restauraccedilotildees descamaccedilatildeo da mucosa e modificaccedilotildees no paladar (MATOS et al 2015
HAJIFATTAHI et al 2016)
17
As limitaccedilotildees da clorexidina e de outros agentes antimicrobianos sinteacuteticos convencionais
tem encorajado a investigaccedilatildeo de produtos naturais com maior atividade terapecircutica menor
toxicidade maior biocompatibilidade com os tecidos moles e duros da cavidade oral e menor custo
para o controle quiacutemico do biofilme e o tratamento de diferentes infecccedilotildees orais (ALLAKER 2009)
Dentre esses produtos naturais cuja accedilatildeo antimicrobiana tem sido investigada merece
destaque o extrato da folha de Spondias mombin (S mombin L) espeacutecie vulgarmente conhecida
como cajaacute pertencente agrave famiacutelia Anacardiacea que estaacute distribuiacuteda em diversas regiotildees do Brasil e
de outros paiacuteses da Ameacuterica Latina (THADHANI et al 2012)
Considerando que S mombin L tem demonstrado muacuteltiplas atividades bioloacutegicas relevantes
agrave manutenccedilatildeo e ao restabelecimento da sauacutede bucal podendo assim ser utilizada como mateacuteria
prima para o desenvolvimento futuro de novos agentes antimicrobianos quiacutemicos torna-se de
extrema importacircncia investigar o seu efeito sobre os tecidos moles e duros da cavidade oral a fim
de que o mesmo seja administrado com eficaacutecia e seguranccedila
Frente ao exposto o presente estudo se propocircs a investigar o pH do extrato de Spondias
mombin L e avaliar o seu efeito sobre a superfiacutecie de dentes humanos no que diz respeito agraves
caracteriacutesticas cor rugosidade morfologia de superfiacutecie e molhabilidade comparando esse efeito
com aquele produzido pela soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 sobre essa mesma
superfiacutecie A hipoacutetese nula testada foi a de que natildeo havia diferenccedila entre o pH do extrato de
Spondias mombin L e o pH da soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 assim como entre os
efeitos produzidos por essas substacircncias sobre as superfiacutecies de dentes humanos no tocante a todas
as variaacuteveis investigadas Ademais natildeo existem estudos na literatura vigente que tenham
investigado o referido extrato frente agrave superfiacutecie dentaacuteria fato este que destaca o ineditismo do
estudo em questatildeo e a sua importante contribuiccedilatildeo para os avanccedilos cientiacuteficos na aacuterea odontoloacutegica
18
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
21 Agentes quiacutemicos antimicrobianos
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar quando o controle mecacircnico no
sentido de evitar o acuacutemulo de bacteacuterias sobre os dentes natildeo puder ser realizado diariamente ou
estiver inadequado (ANDERSON 2003 LAING et al 2008)
Frente agraves limitaccedilotildees dos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal agentes quiacutemicos
antimicrobianos tecircm sido propostos principalmente nos casos em que haacute dificuldade de controle do
biofilme dentaacuterio e naqueles onde eacute necessaacuterio reduzir demasiadamente a quantidade de
microrganismos bucais (MOREIRA et al 2009 MARSH 2010)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico de moleacuteculas carregadas positivamente que apresenta um
largo espectro antimicrobiano pertencente agrave famiacutelia de compostos conhecidos como bisbiguanida
Sua moleacutecula se liga provavelmente atraveacutes de forccedilas eletrostaacuteticas aos grupos fosfato carboxila
ou sulfato tanto na mucosa bucal quanto nos microrganismos e na peliacutecula adquirida Sendo assim
a clorexidina compete com o caacutelcio comprometendo a aderecircncia bacteriana e consequentemente
inibindo a formaccedilatildeo do biofilme Tal substacircncia atinge seu efeito antimicrobiano atraveacutes de suas
atividades bactericida e bacteriostaacutetica Inicialmente quando aplicada na forma de soluccedilatildeo gel ou
verniz a concentraccedilatildeo eacute tal que o agente eacute bactericida Todavia a clorexidina tambeacutem se liga agraves
mucosas e superfiacutecies dos dentes e posteriormente eacute liberada de forma lenta em concentraccedilotildees
bacteriostaacuteticas durante vaacuterias horas Diante do exposto o que diferencia a clorexidina dos demais
agentes antimicrobianos eacute a sua substantividade Sua duraccedilatildeo de accedilatildeo eacute prolongada pela sua
habilidade de adsorccedilatildeo agraves estruturas bucais e posterior liberaccedilatildeo lenta na sua forma ativa (SILVA
1991 ROSA ROCHA 1993 MATTHIJS 2009 SOET et al 2002 FEJERSKOV KIDD 2005
VAN STRYDONCK et al 2005)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico catiocircnico que age contra uma ampla variedade de bacteacuterias
fungos e alguns viacuterus lipofiacutelicos (DENTON et al 1991) Seu efeito antibacteriano ocorre atraveacutes da
interaccedilatildeo natildeo-especiacutefica com o aacutecido fosfolipiacutedico da membrana celular causando alteraccedilotildees na
permeabilidade da membrana para iacuteons como potaacutessio e para constituintes do citosol como
aminoaacutecidos e nucleotiacutedeos Em altas concentraccedilotildees a atividade de enzimas associadas agrave
membrana como dehidrogenases e ATPase eacute indiretamente afetada (DAVIES 1973 BRECX
THEILADE 1984)
19
Dentre os agentes antimicrobianos bucais mais utilizados o digluconato de clorexidina
012 merece destaque devido ao seu potencial antimicrobiano e agrave sua caracteriacutestica de forte
adsorccedilatildeo agraves superfiacutecies bucais (MARSH 2010 SCHEIE PETERSEN 2011) A clorexidina
demonstrou ser eficaz contra vaacuterias bacteacuterias orais Devido ao seu amplo espectro antimicrobiano
atuando contra bacteacuterias Gram-positivas Gram-negativas e fungos tambeacutem tem sido utilizada para
tratar concomitantemente doenccedilas endodocircnticas (SIQUEIRA JR PAIVA ROcircCcedilAS 2007
VIANNA et al 2008) periodontais e para prevenir a progressatildeo de caacuterie (COSYN et al2006
DUARTE LOTUFO PANNUTI 2008) Visto que a clorexidina promove alguns efeitos colaterais
como pigmentaccedilatildeo dos dentes alteraccedilatildeo do paladar e descamaccedilatildeo da mucosa os antisseacutepticos que
tecircm como princiacutepio ativo o digluconato de clorexidina a 012 ou 02 apresentam meacutedia elevada
para o potencial de reduccedilatildeo da microbiota bucal quando comparados a outros antisseacutepticos
(MATOS et al 2015)
As propriedades de um antisseacuteptico ideal incluem estabilidade baixa tensatildeo superficial
letalidade em baixas concentraccedilotildees ausecircncia de toxicidade e poder de penetraccedilatildeo No entanto
nenhum produto disponiacutevel no mercado possui todos esses requisitos o que justifica os efeitos
colaterais e a pouca eficiecircncia apresentada por alguns (MOREIRA et al 2009 ZANIN et al 2007)
Diante dos efeitos colaterais do digluconato de clorexidina 012 e da sua possibilidade de
causar resistecircncia bacteriana torna-se necessaacuterio investigar as propriedades antimicrobianas de
novas substacircncias e com a rica diversidade da flora do Brasil parece salutar o estudo de produtos
derivados de plantas como princiacutepio ativo de possiacuteveis agentes antimicrobianos (MOTA
TURRINI POVEDA 2015)
O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibioacuteticos tem
se tornado um problema significante para a sauacutede puacuteblica As principais causas dessa resistecircncia
estatildeo associadas ao uso excessivo de antibioacuteticos nos tratamentos por prescriccedilotildees meacutedicas e agrave
capacidade de sobrevivecircncia intracelular de algumas bacteacuterias induzidas por certas infecccedilotildees que
impedem o acesso do medicamento em foco Observa-se que o alto custo dos medicamentos se
apresenta como um problema relevante para a populaccedilatildeo de baixa renda gerando assim a busca por
novos meacutetodos alternativos viaacuteveis como o uso dos fitoteraacutepicos (YUNES et al 2001)
22 Fitoterapia
Atualmente o uso de fitoteraacutepicos tem se intensificado em vaacuterios paiacuteses especialmente no
Brasil que possui uma flora rica e diversa com grande potencial para o desenvolvimento dessa
ciecircncia (ASSIS 2009 MOLINA et al 2008 MONTES et al 2009 OLIVEIRA et al 2007
TOMAZZONI NEGRELLE CENTA 2006)
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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5 10
39
Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
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7
8
4 9
5 10
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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v
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
2
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9
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44
6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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ANEXOS
57
58
APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
lsquorsquoA essecircncia do conhecimento consiste em
aplicaacute-lo uma vez possuiacutedorsquorsquo
(Confuacutecio)
RESUMO
INTRODUCcedilAtildeO O estudo da fitoterapia na prevenccedilatildeo e no tratamento de doenccedilas tem
estimulado pesquisas com plantas medicinais na Odontologia Dentre essas plantas destaca-se
a espeacutecie Spondias mombin por apresentar disponibilidade de mateacuteria-prima e amplo espectro
de accedilotildees farmacoloacutegicas que incluem atividades antimicrobiana anti-inflamatoacuteria cicatrizante
e antioxidante OBJETIVO Investigar o efeito do extrato de Spondias mombin L (cajaacute) sobre
a superfiacutecie de dentes humanos METODOLOGIA O extrato de cajaacute foi preparado em sua
diluiccedilatildeo 132=3125 mgml Trinta dentes humanos foram seccionados (60 x 60 mm)
preservando as proximais Os fragmentos foram divididos aleatoriamente em 3 grupos (n=10
por grupo) de acordo com os grupos extrato hidroetanoacutelico de S mombin L Digluconato de
clorexidina 012 e aacutegua destilada Cada fragmento foi imerso nas respectivas substacircncias por
1 minuto 2 vezes ao dia durante 14 dias Antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees foram realizadas
anaacutelises de cor molhabilidade rugosidade (Ra) e morfologia O pH das substacircncias tambeacutem
foi investigado Os dados foram analisados estatisticamente por meio de ANOVA (1 e 2 fatores)
e teste de Tukey para muacuteltiplas comparaccedilotildees RESULTADOS Natildeo houve diferenccedila
estatisticamente significativa em relaccedilatildeo a cor entre os grupos O extrato de cajaacute e clorexidina
012 apresentaram diferenccedilas significativas (plt0001) enquanto aacutegua destilada natildeo
apresentou diferenccedilas estatiacutesticas (pgt0005) Quanto a molhabilidade natildeo houve diferenccedila
estatisticamente significativa entre extrato de cajaacute (pgt0005) clorexidina 012 (pgt0005) e
aacutegua destilada (pgt0005) Para rugosidade natildeo houve diferenccedila estatisticamente significante
entre as substacircncias analisadas (pgt00005) Aleacutem disso natildeo houve diferenccedila estatiacutestica entre as
substacircncias e o tempo de imersatildeo (p lt00001) O pH meacutedio do extrato hidroetanoacutelico de cajaacute e
clorexidina 012 was de 295 e 65 respectivamente CONCLUSAtildeO O pH do extrato de
Smombin L eacute aacutecido e da clorexidina eacute neutro A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de
cajaacute foi bom tanto quanto a clorexidina A cor dos fragmentos dentaacuterios foi alterada apoacutes o
protocolo de imersatildeo no extrato hidroetanoacutelico de cajaacute e clorexidina 012 A rugosidade dos
fragmentos dentaacuterios analisados se manteve inalterada apoacutes o protocolo de imersatildeo nas
diferentes soluccedilotildees testadas O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostrou que natildeo
houve diferenccedila na superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
Descritores Fitoteraacutepicos Anacardiaceae Espectroscopia Dente
ABSTRACT
INTRODUCTION The study of phytotherapy in the prevention and treatment of diseases
stimulated the research with medicinal plants in Dentistry Among these plants the species
Spondia mombin stands out for the availability of raw material and a broad spectrum of
pharmacological actions that include antimicrobial anti-inflammatory cicatrizant and
antioxidant activities OBJECTIVE To investigate tooth surface changes regarding cajaacute
(Spondias mombin L) extract METHOD The cashew extract was prepared in its
dilution116=3125 mgml Thirty human teeth were sectioned (60 x 60 mm) preserving the
proximal surfaces Dental fragments were randomly divided into 3 groups (n =10 per group)
according to the substances hydroethanolic extract (3125 mgml) 012 chlorhexidine and
distilled water Each fragment was immersed in the respective substance for 1 minute twice
daily for 14 days Before and after the immersion color analysis wettability roughness (Ra)
and morphology as well as the pH levels of the substances were investigated Data were
analyzed statistically by means of ANOVA (one and two factors) and Tukey test for multiple
comparisons RESULTS There was a statistically significant difference between color in the
groups Cajaacute extract and 012 chlorhexidine presented significant differences (p lt0001)
while distilled water showed no statistical differences (pgt 0005) Regarding wettability there
was no statistically significant difference between Cajaacute extract (pgt0005) 012 chlorhexidine
and distilled water (pgt0005) For roughnes there was no statistically significant difference
between the analyzed substances (pgt00005) In addition there was no statistically significant
difference between the substances and immersion time (p lt00001) The mean pH of the
hydroethanolic extract of cajaacute and 012 chlorhexidine is 295 and 65 respectively
CONCLUSION pH of the extract of Smombin L is acid of the chlorhexidine is neutral The
wettability of the hydroethanolic extract of cajaacute was as good as 012 chlorhexidine Color
changes were observed after the immersion in hydroethanolic extract of cajaacute and 012
chlorhexidine Roughness of the analyzed dental fragments remained unchanged after the
immersion protocols Scanning electron microscopy showed no difference in the enamel
surface between the solutions tested
Keywords Phytotherapeutic AnacardiaceaeSpectroscopy Tooth
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade em baixa
rotaccedilatildeo27
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes seccionamento27
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L 29
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH29
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)30
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie dentaacuteria para anaacutelise da molhabilidade
31
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade32
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact32
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG33
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia34
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L preacutevio apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo38
Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo39
Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo40
Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo41
Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo42
Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo43
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 Resultados das meacutedias (desvios-padratildeo) da molhabilidade das substacircncias
testadas35
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padratildeo) da anaacutelise da cor valores de (ΔE) 36
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padratildeo) dos valores de rugosidade antes e apoacutes os diferentes
protocolos de imersatildeo36
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 18
21 AGENTES QUIacuteMICOS ANTIMICROBIANOS 18
22 FITOTERAPIA 19
221 SPONDIAS MOMBIN L20
23 CARACTERIacuteSTICAS DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA22
24 ALTERACcedilOtildeES NA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA CAUSADAS POR SUBSTAcircNCIAS QUIacuteMICAS
23
3 OBJETIVOS 25
31 OBJETIVO GERAL 25
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS 25
4 MEacuteTODO 26
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO26
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS26
43 SELECcedilAtildeOPREPARACcedilAtildeOARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA 26
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L 28
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO29
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO29
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE30
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE31
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR 32
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA 33
411 ANAacuteLISE DOS DADOS 34
5 RESULTADOS 35
51 pH DO EXTRATO 35
52 AcircNGULO DE CONTATO MOLHABILIDADE35
53 COR 36
54 RUGOSIDADE 36
55 MORFOLOGIA 37
6 DISCUSSAtildeO 44
7 CONCLUSAtildeO 48
REFEREcircNCIAS 49
ANEXOS 56
APENDICES 58
16
1 INTRODUCcedilAtildeO
Desde os primoacuterdios o uso de plantas medicinais foi preterido por falta de embasamento
cientiacutefico favorecendo agrave substituiccedilatildeo dos fitoteraacutepicos pelos medicamentos alopaacuteticos Na deacutecada
de 70 a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (OMS) passou a incentivar o estudo cientiacutefico das plantas
medicinais jaacute que muitas das encontradas no Brasil ainda natildeo possuiacuteam eficaacutecia cientiacutefica
comprovada (ALELUIA et al 2015) A partir dos anos 80 e 90 ocorreu um aumento expressivo
no mercado mundial de medicamentos fitoteraacutepicos especialmente nos paiacuteses industrializados
(FERNANDES 2003 CALIXTO 2001)
A 8ordf Conferecircncia Nacional de Sauacutede realizada no ano de 1986 trouxe entre suas
recomendaccedilotildees a ldquointroduccedilatildeo de praacuteticas alternativas de assistecircncia agrave sauacutede no acircmbito dos serviccedilos
de sauacutede possibilitando ao usuaacuterio o acesso democraacutetico de escolher a terapecircutica preferidardquo Com
vistas agrave viabilizaccedilatildeo dessa recomendaccedilatildeo algumas medidas foram tomadas como a regulamentaccedilatildeo
da implantaccedilatildeo da fitoterapia nos serviccedilos de sauacutede nas unidades federadas por meio da resoluccedilatildeo
Comissatildeo Interministerial de Planejamento e Coordenaccedilatildeo (Ciplan nordm 08 de 8 de marccedilo de 1988)
Os estudos com plantas medicinais em Odontologia tecircm sido desenvolvidos como uma
tentativa de abrir novos caminhos para o combate agraves infecccedilotildees bucais possibilitando a inserccedilatildeo do
uso de fitoteraacutepicos como recursos preventivo e terapecircutico na praacutetica diaacuteria ambulatorial
especialmente nos serviccedilos de atenccedilatildeo baacutesica ofertados pelo Sistema Uacutenico de Sauacutede (SUS) Nessa
perspectiva experimentos in vitro sobre a accedilatildeo antimicrobiana de extratos vegetais tecircm sido
realizados nas uacuteltimas deacutecadas (ALELUIA et al 2015 LIMA 2015 MACEcircDO 2016 LIMA
2015 ALVES 2017) com o intuito de obter agentes quiacutemicos antimicrobianos que auxiliem o
controle mecacircnico da microbiota bucal
Frente agraves deficiecircncias nos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal decorrentes da falta de
destreza manual e motivaccedilatildeo agentes quiacutemicos antimicrobianos tecircm sido propostos a fim de inibir
o crescimento e a proliferaccedilatildeo de microrganismos no ambiente bucal reduzir a adesatildeo bacteriana
agraves superfiacutecies modificar a atividade bioquiacutemica desses microrganismos e alterar a ecologia do
biofilme dentaacuterio para uma microbiota menos patogecircnica (MARSH 2010)
Na atualidade o agente antimicrobiano mais utilizado no controle quiacutemico da microbiota
bucal planctocircnica e organizada em biofilme eacute o digluconato de clorexidina 012 em funccedilatildeo do
seu amplo espectro de accedilatildeo baixa toxicidade e elevada substantividade Todavia essa substacircncia
aleacutem de apresentar um custo elevado natildeo pode ser usada por periacuteodos prolongados uma vez que
nessas situaccedilotildees altera a microbiota natural e produz efeitos colaterais como manchamento de
dentes e restauraccedilotildees descamaccedilatildeo da mucosa e modificaccedilotildees no paladar (MATOS et al 2015
HAJIFATTAHI et al 2016)
17
As limitaccedilotildees da clorexidina e de outros agentes antimicrobianos sinteacuteticos convencionais
tem encorajado a investigaccedilatildeo de produtos naturais com maior atividade terapecircutica menor
toxicidade maior biocompatibilidade com os tecidos moles e duros da cavidade oral e menor custo
para o controle quiacutemico do biofilme e o tratamento de diferentes infecccedilotildees orais (ALLAKER 2009)
Dentre esses produtos naturais cuja accedilatildeo antimicrobiana tem sido investigada merece
destaque o extrato da folha de Spondias mombin (S mombin L) espeacutecie vulgarmente conhecida
como cajaacute pertencente agrave famiacutelia Anacardiacea que estaacute distribuiacuteda em diversas regiotildees do Brasil e
de outros paiacuteses da Ameacuterica Latina (THADHANI et al 2012)
Considerando que S mombin L tem demonstrado muacuteltiplas atividades bioloacutegicas relevantes
agrave manutenccedilatildeo e ao restabelecimento da sauacutede bucal podendo assim ser utilizada como mateacuteria
prima para o desenvolvimento futuro de novos agentes antimicrobianos quiacutemicos torna-se de
extrema importacircncia investigar o seu efeito sobre os tecidos moles e duros da cavidade oral a fim
de que o mesmo seja administrado com eficaacutecia e seguranccedila
Frente ao exposto o presente estudo se propocircs a investigar o pH do extrato de Spondias
mombin L e avaliar o seu efeito sobre a superfiacutecie de dentes humanos no que diz respeito agraves
caracteriacutesticas cor rugosidade morfologia de superfiacutecie e molhabilidade comparando esse efeito
com aquele produzido pela soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 sobre essa mesma
superfiacutecie A hipoacutetese nula testada foi a de que natildeo havia diferenccedila entre o pH do extrato de
Spondias mombin L e o pH da soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 assim como entre os
efeitos produzidos por essas substacircncias sobre as superfiacutecies de dentes humanos no tocante a todas
as variaacuteveis investigadas Ademais natildeo existem estudos na literatura vigente que tenham
investigado o referido extrato frente agrave superfiacutecie dentaacuteria fato este que destaca o ineditismo do
estudo em questatildeo e a sua importante contribuiccedilatildeo para os avanccedilos cientiacuteficos na aacuterea odontoloacutegica
18
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
21 Agentes quiacutemicos antimicrobianos
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar quando o controle mecacircnico no
sentido de evitar o acuacutemulo de bacteacuterias sobre os dentes natildeo puder ser realizado diariamente ou
estiver inadequado (ANDERSON 2003 LAING et al 2008)
Frente agraves limitaccedilotildees dos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal agentes quiacutemicos
antimicrobianos tecircm sido propostos principalmente nos casos em que haacute dificuldade de controle do
biofilme dentaacuterio e naqueles onde eacute necessaacuterio reduzir demasiadamente a quantidade de
microrganismos bucais (MOREIRA et al 2009 MARSH 2010)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico de moleacuteculas carregadas positivamente que apresenta um
largo espectro antimicrobiano pertencente agrave famiacutelia de compostos conhecidos como bisbiguanida
Sua moleacutecula se liga provavelmente atraveacutes de forccedilas eletrostaacuteticas aos grupos fosfato carboxila
ou sulfato tanto na mucosa bucal quanto nos microrganismos e na peliacutecula adquirida Sendo assim
a clorexidina compete com o caacutelcio comprometendo a aderecircncia bacteriana e consequentemente
inibindo a formaccedilatildeo do biofilme Tal substacircncia atinge seu efeito antimicrobiano atraveacutes de suas
atividades bactericida e bacteriostaacutetica Inicialmente quando aplicada na forma de soluccedilatildeo gel ou
verniz a concentraccedilatildeo eacute tal que o agente eacute bactericida Todavia a clorexidina tambeacutem se liga agraves
mucosas e superfiacutecies dos dentes e posteriormente eacute liberada de forma lenta em concentraccedilotildees
bacteriostaacuteticas durante vaacuterias horas Diante do exposto o que diferencia a clorexidina dos demais
agentes antimicrobianos eacute a sua substantividade Sua duraccedilatildeo de accedilatildeo eacute prolongada pela sua
habilidade de adsorccedilatildeo agraves estruturas bucais e posterior liberaccedilatildeo lenta na sua forma ativa (SILVA
1991 ROSA ROCHA 1993 MATTHIJS 2009 SOET et al 2002 FEJERSKOV KIDD 2005
VAN STRYDONCK et al 2005)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico catiocircnico que age contra uma ampla variedade de bacteacuterias
fungos e alguns viacuterus lipofiacutelicos (DENTON et al 1991) Seu efeito antibacteriano ocorre atraveacutes da
interaccedilatildeo natildeo-especiacutefica com o aacutecido fosfolipiacutedico da membrana celular causando alteraccedilotildees na
permeabilidade da membrana para iacuteons como potaacutessio e para constituintes do citosol como
aminoaacutecidos e nucleotiacutedeos Em altas concentraccedilotildees a atividade de enzimas associadas agrave
membrana como dehidrogenases e ATPase eacute indiretamente afetada (DAVIES 1973 BRECX
THEILADE 1984)
19
Dentre os agentes antimicrobianos bucais mais utilizados o digluconato de clorexidina
012 merece destaque devido ao seu potencial antimicrobiano e agrave sua caracteriacutestica de forte
adsorccedilatildeo agraves superfiacutecies bucais (MARSH 2010 SCHEIE PETERSEN 2011) A clorexidina
demonstrou ser eficaz contra vaacuterias bacteacuterias orais Devido ao seu amplo espectro antimicrobiano
atuando contra bacteacuterias Gram-positivas Gram-negativas e fungos tambeacutem tem sido utilizada para
tratar concomitantemente doenccedilas endodocircnticas (SIQUEIRA JR PAIVA ROcircCcedilAS 2007
VIANNA et al 2008) periodontais e para prevenir a progressatildeo de caacuterie (COSYN et al2006
DUARTE LOTUFO PANNUTI 2008) Visto que a clorexidina promove alguns efeitos colaterais
como pigmentaccedilatildeo dos dentes alteraccedilatildeo do paladar e descamaccedilatildeo da mucosa os antisseacutepticos que
tecircm como princiacutepio ativo o digluconato de clorexidina a 012 ou 02 apresentam meacutedia elevada
para o potencial de reduccedilatildeo da microbiota bucal quando comparados a outros antisseacutepticos
(MATOS et al 2015)
As propriedades de um antisseacuteptico ideal incluem estabilidade baixa tensatildeo superficial
letalidade em baixas concentraccedilotildees ausecircncia de toxicidade e poder de penetraccedilatildeo No entanto
nenhum produto disponiacutevel no mercado possui todos esses requisitos o que justifica os efeitos
colaterais e a pouca eficiecircncia apresentada por alguns (MOREIRA et al 2009 ZANIN et al 2007)
Diante dos efeitos colaterais do digluconato de clorexidina 012 e da sua possibilidade de
causar resistecircncia bacteriana torna-se necessaacuterio investigar as propriedades antimicrobianas de
novas substacircncias e com a rica diversidade da flora do Brasil parece salutar o estudo de produtos
derivados de plantas como princiacutepio ativo de possiacuteveis agentes antimicrobianos (MOTA
TURRINI POVEDA 2015)
O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibioacuteticos tem
se tornado um problema significante para a sauacutede puacuteblica As principais causas dessa resistecircncia
estatildeo associadas ao uso excessivo de antibioacuteticos nos tratamentos por prescriccedilotildees meacutedicas e agrave
capacidade de sobrevivecircncia intracelular de algumas bacteacuterias induzidas por certas infecccedilotildees que
impedem o acesso do medicamento em foco Observa-se que o alto custo dos medicamentos se
apresenta como um problema relevante para a populaccedilatildeo de baixa renda gerando assim a busca por
novos meacutetodos alternativos viaacuteveis como o uso dos fitoteraacutepicos (YUNES et al 2001)
22 Fitoterapia
Atualmente o uso de fitoteraacutepicos tem se intensificado em vaacuterios paiacuteses especialmente no
Brasil que possui uma flora rica e diversa com grande potencial para o desenvolvimento dessa
ciecircncia (ASSIS 2009 MOLINA et al 2008 MONTES et al 2009 OLIVEIRA et al 2007
TOMAZZONI NEGRELLE CENTA 2006)
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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ANEXOS
57
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APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
RESUMO
INTRODUCcedilAtildeO O estudo da fitoterapia na prevenccedilatildeo e no tratamento de doenccedilas tem
estimulado pesquisas com plantas medicinais na Odontologia Dentre essas plantas destaca-se
a espeacutecie Spondias mombin por apresentar disponibilidade de mateacuteria-prima e amplo espectro
de accedilotildees farmacoloacutegicas que incluem atividades antimicrobiana anti-inflamatoacuteria cicatrizante
e antioxidante OBJETIVO Investigar o efeito do extrato de Spondias mombin L (cajaacute) sobre
a superfiacutecie de dentes humanos METODOLOGIA O extrato de cajaacute foi preparado em sua
diluiccedilatildeo 132=3125 mgml Trinta dentes humanos foram seccionados (60 x 60 mm)
preservando as proximais Os fragmentos foram divididos aleatoriamente em 3 grupos (n=10
por grupo) de acordo com os grupos extrato hidroetanoacutelico de S mombin L Digluconato de
clorexidina 012 e aacutegua destilada Cada fragmento foi imerso nas respectivas substacircncias por
1 minuto 2 vezes ao dia durante 14 dias Antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees foram realizadas
anaacutelises de cor molhabilidade rugosidade (Ra) e morfologia O pH das substacircncias tambeacutem
foi investigado Os dados foram analisados estatisticamente por meio de ANOVA (1 e 2 fatores)
e teste de Tukey para muacuteltiplas comparaccedilotildees RESULTADOS Natildeo houve diferenccedila
estatisticamente significativa em relaccedilatildeo a cor entre os grupos O extrato de cajaacute e clorexidina
012 apresentaram diferenccedilas significativas (plt0001) enquanto aacutegua destilada natildeo
apresentou diferenccedilas estatiacutesticas (pgt0005) Quanto a molhabilidade natildeo houve diferenccedila
estatisticamente significativa entre extrato de cajaacute (pgt0005) clorexidina 012 (pgt0005) e
aacutegua destilada (pgt0005) Para rugosidade natildeo houve diferenccedila estatisticamente significante
entre as substacircncias analisadas (pgt00005) Aleacutem disso natildeo houve diferenccedila estatiacutestica entre as
substacircncias e o tempo de imersatildeo (p lt00001) O pH meacutedio do extrato hidroetanoacutelico de cajaacute e
clorexidina 012 was de 295 e 65 respectivamente CONCLUSAtildeO O pH do extrato de
Smombin L eacute aacutecido e da clorexidina eacute neutro A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de
cajaacute foi bom tanto quanto a clorexidina A cor dos fragmentos dentaacuterios foi alterada apoacutes o
protocolo de imersatildeo no extrato hidroetanoacutelico de cajaacute e clorexidina 012 A rugosidade dos
fragmentos dentaacuterios analisados se manteve inalterada apoacutes o protocolo de imersatildeo nas
diferentes soluccedilotildees testadas O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostrou que natildeo
houve diferenccedila na superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
Descritores Fitoteraacutepicos Anacardiaceae Espectroscopia Dente
ABSTRACT
INTRODUCTION The study of phytotherapy in the prevention and treatment of diseases
stimulated the research with medicinal plants in Dentistry Among these plants the species
Spondia mombin stands out for the availability of raw material and a broad spectrum of
pharmacological actions that include antimicrobial anti-inflammatory cicatrizant and
antioxidant activities OBJECTIVE To investigate tooth surface changes regarding cajaacute
(Spondias mombin L) extract METHOD The cashew extract was prepared in its
dilution116=3125 mgml Thirty human teeth were sectioned (60 x 60 mm) preserving the
proximal surfaces Dental fragments were randomly divided into 3 groups (n =10 per group)
according to the substances hydroethanolic extract (3125 mgml) 012 chlorhexidine and
distilled water Each fragment was immersed in the respective substance for 1 minute twice
daily for 14 days Before and after the immersion color analysis wettability roughness (Ra)
and morphology as well as the pH levels of the substances were investigated Data were
analyzed statistically by means of ANOVA (one and two factors) and Tukey test for multiple
comparisons RESULTS There was a statistically significant difference between color in the
groups Cajaacute extract and 012 chlorhexidine presented significant differences (p lt0001)
while distilled water showed no statistical differences (pgt 0005) Regarding wettability there
was no statistically significant difference between Cajaacute extract (pgt0005) 012 chlorhexidine
and distilled water (pgt0005) For roughnes there was no statistically significant difference
between the analyzed substances (pgt00005) In addition there was no statistically significant
difference between the substances and immersion time (p lt00001) The mean pH of the
hydroethanolic extract of cajaacute and 012 chlorhexidine is 295 and 65 respectively
CONCLUSION pH of the extract of Smombin L is acid of the chlorhexidine is neutral The
wettability of the hydroethanolic extract of cajaacute was as good as 012 chlorhexidine Color
changes were observed after the immersion in hydroethanolic extract of cajaacute and 012
chlorhexidine Roughness of the analyzed dental fragments remained unchanged after the
immersion protocols Scanning electron microscopy showed no difference in the enamel
surface between the solutions tested
Keywords Phytotherapeutic AnacardiaceaeSpectroscopy Tooth
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade em baixa
rotaccedilatildeo27
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes seccionamento27
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L 29
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH29
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)30
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie dentaacuteria para anaacutelise da molhabilidade
31
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade32
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact32
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG33
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia34
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L preacutevio apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo38
Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo39
Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo40
Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo41
Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo42
Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo43
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 Resultados das meacutedias (desvios-padratildeo) da molhabilidade das substacircncias
testadas35
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padratildeo) da anaacutelise da cor valores de (ΔE) 36
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padratildeo) dos valores de rugosidade antes e apoacutes os diferentes
protocolos de imersatildeo36
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 18
21 AGENTES QUIacuteMICOS ANTIMICROBIANOS 18
22 FITOTERAPIA 19
221 SPONDIAS MOMBIN L20
23 CARACTERIacuteSTICAS DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA22
24 ALTERACcedilOtildeES NA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA CAUSADAS POR SUBSTAcircNCIAS QUIacuteMICAS
23
3 OBJETIVOS 25
31 OBJETIVO GERAL 25
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS 25
4 MEacuteTODO 26
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO26
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS26
43 SELECcedilAtildeOPREPARACcedilAtildeOARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA 26
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L 28
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO29
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO29
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE30
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE31
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR 32
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA 33
411 ANAacuteLISE DOS DADOS 34
5 RESULTADOS 35
51 pH DO EXTRATO 35
52 AcircNGULO DE CONTATO MOLHABILIDADE35
53 COR 36
54 RUGOSIDADE 36
55 MORFOLOGIA 37
6 DISCUSSAtildeO 44
7 CONCLUSAtildeO 48
REFEREcircNCIAS 49
ANEXOS 56
APENDICES 58
16
1 INTRODUCcedilAtildeO
Desde os primoacuterdios o uso de plantas medicinais foi preterido por falta de embasamento
cientiacutefico favorecendo agrave substituiccedilatildeo dos fitoteraacutepicos pelos medicamentos alopaacuteticos Na deacutecada
de 70 a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (OMS) passou a incentivar o estudo cientiacutefico das plantas
medicinais jaacute que muitas das encontradas no Brasil ainda natildeo possuiacuteam eficaacutecia cientiacutefica
comprovada (ALELUIA et al 2015) A partir dos anos 80 e 90 ocorreu um aumento expressivo
no mercado mundial de medicamentos fitoteraacutepicos especialmente nos paiacuteses industrializados
(FERNANDES 2003 CALIXTO 2001)
A 8ordf Conferecircncia Nacional de Sauacutede realizada no ano de 1986 trouxe entre suas
recomendaccedilotildees a ldquointroduccedilatildeo de praacuteticas alternativas de assistecircncia agrave sauacutede no acircmbito dos serviccedilos
de sauacutede possibilitando ao usuaacuterio o acesso democraacutetico de escolher a terapecircutica preferidardquo Com
vistas agrave viabilizaccedilatildeo dessa recomendaccedilatildeo algumas medidas foram tomadas como a regulamentaccedilatildeo
da implantaccedilatildeo da fitoterapia nos serviccedilos de sauacutede nas unidades federadas por meio da resoluccedilatildeo
Comissatildeo Interministerial de Planejamento e Coordenaccedilatildeo (Ciplan nordm 08 de 8 de marccedilo de 1988)
Os estudos com plantas medicinais em Odontologia tecircm sido desenvolvidos como uma
tentativa de abrir novos caminhos para o combate agraves infecccedilotildees bucais possibilitando a inserccedilatildeo do
uso de fitoteraacutepicos como recursos preventivo e terapecircutico na praacutetica diaacuteria ambulatorial
especialmente nos serviccedilos de atenccedilatildeo baacutesica ofertados pelo Sistema Uacutenico de Sauacutede (SUS) Nessa
perspectiva experimentos in vitro sobre a accedilatildeo antimicrobiana de extratos vegetais tecircm sido
realizados nas uacuteltimas deacutecadas (ALELUIA et al 2015 LIMA 2015 MACEcircDO 2016 LIMA
2015 ALVES 2017) com o intuito de obter agentes quiacutemicos antimicrobianos que auxiliem o
controle mecacircnico da microbiota bucal
Frente agraves deficiecircncias nos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal decorrentes da falta de
destreza manual e motivaccedilatildeo agentes quiacutemicos antimicrobianos tecircm sido propostos a fim de inibir
o crescimento e a proliferaccedilatildeo de microrganismos no ambiente bucal reduzir a adesatildeo bacteriana
agraves superfiacutecies modificar a atividade bioquiacutemica desses microrganismos e alterar a ecologia do
biofilme dentaacuterio para uma microbiota menos patogecircnica (MARSH 2010)
Na atualidade o agente antimicrobiano mais utilizado no controle quiacutemico da microbiota
bucal planctocircnica e organizada em biofilme eacute o digluconato de clorexidina 012 em funccedilatildeo do
seu amplo espectro de accedilatildeo baixa toxicidade e elevada substantividade Todavia essa substacircncia
aleacutem de apresentar um custo elevado natildeo pode ser usada por periacuteodos prolongados uma vez que
nessas situaccedilotildees altera a microbiota natural e produz efeitos colaterais como manchamento de
dentes e restauraccedilotildees descamaccedilatildeo da mucosa e modificaccedilotildees no paladar (MATOS et al 2015
HAJIFATTAHI et al 2016)
17
As limitaccedilotildees da clorexidina e de outros agentes antimicrobianos sinteacuteticos convencionais
tem encorajado a investigaccedilatildeo de produtos naturais com maior atividade terapecircutica menor
toxicidade maior biocompatibilidade com os tecidos moles e duros da cavidade oral e menor custo
para o controle quiacutemico do biofilme e o tratamento de diferentes infecccedilotildees orais (ALLAKER 2009)
Dentre esses produtos naturais cuja accedilatildeo antimicrobiana tem sido investigada merece
destaque o extrato da folha de Spondias mombin (S mombin L) espeacutecie vulgarmente conhecida
como cajaacute pertencente agrave famiacutelia Anacardiacea que estaacute distribuiacuteda em diversas regiotildees do Brasil e
de outros paiacuteses da Ameacuterica Latina (THADHANI et al 2012)
Considerando que S mombin L tem demonstrado muacuteltiplas atividades bioloacutegicas relevantes
agrave manutenccedilatildeo e ao restabelecimento da sauacutede bucal podendo assim ser utilizada como mateacuteria
prima para o desenvolvimento futuro de novos agentes antimicrobianos quiacutemicos torna-se de
extrema importacircncia investigar o seu efeito sobre os tecidos moles e duros da cavidade oral a fim
de que o mesmo seja administrado com eficaacutecia e seguranccedila
Frente ao exposto o presente estudo se propocircs a investigar o pH do extrato de Spondias
mombin L e avaliar o seu efeito sobre a superfiacutecie de dentes humanos no que diz respeito agraves
caracteriacutesticas cor rugosidade morfologia de superfiacutecie e molhabilidade comparando esse efeito
com aquele produzido pela soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 sobre essa mesma
superfiacutecie A hipoacutetese nula testada foi a de que natildeo havia diferenccedila entre o pH do extrato de
Spondias mombin L e o pH da soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 assim como entre os
efeitos produzidos por essas substacircncias sobre as superfiacutecies de dentes humanos no tocante a todas
as variaacuteveis investigadas Ademais natildeo existem estudos na literatura vigente que tenham
investigado o referido extrato frente agrave superfiacutecie dentaacuteria fato este que destaca o ineditismo do
estudo em questatildeo e a sua importante contribuiccedilatildeo para os avanccedilos cientiacuteficos na aacuterea odontoloacutegica
18
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
21 Agentes quiacutemicos antimicrobianos
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar quando o controle mecacircnico no
sentido de evitar o acuacutemulo de bacteacuterias sobre os dentes natildeo puder ser realizado diariamente ou
estiver inadequado (ANDERSON 2003 LAING et al 2008)
Frente agraves limitaccedilotildees dos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal agentes quiacutemicos
antimicrobianos tecircm sido propostos principalmente nos casos em que haacute dificuldade de controle do
biofilme dentaacuterio e naqueles onde eacute necessaacuterio reduzir demasiadamente a quantidade de
microrganismos bucais (MOREIRA et al 2009 MARSH 2010)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico de moleacuteculas carregadas positivamente que apresenta um
largo espectro antimicrobiano pertencente agrave famiacutelia de compostos conhecidos como bisbiguanida
Sua moleacutecula se liga provavelmente atraveacutes de forccedilas eletrostaacuteticas aos grupos fosfato carboxila
ou sulfato tanto na mucosa bucal quanto nos microrganismos e na peliacutecula adquirida Sendo assim
a clorexidina compete com o caacutelcio comprometendo a aderecircncia bacteriana e consequentemente
inibindo a formaccedilatildeo do biofilme Tal substacircncia atinge seu efeito antimicrobiano atraveacutes de suas
atividades bactericida e bacteriostaacutetica Inicialmente quando aplicada na forma de soluccedilatildeo gel ou
verniz a concentraccedilatildeo eacute tal que o agente eacute bactericida Todavia a clorexidina tambeacutem se liga agraves
mucosas e superfiacutecies dos dentes e posteriormente eacute liberada de forma lenta em concentraccedilotildees
bacteriostaacuteticas durante vaacuterias horas Diante do exposto o que diferencia a clorexidina dos demais
agentes antimicrobianos eacute a sua substantividade Sua duraccedilatildeo de accedilatildeo eacute prolongada pela sua
habilidade de adsorccedilatildeo agraves estruturas bucais e posterior liberaccedilatildeo lenta na sua forma ativa (SILVA
1991 ROSA ROCHA 1993 MATTHIJS 2009 SOET et al 2002 FEJERSKOV KIDD 2005
VAN STRYDONCK et al 2005)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico catiocircnico que age contra uma ampla variedade de bacteacuterias
fungos e alguns viacuterus lipofiacutelicos (DENTON et al 1991) Seu efeito antibacteriano ocorre atraveacutes da
interaccedilatildeo natildeo-especiacutefica com o aacutecido fosfolipiacutedico da membrana celular causando alteraccedilotildees na
permeabilidade da membrana para iacuteons como potaacutessio e para constituintes do citosol como
aminoaacutecidos e nucleotiacutedeos Em altas concentraccedilotildees a atividade de enzimas associadas agrave
membrana como dehidrogenases e ATPase eacute indiretamente afetada (DAVIES 1973 BRECX
THEILADE 1984)
19
Dentre os agentes antimicrobianos bucais mais utilizados o digluconato de clorexidina
012 merece destaque devido ao seu potencial antimicrobiano e agrave sua caracteriacutestica de forte
adsorccedilatildeo agraves superfiacutecies bucais (MARSH 2010 SCHEIE PETERSEN 2011) A clorexidina
demonstrou ser eficaz contra vaacuterias bacteacuterias orais Devido ao seu amplo espectro antimicrobiano
atuando contra bacteacuterias Gram-positivas Gram-negativas e fungos tambeacutem tem sido utilizada para
tratar concomitantemente doenccedilas endodocircnticas (SIQUEIRA JR PAIVA ROcircCcedilAS 2007
VIANNA et al 2008) periodontais e para prevenir a progressatildeo de caacuterie (COSYN et al2006
DUARTE LOTUFO PANNUTI 2008) Visto que a clorexidina promove alguns efeitos colaterais
como pigmentaccedilatildeo dos dentes alteraccedilatildeo do paladar e descamaccedilatildeo da mucosa os antisseacutepticos que
tecircm como princiacutepio ativo o digluconato de clorexidina a 012 ou 02 apresentam meacutedia elevada
para o potencial de reduccedilatildeo da microbiota bucal quando comparados a outros antisseacutepticos
(MATOS et al 2015)
As propriedades de um antisseacuteptico ideal incluem estabilidade baixa tensatildeo superficial
letalidade em baixas concentraccedilotildees ausecircncia de toxicidade e poder de penetraccedilatildeo No entanto
nenhum produto disponiacutevel no mercado possui todos esses requisitos o que justifica os efeitos
colaterais e a pouca eficiecircncia apresentada por alguns (MOREIRA et al 2009 ZANIN et al 2007)
Diante dos efeitos colaterais do digluconato de clorexidina 012 e da sua possibilidade de
causar resistecircncia bacteriana torna-se necessaacuterio investigar as propriedades antimicrobianas de
novas substacircncias e com a rica diversidade da flora do Brasil parece salutar o estudo de produtos
derivados de plantas como princiacutepio ativo de possiacuteveis agentes antimicrobianos (MOTA
TURRINI POVEDA 2015)
O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibioacuteticos tem
se tornado um problema significante para a sauacutede puacuteblica As principais causas dessa resistecircncia
estatildeo associadas ao uso excessivo de antibioacuteticos nos tratamentos por prescriccedilotildees meacutedicas e agrave
capacidade de sobrevivecircncia intracelular de algumas bacteacuterias induzidas por certas infecccedilotildees que
impedem o acesso do medicamento em foco Observa-se que o alto custo dos medicamentos se
apresenta como um problema relevante para a populaccedilatildeo de baixa renda gerando assim a busca por
novos meacutetodos alternativos viaacuteveis como o uso dos fitoteraacutepicos (YUNES et al 2001)
22 Fitoterapia
Atualmente o uso de fitoteraacutepicos tem se intensificado em vaacuterios paiacuteses especialmente no
Brasil que possui uma flora rica e diversa com grande potencial para o desenvolvimento dessa
ciecircncia (ASSIS 2009 MOLINA et al 2008 MONTES et al 2009 OLIVEIRA et al 2007
TOMAZZONI NEGRELLE CENTA 2006)
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
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Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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56
ANEXOS
57
58
APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
ABSTRACT
INTRODUCTION The study of phytotherapy in the prevention and treatment of diseases
stimulated the research with medicinal plants in Dentistry Among these plants the species
Spondia mombin stands out for the availability of raw material and a broad spectrum of
pharmacological actions that include antimicrobial anti-inflammatory cicatrizant and
antioxidant activities OBJECTIVE To investigate tooth surface changes regarding cajaacute
(Spondias mombin L) extract METHOD The cashew extract was prepared in its
dilution116=3125 mgml Thirty human teeth were sectioned (60 x 60 mm) preserving the
proximal surfaces Dental fragments were randomly divided into 3 groups (n =10 per group)
according to the substances hydroethanolic extract (3125 mgml) 012 chlorhexidine and
distilled water Each fragment was immersed in the respective substance for 1 minute twice
daily for 14 days Before and after the immersion color analysis wettability roughness (Ra)
and morphology as well as the pH levels of the substances were investigated Data were
analyzed statistically by means of ANOVA (one and two factors) and Tukey test for multiple
comparisons RESULTS There was a statistically significant difference between color in the
groups Cajaacute extract and 012 chlorhexidine presented significant differences (p lt0001)
while distilled water showed no statistical differences (pgt 0005) Regarding wettability there
was no statistically significant difference between Cajaacute extract (pgt0005) 012 chlorhexidine
and distilled water (pgt0005) For roughnes there was no statistically significant difference
between the analyzed substances (pgt00005) In addition there was no statistically significant
difference between the substances and immersion time (p lt00001) The mean pH of the
hydroethanolic extract of cajaacute and 012 chlorhexidine is 295 and 65 respectively
CONCLUSION pH of the extract of Smombin L is acid of the chlorhexidine is neutral The
wettability of the hydroethanolic extract of cajaacute was as good as 012 chlorhexidine Color
changes were observed after the immersion in hydroethanolic extract of cajaacute and 012
chlorhexidine Roughness of the analyzed dental fragments remained unchanged after the
immersion protocols Scanning electron microscopy showed no difference in the enamel
surface between the solutions tested
Keywords Phytotherapeutic AnacardiaceaeSpectroscopy Tooth
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade em baixa
rotaccedilatildeo27
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes seccionamento27
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L 29
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH29
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)30
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie dentaacuteria para anaacutelise da molhabilidade
31
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade32
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact32
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG33
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia34
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L preacutevio apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo38
Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo39
Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo40
Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo41
Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo42
Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo43
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 Resultados das meacutedias (desvios-padratildeo) da molhabilidade das substacircncias
testadas35
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padratildeo) da anaacutelise da cor valores de (ΔE) 36
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padratildeo) dos valores de rugosidade antes e apoacutes os diferentes
protocolos de imersatildeo36
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 18
21 AGENTES QUIacuteMICOS ANTIMICROBIANOS 18
22 FITOTERAPIA 19
221 SPONDIAS MOMBIN L20
23 CARACTERIacuteSTICAS DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA22
24 ALTERACcedilOtildeES NA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA CAUSADAS POR SUBSTAcircNCIAS QUIacuteMICAS
23
3 OBJETIVOS 25
31 OBJETIVO GERAL 25
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS 25
4 MEacuteTODO 26
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO26
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS26
43 SELECcedilAtildeOPREPARACcedilAtildeOARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA 26
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L 28
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO29
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO29
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE30
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE31
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR 32
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA 33
411 ANAacuteLISE DOS DADOS 34
5 RESULTADOS 35
51 pH DO EXTRATO 35
52 AcircNGULO DE CONTATO MOLHABILIDADE35
53 COR 36
54 RUGOSIDADE 36
55 MORFOLOGIA 37
6 DISCUSSAtildeO 44
7 CONCLUSAtildeO 48
REFEREcircNCIAS 49
ANEXOS 56
APENDICES 58
16
1 INTRODUCcedilAtildeO
Desde os primoacuterdios o uso de plantas medicinais foi preterido por falta de embasamento
cientiacutefico favorecendo agrave substituiccedilatildeo dos fitoteraacutepicos pelos medicamentos alopaacuteticos Na deacutecada
de 70 a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (OMS) passou a incentivar o estudo cientiacutefico das plantas
medicinais jaacute que muitas das encontradas no Brasil ainda natildeo possuiacuteam eficaacutecia cientiacutefica
comprovada (ALELUIA et al 2015) A partir dos anos 80 e 90 ocorreu um aumento expressivo
no mercado mundial de medicamentos fitoteraacutepicos especialmente nos paiacuteses industrializados
(FERNANDES 2003 CALIXTO 2001)
A 8ordf Conferecircncia Nacional de Sauacutede realizada no ano de 1986 trouxe entre suas
recomendaccedilotildees a ldquointroduccedilatildeo de praacuteticas alternativas de assistecircncia agrave sauacutede no acircmbito dos serviccedilos
de sauacutede possibilitando ao usuaacuterio o acesso democraacutetico de escolher a terapecircutica preferidardquo Com
vistas agrave viabilizaccedilatildeo dessa recomendaccedilatildeo algumas medidas foram tomadas como a regulamentaccedilatildeo
da implantaccedilatildeo da fitoterapia nos serviccedilos de sauacutede nas unidades federadas por meio da resoluccedilatildeo
Comissatildeo Interministerial de Planejamento e Coordenaccedilatildeo (Ciplan nordm 08 de 8 de marccedilo de 1988)
Os estudos com plantas medicinais em Odontologia tecircm sido desenvolvidos como uma
tentativa de abrir novos caminhos para o combate agraves infecccedilotildees bucais possibilitando a inserccedilatildeo do
uso de fitoteraacutepicos como recursos preventivo e terapecircutico na praacutetica diaacuteria ambulatorial
especialmente nos serviccedilos de atenccedilatildeo baacutesica ofertados pelo Sistema Uacutenico de Sauacutede (SUS) Nessa
perspectiva experimentos in vitro sobre a accedilatildeo antimicrobiana de extratos vegetais tecircm sido
realizados nas uacuteltimas deacutecadas (ALELUIA et al 2015 LIMA 2015 MACEcircDO 2016 LIMA
2015 ALVES 2017) com o intuito de obter agentes quiacutemicos antimicrobianos que auxiliem o
controle mecacircnico da microbiota bucal
Frente agraves deficiecircncias nos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal decorrentes da falta de
destreza manual e motivaccedilatildeo agentes quiacutemicos antimicrobianos tecircm sido propostos a fim de inibir
o crescimento e a proliferaccedilatildeo de microrganismos no ambiente bucal reduzir a adesatildeo bacteriana
agraves superfiacutecies modificar a atividade bioquiacutemica desses microrganismos e alterar a ecologia do
biofilme dentaacuterio para uma microbiota menos patogecircnica (MARSH 2010)
Na atualidade o agente antimicrobiano mais utilizado no controle quiacutemico da microbiota
bucal planctocircnica e organizada em biofilme eacute o digluconato de clorexidina 012 em funccedilatildeo do
seu amplo espectro de accedilatildeo baixa toxicidade e elevada substantividade Todavia essa substacircncia
aleacutem de apresentar um custo elevado natildeo pode ser usada por periacuteodos prolongados uma vez que
nessas situaccedilotildees altera a microbiota natural e produz efeitos colaterais como manchamento de
dentes e restauraccedilotildees descamaccedilatildeo da mucosa e modificaccedilotildees no paladar (MATOS et al 2015
HAJIFATTAHI et al 2016)
17
As limitaccedilotildees da clorexidina e de outros agentes antimicrobianos sinteacuteticos convencionais
tem encorajado a investigaccedilatildeo de produtos naturais com maior atividade terapecircutica menor
toxicidade maior biocompatibilidade com os tecidos moles e duros da cavidade oral e menor custo
para o controle quiacutemico do biofilme e o tratamento de diferentes infecccedilotildees orais (ALLAKER 2009)
Dentre esses produtos naturais cuja accedilatildeo antimicrobiana tem sido investigada merece
destaque o extrato da folha de Spondias mombin (S mombin L) espeacutecie vulgarmente conhecida
como cajaacute pertencente agrave famiacutelia Anacardiacea que estaacute distribuiacuteda em diversas regiotildees do Brasil e
de outros paiacuteses da Ameacuterica Latina (THADHANI et al 2012)
Considerando que S mombin L tem demonstrado muacuteltiplas atividades bioloacutegicas relevantes
agrave manutenccedilatildeo e ao restabelecimento da sauacutede bucal podendo assim ser utilizada como mateacuteria
prima para o desenvolvimento futuro de novos agentes antimicrobianos quiacutemicos torna-se de
extrema importacircncia investigar o seu efeito sobre os tecidos moles e duros da cavidade oral a fim
de que o mesmo seja administrado com eficaacutecia e seguranccedila
Frente ao exposto o presente estudo se propocircs a investigar o pH do extrato de Spondias
mombin L e avaliar o seu efeito sobre a superfiacutecie de dentes humanos no que diz respeito agraves
caracteriacutesticas cor rugosidade morfologia de superfiacutecie e molhabilidade comparando esse efeito
com aquele produzido pela soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 sobre essa mesma
superfiacutecie A hipoacutetese nula testada foi a de que natildeo havia diferenccedila entre o pH do extrato de
Spondias mombin L e o pH da soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 assim como entre os
efeitos produzidos por essas substacircncias sobre as superfiacutecies de dentes humanos no tocante a todas
as variaacuteveis investigadas Ademais natildeo existem estudos na literatura vigente que tenham
investigado o referido extrato frente agrave superfiacutecie dentaacuteria fato este que destaca o ineditismo do
estudo em questatildeo e a sua importante contribuiccedilatildeo para os avanccedilos cientiacuteficos na aacuterea odontoloacutegica
18
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
21 Agentes quiacutemicos antimicrobianos
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar quando o controle mecacircnico no
sentido de evitar o acuacutemulo de bacteacuterias sobre os dentes natildeo puder ser realizado diariamente ou
estiver inadequado (ANDERSON 2003 LAING et al 2008)
Frente agraves limitaccedilotildees dos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal agentes quiacutemicos
antimicrobianos tecircm sido propostos principalmente nos casos em que haacute dificuldade de controle do
biofilme dentaacuterio e naqueles onde eacute necessaacuterio reduzir demasiadamente a quantidade de
microrganismos bucais (MOREIRA et al 2009 MARSH 2010)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico de moleacuteculas carregadas positivamente que apresenta um
largo espectro antimicrobiano pertencente agrave famiacutelia de compostos conhecidos como bisbiguanida
Sua moleacutecula se liga provavelmente atraveacutes de forccedilas eletrostaacuteticas aos grupos fosfato carboxila
ou sulfato tanto na mucosa bucal quanto nos microrganismos e na peliacutecula adquirida Sendo assim
a clorexidina compete com o caacutelcio comprometendo a aderecircncia bacteriana e consequentemente
inibindo a formaccedilatildeo do biofilme Tal substacircncia atinge seu efeito antimicrobiano atraveacutes de suas
atividades bactericida e bacteriostaacutetica Inicialmente quando aplicada na forma de soluccedilatildeo gel ou
verniz a concentraccedilatildeo eacute tal que o agente eacute bactericida Todavia a clorexidina tambeacutem se liga agraves
mucosas e superfiacutecies dos dentes e posteriormente eacute liberada de forma lenta em concentraccedilotildees
bacteriostaacuteticas durante vaacuterias horas Diante do exposto o que diferencia a clorexidina dos demais
agentes antimicrobianos eacute a sua substantividade Sua duraccedilatildeo de accedilatildeo eacute prolongada pela sua
habilidade de adsorccedilatildeo agraves estruturas bucais e posterior liberaccedilatildeo lenta na sua forma ativa (SILVA
1991 ROSA ROCHA 1993 MATTHIJS 2009 SOET et al 2002 FEJERSKOV KIDD 2005
VAN STRYDONCK et al 2005)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico catiocircnico que age contra uma ampla variedade de bacteacuterias
fungos e alguns viacuterus lipofiacutelicos (DENTON et al 1991) Seu efeito antibacteriano ocorre atraveacutes da
interaccedilatildeo natildeo-especiacutefica com o aacutecido fosfolipiacutedico da membrana celular causando alteraccedilotildees na
permeabilidade da membrana para iacuteons como potaacutessio e para constituintes do citosol como
aminoaacutecidos e nucleotiacutedeos Em altas concentraccedilotildees a atividade de enzimas associadas agrave
membrana como dehidrogenases e ATPase eacute indiretamente afetada (DAVIES 1973 BRECX
THEILADE 1984)
19
Dentre os agentes antimicrobianos bucais mais utilizados o digluconato de clorexidina
012 merece destaque devido ao seu potencial antimicrobiano e agrave sua caracteriacutestica de forte
adsorccedilatildeo agraves superfiacutecies bucais (MARSH 2010 SCHEIE PETERSEN 2011) A clorexidina
demonstrou ser eficaz contra vaacuterias bacteacuterias orais Devido ao seu amplo espectro antimicrobiano
atuando contra bacteacuterias Gram-positivas Gram-negativas e fungos tambeacutem tem sido utilizada para
tratar concomitantemente doenccedilas endodocircnticas (SIQUEIRA JR PAIVA ROcircCcedilAS 2007
VIANNA et al 2008) periodontais e para prevenir a progressatildeo de caacuterie (COSYN et al2006
DUARTE LOTUFO PANNUTI 2008) Visto que a clorexidina promove alguns efeitos colaterais
como pigmentaccedilatildeo dos dentes alteraccedilatildeo do paladar e descamaccedilatildeo da mucosa os antisseacutepticos que
tecircm como princiacutepio ativo o digluconato de clorexidina a 012 ou 02 apresentam meacutedia elevada
para o potencial de reduccedilatildeo da microbiota bucal quando comparados a outros antisseacutepticos
(MATOS et al 2015)
As propriedades de um antisseacuteptico ideal incluem estabilidade baixa tensatildeo superficial
letalidade em baixas concentraccedilotildees ausecircncia de toxicidade e poder de penetraccedilatildeo No entanto
nenhum produto disponiacutevel no mercado possui todos esses requisitos o que justifica os efeitos
colaterais e a pouca eficiecircncia apresentada por alguns (MOREIRA et al 2009 ZANIN et al 2007)
Diante dos efeitos colaterais do digluconato de clorexidina 012 e da sua possibilidade de
causar resistecircncia bacteriana torna-se necessaacuterio investigar as propriedades antimicrobianas de
novas substacircncias e com a rica diversidade da flora do Brasil parece salutar o estudo de produtos
derivados de plantas como princiacutepio ativo de possiacuteveis agentes antimicrobianos (MOTA
TURRINI POVEDA 2015)
O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibioacuteticos tem
se tornado um problema significante para a sauacutede puacuteblica As principais causas dessa resistecircncia
estatildeo associadas ao uso excessivo de antibioacuteticos nos tratamentos por prescriccedilotildees meacutedicas e agrave
capacidade de sobrevivecircncia intracelular de algumas bacteacuterias induzidas por certas infecccedilotildees que
impedem o acesso do medicamento em foco Observa-se que o alto custo dos medicamentos se
apresenta como um problema relevante para a populaccedilatildeo de baixa renda gerando assim a busca por
novos meacutetodos alternativos viaacuteveis como o uso dos fitoteraacutepicos (YUNES et al 2001)
22 Fitoterapia
Atualmente o uso de fitoteraacutepicos tem se intensificado em vaacuterios paiacuteses especialmente no
Brasil que possui uma flora rica e diversa com grande potencial para o desenvolvimento dessa
ciecircncia (ASSIS 2009 MOLINA et al 2008 MONTES et al 2009 OLIVEIRA et al 2007
TOMAZZONI NEGRELLE CENTA 2006)
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
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7
8
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5 10
40
Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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v
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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44
6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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56
ANEXOS
57
58
APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade em baixa
rotaccedilatildeo27
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes seccionamento27
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L 29
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH29
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)30
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie dentaacuteria para anaacutelise da molhabilidade
31
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade32
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact32
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG33
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia34
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L preacutevio apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo38
Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo39
Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo40
Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo41
Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo42
Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo43
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 Resultados das meacutedias (desvios-padratildeo) da molhabilidade das substacircncias
testadas35
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padratildeo) da anaacutelise da cor valores de (ΔE) 36
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padratildeo) dos valores de rugosidade antes e apoacutes os diferentes
protocolos de imersatildeo36
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 18
21 AGENTES QUIacuteMICOS ANTIMICROBIANOS 18
22 FITOTERAPIA 19
221 SPONDIAS MOMBIN L20
23 CARACTERIacuteSTICAS DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA22
24 ALTERACcedilOtildeES NA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA CAUSADAS POR SUBSTAcircNCIAS QUIacuteMICAS
23
3 OBJETIVOS 25
31 OBJETIVO GERAL 25
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS 25
4 MEacuteTODO 26
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO26
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS26
43 SELECcedilAtildeOPREPARACcedilAtildeOARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA 26
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L 28
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO29
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO29
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE30
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE31
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR 32
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA 33
411 ANAacuteLISE DOS DADOS 34
5 RESULTADOS 35
51 pH DO EXTRATO 35
52 AcircNGULO DE CONTATO MOLHABILIDADE35
53 COR 36
54 RUGOSIDADE 36
55 MORFOLOGIA 37
6 DISCUSSAtildeO 44
7 CONCLUSAtildeO 48
REFEREcircNCIAS 49
ANEXOS 56
APENDICES 58
16
1 INTRODUCcedilAtildeO
Desde os primoacuterdios o uso de plantas medicinais foi preterido por falta de embasamento
cientiacutefico favorecendo agrave substituiccedilatildeo dos fitoteraacutepicos pelos medicamentos alopaacuteticos Na deacutecada
de 70 a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (OMS) passou a incentivar o estudo cientiacutefico das plantas
medicinais jaacute que muitas das encontradas no Brasil ainda natildeo possuiacuteam eficaacutecia cientiacutefica
comprovada (ALELUIA et al 2015) A partir dos anos 80 e 90 ocorreu um aumento expressivo
no mercado mundial de medicamentos fitoteraacutepicos especialmente nos paiacuteses industrializados
(FERNANDES 2003 CALIXTO 2001)
A 8ordf Conferecircncia Nacional de Sauacutede realizada no ano de 1986 trouxe entre suas
recomendaccedilotildees a ldquointroduccedilatildeo de praacuteticas alternativas de assistecircncia agrave sauacutede no acircmbito dos serviccedilos
de sauacutede possibilitando ao usuaacuterio o acesso democraacutetico de escolher a terapecircutica preferidardquo Com
vistas agrave viabilizaccedilatildeo dessa recomendaccedilatildeo algumas medidas foram tomadas como a regulamentaccedilatildeo
da implantaccedilatildeo da fitoterapia nos serviccedilos de sauacutede nas unidades federadas por meio da resoluccedilatildeo
Comissatildeo Interministerial de Planejamento e Coordenaccedilatildeo (Ciplan nordm 08 de 8 de marccedilo de 1988)
Os estudos com plantas medicinais em Odontologia tecircm sido desenvolvidos como uma
tentativa de abrir novos caminhos para o combate agraves infecccedilotildees bucais possibilitando a inserccedilatildeo do
uso de fitoteraacutepicos como recursos preventivo e terapecircutico na praacutetica diaacuteria ambulatorial
especialmente nos serviccedilos de atenccedilatildeo baacutesica ofertados pelo Sistema Uacutenico de Sauacutede (SUS) Nessa
perspectiva experimentos in vitro sobre a accedilatildeo antimicrobiana de extratos vegetais tecircm sido
realizados nas uacuteltimas deacutecadas (ALELUIA et al 2015 LIMA 2015 MACEcircDO 2016 LIMA
2015 ALVES 2017) com o intuito de obter agentes quiacutemicos antimicrobianos que auxiliem o
controle mecacircnico da microbiota bucal
Frente agraves deficiecircncias nos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal decorrentes da falta de
destreza manual e motivaccedilatildeo agentes quiacutemicos antimicrobianos tecircm sido propostos a fim de inibir
o crescimento e a proliferaccedilatildeo de microrganismos no ambiente bucal reduzir a adesatildeo bacteriana
agraves superfiacutecies modificar a atividade bioquiacutemica desses microrganismos e alterar a ecologia do
biofilme dentaacuterio para uma microbiota menos patogecircnica (MARSH 2010)
Na atualidade o agente antimicrobiano mais utilizado no controle quiacutemico da microbiota
bucal planctocircnica e organizada em biofilme eacute o digluconato de clorexidina 012 em funccedilatildeo do
seu amplo espectro de accedilatildeo baixa toxicidade e elevada substantividade Todavia essa substacircncia
aleacutem de apresentar um custo elevado natildeo pode ser usada por periacuteodos prolongados uma vez que
nessas situaccedilotildees altera a microbiota natural e produz efeitos colaterais como manchamento de
dentes e restauraccedilotildees descamaccedilatildeo da mucosa e modificaccedilotildees no paladar (MATOS et al 2015
HAJIFATTAHI et al 2016)
17
As limitaccedilotildees da clorexidina e de outros agentes antimicrobianos sinteacuteticos convencionais
tem encorajado a investigaccedilatildeo de produtos naturais com maior atividade terapecircutica menor
toxicidade maior biocompatibilidade com os tecidos moles e duros da cavidade oral e menor custo
para o controle quiacutemico do biofilme e o tratamento de diferentes infecccedilotildees orais (ALLAKER 2009)
Dentre esses produtos naturais cuja accedilatildeo antimicrobiana tem sido investigada merece
destaque o extrato da folha de Spondias mombin (S mombin L) espeacutecie vulgarmente conhecida
como cajaacute pertencente agrave famiacutelia Anacardiacea que estaacute distribuiacuteda em diversas regiotildees do Brasil e
de outros paiacuteses da Ameacuterica Latina (THADHANI et al 2012)
Considerando que S mombin L tem demonstrado muacuteltiplas atividades bioloacutegicas relevantes
agrave manutenccedilatildeo e ao restabelecimento da sauacutede bucal podendo assim ser utilizada como mateacuteria
prima para o desenvolvimento futuro de novos agentes antimicrobianos quiacutemicos torna-se de
extrema importacircncia investigar o seu efeito sobre os tecidos moles e duros da cavidade oral a fim
de que o mesmo seja administrado com eficaacutecia e seguranccedila
Frente ao exposto o presente estudo se propocircs a investigar o pH do extrato de Spondias
mombin L e avaliar o seu efeito sobre a superfiacutecie de dentes humanos no que diz respeito agraves
caracteriacutesticas cor rugosidade morfologia de superfiacutecie e molhabilidade comparando esse efeito
com aquele produzido pela soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 sobre essa mesma
superfiacutecie A hipoacutetese nula testada foi a de que natildeo havia diferenccedila entre o pH do extrato de
Spondias mombin L e o pH da soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 assim como entre os
efeitos produzidos por essas substacircncias sobre as superfiacutecies de dentes humanos no tocante a todas
as variaacuteveis investigadas Ademais natildeo existem estudos na literatura vigente que tenham
investigado o referido extrato frente agrave superfiacutecie dentaacuteria fato este que destaca o ineditismo do
estudo em questatildeo e a sua importante contribuiccedilatildeo para os avanccedilos cientiacuteficos na aacuterea odontoloacutegica
18
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
21 Agentes quiacutemicos antimicrobianos
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar quando o controle mecacircnico no
sentido de evitar o acuacutemulo de bacteacuterias sobre os dentes natildeo puder ser realizado diariamente ou
estiver inadequado (ANDERSON 2003 LAING et al 2008)
Frente agraves limitaccedilotildees dos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal agentes quiacutemicos
antimicrobianos tecircm sido propostos principalmente nos casos em que haacute dificuldade de controle do
biofilme dentaacuterio e naqueles onde eacute necessaacuterio reduzir demasiadamente a quantidade de
microrganismos bucais (MOREIRA et al 2009 MARSH 2010)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico de moleacuteculas carregadas positivamente que apresenta um
largo espectro antimicrobiano pertencente agrave famiacutelia de compostos conhecidos como bisbiguanida
Sua moleacutecula se liga provavelmente atraveacutes de forccedilas eletrostaacuteticas aos grupos fosfato carboxila
ou sulfato tanto na mucosa bucal quanto nos microrganismos e na peliacutecula adquirida Sendo assim
a clorexidina compete com o caacutelcio comprometendo a aderecircncia bacteriana e consequentemente
inibindo a formaccedilatildeo do biofilme Tal substacircncia atinge seu efeito antimicrobiano atraveacutes de suas
atividades bactericida e bacteriostaacutetica Inicialmente quando aplicada na forma de soluccedilatildeo gel ou
verniz a concentraccedilatildeo eacute tal que o agente eacute bactericida Todavia a clorexidina tambeacutem se liga agraves
mucosas e superfiacutecies dos dentes e posteriormente eacute liberada de forma lenta em concentraccedilotildees
bacteriostaacuteticas durante vaacuterias horas Diante do exposto o que diferencia a clorexidina dos demais
agentes antimicrobianos eacute a sua substantividade Sua duraccedilatildeo de accedilatildeo eacute prolongada pela sua
habilidade de adsorccedilatildeo agraves estruturas bucais e posterior liberaccedilatildeo lenta na sua forma ativa (SILVA
1991 ROSA ROCHA 1993 MATTHIJS 2009 SOET et al 2002 FEJERSKOV KIDD 2005
VAN STRYDONCK et al 2005)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico catiocircnico que age contra uma ampla variedade de bacteacuterias
fungos e alguns viacuterus lipofiacutelicos (DENTON et al 1991) Seu efeito antibacteriano ocorre atraveacutes da
interaccedilatildeo natildeo-especiacutefica com o aacutecido fosfolipiacutedico da membrana celular causando alteraccedilotildees na
permeabilidade da membrana para iacuteons como potaacutessio e para constituintes do citosol como
aminoaacutecidos e nucleotiacutedeos Em altas concentraccedilotildees a atividade de enzimas associadas agrave
membrana como dehidrogenases e ATPase eacute indiretamente afetada (DAVIES 1973 BRECX
THEILADE 1984)
19
Dentre os agentes antimicrobianos bucais mais utilizados o digluconato de clorexidina
012 merece destaque devido ao seu potencial antimicrobiano e agrave sua caracteriacutestica de forte
adsorccedilatildeo agraves superfiacutecies bucais (MARSH 2010 SCHEIE PETERSEN 2011) A clorexidina
demonstrou ser eficaz contra vaacuterias bacteacuterias orais Devido ao seu amplo espectro antimicrobiano
atuando contra bacteacuterias Gram-positivas Gram-negativas e fungos tambeacutem tem sido utilizada para
tratar concomitantemente doenccedilas endodocircnticas (SIQUEIRA JR PAIVA ROcircCcedilAS 2007
VIANNA et al 2008) periodontais e para prevenir a progressatildeo de caacuterie (COSYN et al2006
DUARTE LOTUFO PANNUTI 2008) Visto que a clorexidina promove alguns efeitos colaterais
como pigmentaccedilatildeo dos dentes alteraccedilatildeo do paladar e descamaccedilatildeo da mucosa os antisseacutepticos que
tecircm como princiacutepio ativo o digluconato de clorexidina a 012 ou 02 apresentam meacutedia elevada
para o potencial de reduccedilatildeo da microbiota bucal quando comparados a outros antisseacutepticos
(MATOS et al 2015)
As propriedades de um antisseacuteptico ideal incluem estabilidade baixa tensatildeo superficial
letalidade em baixas concentraccedilotildees ausecircncia de toxicidade e poder de penetraccedilatildeo No entanto
nenhum produto disponiacutevel no mercado possui todos esses requisitos o que justifica os efeitos
colaterais e a pouca eficiecircncia apresentada por alguns (MOREIRA et al 2009 ZANIN et al 2007)
Diante dos efeitos colaterais do digluconato de clorexidina 012 e da sua possibilidade de
causar resistecircncia bacteriana torna-se necessaacuterio investigar as propriedades antimicrobianas de
novas substacircncias e com a rica diversidade da flora do Brasil parece salutar o estudo de produtos
derivados de plantas como princiacutepio ativo de possiacuteveis agentes antimicrobianos (MOTA
TURRINI POVEDA 2015)
O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibioacuteticos tem
se tornado um problema significante para a sauacutede puacuteblica As principais causas dessa resistecircncia
estatildeo associadas ao uso excessivo de antibioacuteticos nos tratamentos por prescriccedilotildees meacutedicas e agrave
capacidade de sobrevivecircncia intracelular de algumas bacteacuterias induzidas por certas infecccedilotildees que
impedem o acesso do medicamento em foco Observa-se que o alto custo dos medicamentos se
apresenta como um problema relevante para a populaccedilatildeo de baixa renda gerando assim a busca por
novos meacutetodos alternativos viaacuteveis como o uso dos fitoteraacutepicos (YUNES et al 2001)
22 Fitoterapia
Atualmente o uso de fitoteraacutepicos tem se intensificado em vaacuterios paiacuteses especialmente no
Brasil que possui uma flora rica e diversa com grande potencial para o desenvolvimento dessa
ciecircncia (ASSIS 2009 MOLINA et al 2008 MONTES et al 2009 OLIVEIRA et al 2007
TOMAZZONI NEGRELLE CENTA 2006)
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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v
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Conselho Regional de Farmaacutecia do Estado de Satildeo Paulo
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ANEXOS
57
58
APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 Resultados das meacutedias (desvios-padratildeo) da molhabilidade das substacircncias
testadas35
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padratildeo) da anaacutelise da cor valores de (ΔE) 36
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padratildeo) dos valores de rugosidade antes e apoacutes os diferentes
protocolos de imersatildeo36
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 18
21 AGENTES QUIacuteMICOS ANTIMICROBIANOS 18
22 FITOTERAPIA 19
221 SPONDIAS MOMBIN L20
23 CARACTERIacuteSTICAS DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA22
24 ALTERACcedilOtildeES NA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA CAUSADAS POR SUBSTAcircNCIAS QUIacuteMICAS
23
3 OBJETIVOS 25
31 OBJETIVO GERAL 25
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS 25
4 MEacuteTODO 26
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO26
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS26
43 SELECcedilAtildeOPREPARACcedilAtildeOARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA 26
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L 28
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO29
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO29
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE30
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE31
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR 32
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA 33
411 ANAacuteLISE DOS DADOS 34
5 RESULTADOS 35
51 pH DO EXTRATO 35
52 AcircNGULO DE CONTATO MOLHABILIDADE35
53 COR 36
54 RUGOSIDADE 36
55 MORFOLOGIA 37
6 DISCUSSAtildeO 44
7 CONCLUSAtildeO 48
REFEREcircNCIAS 49
ANEXOS 56
APENDICES 58
16
1 INTRODUCcedilAtildeO
Desde os primoacuterdios o uso de plantas medicinais foi preterido por falta de embasamento
cientiacutefico favorecendo agrave substituiccedilatildeo dos fitoteraacutepicos pelos medicamentos alopaacuteticos Na deacutecada
de 70 a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (OMS) passou a incentivar o estudo cientiacutefico das plantas
medicinais jaacute que muitas das encontradas no Brasil ainda natildeo possuiacuteam eficaacutecia cientiacutefica
comprovada (ALELUIA et al 2015) A partir dos anos 80 e 90 ocorreu um aumento expressivo
no mercado mundial de medicamentos fitoteraacutepicos especialmente nos paiacuteses industrializados
(FERNANDES 2003 CALIXTO 2001)
A 8ordf Conferecircncia Nacional de Sauacutede realizada no ano de 1986 trouxe entre suas
recomendaccedilotildees a ldquointroduccedilatildeo de praacuteticas alternativas de assistecircncia agrave sauacutede no acircmbito dos serviccedilos
de sauacutede possibilitando ao usuaacuterio o acesso democraacutetico de escolher a terapecircutica preferidardquo Com
vistas agrave viabilizaccedilatildeo dessa recomendaccedilatildeo algumas medidas foram tomadas como a regulamentaccedilatildeo
da implantaccedilatildeo da fitoterapia nos serviccedilos de sauacutede nas unidades federadas por meio da resoluccedilatildeo
Comissatildeo Interministerial de Planejamento e Coordenaccedilatildeo (Ciplan nordm 08 de 8 de marccedilo de 1988)
Os estudos com plantas medicinais em Odontologia tecircm sido desenvolvidos como uma
tentativa de abrir novos caminhos para o combate agraves infecccedilotildees bucais possibilitando a inserccedilatildeo do
uso de fitoteraacutepicos como recursos preventivo e terapecircutico na praacutetica diaacuteria ambulatorial
especialmente nos serviccedilos de atenccedilatildeo baacutesica ofertados pelo Sistema Uacutenico de Sauacutede (SUS) Nessa
perspectiva experimentos in vitro sobre a accedilatildeo antimicrobiana de extratos vegetais tecircm sido
realizados nas uacuteltimas deacutecadas (ALELUIA et al 2015 LIMA 2015 MACEcircDO 2016 LIMA
2015 ALVES 2017) com o intuito de obter agentes quiacutemicos antimicrobianos que auxiliem o
controle mecacircnico da microbiota bucal
Frente agraves deficiecircncias nos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal decorrentes da falta de
destreza manual e motivaccedilatildeo agentes quiacutemicos antimicrobianos tecircm sido propostos a fim de inibir
o crescimento e a proliferaccedilatildeo de microrganismos no ambiente bucal reduzir a adesatildeo bacteriana
agraves superfiacutecies modificar a atividade bioquiacutemica desses microrganismos e alterar a ecologia do
biofilme dentaacuterio para uma microbiota menos patogecircnica (MARSH 2010)
Na atualidade o agente antimicrobiano mais utilizado no controle quiacutemico da microbiota
bucal planctocircnica e organizada em biofilme eacute o digluconato de clorexidina 012 em funccedilatildeo do
seu amplo espectro de accedilatildeo baixa toxicidade e elevada substantividade Todavia essa substacircncia
aleacutem de apresentar um custo elevado natildeo pode ser usada por periacuteodos prolongados uma vez que
nessas situaccedilotildees altera a microbiota natural e produz efeitos colaterais como manchamento de
dentes e restauraccedilotildees descamaccedilatildeo da mucosa e modificaccedilotildees no paladar (MATOS et al 2015
HAJIFATTAHI et al 2016)
17
As limitaccedilotildees da clorexidina e de outros agentes antimicrobianos sinteacuteticos convencionais
tem encorajado a investigaccedilatildeo de produtos naturais com maior atividade terapecircutica menor
toxicidade maior biocompatibilidade com os tecidos moles e duros da cavidade oral e menor custo
para o controle quiacutemico do biofilme e o tratamento de diferentes infecccedilotildees orais (ALLAKER 2009)
Dentre esses produtos naturais cuja accedilatildeo antimicrobiana tem sido investigada merece
destaque o extrato da folha de Spondias mombin (S mombin L) espeacutecie vulgarmente conhecida
como cajaacute pertencente agrave famiacutelia Anacardiacea que estaacute distribuiacuteda em diversas regiotildees do Brasil e
de outros paiacuteses da Ameacuterica Latina (THADHANI et al 2012)
Considerando que S mombin L tem demonstrado muacuteltiplas atividades bioloacutegicas relevantes
agrave manutenccedilatildeo e ao restabelecimento da sauacutede bucal podendo assim ser utilizada como mateacuteria
prima para o desenvolvimento futuro de novos agentes antimicrobianos quiacutemicos torna-se de
extrema importacircncia investigar o seu efeito sobre os tecidos moles e duros da cavidade oral a fim
de que o mesmo seja administrado com eficaacutecia e seguranccedila
Frente ao exposto o presente estudo se propocircs a investigar o pH do extrato de Spondias
mombin L e avaliar o seu efeito sobre a superfiacutecie de dentes humanos no que diz respeito agraves
caracteriacutesticas cor rugosidade morfologia de superfiacutecie e molhabilidade comparando esse efeito
com aquele produzido pela soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 sobre essa mesma
superfiacutecie A hipoacutetese nula testada foi a de que natildeo havia diferenccedila entre o pH do extrato de
Spondias mombin L e o pH da soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 assim como entre os
efeitos produzidos por essas substacircncias sobre as superfiacutecies de dentes humanos no tocante a todas
as variaacuteveis investigadas Ademais natildeo existem estudos na literatura vigente que tenham
investigado o referido extrato frente agrave superfiacutecie dentaacuteria fato este que destaca o ineditismo do
estudo em questatildeo e a sua importante contribuiccedilatildeo para os avanccedilos cientiacuteficos na aacuterea odontoloacutegica
18
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
21 Agentes quiacutemicos antimicrobianos
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar quando o controle mecacircnico no
sentido de evitar o acuacutemulo de bacteacuterias sobre os dentes natildeo puder ser realizado diariamente ou
estiver inadequado (ANDERSON 2003 LAING et al 2008)
Frente agraves limitaccedilotildees dos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal agentes quiacutemicos
antimicrobianos tecircm sido propostos principalmente nos casos em que haacute dificuldade de controle do
biofilme dentaacuterio e naqueles onde eacute necessaacuterio reduzir demasiadamente a quantidade de
microrganismos bucais (MOREIRA et al 2009 MARSH 2010)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico de moleacuteculas carregadas positivamente que apresenta um
largo espectro antimicrobiano pertencente agrave famiacutelia de compostos conhecidos como bisbiguanida
Sua moleacutecula se liga provavelmente atraveacutes de forccedilas eletrostaacuteticas aos grupos fosfato carboxila
ou sulfato tanto na mucosa bucal quanto nos microrganismos e na peliacutecula adquirida Sendo assim
a clorexidina compete com o caacutelcio comprometendo a aderecircncia bacteriana e consequentemente
inibindo a formaccedilatildeo do biofilme Tal substacircncia atinge seu efeito antimicrobiano atraveacutes de suas
atividades bactericida e bacteriostaacutetica Inicialmente quando aplicada na forma de soluccedilatildeo gel ou
verniz a concentraccedilatildeo eacute tal que o agente eacute bactericida Todavia a clorexidina tambeacutem se liga agraves
mucosas e superfiacutecies dos dentes e posteriormente eacute liberada de forma lenta em concentraccedilotildees
bacteriostaacuteticas durante vaacuterias horas Diante do exposto o que diferencia a clorexidina dos demais
agentes antimicrobianos eacute a sua substantividade Sua duraccedilatildeo de accedilatildeo eacute prolongada pela sua
habilidade de adsorccedilatildeo agraves estruturas bucais e posterior liberaccedilatildeo lenta na sua forma ativa (SILVA
1991 ROSA ROCHA 1993 MATTHIJS 2009 SOET et al 2002 FEJERSKOV KIDD 2005
VAN STRYDONCK et al 2005)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico catiocircnico que age contra uma ampla variedade de bacteacuterias
fungos e alguns viacuterus lipofiacutelicos (DENTON et al 1991) Seu efeito antibacteriano ocorre atraveacutes da
interaccedilatildeo natildeo-especiacutefica com o aacutecido fosfolipiacutedico da membrana celular causando alteraccedilotildees na
permeabilidade da membrana para iacuteons como potaacutessio e para constituintes do citosol como
aminoaacutecidos e nucleotiacutedeos Em altas concentraccedilotildees a atividade de enzimas associadas agrave
membrana como dehidrogenases e ATPase eacute indiretamente afetada (DAVIES 1973 BRECX
THEILADE 1984)
19
Dentre os agentes antimicrobianos bucais mais utilizados o digluconato de clorexidina
012 merece destaque devido ao seu potencial antimicrobiano e agrave sua caracteriacutestica de forte
adsorccedilatildeo agraves superfiacutecies bucais (MARSH 2010 SCHEIE PETERSEN 2011) A clorexidina
demonstrou ser eficaz contra vaacuterias bacteacuterias orais Devido ao seu amplo espectro antimicrobiano
atuando contra bacteacuterias Gram-positivas Gram-negativas e fungos tambeacutem tem sido utilizada para
tratar concomitantemente doenccedilas endodocircnticas (SIQUEIRA JR PAIVA ROcircCcedilAS 2007
VIANNA et al 2008) periodontais e para prevenir a progressatildeo de caacuterie (COSYN et al2006
DUARTE LOTUFO PANNUTI 2008) Visto que a clorexidina promove alguns efeitos colaterais
como pigmentaccedilatildeo dos dentes alteraccedilatildeo do paladar e descamaccedilatildeo da mucosa os antisseacutepticos que
tecircm como princiacutepio ativo o digluconato de clorexidina a 012 ou 02 apresentam meacutedia elevada
para o potencial de reduccedilatildeo da microbiota bucal quando comparados a outros antisseacutepticos
(MATOS et al 2015)
As propriedades de um antisseacuteptico ideal incluem estabilidade baixa tensatildeo superficial
letalidade em baixas concentraccedilotildees ausecircncia de toxicidade e poder de penetraccedilatildeo No entanto
nenhum produto disponiacutevel no mercado possui todos esses requisitos o que justifica os efeitos
colaterais e a pouca eficiecircncia apresentada por alguns (MOREIRA et al 2009 ZANIN et al 2007)
Diante dos efeitos colaterais do digluconato de clorexidina 012 e da sua possibilidade de
causar resistecircncia bacteriana torna-se necessaacuterio investigar as propriedades antimicrobianas de
novas substacircncias e com a rica diversidade da flora do Brasil parece salutar o estudo de produtos
derivados de plantas como princiacutepio ativo de possiacuteveis agentes antimicrobianos (MOTA
TURRINI POVEDA 2015)
O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibioacuteticos tem
se tornado um problema significante para a sauacutede puacuteblica As principais causas dessa resistecircncia
estatildeo associadas ao uso excessivo de antibioacuteticos nos tratamentos por prescriccedilotildees meacutedicas e agrave
capacidade de sobrevivecircncia intracelular de algumas bacteacuterias induzidas por certas infecccedilotildees que
impedem o acesso do medicamento em foco Observa-se que o alto custo dos medicamentos se
apresenta como um problema relevante para a populaccedilatildeo de baixa renda gerando assim a busca por
novos meacutetodos alternativos viaacuteveis como o uso dos fitoteraacutepicos (YUNES et al 2001)
22 Fitoterapia
Atualmente o uso de fitoteraacutepicos tem se intensificado em vaacuterios paiacuteses especialmente no
Brasil que possui uma flora rica e diversa com grande potencial para o desenvolvimento dessa
ciecircncia (ASSIS 2009 MOLINA et al 2008 MONTES et al 2009 OLIVEIRA et al 2007
TOMAZZONI NEGRELLE CENTA 2006)
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
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3
4
6
7
8
9
5 10
39
Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
2
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7
8
4 9
5 10
40
Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
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6
7
8
9 4
10 5
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
4
10 5
9
8 3
v
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
2
3
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9
8
7
6
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4
44
6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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ANEXOS
57
58
APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 16
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 18
21 AGENTES QUIacuteMICOS ANTIMICROBIANOS 18
22 FITOTERAPIA 19
221 SPONDIAS MOMBIN L20
23 CARACTERIacuteSTICAS DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA22
24 ALTERACcedilOtildeES NA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA CAUSADAS POR SUBSTAcircNCIAS QUIacuteMICAS
23
3 OBJETIVOS 25
31 OBJETIVO GERAL 25
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS 25
4 MEacuteTODO 26
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO26
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS26
43 SELECcedilAtildeOPREPARACcedilAtildeOARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA 26
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L 28
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO29
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO29
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE30
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE31
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR 32
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA 33
411 ANAacuteLISE DOS DADOS 34
5 RESULTADOS 35
51 pH DO EXTRATO 35
52 AcircNGULO DE CONTATO MOLHABILIDADE35
53 COR 36
54 RUGOSIDADE 36
55 MORFOLOGIA 37
6 DISCUSSAtildeO 44
7 CONCLUSAtildeO 48
REFEREcircNCIAS 49
ANEXOS 56
APENDICES 58
16
1 INTRODUCcedilAtildeO
Desde os primoacuterdios o uso de plantas medicinais foi preterido por falta de embasamento
cientiacutefico favorecendo agrave substituiccedilatildeo dos fitoteraacutepicos pelos medicamentos alopaacuteticos Na deacutecada
de 70 a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (OMS) passou a incentivar o estudo cientiacutefico das plantas
medicinais jaacute que muitas das encontradas no Brasil ainda natildeo possuiacuteam eficaacutecia cientiacutefica
comprovada (ALELUIA et al 2015) A partir dos anos 80 e 90 ocorreu um aumento expressivo
no mercado mundial de medicamentos fitoteraacutepicos especialmente nos paiacuteses industrializados
(FERNANDES 2003 CALIXTO 2001)
A 8ordf Conferecircncia Nacional de Sauacutede realizada no ano de 1986 trouxe entre suas
recomendaccedilotildees a ldquointroduccedilatildeo de praacuteticas alternativas de assistecircncia agrave sauacutede no acircmbito dos serviccedilos
de sauacutede possibilitando ao usuaacuterio o acesso democraacutetico de escolher a terapecircutica preferidardquo Com
vistas agrave viabilizaccedilatildeo dessa recomendaccedilatildeo algumas medidas foram tomadas como a regulamentaccedilatildeo
da implantaccedilatildeo da fitoterapia nos serviccedilos de sauacutede nas unidades federadas por meio da resoluccedilatildeo
Comissatildeo Interministerial de Planejamento e Coordenaccedilatildeo (Ciplan nordm 08 de 8 de marccedilo de 1988)
Os estudos com plantas medicinais em Odontologia tecircm sido desenvolvidos como uma
tentativa de abrir novos caminhos para o combate agraves infecccedilotildees bucais possibilitando a inserccedilatildeo do
uso de fitoteraacutepicos como recursos preventivo e terapecircutico na praacutetica diaacuteria ambulatorial
especialmente nos serviccedilos de atenccedilatildeo baacutesica ofertados pelo Sistema Uacutenico de Sauacutede (SUS) Nessa
perspectiva experimentos in vitro sobre a accedilatildeo antimicrobiana de extratos vegetais tecircm sido
realizados nas uacuteltimas deacutecadas (ALELUIA et al 2015 LIMA 2015 MACEcircDO 2016 LIMA
2015 ALVES 2017) com o intuito de obter agentes quiacutemicos antimicrobianos que auxiliem o
controle mecacircnico da microbiota bucal
Frente agraves deficiecircncias nos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal decorrentes da falta de
destreza manual e motivaccedilatildeo agentes quiacutemicos antimicrobianos tecircm sido propostos a fim de inibir
o crescimento e a proliferaccedilatildeo de microrganismos no ambiente bucal reduzir a adesatildeo bacteriana
agraves superfiacutecies modificar a atividade bioquiacutemica desses microrganismos e alterar a ecologia do
biofilme dentaacuterio para uma microbiota menos patogecircnica (MARSH 2010)
Na atualidade o agente antimicrobiano mais utilizado no controle quiacutemico da microbiota
bucal planctocircnica e organizada em biofilme eacute o digluconato de clorexidina 012 em funccedilatildeo do
seu amplo espectro de accedilatildeo baixa toxicidade e elevada substantividade Todavia essa substacircncia
aleacutem de apresentar um custo elevado natildeo pode ser usada por periacuteodos prolongados uma vez que
nessas situaccedilotildees altera a microbiota natural e produz efeitos colaterais como manchamento de
dentes e restauraccedilotildees descamaccedilatildeo da mucosa e modificaccedilotildees no paladar (MATOS et al 2015
HAJIFATTAHI et al 2016)
17
As limitaccedilotildees da clorexidina e de outros agentes antimicrobianos sinteacuteticos convencionais
tem encorajado a investigaccedilatildeo de produtos naturais com maior atividade terapecircutica menor
toxicidade maior biocompatibilidade com os tecidos moles e duros da cavidade oral e menor custo
para o controle quiacutemico do biofilme e o tratamento de diferentes infecccedilotildees orais (ALLAKER 2009)
Dentre esses produtos naturais cuja accedilatildeo antimicrobiana tem sido investigada merece
destaque o extrato da folha de Spondias mombin (S mombin L) espeacutecie vulgarmente conhecida
como cajaacute pertencente agrave famiacutelia Anacardiacea que estaacute distribuiacuteda em diversas regiotildees do Brasil e
de outros paiacuteses da Ameacuterica Latina (THADHANI et al 2012)
Considerando que S mombin L tem demonstrado muacuteltiplas atividades bioloacutegicas relevantes
agrave manutenccedilatildeo e ao restabelecimento da sauacutede bucal podendo assim ser utilizada como mateacuteria
prima para o desenvolvimento futuro de novos agentes antimicrobianos quiacutemicos torna-se de
extrema importacircncia investigar o seu efeito sobre os tecidos moles e duros da cavidade oral a fim
de que o mesmo seja administrado com eficaacutecia e seguranccedila
Frente ao exposto o presente estudo se propocircs a investigar o pH do extrato de Spondias
mombin L e avaliar o seu efeito sobre a superfiacutecie de dentes humanos no que diz respeito agraves
caracteriacutesticas cor rugosidade morfologia de superfiacutecie e molhabilidade comparando esse efeito
com aquele produzido pela soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 sobre essa mesma
superfiacutecie A hipoacutetese nula testada foi a de que natildeo havia diferenccedila entre o pH do extrato de
Spondias mombin L e o pH da soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 assim como entre os
efeitos produzidos por essas substacircncias sobre as superfiacutecies de dentes humanos no tocante a todas
as variaacuteveis investigadas Ademais natildeo existem estudos na literatura vigente que tenham
investigado o referido extrato frente agrave superfiacutecie dentaacuteria fato este que destaca o ineditismo do
estudo em questatildeo e a sua importante contribuiccedilatildeo para os avanccedilos cientiacuteficos na aacuterea odontoloacutegica
18
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
21 Agentes quiacutemicos antimicrobianos
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar quando o controle mecacircnico no
sentido de evitar o acuacutemulo de bacteacuterias sobre os dentes natildeo puder ser realizado diariamente ou
estiver inadequado (ANDERSON 2003 LAING et al 2008)
Frente agraves limitaccedilotildees dos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal agentes quiacutemicos
antimicrobianos tecircm sido propostos principalmente nos casos em que haacute dificuldade de controle do
biofilme dentaacuterio e naqueles onde eacute necessaacuterio reduzir demasiadamente a quantidade de
microrganismos bucais (MOREIRA et al 2009 MARSH 2010)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico de moleacuteculas carregadas positivamente que apresenta um
largo espectro antimicrobiano pertencente agrave famiacutelia de compostos conhecidos como bisbiguanida
Sua moleacutecula se liga provavelmente atraveacutes de forccedilas eletrostaacuteticas aos grupos fosfato carboxila
ou sulfato tanto na mucosa bucal quanto nos microrganismos e na peliacutecula adquirida Sendo assim
a clorexidina compete com o caacutelcio comprometendo a aderecircncia bacteriana e consequentemente
inibindo a formaccedilatildeo do biofilme Tal substacircncia atinge seu efeito antimicrobiano atraveacutes de suas
atividades bactericida e bacteriostaacutetica Inicialmente quando aplicada na forma de soluccedilatildeo gel ou
verniz a concentraccedilatildeo eacute tal que o agente eacute bactericida Todavia a clorexidina tambeacutem se liga agraves
mucosas e superfiacutecies dos dentes e posteriormente eacute liberada de forma lenta em concentraccedilotildees
bacteriostaacuteticas durante vaacuterias horas Diante do exposto o que diferencia a clorexidina dos demais
agentes antimicrobianos eacute a sua substantividade Sua duraccedilatildeo de accedilatildeo eacute prolongada pela sua
habilidade de adsorccedilatildeo agraves estruturas bucais e posterior liberaccedilatildeo lenta na sua forma ativa (SILVA
1991 ROSA ROCHA 1993 MATTHIJS 2009 SOET et al 2002 FEJERSKOV KIDD 2005
VAN STRYDONCK et al 2005)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico catiocircnico que age contra uma ampla variedade de bacteacuterias
fungos e alguns viacuterus lipofiacutelicos (DENTON et al 1991) Seu efeito antibacteriano ocorre atraveacutes da
interaccedilatildeo natildeo-especiacutefica com o aacutecido fosfolipiacutedico da membrana celular causando alteraccedilotildees na
permeabilidade da membrana para iacuteons como potaacutessio e para constituintes do citosol como
aminoaacutecidos e nucleotiacutedeos Em altas concentraccedilotildees a atividade de enzimas associadas agrave
membrana como dehidrogenases e ATPase eacute indiretamente afetada (DAVIES 1973 BRECX
THEILADE 1984)
19
Dentre os agentes antimicrobianos bucais mais utilizados o digluconato de clorexidina
012 merece destaque devido ao seu potencial antimicrobiano e agrave sua caracteriacutestica de forte
adsorccedilatildeo agraves superfiacutecies bucais (MARSH 2010 SCHEIE PETERSEN 2011) A clorexidina
demonstrou ser eficaz contra vaacuterias bacteacuterias orais Devido ao seu amplo espectro antimicrobiano
atuando contra bacteacuterias Gram-positivas Gram-negativas e fungos tambeacutem tem sido utilizada para
tratar concomitantemente doenccedilas endodocircnticas (SIQUEIRA JR PAIVA ROcircCcedilAS 2007
VIANNA et al 2008) periodontais e para prevenir a progressatildeo de caacuterie (COSYN et al2006
DUARTE LOTUFO PANNUTI 2008) Visto que a clorexidina promove alguns efeitos colaterais
como pigmentaccedilatildeo dos dentes alteraccedilatildeo do paladar e descamaccedilatildeo da mucosa os antisseacutepticos que
tecircm como princiacutepio ativo o digluconato de clorexidina a 012 ou 02 apresentam meacutedia elevada
para o potencial de reduccedilatildeo da microbiota bucal quando comparados a outros antisseacutepticos
(MATOS et al 2015)
As propriedades de um antisseacuteptico ideal incluem estabilidade baixa tensatildeo superficial
letalidade em baixas concentraccedilotildees ausecircncia de toxicidade e poder de penetraccedilatildeo No entanto
nenhum produto disponiacutevel no mercado possui todos esses requisitos o que justifica os efeitos
colaterais e a pouca eficiecircncia apresentada por alguns (MOREIRA et al 2009 ZANIN et al 2007)
Diante dos efeitos colaterais do digluconato de clorexidina 012 e da sua possibilidade de
causar resistecircncia bacteriana torna-se necessaacuterio investigar as propriedades antimicrobianas de
novas substacircncias e com a rica diversidade da flora do Brasil parece salutar o estudo de produtos
derivados de plantas como princiacutepio ativo de possiacuteveis agentes antimicrobianos (MOTA
TURRINI POVEDA 2015)
O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibioacuteticos tem
se tornado um problema significante para a sauacutede puacuteblica As principais causas dessa resistecircncia
estatildeo associadas ao uso excessivo de antibioacuteticos nos tratamentos por prescriccedilotildees meacutedicas e agrave
capacidade de sobrevivecircncia intracelular de algumas bacteacuterias induzidas por certas infecccedilotildees que
impedem o acesso do medicamento em foco Observa-se que o alto custo dos medicamentos se
apresenta como um problema relevante para a populaccedilatildeo de baixa renda gerando assim a busca por
novos meacutetodos alternativos viaacuteveis como o uso dos fitoteraacutepicos (YUNES et al 2001)
22 Fitoterapia
Atualmente o uso de fitoteraacutepicos tem se intensificado em vaacuterios paiacuteses especialmente no
Brasil que possui uma flora rica e diversa com grande potencial para o desenvolvimento dessa
ciecircncia (ASSIS 2009 MOLINA et al 2008 MONTES et al 2009 OLIVEIRA et al 2007
TOMAZZONI NEGRELLE CENTA 2006)
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
2
3
4
6
7
8
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5 10
39
Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
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7
8
4 9
5 10
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
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6
7
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9 4
10 5
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
4
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9
8 3
v
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
2
3
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9
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4
44
6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
REFEREcircNCIAS
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ANEXOS
57
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APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
16
1 INTRODUCcedilAtildeO
Desde os primoacuterdios o uso de plantas medicinais foi preterido por falta de embasamento
cientiacutefico favorecendo agrave substituiccedilatildeo dos fitoteraacutepicos pelos medicamentos alopaacuteticos Na deacutecada
de 70 a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (OMS) passou a incentivar o estudo cientiacutefico das plantas
medicinais jaacute que muitas das encontradas no Brasil ainda natildeo possuiacuteam eficaacutecia cientiacutefica
comprovada (ALELUIA et al 2015) A partir dos anos 80 e 90 ocorreu um aumento expressivo
no mercado mundial de medicamentos fitoteraacutepicos especialmente nos paiacuteses industrializados
(FERNANDES 2003 CALIXTO 2001)
A 8ordf Conferecircncia Nacional de Sauacutede realizada no ano de 1986 trouxe entre suas
recomendaccedilotildees a ldquointroduccedilatildeo de praacuteticas alternativas de assistecircncia agrave sauacutede no acircmbito dos serviccedilos
de sauacutede possibilitando ao usuaacuterio o acesso democraacutetico de escolher a terapecircutica preferidardquo Com
vistas agrave viabilizaccedilatildeo dessa recomendaccedilatildeo algumas medidas foram tomadas como a regulamentaccedilatildeo
da implantaccedilatildeo da fitoterapia nos serviccedilos de sauacutede nas unidades federadas por meio da resoluccedilatildeo
Comissatildeo Interministerial de Planejamento e Coordenaccedilatildeo (Ciplan nordm 08 de 8 de marccedilo de 1988)
Os estudos com plantas medicinais em Odontologia tecircm sido desenvolvidos como uma
tentativa de abrir novos caminhos para o combate agraves infecccedilotildees bucais possibilitando a inserccedilatildeo do
uso de fitoteraacutepicos como recursos preventivo e terapecircutico na praacutetica diaacuteria ambulatorial
especialmente nos serviccedilos de atenccedilatildeo baacutesica ofertados pelo Sistema Uacutenico de Sauacutede (SUS) Nessa
perspectiva experimentos in vitro sobre a accedilatildeo antimicrobiana de extratos vegetais tecircm sido
realizados nas uacuteltimas deacutecadas (ALELUIA et al 2015 LIMA 2015 MACEcircDO 2016 LIMA
2015 ALVES 2017) com o intuito de obter agentes quiacutemicos antimicrobianos que auxiliem o
controle mecacircnico da microbiota bucal
Frente agraves deficiecircncias nos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal decorrentes da falta de
destreza manual e motivaccedilatildeo agentes quiacutemicos antimicrobianos tecircm sido propostos a fim de inibir
o crescimento e a proliferaccedilatildeo de microrganismos no ambiente bucal reduzir a adesatildeo bacteriana
agraves superfiacutecies modificar a atividade bioquiacutemica desses microrganismos e alterar a ecologia do
biofilme dentaacuterio para uma microbiota menos patogecircnica (MARSH 2010)
Na atualidade o agente antimicrobiano mais utilizado no controle quiacutemico da microbiota
bucal planctocircnica e organizada em biofilme eacute o digluconato de clorexidina 012 em funccedilatildeo do
seu amplo espectro de accedilatildeo baixa toxicidade e elevada substantividade Todavia essa substacircncia
aleacutem de apresentar um custo elevado natildeo pode ser usada por periacuteodos prolongados uma vez que
nessas situaccedilotildees altera a microbiota natural e produz efeitos colaterais como manchamento de
dentes e restauraccedilotildees descamaccedilatildeo da mucosa e modificaccedilotildees no paladar (MATOS et al 2015
HAJIFATTAHI et al 2016)
17
As limitaccedilotildees da clorexidina e de outros agentes antimicrobianos sinteacuteticos convencionais
tem encorajado a investigaccedilatildeo de produtos naturais com maior atividade terapecircutica menor
toxicidade maior biocompatibilidade com os tecidos moles e duros da cavidade oral e menor custo
para o controle quiacutemico do biofilme e o tratamento de diferentes infecccedilotildees orais (ALLAKER 2009)
Dentre esses produtos naturais cuja accedilatildeo antimicrobiana tem sido investigada merece
destaque o extrato da folha de Spondias mombin (S mombin L) espeacutecie vulgarmente conhecida
como cajaacute pertencente agrave famiacutelia Anacardiacea que estaacute distribuiacuteda em diversas regiotildees do Brasil e
de outros paiacuteses da Ameacuterica Latina (THADHANI et al 2012)
Considerando que S mombin L tem demonstrado muacuteltiplas atividades bioloacutegicas relevantes
agrave manutenccedilatildeo e ao restabelecimento da sauacutede bucal podendo assim ser utilizada como mateacuteria
prima para o desenvolvimento futuro de novos agentes antimicrobianos quiacutemicos torna-se de
extrema importacircncia investigar o seu efeito sobre os tecidos moles e duros da cavidade oral a fim
de que o mesmo seja administrado com eficaacutecia e seguranccedila
Frente ao exposto o presente estudo se propocircs a investigar o pH do extrato de Spondias
mombin L e avaliar o seu efeito sobre a superfiacutecie de dentes humanos no que diz respeito agraves
caracteriacutesticas cor rugosidade morfologia de superfiacutecie e molhabilidade comparando esse efeito
com aquele produzido pela soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 sobre essa mesma
superfiacutecie A hipoacutetese nula testada foi a de que natildeo havia diferenccedila entre o pH do extrato de
Spondias mombin L e o pH da soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 assim como entre os
efeitos produzidos por essas substacircncias sobre as superfiacutecies de dentes humanos no tocante a todas
as variaacuteveis investigadas Ademais natildeo existem estudos na literatura vigente que tenham
investigado o referido extrato frente agrave superfiacutecie dentaacuteria fato este que destaca o ineditismo do
estudo em questatildeo e a sua importante contribuiccedilatildeo para os avanccedilos cientiacuteficos na aacuterea odontoloacutegica
18
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
21 Agentes quiacutemicos antimicrobianos
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar quando o controle mecacircnico no
sentido de evitar o acuacutemulo de bacteacuterias sobre os dentes natildeo puder ser realizado diariamente ou
estiver inadequado (ANDERSON 2003 LAING et al 2008)
Frente agraves limitaccedilotildees dos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal agentes quiacutemicos
antimicrobianos tecircm sido propostos principalmente nos casos em que haacute dificuldade de controle do
biofilme dentaacuterio e naqueles onde eacute necessaacuterio reduzir demasiadamente a quantidade de
microrganismos bucais (MOREIRA et al 2009 MARSH 2010)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico de moleacuteculas carregadas positivamente que apresenta um
largo espectro antimicrobiano pertencente agrave famiacutelia de compostos conhecidos como bisbiguanida
Sua moleacutecula se liga provavelmente atraveacutes de forccedilas eletrostaacuteticas aos grupos fosfato carboxila
ou sulfato tanto na mucosa bucal quanto nos microrganismos e na peliacutecula adquirida Sendo assim
a clorexidina compete com o caacutelcio comprometendo a aderecircncia bacteriana e consequentemente
inibindo a formaccedilatildeo do biofilme Tal substacircncia atinge seu efeito antimicrobiano atraveacutes de suas
atividades bactericida e bacteriostaacutetica Inicialmente quando aplicada na forma de soluccedilatildeo gel ou
verniz a concentraccedilatildeo eacute tal que o agente eacute bactericida Todavia a clorexidina tambeacutem se liga agraves
mucosas e superfiacutecies dos dentes e posteriormente eacute liberada de forma lenta em concentraccedilotildees
bacteriostaacuteticas durante vaacuterias horas Diante do exposto o que diferencia a clorexidina dos demais
agentes antimicrobianos eacute a sua substantividade Sua duraccedilatildeo de accedilatildeo eacute prolongada pela sua
habilidade de adsorccedilatildeo agraves estruturas bucais e posterior liberaccedilatildeo lenta na sua forma ativa (SILVA
1991 ROSA ROCHA 1993 MATTHIJS 2009 SOET et al 2002 FEJERSKOV KIDD 2005
VAN STRYDONCK et al 2005)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico catiocircnico que age contra uma ampla variedade de bacteacuterias
fungos e alguns viacuterus lipofiacutelicos (DENTON et al 1991) Seu efeito antibacteriano ocorre atraveacutes da
interaccedilatildeo natildeo-especiacutefica com o aacutecido fosfolipiacutedico da membrana celular causando alteraccedilotildees na
permeabilidade da membrana para iacuteons como potaacutessio e para constituintes do citosol como
aminoaacutecidos e nucleotiacutedeos Em altas concentraccedilotildees a atividade de enzimas associadas agrave
membrana como dehidrogenases e ATPase eacute indiretamente afetada (DAVIES 1973 BRECX
THEILADE 1984)
19
Dentre os agentes antimicrobianos bucais mais utilizados o digluconato de clorexidina
012 merece destaque devido ao seu potencial antimicrobiano e agrave sua caracteriacutestica de forte
adsorccedilatildeo agraves superfiacutecies bucais (MARSH 2010 SCHEIE PETERSEN 2011) A clorexidina
demonstrou ser eficaz contra vaacuterias bacteacuterias orais Devido ao seu amplo espectro antimicrobiano
atuando contra bacteacuterias Gram-positivas Gram-negativas e fungos tambeacutem tem sido utilizada para
tratar concomitantemente doenccedilas endodocircnticas (SIQUEIRA JR PAIVA ROcircCcedilAS 2007
VIANNA et al 2008) periodontais e para prevenir a progressatildeo de caacuterie (COSYN et al2006
DUARTE LOTUFO PANNUTI 2008) Visto que a clorexidina promove alguns efeitos colaterais
como pigmentaccedilatildeo dos dentes alteraccedilatildeo do paladar e descamaccedilatildeo da mucosa os antisseacutepticos que
tecircm como princiacutepio ativo o digluconato de clorexidina a 012 ou 02 apresentam meacutedia elevada
para o potencial de reduccedilatildeo da microbiota bucal quando comparados a outros antisseacutepticos
(MATOS et al 2015)
As propriedades de um antisseacuteptico ideal incluem estabilidade baixa tensatildeo superficial
letalidade em baixas concentraccedilotildees ausecircncia de toxicidade e poder de penetraccedilatildeo No entanto
nenhum produto disponiacutevel no mercado possui todos esses requisitos o que justifica os efeitos
colaterais e a pouca eficiecircncia apresentada por alguns (MOREIRA et al 2009 ZANIN et al 2007)
Diante dos efeitos colaterais do digluconato de clorexidina 012 e da sua possibilidade de
causar resistecircncia bacteriana torna-se necessaacuterio investigar as propriedades antimicrobianas de
novas substacircncias e com a rica diversidade da flora do Brasil parece salutar o estudo de produtos
derivados de plantas como princiacutepio ativo de possiacuteveis agentes antimicrobianos (MOTA
TURRINI POVEDA 2015)
O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibioacuteticos tem
se tornado um problema significante para a sauacutede puacuteblica As principais causas dessa resistecircncia
estatildeo associadas ao uso excessivo de antibioacuteticos nos tratamentos por prescriccedilotildees meacutedicas e agrave
capacidade de sobrevivecircncia intracelular de algumas bacteacuterias induzidas por certas infecccedilotildees que
impedem o acesso do medicamento em foco Observa-se que o alto custo dos medicamentos se
apresenta como um problema relevante para a populaccedilatildeo de baixa renda gerando assim a busca por
novos meacutetodos alternativos viaacuteveis como o uso dos fitoteraacutepicos (YUNES et al 2001)
22 Fitoterapia
Atualmente o uso de fitoteraacutepicos tem se intensificado em vaacuterios paiacuteses especialmente no
Brasil que possui uma flora rica e diversa com grande potencial para o desenvolvimento dessa
ciecircncia (ASSIS 2009 MOLINA et al 2008 MONTES et al 2009 OLIVEIRA et al 2007
TOMAZZONI NEGRELLE CENTA 2006)
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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5 10
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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v
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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44
6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
REFEREcircNCIAS
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ALLAKER R P DOUGLAS C W I Novel anti-microbial therapies for dental plaque-related
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ANEXOS
57
58
APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
17
As limitaccedilotildees da clorexidina e de outros agentes antimicrobianos sinteacuteticos convencionais
tem encorajado a investigaccedilatildeo de produtos naturais com maior atividade terapecircutica menor
toxicidade maior biocompatibilidade com os tecidos moles e duros da cavidade oral e menor custo
para o controle quiacutemico do biofilme e o tratamento de diferentes infecccedilotildees orais (ALLAKER 2009)
Dentre esses produtos naturais cuja accedilatildeo antimicrobiana tem sido investigada merece
destaque o extrato da folha de Spondias mombin (S mombin L) espeacutecie vulgarmente conhecida
como cajaacute pertencente agrave famiacutelia Anacardiacea que estaacute distribuiacuteda em diversas regiotildees do Brasil e
de outros paiacuteses da Ameacuterica Latina (THADHANI et al 2012)
Considerando que S mombin L tem demonstrado muacuteltiplas atividades bioloacutegicas relevantes
agrave manutenccedilatildeo e ao restabelecimento da sauacutede bucal podendo assim ser utilizada como mateacuteria
prima para o desenvolvimento futuro de novos agentes antimicrobianos quiacutemicos torna-se de
extrema importacircncia investigar o seu efeito sobre os tecidos moles e duros da cavidade oral a fim
de que o mesmo seja administrado com eficaacutecia e seguranccedila
Frente ao exposto o presente estudo se propocircs a investigar o pH do extrato de Spondias
mombin L e avaliar o seu efeito sobre a superfiacutecie de dentes humanos no que diz respeito agraves
caracteriacutesticas cor rugosidade morfologia de superfiacutecie e molhabilidade comparando esse efeito
com aquele produzido pela soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 sobre essa mesma
superfiacutecie A hipoacutetese nula testada foi a de que natildeo havia diferenccedila entre o pH do extrato de
Spondias mombin L e o pH da soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012 assim como entre os
efeitos produzidos por essas substacircncias sobre as superfiacutecies de dentes humanos no tocante a todas
as variaacuteveis investigadas Ademais natildeo existem estudos na literatura vigente que tenham
investigado o referido extrato frente agrave superfiacutecie dentaacuteria fato este que destaca o ineditismo do
estudo em questatildeo e a sua importante contribuiccedilatildeo para os avanccedilos cientiacuteficos na aacuterea odontoloacutegica
18
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
21 Agentes quiacutemicos antimicrobianos
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar quando o controle mecacircnico no
sentido de evitar o acuacutemulo de bacteacuterias sobre os dentes natildeo puder ser realizado diariamente ou
estiver inadequado (ANDERSON 2003 LAING et al 2008)
Frente agraves limitaccedilotildees dos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal agentes quiacutemicos
antimicrobianos tecircm sido propostos principalmente nos casos em que haacute dificuldade de controle do
biofilme dentaacuterio e naqueles onde eacute necessaacuterio reduzir demasiadamente a quantidade de
microrganismos bucais (MOREIRA et al 2009 MARSH 2010)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico de moleacuteculas carregadas positivamente que apresenta um
largo espectro antimicrobiano pertencente agrave famiacutelia de compostos conhecidos como bisbiguanida
Sua moleacutecula se liga provavelmente atraveacutes de forccedilas eletrostaacuteticas aos grupos fosfato carboxila
ou sulfato tanto na mucosa bucal quanto nos microrganismos e na peliacutecula adquirida Sendo assim
a clorexidina compete com o caacutelcio comprometendo a aderecircncia bacteriana e consequentemente
inibindo a formaccedilatildeo do biofilme Tal substacircncia atinge seu efeito antimicrobiano atraveacutes de suas
atividades bactericida e bacteriostaacutetica Inicialmente quando aplicada na forma de soluccedilatildeo gel ou
verniz a concentraccedilatildeo eacute tal que o agente eacute bactericida Todavia a clorexidina tambeacutem se liga agraves
mucosas e superfiacutecies dos dentes e posteriormente eacute liberada de forma lenta em concentraccedilotildees
bacteriostaacuteticas durante vaacuterias horas Diante do exposto o que diferencia a clorexidina dos demais
agentes antimicrobianos eacute a sua substantividade Sua duraccedilatildeo de accedilatildeo eacute prolongada pela sua
habilidade de adsorccedilatildeo agraves estruturas bucais e posterior liberaccedilatildeo lenta na sua forma ativa (SILVA
1991 ROSA ROCHA 1993 MATTHIJS 2009 SOET et al 2002 FEJERSKOV KIDD 2005
VAN STRYDONCK et al 2005)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico catiocircnico que age contra uma ampla variedade de bacteacuterias
fungos e alguns viacuterus lipofiacutelicos (DENTON et al 1991) Seu efeito antibacteriano ocorre atraveacutes da
interaccedilatildeo natildeo-especiacutefica com o aacutecido fosfolipiacutedico da membrana celular causando alteraccedilotildees na
permeabilidade da membrana para iacuteons como potaacutessio e para constituintes do citosol como
aminoaacutecidos e nucleotiacutedeos Em altas concentraccedilotildees a atividade de enzimas associadas agrave
membrana como dehidrogenases e ATPase eacute indiretamente afetada (DAVIES 1973 BRECX
THEILADE 1984)
19
Dentre os agentes antimicrobianos bucais mais utilizados o digluconato de clorexidina
012 merece destaque devido ao seu potencial antimicrobiano e agrave sua caracteriacutestica de forte
adsorccedilatildeo agraves superfiacutecies bucais (MARSH 2010 SCHEIE PETERSEN 2011) A clorexidina
demonstrou ser eficaz contra vaacuterias bacteacuterias orais Devido ao seu amplo espectro antimicrobiano
atuando contra bacteacuterias Gram-positivas Gram-negativas e fungos tambeacutem tem sido utilizada para
tratar concomitantemente doenccedilas endodocircnticas (SIQUEIRA JR PAIVA ROcircCcedilAS 2007
VIANNA et al 2008) periodontais e para prevenir a progressatildeo de caacuterie (COSYN et al2006
DUARTE LOTUFO PANNUTI 2008) Visto que a clorexidina promove alguns efeitos colaterais
como pigmentaccedilatildeo dos dentes alteraccedilatildeo do paladar e descamaccedilatildeo da mucosa os antisseacutepticos que
tecircm como princiacutepio ativo o digluconato de clorexidina a 012 ou 02 apresentam meacutedia elevada
para o potencial de reduccedilatildeo da microbiota bucal quando comparados a outros antisseacutepticos
(MATOS et al 2015)
As propriedades de um antisseacuteptico ideal incluem estabilidade baixa tensatildeo superficial
letalidade em baixas concentraccedilotildees ausecircncia de toxicidade e poder de penetraccedilatildeo No entanto
nenhum produto disponiacutevel no mercado possui todos esses requisitos o que justifica os efeitos
colaterais e a pouca eficiecircncia apresentada por alguns (MOREIRA et al 2009 ZANIN et al 2007)
Diante dos efeitos colaterais do digluconato de clorexidina 012 e da sua possibilidade de
causar resistecircncia bacteriana torna-se necessaacuterio investigar as propriedades antimicrobianas de
novas substacircncias e com a rica diversidade da flora do Brasil parece salutar o estudo de produtos
derivados de plantas como princiacutepio ativo de possiacuteveis agentes antimicrobianos (MOTA
TURRINI POVEDA 2015)
O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibioacuteticos tem
se tornado um problema significante para a sauacutede puacuteblica As principais causas dessa resistecircncia
estatildeo associadas ao uso excessivo de antibioacuteticos nos tratamentos por prescriccedilotildees meacutedicas e agrave
capacidade de sobrevivecircncia intracelular de algumas bacteacuterias induzidas por certas infecccedilotildees que
impedem o acesso do medicamento em foco Observa-se que o alto custo dos medicamentos se
apresenta como um problema relevante para a populaccedilatildeo de baixa renda gerando assim a busca por
novos meacutetodos alternativos viaacuteveis como o uso dos fitoteraacutepicos (YUNES et al 2001)
22 Fitoterapia
Atualmente o uso de fitoteraacutepicos tem se intensificado em vaacuterios paiacuteses especialmente no
Brasil que possui uma flora rica e diversa com grande potencial para o desenvolvimento dessa
ciecircncia (ASSIS 2009 MOLINA et al 2008 MONTES et al 2009 OLIVEIRA et al 2007
TOMAZZONI NEGRELLE CENTA 2006)
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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5 10
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
2
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7
8
4 9
5 10
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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v
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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2
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6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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ANEXOS
57
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APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
18
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
21 Agentes quiacutemicos antimicrobianos
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar quando o controle mecacircnico no
sentido de evitar o acuacutemulo de bacteacuterias sobre os dentes natildeo puder ser realizado diariamente ou
estiver inadequado (ANDERSON 2003 LAING et al 2008)
Frente agraves limitaccedilotildees dos meacutetodos mecacircnicos de higiene bucal agentes quiacutemicos
antimicrobianos tecircm sido propostos principalmente nos casos em que haacute dificuldade de controle do
biofilme dentaacuterio e naqueles onde eacute necessaacuterio reduzir demasiadamente a quantidade de
microrganismos bucais (MOREIRA et al 2009 MARSH 2010)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico de moleacuteculas carregadas positivamente que apresenta um
largo espectro antimicrobiano pertencente agrave famiacutelia de compostos conhecidos como bisbiguanida
Sua moleacutecula se liga provavelmente atraveacutes de forccedilas eletrostaacuteticas aos grupos fosfato carboxila
ou sulfato tanto na mucosa bucal quanto nos microrganismos e na peliacutecula adquirida Sendo assim
a clorexidina compete com o caacutelcio comprometendo a aderecircncia bacteriana e consequentemente
inibindo a formaccedilatildeo do biofilme Tal substacircncia atinge seu efeito antimicrobiano atraveacutes de suas
atividades bactericida e bacteriostaacutetica Inicialmente quando aplicada na forma de soluccedilatildeo gel ou
verniz a concentraccedilatildeo eacute tal que o agente eacute bactericida Todavia a clorexidina tambeacutem se liga agraves
mucosas e superfiacutecies dos dentes e posteriormente eacute liberada de forma lenta em concentraccedilotildees
bacteriostaacuteticas durante vaacuterias horas Diante do exposto o que diferencia a clorexidina dos demais
agentes antimicrobianos eacute a sua substantividade Sua duraccedilatildeo de accedilatildeo eacute prolongada pela sua
habilidade de adsorccedilatildeo agraves estruturas bucais e posterior liberaccedilatildeo lenta na sua forma ativa (SILVA
1991 ROSA ROCHA 1993 MATTHIJS 2009 SOET et al 2002 FEJERSKOV KIDD 2005
VAN STRYDONCK et al 2005)
A clorexidina eacute um antisseacuteptico catiocircnico que age contra uma ampla variedade de bacteacuterias
fungos e alguns viacuterus lipofiacutelicos (DENTON et al 1991) Seu efeito antibacteriano ocorre atraveacutes da
interaccedilatildeo natildeo-especiacutefica com o aacutecido fosfolipiacutedico da membrana celular causando alteraccedilotildees na
permeabilidade da membrana para iacuteons como potaacutessio e para constituintes do citosol como
aminoaacutecidos e nucleotiacutedeos Em altas concentraccedilotildees a atividade de enzimas associadas agrave
membrana como dehidrogenases e ATPase eacute indiretamente afetada (DAVIES 1973 BRECX
THEILADE 1984)
19
Dentre os agentes antimicrobianos bucais mais utilizados o digluconato de clorexidina
012 merece destaque devido ao seu potencial antimicrobiano e agrave sua caracteriacutestica de forte
adsorccedilatildeo agraves superfiacutecies bucais (MARSH 2010 SCHEIE PETERSEN 2011) A clorexidina
demonstrou ser eficaz contra vaacuterias bacteacuterias orais Devido ao seu amplo espectro antimicrobiano
atuando contra bacteacuterias Gram-positivas Gram-negativas e fungos tambeacutem tem sido utilizada para
tratar concomitantemente doenccedilas endodocircnticas (SIQUEIRA JR PAIVA ROcircCcedilAS 2007
VIANNA et al 2008) periodontais e para prevenir a progressatildeo de caacuterie (COSYN et al2006
DUARTE LOTUFO PANNUTI 2008) Visto que a clorexidina promove alguns efeitos colaterais
como pigmentaccedilatildeo dos dentes alteraccedilatildeo do paladar e descamaccedilatildeo da mucosa os antisseacutepticos que
tecircm como princiacutepio ativo o digluconato de clorexidina a 012 ou 02 apresentam meacutedia elevada
para o potencial de reduccedilatildeo da microbiota bucal quando comparados a outros antisseacutepticos
(MATOS et al 2015)
As propriedades de um antisseacuteptico ideal incluem estabilidade baixa tensatildeo superficial
letalidade em baixas concentraccedilotildees ausecircncia de toxicidade e poder de penetraccedilatildeo No entanto
nenhum produto disponiacutevel no mercado possui todos esses requisitos o que justifica os efeitos
colaterais e a pouca eficiecircncia apresentada por alguns (MOREIRA et al 2009 ZANIN et al 2007)
Diante dos efeitos colaterais do digluconato de clorexidina 012 e da sua possibilidade de
causar resistecircncia bacteriana torna-se necessaacuterio investigar as propriedades antimicrobianas de
novas substacircncias e com a rica diversidade da flora do Brasil parece salutar o estudo de produtos
derivados de plantas como princiacutepio ativo de possiacuteveis agentes antimicrobianos (MOTA
TURRINI POVEDA 2015)
O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibioacuteticos tem
se tornado um problema significante para a sauacutede puacuteblica As principais causas dessa resistecircncia
estatildeo associadas ao uso excessivo de antibioacuteticos nos tratamentos por prescriccedilotildees meacutedicas e agrave
capacidade de sobrevivecircncia intracelular de algumas bacteacuterias induzidas por certas infecccedilotildees que
impedem o acesso do medicamento em foco Observa-se que o alto custo dos medicamentos se
apresenta como um problema relevante para a populaccedilatildeo de baixa renda gerando assim a busca por
novos meacutetodos alternativos viaacuteveis como o uso dos fitoteraacutepicos (YUNES et al 2001)
22 Fitoterapia
Atualmente o uso de fitoteraacutepicos tem se intensificado em vaacuterios paiacuteses especialmente no
Brasil que possui uma flora rica e diversa com grande potencial para o desenvolvimento dessa
ciecircncia (ASSIS 2009 MOLINA et al 2008 MONTES et al 2009 OLIVEIRA et al 2007
TOMAZZONI NEGRELLE CENTA 2006)
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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5 10
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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v
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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44
6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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ANEXOS
57
58
APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
19
Dentre os agentes antimicrobianos bucais mais utilizados o digluconato de clorexidina
012 merece destaque devido ao seu potencial antimicrobiano e agrave sua caracteriacutestica de forte
adsorccedilatildeo agraves superfiacutecies bucais (MARSH 2010 SCHEIE PETERSEN 2011) A clorexidina
demonstrou ser eficaz contra vaacuterias bacteacuterias orais Devido ao seu amplo espectro antimicrobiano
atuando contra bacteacuterias Gram-positivas Gram-negativas e fungos tambeacutem tem sido utilizada para
tratar concomitantemente doenccedilas endodocircnticas (SIQUEIRA JR PAIVA ROcircCcedilAS 2007
VIANNA et al 2008) periodontais e para prevenir a progressatildeo de caacuterie (COSYN et al2006
DUARTE LOTUFO PANNUTI 2008) Visto que a clorexidina promove alguns efeitos colaterais
como pigmentaccedilatildeo dos dentes alteraccedilatildeo do paladar e descamaccedilatildeo da mucosa os antisseacutepticos que
tecircm como princiacutepio ativo o digluconato de clorexidina a 012 ou 02 apresentam meacutedia elevada
para o potencial de reduccedilatildeo da microbiota bucal quando comparados a outros antisseacutepticos
(MATOS et al 2015)
As propriedades de um antisseacuteptico ideal incluem estabilidade baixa tensatildeo superficial
letalidade em baixas concentraccedilotildees ausecircncia de toxicidade e poder de penetraccedilatildeo No entanto
nenhum produto disponiacutevel no mercado possui todos esses requisitos o que justifica os efeitos
colaterais e a pouca eficiecircncia apresentada por alguns (MOREIRA et al 2009 ZANIN et al 2007)
Diante dos efeitos colaterais do digluconato de clorexidina 012 e da sua possibilidade de
causar resistecircncia bacteriana torna-se necessaacuterio investigar as propriedades antimicrobianas de
novas substacircncias e com a rica diversidade da flora do Brasil parece salutar o estudo de produtos
derivados de plantas como princiacutepio ativo de possiacuteveis agentes antimicrobianos (MOTA
TURRINI POVEDA 2015)
O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibioacuteticos tem
se tornado um problema significante para a sauacutede puacuteblica As principais causas dessa resistecircncia
estatildeo associadas ao uso excessivo de antibioacuteticos nos tratamentos por prescriccedilotildees meacutedicas e agrave
capacidade de sobrevivecircncia intracelular de algumas bacteacuterias induzidas por certas infecccedilotildees que
impedem o acesso do medicamento em foco Observa-se que o alto custo dos medicamentos se
apresenta como um problema relevante para a populaccedilatildeo de baixa renda gerando assim a busca por
novos meacutetodos alternativos viaacuteveis como o uso dos fitoteraacutepicos (YUNES et al 2001)
22 Fitoterapia
Atualmente o uso de fitoteraacutepicos tem se intensificado em vaacuterios paiacuteses especialmente no
Brasil que possui uma flora rica e diversa com grande potencial para o desenvolvimento dessa
ciecircncia (ASSIS 2009 MOLINA et al 2008 MONTES et al 2009 OLIVEIRA et al 2007
TOMAZZONI NEGRELLE CENTA 2006)
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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VAN STRYDONCK DA Plaque Inhibition of Two Commercially Available Chlorhexidine
Mouthrinses J Clin Periodontol Copenhagen v 32 no 3 p 305-309 Mar 2005
55
VIANNA ME HORZ HP CONRADS G FERES M GOMES BP Anaacutelise
comparativa de patoacutegenos endodocircnticos usando hibridaccedilatildeo de xadrez em relaccedilatildeo agrave
cultura Oral Microbiol Immunol v23 p 282-290 2008
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WITKOWSKI S YAJIMA ND WOLKEWITZ M STRUB JR Reliability of shade
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YUNES R A Plantas medicinais sob a oacutetica da moderna quiacutemica medicinal 1 ed
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ZANIN SMW et al Enxaguatoacuterio Bucal principais ativos e desenvolvimento de foacutermula
contendo extrato hidroalcooacutelico de Salviaofficinalis L Visatildeo Acadecircmica Curitiba v8 n1
janndash jun 2007
56
ANEXOS
57
58
APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
20
Os fitoteraacutepicos e fitocosmeacuteticos fazem parte de um setor do mercado e da sociedade tanto
que existem poliacuteticas puacuteblicas especiacuteficas para sua reproduccedilatildeo enquanto atividades econocircmica e
social como ocorre com a Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Os medicamentos
fitoteraacutepicos satildeo descritos pela ANVISA como preparaccedilotildees obtidas empregando-se exclusivamente
mateacuteria-prima vegetal ativa podendo estar disponiacuteveis na forma soacutelida ou liacutequida Os extratos
liacutequidos satildeo normalmente preparados com etanol e aacutegua (ANVISA 2017)
A partir da Resoluccedilatildeo - RDC Nordm 26 DE 13 DE MAIO DE 2014 - Dispotildee sobre o registro de
medicamentos fitoteraacutepicos e o registro e a notificaccedilatildeo de produtos tradicionais fitoteraacutepicos
(BRASIL2019) Satildeo considerados produtos tradicionais fitoteraacutepicos os obtidos com emprego
exclusivo de mateacuterias-primas vegetais cuja seguranccedila e efetividade seja baseada na
tradicionalidade de uso e que sejam caracterizados pela constacircncia de sua qualidade (ANVISA
2017)
Em relaccedilatildeo agrave fitoterapia o Decreto Federal nordm 5813 (22062006) aprovou a Poliacutetica
Nacional de Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos (PNPMF) e criou o Grupo de Trabalho
Interministerial com participaccedilatildeo da sociedade civil para elaboraccedilatildeo do Programa Nacional de
Plantas Medicinais e Fitoteraacutepicos Ressalta-se que esse Decreto possui o objetivo de garantir agrave
populaccedilatildeo brasileira o acesso seguro e o uso racional de plantas medicinais e fitoteraacutepicos
promovendo o uso sustentaacutevel da biodiversidade o desenvolvimento da cadeia produtiva e da
induacutestria nacional (BRASIL 2019)
Em 2008 foi realizado o Foacuterum para Regulamentaccedilatildeo das Praacuteticas Integrativas e
Complementares agrave Sauacutede Bucal onde foi discutido a regulamentaccedilatildeo da Fitoterapia Homeopatia
Acupuntura Terapia Floral e Laserterapia Levando-se em consideraccedilatildeo as recomendaccedilotildees da
Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede e dos avanccedilos das poliacuteticas puacuteblicas de incremento agraves praacuteticas
integrativas nas Ciecircncias da Sauacutede e sendo da competecircncia do Conselho Federal de Odontologia
supervisionar a eacutetica profissional zelando pelo bem da profissatildeo resolve atraveacutes do Resoluccedilatildeo
CFO-822008 reconhecer e regulamentar o uso de Praacuteticas Integrativas e Complementares agrave Sauacutede
bucal (Conselho Federal de Odontologia2019)
Estudos avaliando fitoteraacutepicos como Cravo da Iacutendia Romatilde Malva Tanchagem Amoreira
Saacutelvia Camomila entre outras tem sido investigada na odontologia por serem alternativas viaacuteveis
no tratamento de aftas gengivites e abscessos bucais (Oliveira et al2007) Essas plantas tecircm
apresentado accedilatildeo bactericida e bacteriostaacutetica sobre bacteacuterias Gram-positivas e Gram-negativas
constituintes do biofilme dental (Pereira et al 2006)
221 Spondias mombin L
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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4
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8
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5 10
39
Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
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7
8
4 9
5 10
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
4
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v
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
2
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44
6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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ANEXOS
57
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APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
21
A espeacutecie Spondias mombin L pertence agrave famiacutelia Anacardiaceae e eacute distribuiacuteda em todo o
Brasil sendo o seu fruto conhecido por diversos nomes regionais incluindo taperebaacute na Amazocircnia
pequeno cajaacute no Sudeste cajamirim no sul ou simplesmente Cajaacute no nordeste (BOSCO 2000)
O cajaacute eacute rico em vitaminas A B1 B2 e C caacutelcio foacutesforo potaacutessio carotenoides e taninos
sendo por isso utilizado na culinaacuteria A madeira de cajaacute eacute empregada na induacutestria de fabricaccedilatildeo de
moacuteveis enquanto a casca e as folhas satildeo usadas na medicina popular (SACRAMENTO 2000)
Ajao Shonukan amp B Femi-Onadeko (1995) trata-se do primeiro relato da validaccedilatildeo do
uso popular do Smombin como antibacteriano atraveacutes de um estudo in vitro avaliaram os extratos
aquoso e etanoacutelico de folhas de cajazeira (S mombin) e observaram que as zonas de inibiccedilatildeo Para
as bacteacuterias Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus e Escherichia coli satildeo todos
resistentes a 10 pg de estreptomicina Entretanto esses mesmos organismos satildeo suscetiacuteveis a 25 microL
de extratos alcooacutelicos de S mombin
A atividade antimicrobiana do extrato de S mombin L eacute atribuiacuteda em parte agrave presenccedila de
um derivado do aacutecido anarcaacutedico que possui a capacidade de inibir a enzima β-lactamase assim
como o faz o aacutecido clavulacircnico antibacteriano comercialmente conhecido (CORTHOU et al1994)
Diversos estudos preliminares realizados in vitro (LIMA 2015 LIMA 2016 MACEcircDO-COSTA
2016 ALVES 2017) confirmaram essa atividade do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais e microrganismos superinfectantes e oportunistas
Estudos fitoquiacutemicos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015 CABRAL et al 2016)
identificaram no extrato de S mombin L a presenccedila de taninos saponinas esteroacuteis triterpenos
flavonoides alcaloides e compostos fenoacutelicos A presenccedila desses componentes no extrato de S
mombin L natildeo apenas justifica a sua accedilatildeo antibacteriana como tambeacutem indica atividades de
natureza antiviral antioxidante anti-inflamatoacuteria e antitumoral
Em um estudo in vitro (SACRAMENTO 2000) os extratos aquosos e etanoacutelico de folhas
de cajazeira (S mombin) inibiram o crescimento bacteriano tendo sido este o primeiro relato da
validaccedilatildeo do uso popular dessa espeacutecie como antibacteriano A atividade antibacteriana do cajaacute
ocorre pela presenccedila do derivado de aacutecido anarcaacutedico isolado das folhas de S mombin que possui
a capacidade de inibir a enzima β-lactamase atividade atribuiacuteda tambeacutem ao aacutecido clavulacircnico
antibacteriano comercialmente conhecido
Outros compostos secundaacuterios foram isolados das folhas e cascas dessa espeacutecie
identificados como aacutecido 2-O-cafeicol-(+)-alohidroxiciacutetrico e butil eacutester de aacutecido clorogecircnico que
mostraram consideraacutevel atividade antiviral (CORTHOUT 1994) bem como o aacutecido elaacutegico e a
quercetina isolados das folhas que apresentaram atividade antiviral contra o viacuterus da dengue tipo
2 (SILVA 2011)
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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56
ANEXOS
57
58
APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
22
Essas plantas satildeo capazes ainda de produzir algumas substacircncias com potencial
antimicrobiano cujas propriedades bacteriostaacuteticas e fungiostaacuteticas tecircm sido comprovadas em
vaacuterios trabalhos cientiacuteficos (LIMA et al 2010)
Extratos vegetais mostraram-se eficientes na inibiccedilatildeo do crescimento de uma ampla
variedade de microrganismos incluindo fungos leveduras bacteacuterias e parasitas Com o aumento
dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas observou-se que a
espeacutecie Spondias mombin continha substacircncias que lhe conferiam propriedades medicinais para o
controle de bacteacuterias Gram-negativas e Gram-positivas (YUNES et al 2001)
Ao avaliarem in vitro a accedilatildeo antimicrobiana do extrato de S mombin L frente a bacteacuterias
bucais do gecircnero Streptococcus (LIMA 2016) e microrganismos superinfectantes e oportunistas
(LIMA 2015 MACEcircDO-COSTA 2016 ALVES 2017) diferentes experimentos confirmaram a
eficaacutecia dessa atividade Componentes como taninos saponinas esteroacuteis triterpenos flavonoides
alcaloides e compostos fenoacutelicos foram identificados no extrato de S mombin L atraveacutes da triagem
fitoquiacutemica do mesmo realizada em diferentes estudos (ASUQUO et al 2012 LIMA 2015
CABRAL et al 2016) os quais associaram a presenccedila dessas fraccedilotildees agraves atividades antimicrobiana
anti-inflamatoacuteria anti-oxidante e antitumoral do extrato em questatildeo
23 Caracteriacutesticas da superfiacutecie dentaacuteria
O esmalte dentaacuterio eacute o tecido mais mineralizado do organismo sendo de origem
ectodeacutermica formado pelas ceacutelulas do epiteacutelio interno do oacutergatildeo do esmalte recobrindo a coroa dos
dentes (KATCHBURIAN et al1996) O processo de formaccedilatildeo do esmalte (amelogecircnese) tem seu
iniacutecio na fase de coroa do desenvolvimento do dente e consiste basicamente em dois estaacutegios
secreccedilatildeo onde os ameloblastos produzem o esmalte parcialmente mineralizado (30) e maturaccedilatildeo
que consiste na deposiccedilatildeo de mineral remoccedilatildeo de mateacuteria orgacircnica e aacutegua (TEN CATE 2001)
Segundo Ferraris (2006) o esmalte tambeacutem chamado de tecido adamantino cobre a dentina
em sua porccedilatildeo coronaacuteria oferecendo proteccedilatildeo a esse tecido subjacente Eacute o tecido mais duro do
organismo por ser constituiacutedo por milhotildees de prismas altamente mineralizados aleacutem de ser
acelular avascular e apresentar dificuldades de reparar-se frente a um trauma A permeabilidade do
esmalte eacute escassa atuando no entanto como uma membrana semipermeaacutevel que permite a difusatildeo
de aacutegua e de alguns iacuteons
O esmalte eacute sintetizado pelos ameloblastos e essas ceacutelulas satildeo sensiacuteveis agraves variaccedilotildees
metaboacutelicas que ocorrem no organismo Estrias de Retzius satildeo linhas que aparecem durante a
formaccedilatildeo do esmalte Com a mineralizaccedilatildeo da matriz do esmalte elas satildeo depositadas e promovem
o crescimento linear do esmalte Linhas incrementais acentuadas aparecem devido agrave variaccedilatildeo de
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
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3
4
6
7
8
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5 10
39
Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
2
3
6
7
8
4 9
5 10
40
Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
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9 4
10 5
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
4
10 5
9
8 3
v
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
2
3
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9
8
7
6
5
4
44
6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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ANEXOS
57
58
APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
23
deposiccedilatildeo de mineral em alguns pontos ou podem estar relacionadas a alteraccedilotildees metaboacutelicas
oriundas de problemas sistecircmicos que afetam a amelogecircnese (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
A linha neonatal eacute um alargamento da estria de Retzius que se forma durante a transiccedilatildeo das vidas
intra e extrauterina e pode ser observada em caninos e primeiros molares deciacuteduos A proeminecircncia
desta linha reflete mudanccedilas nutricionais e ambientais sofridas no momento do nascimento (TEN
CATE 1998 AVERY 2000)
Bandas de Hunter-Schreger resultam de um fenocircmeno oacuteptico produzido pela diferente
inclinaccedilatildeo de grupos de prismas adjacentes Satildeo visualizadas microscopicamente como bandas
alternadas claras e escuras que resultam da incidecircncia luminosa pois a luz eacute transmitida ao longo
eixo de um grupo de prismas e de outro grupo adjacente natildeo Alterando a direccedilatildeo de luz as bandas
podem ser invertidas (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Na zona de esmalte aprismaacutetico natildeo se
observa o efeito das bandas de Hunter-Schreger (AVERY 2000) Proacuteximo agrave dentina existem aacutereas
prismaacuteticas hipomineralizadas com aspecto ramificado denominadas tufos Aparecem entre os
grupos de prismas de esmalte formando um acircngulo reto com a junccedilatildeo amelodentinaacuteria Tais
defeitos satildeo preenchidos com material orgacircnico (TEN CATE 1998 AVERY 2000)
As lamelas de esmalte satildeo camadas verticais da matriz parcialmente mineralizadas que se
estendem da junccedilatildeo amelodentinaacuteria ateacute a superfiacutecie do esmalte Satildeo preenchidas com resiacuteduos
orgacircnicos originaacuterios da cavidade bucal ou com proteiacutenas do esmalte As lamelas satildeo mais estreitas
e mais longas que os tufos de esmalte e satildeo consideradas como uma anomalia do processo de
cristalizaccedilatildeo do tecido (TEN CATE 1998 AVERY 2000) Como a dentina se forma antes do
esmalte alguns processos odontoblaacutesticos ficam aprisionados no esmalte Essas extensotildees deixadas
no esmalte pelos prolongamentos dos odontoblastos satildeo os fusos de esmalte (AVERY 2000)
24 Alteraccedilotildees na superfiacutecie dentaacuteria causadas por substacircncias quiacutemicas
Os meacutetodos mecacircnicos para limpeza dentaacuteria devem ser a escolha antes da utilizaccedilatildeo de
qualquer tipo de agente quiacutemico para o controle rotineiro do biofilme dentaacuterio O controle quiacutemico
do biofilme dentaacuterio deveraacute ser empregado de forma suplementar (ANDERSON 2003 LAING et
al 2008)
As manchas dentais reconhecidamente extriacutensecas tecircm como caracteriacutestica o alcance de
aacutereas superficiais externas dos dentes mais frequentemente o esmalte pelas substacircncias quiacutemicas
pigmentadas que terminam por se precipitar na superfiacutecie dental Resultam na maioria das vezes
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
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ANEXOS
57
58
APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
24
do contato intermitente dos alimentos com as estruturas que constituem o meio bucal em particular
as unidades dentais desde sua erupccedilatildeo (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001
PONTEFRACT 2004)
A relativa permeabilidade do esmalte dental agravada pela ocorrecircncia de poros se
configura como um elemento facilitador ao surgimento das manchas externas favorecendo dessa
forma a agregaccedilatildeo e a deposiccedilatildeo das mais diversas substacircncias de baixo peso molecular como as
que estatildeo presentes no cafeacute no chaacute preto no tabaco em vinhos tintos no chimarratildeo na beterraba
e em bebidas agrave base de cola (BARATIERI et al2001 WATTS ADDY 2001 PONTEFRACT
2004)
O consumo das substacircncias citadas acelera o processo de impregnaccedilatildeo de pigmentos e
corantes na estrutura dental Ao concluir essa anaacutelise Baratieri et al (2001) destacam que a
rugosidade da proacutepria superfiacutecie a porosidade interna a presenccedila de trincas e a ocorrecircncia de
fendas sulcos e depressotildees presentes na estrutura superficial do esmalte dental podem vir a
contribuir para essa forma de manchamento
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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ANEXOS
57
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APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
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Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
25
3 OBJETIVOS
31 OBJETIVO GERAL
Avaliar o efeito do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L sobre a superfiacutecie de
dentes humanos
32 OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
a) Investigar o pH do extrato de S mombin L
b) Verificar a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria frente ao referido extrato
c) Avaliar a molhabilidade do extrato de S mombin L na superfiacutecie dentaacuteria
d) Observar a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
e) Avaliar a morfologia da superfiacutecie dentaacuteria antes e apoacutes o contato com tal extrato
f) Comparar o pH do extrato de S mombin L com o pH do digluconato de clorexidina
012
g) Comparar os efeitos do extrato de S mombin L sobre as caracteriacutesticas de rugosidade
molhabilidade coloraccedilatildeo e morfologia da superfiacutecie dentaacuteria com aqueles produzidos
pelo digluconato de clorexidina 012 sobre essas mesmas caracteriacutesticas de superfiacutecie
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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ZANIN SMW et al Enxaguatoacuterio Bucal principais ativos e desenvolvimento de foacutermula
contendo extrato hidroalcooacutelico de Salviaofficinalis L Visatildeo Acadecircmica Curitiba v8 n1
janndash jun 2007
56
ANEXOS
57
58
APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
59
Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
26
4 MEacuteTODO
41 CARACTERIZACcedilAtildeO DO ESTUDO
Este estudo eacute caracterizado como um ensaio laboratorial ldquoin vitrordquo cujas variaacuteveis de
resposta satildeo pH molhabilidade rugosidade cor e morfologia de superfiacutecie Os fatores em
estudo satildeo o extrato de S mombin L e a soluccedilatildeo de digluconato de clorexidina 012
42 CONSIDERACcedilOtildeES EacuteTICAS
A presente pesquisa foi submetida ao Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa (CEP) da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) CAAE 90985118500005292 tendo
seu parecer (0609702018) aprovado de acordo com as normas e diretrizes regulamentadoras
de pesquisas envolvendo seres humanos regidas pela resoluccedilatildeo nordm4662012 ndash CNS
Respeitando a identidade dos voluntaacuterios foi utilizado um Termo de Consentimento Livre e
Esclarecido (TCLE) (APEcircNDICE A) no qual foi explicitado o riscobenefiacutecio da pesquisa
43 SELECcedilAtildeO PREPARACcedilAtildeO ARMAZENAMENTO E DIVISAtildeO DA AMOSTRA
A seleccedilatildeo da amostra ocorreu por conveniecircncia cujo tamanho foi determinando com
base em estudos anteriores que analisaram o efeito de soluccedilotildees sobre a superfiacutecie dentaacuteria
sendo assim coletados 30 dentes terceiros molares humanos hiacutegidos parcialmente
erupcionados extraiacutedos por razotildees ciruacutergicas de pacientes de uma Cliacutenica Escola de
Odontologia do Rio Grande do Norte e doados pelos mesmos apoacutes o consentimento informado
ter sido obtido no acircmbito de um protocolo revisado e aprovado pelo CEP da UFRN Natal
Brasil
Apoacutes a extraccedilatildeo dos dentes foi realizada a remoccedilatildeo de detritos orgacircnicos dos mesmos
os quais foram seccionados longitudinalmente separando as faces proximais (Mesial-Distal)
com fresas de diamante em alta velocidade sob refrigeraccedilatildeo abundante com aacutegua e baixa
rotaccedilatildeo (Figura 1) As superfiacutecies proximais desses dentes foram seccionadas e padronizadas
(Figura 2) e as amostras obtidas armazenadas em tubos com aacutegua destilada a 37degC a fim de
evitar seu ressecamento e desmineralizaccedilatildeo
27
Figura 1 Seccionamento do dente com fresas de diamante em alta velocidade sob baixa
rotaccedilatildeo
Fonte Autora (2019)
Figura 2 Padronizaccedilatildeo das amostras apoacutes o seccionamento
Fonte Autora (2019)
28
A amostra (n=30) do experimento foi distribuiacuteda em 3 (trecircs) grupos sendo eles
Grupo 1 Extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L n=10
Grupo 2 Digluconato de Clorexidina 012 n= 10
Grupo 3 Aacutegua Destilada (grupo controle) n=10
O extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L foi usado em sua diluiccedilatildeo 132 = 3125
(mgmL) diluiacutedo em aacutelcool e aacutegua destilada Essa concentraccedilatildeo do extrato de Spondias mombin
L foi definida com base no estudo de Lima Lins e Costa (2017) que verificou que o extrato
de Spondias mombin L apresentou atividade antimicrobiana superior ao digluconato de
clorexidina 012 somente a partir da referida concentraccedilatildeo
44 PREPARACcedilAtildeO DO EXTRATO DE SPONDIAS MOMBIN L
A mateacuteria prima vegetal foi coletada em 2011 As folhas de S mombin foram adquiridas
numa fazenda particular na regiatildeo de Taacutebua em Dom Marcolino Dantas RN com coordenadas
(Taacutebua- RN S Sdeg 28rsquo 14rsquorsquo W 35deg 27rsquo 37rsquorsquo) A amostra coletada foi depositada no herbaacuterio da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) e identificado pelo botacircnico Alan Roque
(exsicata 12252) Antes de coletado o material foram obtidas a autorizaccedilatildeo do Sistema de
Autorizaccedilatildeo e Informaccedilatildeo em Biodiversidade (SISBio)Ministeacuterio do Meio Ambiente (processo
35017) e a autorizaccedilatildeo para o acesso ao patrimocircnio geneacutetico com finalidade de pesquisa
cientiacutefica via Plataforma Carlos ChagasCNPq (processo 0106882012-9) Houve tambeacutem o
registro da pesquisa na plataforma do Sistema Nacional de Gestatildeo do Patrimocircnio Geneacutetico e do
Conhecimento Tradicional Associado (SISGEN) cadastrado com o nuacutemero (A9CFA46)
As folhas coletadas de S mombin foram submetidas agrave secagem na sombra sob
temperatura ambiente por duas semanas Logo apoacutes as folhas foram trituradas em um moinho
de facas A partir de 100 g da droga vegetal de S mombin L foi preparado um extrato por
maceraccedilatildeo que consistiu em deixar a droga vegetal em contato com etanol aacutegua destilada
(8020 vv) durante sete dias e posterior liofilizaccedilatildeo Apoacutes esse periacuteodo o extrato foi filtrado
obtendo-se assim o extrato hidroetanoacutelico das folhas O extrato obtido foi concentrado sob
pressatildeo reduzida com auxiacutelio de um evaporador rotatoacuterio agrave temperatura de 45degC ateacute a
eliminaccedilatildeo total do solvente orgacircnico A preparaccedilatildeo desse extrato foi realizada no Laboratoacuterio
29
de Farmacognosia do Departamento de Farmaacutecia ndash Universidade Federal do Rio Grande do
Norte (Figura 3) sob colaboraccedilatildeo com a professora Drordf Silvana M Zucolotto
Figura 3 Preparaccedilatildeo do extrato de S mombin L
Legenda A Pesagem da folha do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L apoacutes trituraccedilatildeo B Evaporador
rotatoacuterio a 45 ordm para eliminaccedilatildeo do solvente Fonte Autora (2019)
45 DETERMINACcedilAtildeO DO PH DO EXTRATO
Para determinaccedilatildeo do pH das soluccedilotildees extrativas 100 mL de cada soluccedilatildeo em teste foi
analisada em um phmetro calibrado com soluccedilotildees tampotildees de fosfato e acetato com pH 70 e
40 respectivamente agrave 25 degC As anaacutelises foram realizadas em triplicata (SILVA 2016) Foi
utilizado o medidor de pH de bancada (LUCA-210-E LUCADEMA Satildeo Joseacute do Rio Preto
Brasil) (Figura 4)
Figura 4 Soluccedilotildees em anaacutelise no medidor de pH
Legenda A Leitura no medidor de pH da soluccedilatildeo de Digluconato de Clorexidina 012
B Leitura no medidor de pH do extrato de Spondias mombin L Fonte Autora (2019)
46 PROTOCOLO DE IMERSAtildeO
B
A
A B
30
Cada corpo de prova foi posicionado individualmente no interior de um frasco contendo
10mL da soluccedilatildeo especiacutefica para cada grupo durante 1min sob agitaccedilatildeo duas vezes ao dia
com intervalos de 1212h por 15 dias No intervalo entre as imersotildees as amostras foram
armazenadas em saliva artificial (PELINO et al 2018 TORRES et al 2019) Amostras
irregulares ou manchadas foram descartadas
47 AVALIACcedilAtildeO DO AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
As propriedades fiacutesico-quiacutemicas da superfiacutecie do esmalte foram caracterizadas por
medidas de acircngulo de contato utilizando o meacutetodo da gota seacutessil para determinar a energia livre
de superfiacutecie Depois 05μL de cada liacutequido foi dispensado com pipeta automaacutetica na
superfiacutecie do esmalte de cada fragmento dentaacuterio utilizando uma agulha de 05mm de calibre
(NEVES et al 2018) As imagens foram capturadas por uma cacircmera Nikon e analisadas no
software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) adaptando suas
configuraccedilotildees para ldquoaacutegua destiladardquo e ldquoanaacutelise em 4 pontosrdquo Nesse software a imagem foi
aberta ampliada centralizada e posteriormente recebeu as 4 (quatro) marcaccedilotildees a primeira
exatamente na intercessatildeo do acircngulo formado entre a superfiacutecie do espeacutecime e a gota a segunda
e a terceira marcaccedilotildees em dois locais aleatoacuterios da superfiacutecie da gota e por fim a marcaccedilatildeo no
outro ponto de intercessatildeo entre a superfiacutecie da amostra e o final da gota Automaticamente
apoacutes a marcaccedilatildeo do uacuteltimo ponto o software traccedilou o acircngulo de contato da gota com o espeacutecime
e forneceu o seu valor Cada imagem foi analisada em triplicata E os dados dos acircngulos de
contato de cada grupo foram submetidos agrave anaacutelise (Figuras 5 e 6)
Figura 5 Softaware utilizado para anaacutelise da gota sobre a superfiacutecie dentaacuteria (Surftens)
Legenda Software Surftens 47 Automatic (OEG GmbH Frankfurt Oder Alemanha) Fonte Autora2019
31
Figura 6 Inserccedilatildeo da gota na superfiacutecie do dente para anaacutelise da molhabilidade
Fonte Autora (2019)
48 AVALIACcedilAtildeO DA RUGOSIDADE
A anaacutelise da rugosidade da superfiacutecie foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa -BLOCO
G da Faculdade de Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista
antes (T1) e depois (T2) do processo de envelhecimento artificial nas amostras dos grupo 1 2
e 3 utilizando o Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology
Germany GmbH) (Figura 7) Esse instrumento eacute equipado com uma agulha de diamante com
um raio de 2mm Para fazer mediccedilotildees da rugosidade a agulha eacute movida a uma velocidade
constante de 05mms com uma carga de 07mN O valor de corte foi definido em 025mm A
rugosidade superficial foi caracterizada pela rugosidade meacutedia (Ra) que eacute o valor da meacutedia
aritmeacutetica de todas as distacircncias absolutas do perfil de rugosidade a partir da linha de centro
dentro do comprimento de medida Valores de Ra para cada amostra foram tomados ao longo
do diacircmetro sobre um comprimento padratildeo de 025 mm Trecircs traccedilos (paralelo obliacutequo e
perpendicular) foram registrados em cada amostra em trecircs diferentes locais (LIMA et al 2015
SOUZA et al 2018)
32
Figura 7 Equipamento de leitura da rugosidade
Legenda Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
Fonte JENOPTIK (2019)
49 AVALIACcedilAtildeO DA COR
Essa anaacutelise foi realizada no Laboratoacuterio de Pesquisa - BLOCO G da Faculdade de
Odontologia de Presidente Prudente da Universidade do Oeste Paulista Todos os corpos de
prova foram submetidos a uma anaacutelise cromaacutetica inicial por meio de um espectrofotocircmetro
VITA Easyshadereg Compact (Figura 8) que foi calibrado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante com a avaliaccedilatildeo de cor calculada atraveacutes do Sistema CIE Lab estabelecido pela
Comission Internacionale de IrsquoEclairaga ndash CIE Este consiste de dois eixos a e b que
possuem acircngulos retos e representam a dimensatildeo da tonalidade ou cor (a proporccedilatildeo vermelho-
verde b proporccedilatildeo amarelo-azul) O terceiro eixo eacute o brilho representado pela letra L que
eacute perpendicular ao plano ab Com tal sistema qualquer cor pode ser especificada com as
coordenadas L a b (STOBER et al 2001 SCHULZE et al 2003 PELINO et al 2017)
Figura 8 Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg Compact
Fonte VITA (2019)
33
O meacutetodo de envelhecimento consistiu na imersatildeo das amostras nas trecircs soluccedilotildees
testadas (clorexidina extrato e aacutegua destilada) por 1 minuto duas vezes ao dia durante 15 dias
A estabilidade de cor foi determinada pela diferenccedila (ΔE) entre as coordenadas obtidas das
amostras antes e apoacutes o procedimento de envelhecimento A mudanccedila total de cor ΔE eacute
comumente usada para representar uma diferenccedila de cor e eacute calculada a partir da foacutermula ΔE
= radic (ΔL)2 + (Δa)2 + (Δb)2
410 MORFOLOGIA DA SUPERFIacuteCIE DENTAacuteRIA
Essa anaacutelise foi realizada no Departamento de Ciecircncias dos Materiais da Universidade
Federal do Rio Grande do Norte Para a anaacutelise morfoloacutegica as amostras foram submetidas ao
Microscoacutepio Eletrocircnico de Varredura (MEV-FEG Zeiss Auriga 40 1 Alemanha) (Figura 9)
onde foram feitas leituras com aumentos de 1000X 2000X 3000X e 4000X e fornecidas
imagens A anaacutelise inicial foi realizada previamente ao protocolo de imersatildeo sem nenhum
tratamento E apoacutes o protocolo de imersatildeo foram submetidas a anaacutelise final as amostras foram
metalizadas e montadas em bases de alumiacutenio com fita metaacutelica dupla face
Figura 9 Imagem dos espeacutecimes preparados para anaacutelise no MEV-FEG
Fonte Autora (2019)
34
Figura 10 Imagem ilustrativa com a demonstraccedilatildeo da metodologia
Legenda A cortes horizontais e verticais ao longo eixo para obtenccedilatildeo de faixa de superfiacutecie de esmalte dentaacuteria
B seccionamento das faces vestibular e lingualpalatina para obtenccedilatildeo de superfiacutecie proximal mesial e distal com
tamanho padronizado C Rugosiacutemetro Hommel Etamic W10 (JENOPTIK Industrial Metrology Germany GmbH)
para avaliaccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes a imersatildeo nas soluccedilotildees D Espectrofotocircmetro VITA Easyshadereg
Compact utilizado na leitura da alteraccedilatildeo de cor antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo EAnaacutelise no MEV FEGEDS
para mapeamento e quantificaccedilatildeo da composiccedilatildeo quiacutemica dos fragmentos dentaacuterios antes e apoacutes protocolo de
imersatildeo Fgotejamento de gota padronizada para anaacutelise do acircngulo de contato de cada soluccedilatildeo antes e apoacutes o
protocolo de imersatildeo G Distribuiccedilatildeo dos grupos com protocolo de imersatildeo utilizado
Fonte Autora (2019)
411 ANAacuteLISE DOS DADOS
Os dados foram apresentados como meacutedias + erro padratildeo da meacutedia Os valores finais
das amostras de cada teste foram submetidos ao teste de normalidade atraveacutes do teste de
Kolmogorv ndash Sminorv O acircngulo de contato e a cor foram examinados pela anaacutelise de variacircncia
(ANOVA) um fator e a rugosidade foi examinada pela anaacutelise de variacircncia (ANOVA) dois
fatores e pelo teste de Tukey (p lt005) Os testes estatiacutesticos foram realizados utilizando-se o
software GraphPad Prisma 8 A morfologia e o pH foram analisados descritivamente
35
5 RESULTADOS
51 pH DAS SUBSTAcircNCIAS TESTADAS
Ao avaliar o pH das susbtacircncias testadas as meacutedias obtidas foram 295 para o extrato
hidroetanoacutelico de S mombin L e 65 para o digluconato de clorexidina 012 (Graacutefico 1)
Graacutefico 1 Resultados das meacutedias do pH do extrato hidroetanoacutelico
de Smombin L e do Digluconato de Clorexidina 012
Fonte Autora (2019)
52 AcircNGULO DE CONTATOMOLHABILIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre as substacircncias
testadas quanto agrave molhabilidade As comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 1
Tabela 1 Meacutedias (desvios-padrotildees) da molhabilidade das substacircncias testadas
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Fonte Autora (2019)
EXT CLX AD
AcircNGULO DE
CONTATO
6734plusmn (741) A 7227plusmn (777) A 6745plusmn (530) A
36
53 COR
No que diz respeito agrave cor da superfiacutecie dentaacuteria somente a aacutegua destilada natildeo provocou
alteraccedilotildees estatisticamente significativas (pgt005) Tanto o extrato de S mombin L quanto o
digluconato de clorexidina 012 alteraram significativamente (plt005) a cor da superfiacutecie
dentaacuteria especialmente o extrato que exibiu as mais elevadas meacutedias de anaacutelise de cor As
comparaccedilotildees entre os grupos estatildeo listadas na Tabela 2
Tabela 2 Meacutedias (desvios-padrotildees) das anaacutelises de cor valores de (ΔE)
EXT CLX AD
COR 1478plusmn(305)A 796plusmn(334)B 448plusmn(086)C
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas diferentes denotam que houve diferenccedilas estatisticamente
significativas nas linhas (p lt 0001)
Fonte Autora (2019)
54 RUGOSIDADE
Natildeo houve diferenccedila estatisticamente significativa (pgt005) entre os trecircs grupos
investigados com relaccedilatildeo agrave rugosidade de superfiacutecie produzida nem mesmo quando o fator
tempo foi considerado comparando-se as meacutedias dos valores de rugosidade produzidos pela
mesma substacircncia em tempos diferentes (inicial ndash T1 e final ndash T2) e tambeacutem as meacutedias dos
valores de rugosidade produzidos por substacircncias diferentes dentro de um mesmo tempo (T1
ou T2) Ou seja natildeo foram encontradas diferenccedilas estatisticamente significativas quanto agrave
rugosidade de superfiacutecie produzida pelas trecircs substacircncias testadas independentemente do
tempo de avaliaccedilatildeo As comparaccedilotildees intra e intergrupos quanto agrave rugosidade de superfiacutecie em
diferentes tempos de avaliaccedilatildeo (inicia e final) estatildeo listadas na Tabela 3
Tabela 3 Meacutedias (desvios-padrotildees) dos valores de rugosidade em tempos diferentes
SUBSTAcircNCIAS
TEMPO
INICIAL FINAL
Extrato de Spondias
mombin L
469plusmn (101) Aa 417plusmn (123) Aa
Clorexidina 545plusmn (165) Aa 456plusmn (152) Aa
37
Meacutedias seguidas de letras maiuacutesculas iguais expressam que natildeo houve diferenccedila estatisticamente
significativa nas linhas (pgt005) Meacutedias seguidas de letras minuacutesculas iguais expressam que natildeo houve
diferenccedila estatisticamente significativa entre as colunas (pgt005) Fonte Autora (2019)
55 MORFOLOGIA
Analisando-se as imagens das fotomicrografias dos fragmentos dentaacuterios realizadas
previamente e apoacutes o protocolo de imersatildeo nas soluccedilotildees atraveacutes da Microscopia Eletrocircnica de
Varredura (MEV) foi possiacutevel notar que as amostras dos grupos 1 e 2 apresentaram uma
superfiacutecie com ranhuras e prismas de esmalte enquanto aquelas do grupo 3 (grupo controle)
em que a soluccedilatildeo utilizada foi a aacutegua destilada apresentaram imagens exibindo um padratildeo de
carateriacutesticas inerentes agrave superfiacutecie dentaacuteria (Figuras 11 12 13 14 15 e 16) Verificou-se ainda
que existia uma camada superficial que conferia uma superfiacutecie regular a todos os grupos
condizente com os dados obtidos atraveacutes da anaacutelise da rugosidade Ademais foi possiacutevel
avaliar de forma mais definida as anaacutelises finais devido agrave metalizaccedilatildeo das superfiacutecies que
trouxeram agrave tona uma melhor definiccedilatildeo das imagens
Aacutegua destilada 462plusmn (149) Aa 413plusmn (178) Aa
38
Figura 11 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retroespalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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5 10
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Figura 12 Imagens do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos selecionados
para o grupo do extrato de S mombin L apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 13 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina previamente ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 14 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da clorexidina apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE) e retro-
espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
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Figura 15 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada preacutevio ao protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Inicial
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons
secundaacuterios (SE) e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kVFonte Autora (2019)
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1
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2
43
Figura 16 Imagens obtidas do MEV que ilustram a superfiacutecie dentaacuteria dos elementos
selecionados para o grupo da aacutegua destilada apoacutes o protocolo de imersatildeo na soluccedilatildeo
Anaacutelise Final
Legenda- Fotomicrografias da disposiccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria com 2000x em modo de eleacutetrons secundaacuterios (SE)
e retro-espalhados (BSE) sob voltagem de 10 kV Fonte Autora (2019)
1
2
3
10
9
8
7
6
5
4
44
6 DISCUSSAtildeO
Este estudo avaliou o efeito do extrato hidroetanoacutelico das folhas de Spondias mombin L
sobre a superfiacutecie de dentes humanos A cor dos espeacutecimes do grupo do extrato foi
significativamente diferente da cor dos espeacutecimes de outros grupos Portanto a hipoacutetese nula
de que o extrato natildeo alteraria a estabilidade de cor dos dentes foi aceita assim como a hipoacutetese
nula de que o extrato natildeo seria neutro A hipoacutetese nula de que o extrato natildeo alteraria a
rugosidade e que o extrato natildeo teria um acircngulo de contato ideal foram rejeitadas
A rugosidade superficial eacute o conjunto das irregularidades microgeomeacutetricas que
resultam em uma superfiacutecie decorrente da interaccedilatildeo com processos de desgaste e que satildeo
formadas por numerosos sulcos e ranhuras mais ou menos variaacuteveis em forma direccedilatildeo e
profundidade (NOVASKI1994) O valor de Ra (rugosidade aritmeacutetica) eacute o mais comumente
utilizado na odontologia A rugosidade aritmeacutetica eacute expressa em microcircmetros (microm) e eacute obtida
pela meacutedia aritmeacutetica entre os picos e vales encontrados dentro de uma linha central ao longo
da aacuterea avaliada (TEIXEIRA et al 2005) Neste experimento foi utilizado o meacutetodo adequado
para detecccedilatildeo da rugosidade antes e apoacutes o protocolo de imersatildeo das substacircncias testadas
Para garantir a esteacutetica em longo prazo a estabilidade de cor e a rugosidade da
superfiacutecie criteacuterios importantes satildeo considerados Superfiacutecies aacutesperas satildeo mais propensas agrave
coloraccedilatildeo devido agrave sua elevada capacidade de retenccedilatildeo (Lu et al 2005) Assim ao avaliar as
substacircncias utilizadas neste estudo atraveacutes do teste de rugosidade ao comparar os resultados
intra grupos e inter-grupos em relaccedilatildeo aos diferentes tempos (antes e apoacutes o protocolo de
imersatildeo) verificou-se que natildeo houve diferenccedila entre as substacircncias testes e o controle
O baixo pH da substacircncia extrato natildeo afetou a rugosidade levando em consideraccedilatildeo que
o extrato foi testado em superfiacutecie de dentes humanos algo que pode ter tornado este resultado
distinto dos estudos dos autores mencionados Mesmo o pH do extrato sendo mais aacutecido natildeo
alterou a rugosidade fato este que pode ser justificado pela anaacutelise da molhabilidade por ser
tatildeo bom tanto quanto a clorexidina e tambeacutem pode explicar as imagens geradas pelo MEV
(Figuras 1112) sem riscos evidentes apoacutes o protocolo de imersatildeo no extrato Dantas et al
(2015) definiram molhabilidade como a capacidade do liacutequido molhar um soacutelido
exemplificando-a como uma gota de liacutequido em repouso sobre uma superfiacutecie soacutelida sobre a
qual o liacutequido pode ou natildeo se espalhar A aacutegua sendo um liacutequido polar tende a se espalhar
sobre uma superfiacutecie com alta energia superficial e a formar uma gota em aacutereas com baixa
energia Uma maneira de quantificar esse comportamento eacute a anaacutelise do acircngulo de contato de
45
uma gota seacutessil descrita pelo acircngulo da secccedilatildeo da gota de um material liacutequido sobre uma
superfiacutecie em equiliacutebrio
Molhamento eacute o grau de espalhamento na qual a gota-fluiacutedo escoa pela superfiacutecie soacutelida
A medida do molhamento eacute o acircngulo de contato que eacute formada entre a gota-esfera e o plano
do substrato Se o acircngulo for pequeno o molhamento eacute bom se o acircngulo for maior que 90ordm graus
o molhamento eacute ruim Um bom molhamento significa que existe forte atraccedilatildeo entre as
moleacuteculas da substacircncia e o soacutelido Essa atraccedilatildeo eacute influenciada pela energia superficial
(FEJERSKOV KIDD 2011) Neste estudo obteve-se um bom resultado para essa variaacutevel
investigada levando em consideraccedilatildeo que a soluccedilatildeo testada o extrato de S mombin L
apresentou acircngulo menor que 90ordm logo o molhamento do extrato hidroetanoacutelico na superfiacutecie
de dentes humanos eacute tatildeo bom quanto a clorexidina que apresentou resultados similares
A estabilidade da cor pode ser avaliada visualmente e por instrumentos especiacuteficos A
metodologia utilizada no presente estudo estaacute de acordo com estudos anteriores que utilizaram
a espectrofotometria e o sistema de coordenadas CIE L a b (CRUVINEL et al 2010
GURDAL et al 2002) O sistema CIE L a b foi escolhido para avaliar a variaccedilatildeo de cor
(DE) pois eacute adequado para a determinaccedilatildeo de pequenas alteraccedilotildees de cor e possui vantagens
como repetibilidade sensibilidade e objetividade (FESTUCCIA et al 2012) Neste estudo foi
utilizada a espectrofotometria na qual resultados foram automaticamente fornecidos atraveacutes de
um sistema de coordenadas (CIE L a b) (PAUL et al 2002 WITKOWSKI et al2012
FESTUCCIA et al 2012 GUDALR et al 2002)
Diante das variaacuteveis das anaacutelises finais os autores relataram que valores de ΔE variando
de 1 a 3 satildeo perceptiacuteveis a olho nu (Lee et al 2000) A mudanccedila de cor pode ser detectada a
olho nu para valores de ΔE iguais ou superiores a um ou por colorimetria ou espectrofotometria
quanto (Paul et al 2002 Kim-Pusateri et al 2009 Witkowski et al2012 Festuccia et al
2012) Como pode ser visto na seccedilatildeo de resultados a soluccedilatildeo do extrato de S mombin L
resultou em mudanccedilas clinicamente inaceitaacuteveis na cor dos espeacutecimes dentaacuterios utilizados
assim como a clorexidina em comparaccedilatildeo com o grupo controle que produziu os menores
valores de ΔE=448 (p gt 005) Resultado contraacuterio ao que foi observado no estudo de Moreira
et al (2013) que investigaram diferentes enxaguatoacuterios bucais na superfiacutecie de dentes bovinos
e obtiveram em seus resultados que natildeo foi notada mudanccedila de cor dentaacuteria apoacutes exposiccedilatildeo agrave
clorexidina
No presente estudo o extrato hidroetanoacutelico de Smombin L alterou a cor dos fragmentos
dentaacuterios apresentando ΔE =1478 Corroborando com nossos achados atraveacutes do estudo de
46
Guimaratildees et al (2006) os participantes da pesquisa notaram que houve mudanccedila na coloraccedilatildeo
dentaacuteria e apoacutes o uso da clorexidina por 14 dias
Um fato que pode estar relacionado com a alteraccedilatildeo de cor apoacutes o protocolo de imersatildeo
do extrato de Smombin eacute que este apresenta dentre seus componentes taninos que estatildeo
associados a adstringecircncia Componente tambeacutem presentes em bebidas ricas em tanino como
chaacute cafeacute e vinho tinto (PRINZ LUCAS 2000) Este componente apresenta atividades
bactericidas e fungicidas que ocorrem por trecircs caracteriacutesticas gerais comuns aos dois grupos
(taninos hidrolisaacuteveis e taninos condensados) complexaccedilatildeo com iacuteons metaacutelicos atividade
antioxidante e sequestradora de radicais livres habilidade de complexar com outras moleacuteculas
principalmente proteiacutenas e polissacariacutedeos (MELLO SANTOS 2001)
Clinicamente o efeito das soluccedilotildees estudadas pode ser modificado por vaacuterios fatores
que natildeo foram replicados neste estudo in vitro Entre esses fatores a saliva poderia diluir ou
tamponar o pH do extrato hidroetanoacutelico de Smombin reduzindo o efeito diminuindo a
coloraccedilatildeo dos fragmentos dentaacuterios que foram imersos nessas soluccedilotildees e ainda por meio do
auxiacutelio com a higienizaccedilatildeo mecacircnica atraveacutes da escovaccedilatildeo diaacuteria
No estudo de Akasapu Hegde Murthy (2018) observaram e compararam a morfologia
e a morfometria da superfiacutecie do esmalte em vaacuterias superfiacutecies da denticcedilatildeo permanente e em
seus achados encontraram padrotildees de prisma bem definido predominantemente em ambos os
dentes anteriores e posteriores permanentes Os fragmentos dentaacuterios analisados atraveacutes do
MEV neste estudo demonstraram que apoacutes o protocolo de imersatildeo foi observada a presenccedila de
prismas suavemente arredondados dispostos uniformemente na superfiacutecie com contornos de
prisma delineados Nos dentes analisados neste estudo natildeo houve o uso de quaisquer meacutetodos
fiacutesicos ou quiacutemicos previamente e somente apoacutes as anaacutelises iniciais as amostras foram
submetidas ao protocolo de imersatildeo Outro fator eacute que na primeira leitura as amostras natildeo foram
metalizadas a fim de que fosse evitada concitar uma modificaccedilatildeo na superfiacutecie dentaacuteria e
somente apoacutes o protocolo de imersatildeo as amostras foram metalizadas para a anaacutelise final
Uma das limitaccedilotildees do estudo eacute que in vitro o resultado deste estudo natildeo pode ser
aplicado diretamente em situaccedilotildees cliacutenicas Fatores como saliva higiene bucal temperatura e
pH tambeacutem podem afetar nossos resultados Futuros estudos in vivo satildeo necessaacuterios para
confirmar nossos resultados e a implementaccedilatildeo cliacutenica (GRACCO et al 2015) Nesta pesquisa
todo esforccedilo foi feito para manter todas as variaacuteveis tatildeo proacuteximas das condiccedilotildees reais quanto
possiacutevel uma vez que a superfiacutecie do esmalte foi o foco desta investigaccedilatildeo Grande cuidado foi
47
tomado para selecionar as superfiacutecies com a menor quantidade de dano preacute-existente A
simulaccedilatildeo do envelhecimento correspondeu ao protocolo de uso comumente utilizado por
Guimaratildees et al (2006) e Soygun et al (2017) Adicionalmente foram mantidas a cada 12
horas os fragmentos dentaacuterios submersos em saliva artificial (Gel de CMC 25-8 Xarope
simples 20 Flavorizante cereja 01 Glicerina 10 e Aacutegua para soluccedilotildees orais)
Os achados do presente estudo trazem agrave literatura importantes resultados e reflexotildees
acerca do efeito do extrato de S mombin L e de outras soluccedilotildees como o Digluconato de
clorexidina 012 sobre a superfiacutecie de dentes humanos Contudo outros trabalhos devem ser
realizados a fim de averiguar outros possiacuteveis efeitos de soluccedilotildees enxaguatoacuterias bucais na
superfiacutecie dentaacuteria de forma longiacutenqua
48
7 CONCLUSAtildeO
Os resultados sugerem que
1 O pH do extrato hidroetanoacutelico de Spondias mombin L eacute aacutecido e o do Digluconato de
clorexidina 012 eacute neutro
2 A molhabilidade do extrato hidroetanoacutelico de S mombin L eacute semelhante a
molhabilidade da soluccedilatildeo de Digluconato de clorexidina 012
3 Tanto o extrato hidroetanoacutelico de S mombin L quanto agrave soluccedilatildeo de Digluconato de
clorexidina 012 modificam a coloraccedilatildeo da superfiacutecie dentaacuteria
4 Nenhuma das soluccedilotildees testadas altera a rugosidade da superfiacutecie dentaacuteria
5 O exame de microscopia eletrocircnica de varredura mostra que natildeo haacute diferenccedila na
morfologia de superfiacutecie do esmalte entre as soluccedilotildees testadas
49
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ANEXOS
57
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APENDICE (A)
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ndash TCLE
Esclarecimentos
Este eacute um convite para vocecirc participar da pesquisa EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA
DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS que tem
como pesquisador responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Esta pesquisa pretende estudar o efeito do extrato da folha de Spondia Mombin L(Cajaacute) sobre a
superfiacutecie de dentes humanos visando a possibilidade de sua utilizaccedilatildeo do fitoteraacutepico como colutoacuterio
para a higienizaccedilatildeo dos dentes
Considerando que os dentes humanos possuem caracteriacutesticas inerentes eacute vaacutelido investigar se o
extrato apresentado validade cientiacutefica para determinaccedilatildeo do seu uso posteriormente
Esta pesquisa necessita de (dentes sisos sadios extraiacutedos) caso decida participar da pesquisa
doando seu(s) dente(s) que foram extraiacutedos para essa pesquisa esses dentes seratildeo utilizados para anaacutelise
em aparelhos de leitura de componentes quiacutemicos e do efeito do extrato de cajaacute sobre a superfiacutecie dos
dentes As informaccedilotildees coletadas seratildeo guardadas em local seguro e somente usadas com finalidade
cientiacutefica sem divulgaccedilatildeo do nome dos participantes sendo que cada dente doado eacute armazenado a todos
os outros que participam dessa pesquisa Os dentes satildeo dispensados em lixo bioloacutegico mas somente
seratildeo utilizados para o fim cientiacutefico caso vocecirc concorde em participar
Esta pesquisa apresenta o risco miacutenimo quanto a doaccedilatildeo do dente extraiacutedo como risco previsto
seria a quebra de confidencialidade devido isso o mesmo seraacute minimizado com abordagem individual
do participante apoacutes a extraccedilatildeo com o armazenamento dos dentes em potes com numeraccedilatildeo 12 e 3 apoacutes
investigaccedilatildeo dos compostos quiacutemicos de cada dente e com o armazenamento do TCLE em pasta
envelopada preta Vocecirc teraacute como benefiacutecio a possibilidade futura de que atraveacutes dessa pesquisa seja
possiacutevel desenvolver um colutoacuterio utilizado para o combate de microorganismos da cavidade oral
Na ocorrecircncia de algum problema relacionado com a pesquisa vocecirc teraacute direito a assistecircncia
gratuita que seraacute prestada pela Profordf Dra Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins com o reembolso de
qualquer gasto que vocecirc tenha feito para a realizaccedilatildeo deste estudo bem como seraacute indenizado em caso
de dano ocorrido por sua participaccedilatildeo na mesma
Durante todo o periacuteodo da pesquisa vocecirc poderaacute tirar suas duacutevidas com a Profordf Drordf Ruthineia
Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins no Departamento de Odontologia do Centro de Ciecircncias da Sauacutede da
Universidade Federal do Rio Grande do Norte Lagoa Nova NatalRN ou atraveacutes dos seguintes
contatos telefone (84) 3215 4100 celular (84) 99401-3056 E-mailaruthineiagmailcom
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
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Vocecirc tem o direito de se recusar a participar ou retirar seu consentimento em qualquer fase da
pesquisa sem nenhum prejuiacutezo para vocecirc As informaccedilotildees que vocecirc iraacute fornecer seratildeo confidenciais e
seratildeo divulgados apenas em congressos ou publicaccedilotildees cientiacuteficas natildeo havendo divulgaccedilatildeo de nenhum
dado que possa lhe identificar Esses dados seratildeo guardados pelo pesquisador responsaacutevel por essa
pesquisa em local seguro e por um periacuteodo de 5 anos
Qualquer duacutevida sobre a eacutetica desta pesquisa vocecirc deveraacute entrar em contato com o Comitecirc de
Eacutetica em Pesquisa do Hospital Universitaacuterio Onofre Lopes telefone 3342-5003 endereccedilo Av Nilo
Peccedilanha 620 ndash Petroacutepolis ndash Espaccedilo Joatildeo Machado ndash 1deg Andar ndash Preacutedio Administrativo - CEP 59012-
300 - NataRN e-mail cep_huolyahoocombr
Este documento foi impresso em duas vias Uma ficaraacute com vocecirc e a outra com a pesquisadora
responsaacutevel Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Consentimento Livre e Esclarecido
Apoacutes ter sido esclarecido(a) sobre os objetivos a importacircncia e o modo como os dados seratildeo coletados
na pesquisa ldquo EFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE
A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo ter conhecido os riscos desconfortos e benefiacutecios que
ela traraacute para mim e ficado ciente de todos os meus direitos concordo em participar da mesma e autorizo
a divulgaccedilatildeo das informaccedilotildees por mim fornecidas em congressos eou publicaccedilotildees cientiacuteficas desde que
nenhum dado possa me identificar
Natal _________ de ____________________de 2018
Assinatura do participante da pesquisa
Impressatildeo datiloscoacutepica
do participante
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
60
Declaraccedilatildeo do pesquisador responsaacutevel
Como pesquisador responsaacutevel pelo estudo ldquoEFEITO DO EXTRATO DA FOLHA DE
SPONDIA MOMBIN L (CAJAacute) SOBRE A SUPERFIacuteCIE DE DENTES HUMANOS rdquo declaro que
assumo a inteira responsabilidade de cumprir fielmente os procedimentos metodoloacutegicos e direitos que
foram esclarecidos e assegurados ao participante deste estudo assim como manter sigilo e
confidencialidade sobre a identidade do mesmo
Declaro ainda estar ciente que na inobservacircncia do compromisso ora assumido estarei infringindo
as normas e diretrizes propostas pela Resoluccedilatildeo 46612 do Conselho Nacional de Sauacutede ndash CNS que
regulamenta as pesquisas envolvendo o ser humano
Natal _________ de ________________de 2018
Profordf Drordf Ruthineia Dioacutegenes Alves Uchocirca Lins
Rubrica do ParticipanteResponsaacutevel legal Rubrica do Pesquisador
