UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

DOUTORADO EM CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

JULIANA KELLE DE ANDRADE LEMOINE NEVES

IMIDAZOLÍDINAS ESQUISTOSSOMICIDAS: AVALIAÇÃO

ULTRAESTRUTURAL, ATIVIDADE CITOTÓXICA E IMUNOMODULADORA

RECIFE – 2010

UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

DOUTORADO EM CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

IMIDAZOLÍDINAS ESQUISTOSSOMICIDAS: AVALIAÇÃO

ULTRAESTRUTURAL, ATIVIDADE CITOTÓXICA E IMUNOMODULADORA

Tese apresentada ao Programa de Pós-

Graduação em Ciências Biológicas –

Universidade Federal de Pernambuco,

como parte dos requisitos para a obtenção

do Título de Doutor em Ciências

Biológicas.

Orientadora:

Dra. Suely Lins Galdino

Co-orientadora:

Dra. Mônica Camelo P.A. Albuquerque

RECIFE – 2010

Neves, Juliana Kelle de Andrade Lemoine Imidazolidinas esquistomicidas: avaliação ultraestrutural, atividade citotóxica e imunomoduladora/ Juliana Kelle de Andrade Lemoine Neves. – Recife: O Autor, 2010. 166 folhas : il., fig., tab.

Orientadora: Suely Lins Galdino Co-orientadora: Mônica Camelo P.A. Albuquerque

Tese (doutorado) – Universidade Federal de Pernambuco. Centro de

Ciências Biológicas. Ciências Biológicas, 2010.

Inclui bibliografia e anexos.

1. Esquistossomose 2. Imidazolidinas 3. Citotoxicidade I. Título.

616.963 CDD (22.ed.) UFPE/CCB-2010-102

"Aquele que tentou e não conseguiu

é superior àquele que nada tentou”.

Arquimedes

Dedico a

Meu esposo e filho

André Lemoine e Ângelo Lemoine

Minha mãe

Maria José

AGRADECIMENTOS

A Deus que me deu oportunidade de vida, pela força e coragem pela caminhada longa que

foi e será;

A Professora Dra. Suely Lins Galdino, do Laboratório de Planejamento e Síntese de

Fármacos, do Departamento de Antibióticos da UFPE, pela orientação e credibilidade;

A Professora Dra. Mônica Camelo Pessoa Azevedo de Albuquerque, do Departamento de

Medicina Tropical da UFPE, pela orientação e credibilidade;

Ao Professor Dr. Ivan da Rocha Pitta, do Laboratório de Planejamento e Síntese de

Fármacos, do Departamento de Antibióticos da UFPE, pela cooperação para realização

deste trabalho e credibilidade;

A Professora Dra. Maria do Carmo Alves de Lima, do Laboratório de Planejamento e

Síntese de Fármacos, do Departamento de Antibióticos da UFPE, pela orientação,

incentivo, credibilidade e amizade e por todos momentos de alegria;

A Professora Dra. Paloma Lys de Medeiros do Departamento de Histologia e Embriologia

da UFPE, pela cooperação e disponibilidade prestada;

A Professora Dra. Valéria Rêgo Alves Pereira do Departamento de Imunologia do Centro

de Pesquisas Aggeu Magalhães pelos grandes incentivos, colaboração e pela atenção

dispensadas no decorrer da reta final do trabalho e esclarecimentos prestados nos momentos

de dúvidas;

A Dra. Cristiane Moutinho Lagos de Melo do Departamento de Imunologia do Centro de

Pesquisas Aggeu Magalhães, pela grande amizade, colaboração, dedicação e disponibildade

prestada;

A Dra. Maira Galdino da Rocha Pitta do Departamento de Antibióticos pela colaboração

para realização deste trabalho;

A Dra. Christina Alves Peixoto do Laboratório de Ultraestrutura do Centro de Pesquisas

Aggeu Magalhães (FIOCRUZ) e toda sua equipe pela colaboração na realização da

microscopia eletrônica de varredura.

A Sandra Botelho do Departamento de Antibióticos pela grande ajuda nas sínteses dos

compostos;

A todos do Laboratório de Imunologia do LIKA, pela colaboração e agradável convívio

durante o período de experimentação;

Aos colegas do Laboratório de Planejamento e Síntese de Fármacos (GPIT/UFPE);

Ao Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas, pela oportunidade do Doutorado;

A Adenilda Eugênia de Lima, secretária do Curso de Pós-Graduação em Ciências

Biológicas, pela competência e grande convívio;

E a minha família, por sempre acreditar em mim e superarem pacientemente os meus

momentos de ausência.

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

Cepa BH – Cepa oriunda de Belo Horizonte – MG

DMSO – Dimetilsulfóxido

ELISA - Enzyme-Linked Immunosorbent Assay

ESQ – Esquistossomose

FIOCRUZ – Fundação Oswaldo Cruz

FUNASA – Fundação Nacional de Saúde

GGVS – Gerência Geral de Vigilância à Saúde

GPIT – Grupo de Pesquisa e Inovação Terapêutica

IFN- Interferon gama

IL – Interleucina

LIKA – Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami

LPSF – Laboratório de Planejamento e Síntese de Fármacos

MEC - Matriz Extracelular

MEV – Microscopia Eletrônica de Varredura

NO – Óxido nítrico

OMS – Organização Mundial de Saúde

PECE – Programa Especial de Controle da Esquistossomose

UFPE – Universidade Federal de Pernambuco

WHO - World Health Organization

LISTA DE FIGURAS

Figura 1: Medicamentos desenvolvidos entre 1975 a 2004. Fonte: CHIRAC e

TORREELE, 2006.

20

Figura 2: Theodor Bilharz . Fonte: www.yearofscience.org. 21

Figura 3: Vermes adultos de Schistosoma. (A) Macho e (B) Fêmea. Fonte: PICASA,

2009.

23

Figura 4: Distribuição mundial da esquistossomose. Fonte: GRYSSELS et al, 2006. 24

Figura 5: Áreas endêmicas da esquistossomose mansônica no Brasil. Fonte:

AMARAL et al., 2006.

25

Figura 6: Prevalência da esquistossomose dos municípios da Zona da Mata no

estado de Pernambuco. Fonte: BARBOSA et al., 2006.

27

Figura 7: Caramujo do gênero Biomphalaria. Fonte: www.york.ac.uk, 2009. 29

Figura 8: Segmento anterior do corpo do macho (à esquerda) e da fêmea (à

direita), mostrando os principais órgãos: a-ventosa oral e boca, b-porção

anterior do intestino, c-acetábulo ou ventosa ventral, d-vesícula seminal,

e-canal deferente, f-testículos, g-porção média bifurcada do intestino, h-

ceco, i-orifício genital feminino, j-útero contendo dois ovos, k-um ovo em

processo de formação da casca no oótipo, l-oviduto, m- ovário, n-

viteloduto, o-glândulas vitelinas. Fonte: REY, 2001.

31

Figura 9: Fígado sem alterações (A); hepatomegalia com o lóbulo esquerdo

aumentado (B), baço com conformações normais (C); esplenomegalia

mostrando um crescimento do órgão ultrapassando o ultimo arco costal

na altura do umbigo (D). Fonte: medlineplus, 2009.

33

Figura 10: Composição celular e de componentes da matri extraceular em

granulomas esquistossómticos hepáticos. (Modificado a partir de

CARVALHO, et al 2008).

34

Figura 11: Tipos de moléculas de adesão, fatores de crescimento e seus receptores

em granulomas esquistossomóticos. (Modificado a partir de CARVALHO,

et al 2008).

34

Figura 12: Esquema da reação granulomatosa em fígado de camundongo. Fonte:

HITARA e FUKUMA, 2003.

35

Figura 13: Granuloma esquistossomótico. Fonte:38 PEARCE e MACDONALD, 2002. 36

Figura 14: Ciclo de vida do Schist45osoma mansoni. Fonte: GRYSSELS et al, 2006. 38

Figura 15: Desenvolvimento da resposta imune na infecção. Fonte: PEARCE e

MACDONALD, 2002.

43

Figura 16: (I) 5,5-Difenil-imidazolidina-2,4-diona e (II) 5-(p-clorofenil)-5-metil-

imidazolidina-2,4-diona.

45

Figura 17: (I) 5-Benzilideno-2-tioxo-imidazolidin-4-ona e (II) 2-amino-5-

benzilideno-imidazolidina-2,4-diona

46

LISTA DE TABELAS

Tabela 1: Grandes editais temáticos na área de doenças negligenciadas. 21

Tabela 2: As principais espécies que infectam seres humanos, as regiões onde são

encontradas e seus hospedeiros intermediários.

22

Tabela 3: Número de infecções das cidades da Zona da Mata do estado de

Pernambuco, em destaque as cidades com maior número de infecções.

28

Tabela 4: Principais fármacos esquistossomicidas desenvolvidos no século XX. 50

.

SUMÁRIO

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

LISTA DE FIGURAS

LISTA DE TABELAS

RESUMO

ABSTRACT

1 INTRODUÇÃO 15

2 REVISÃO DA LITERATURA 18

2.1 Doenças negligenciadas 19

2.2 Esquistossomose 21

2.3 Distribuição geográfica e dados epidemiológicos 23

2.4 Hospedeiro Intermediário 29

2.5 Classificação e morfologia 30

2.6 Morbidade, fisiologia e imunopatologia 32

2.7 Ciclo biológico 37

2.8 Diagnóstico 38

2.9 Controle e prevenção quimioterapica 39

2.10 Resistência ao tratamento 40

2.11 Imunopatologia 41

2.12 Imidazolidinas bioativas 44

2.13 Fármacos esquistossomicidas 46

3-OBJETIVOS 53

3.1 Geral 54

3.2 Específicos 54

4 CONCLUSÃO 55

5 PERSPECTIVAS 57

6 REFERÊNCIAS 59

ANEXOS 74

Biological and immunological activity of new Imidazolidines front of adult worms of

Schistosoma mansoni

Immunological studies and in vitro schistosomicide action of new imidazolidine

derivatives

Antischistosomal action of thioxo-imidazolidine compounds: an ultrastructural study

Comissão de Ética de Experimentação Animal

RESUMO

A esquistossomose é uma doença debilitante e endêmica, distribuída em 74 países, causada

por parasitas do gênero Schistosoma, onde existem cinco espécies de interesse médico,

apenas o Schistosoma mansoni é endêmico no Brasil. Existem aproximadamente 207

milhões de pessoas infectadas pela esquistossomose no mundo, no Brasil estima-se sete

milhões de portadores de esquistossomose mansônica e é considerada uma endemia em

franca expansão atingindo aproximadamente 19 estados brasileiros. O praziquantel é o

único fármaco para o tratamento de todas as esquistossomoses no mundo. O objetivo do

nosso trabalho foi a busca de novos compostos biologicamente ativos para o combate da

esquistossomose, através da síntese de derivados imidazolidínicos e avaliação da atividade

esquistossomicida. Os derivados imidazolidínicos das séries 5-benzilideno-3-benzil-4-

tioxo-imidazolidin-2-ona e 5-arilazo-4-tioxo-imidazolidin-2-ona foram avaliados in vitro

frente a vermes adultos de Schistosoma mansoni (Cepa BH). Todos derivados avaliados in

vitro apresentaram atividade esquistossomicida, sendo que os compostos LPSF/PT05, PT10

e PT11 provocaram mortalidade de 100% em 24 horas nas concentrações de 320 e 200 M

e o LPSF/PT09 mortalidade de 100% em 48 horas também na maior concentração 320 M.

O LPSF/PT05 e LPSF/PT10 foram analisado em microscopia eletrônica de varredura. Os

derivados também foram avaliados quanto a citotoxicidade e viabilidade celular,

apresentando uma toxicidade inferior ao praziquantel e uma baixa mortalidade celular

(apoptose e necrose) em relação ao padrão. Na dosagem de citocinas (IL-10 e IFN- )

nenhum dos compostos apresentou indução dessas proteínas, porém todos os compostos

analisados apresentaram uma indução no óxido nítrico estatisticamente significativo.

Palavras-chave: Esquistossomose, imidazolidinadionas, Ensaios in vitro .

ABSTRACT

Schistosomiasis is a debilitating and endemic, distributed in 74 countries, caused by

parasites of the genus Schistosoma, which has five species of medical interest, only the

Schistosoma mansoni is endemic in Brazil. There are approximately 207 million people

infected with schistosomiasis in the world, in Brazil an estimated seven million people with

schistosomiasis and is considered an endemic disease on the rise amounting to about 19

states. The Praziquantel is the main drug for the treatment of schistosomiasis in all the

world. The aim of our study was the search for new biologically active compounds for the

fight against schistosomiasis, through the synthesis of imidazolidine. Derivatives

imidazolidine series 5-benzylidene-3-benzyl-4-thioxo-imidazolidin-2-one and 5-arilazo-4-

thioxo-imidazolidin-2-one were evaluated in vitro against the adult worms of Schistosoma

mansoni (strain BH). Derivatives evaluated in vitro all showed schistosomicidal activity

and the LPSF/PT05, PT10 and PT11 had 100% mortality within 24 hours in higher

concentrations 320 and 200 M and LPSF/PT09 100% mortality within 48 hours also the

highest concentration 320 M. The LPSF/PT05 e LPSF/PT10 analyzed in scanning

electron microscopy. Derivatives were also evaluated for cytotoxicity and cell viability,

showing a lower toxicity to praziquantel and a low mortality in relation to the cellular

standard. The measurement of cytokines (IL-10 e IFN- ) none of the compounds showed

induction, but all the compounds showed an induction analyzes nitric oxide statistically

significant.

Keywords: Schistosomiasis, imidazolidinedione, Assay in vitro.

INTRODUÇÃO

1. Introdução

A Química Medicinal estuda as razões moleculares da ação dos fármacos de

maneira a descrever a relação entre a estrutura química e a atividade farmacológica,

hierarquizando as diferentes contribuições funcionais. No contexto inverso, inclui-se o

planejamento e o desenho estrutural de novas substâncias que possuam propriedades

farmacoterapêuticas úteis, capazes de representarem novas entidades químicas, candidatas a

protótipos de novos fármacos de uso seguro. A química medicinal é uma disciplina híbrida

que está no centro de um grande espaço inter e multidisciplinar constituído pela biofísica,

biologia molecular, bioquímica, clínica médica, físico-química, fisiologia, patologia,

química biológica, química inorgânica, química orgânica, entre outras. Tratando do

planejamento racional das drogas, sua síntese, sua elucidação estrutural, o desenvolvimento

de ensaios farmacológicos e estudos de relações estrutura-atividade farmacológica

(WILLIAMS e LEMKE, 2002; IUPAC, 2010).

As doenças infecciosas parasitárias continuam sendo um obstáculo ao

desenvolvimento social e econômico dos países mais pobres, afetando as populações pobres

e marginalizadas. As alternativas quimioterápicas para o tratamento da maioria das doenças

parasitárias são extremamente limitadas. A esquistossomose, doença debilitante causada

por parasitas do gênero Schistosoma constitui um dos maiores problemas mundiais

enfrentados na saúde pública, visto que está distribuída em várias regiões geográficas. E

mundialmente só perde para malária em número de pessoas infectadas (CARVALHO et al,

2008).

O Schistosoma é endêmico, afetando, aproximadamente, 76 países tropicais e

subtropicais, principalmente países da África, Ásia e América Latina, sendo que nas

Américas, ocorre apenas a espécie S. mansoni. No Brasil, ocorre nas regiões Norte,

Nordeste, e no Norte das regiões Sul e Sudeste (GREVELDING, 2004).

Atualmente, estima-se no mundo 207 milhões de pessoas infectadas com as

esquistossomoses, com um total de 650 milhões expostos ao risco de contrair a doença. Há

aproximadamente seis a oito milhões de portadores de esquistossomose mansoni no Brasil.

No mundo o S. mansoni infecta cerca de 70 milhões de indivíduos (CHITSULO et al.,

2000; CIMERMAN, 2001; WHO, 2008).

O ciclo do Schistosoma é complexo, pois exige a presença de hospedeiro

intermediário, representados por diferentes espécies de moluscos pertencentes ao gênero:

Bullinus, Biomphalaria, Oncomelania e Neotricula (CARRERA, 1990; NEVES,2005),

com as seguintes formas evolutivas do S. mansoni: verme adulto (macho e fêmea), ovo,

miracídio, esporocisto, cercária e esquistossômulo.

Na dependência de elevadas cargas parasitárias e, conseqüentemente, do número de

ovos com formações granulomatosas, instala-se, progressivamente, o regime de hipertensão

portal, com o conseqüente aparecimento de esplenomegalia de caráter congestivo e de

circulação colateral, inclusive de varizes de esôfago. As fêmeas liberam centenas de ovos

por dia, um número substancial ficam presos ao intestino e fígado, principalmente. Tem-se,

assim, a forma hepatoesplênica com hipertensão portal da esquistossomose, definida como

descompensada quando houver sangramento digestivo alto (GRYSCHEK, 2001; HELMY

et al., 2009).

Há relatos de resistência ao praziquantel em cepas de Schistosoma principalmente

na África, aonde o fármaco vem sendo utilizado agressivamente por longos períodos. Com

a possível resistência a este fármaco são utilizadas doses maiores para se obter um melhor

resultado (LIANG, 2001; ISMAIL et al., 1996). Porém, faz-se necessário o

desenvolvimento de vacinas e o planejamento e síntese de novos fármacos que constituem

novas alternativas terapêuticas para a parasitose em questão.

As imidazolidinas tiveram no passado um representante na clínica médica como um

fármaco de ação comprovada frente a vermes adultos de S. mansoni, o niridazol (CATTO;

TRACY; WEBSTER, 1984). A propriedade esquistossomicida in vitro frente a vermes

adultos de S. mansoni dos derivados imidazolidínicos vem sendo relatada por Oliveira e

colaboradores (2004) e Albuquerque e colaboradores (2006).

Derivados imidazolidínicos sintetizados por nossa equipe no Laboratório de Síntese

e Planejamento de Fármacos-LSPF, ressaltam a contribuição química do núcleo

imidazolidínico. Os resultados já obtidos com derivados imidazolidinônicos-3,5-

dissubstituídos revelam que estas moléculas são portadores de significante atividade

esquistossomicida (OLIVEIRA et. al., 2004; SOARES, 2004; ALBUQUERQUE et. al.,

2005; PITTA, 2005).

REVISÃO BIBLIOGRÁFICA

2 REVISÃO BIBLIOGRÁFICA

2.1 Doenças negligenciadas

Doenças negligenciadas são doenças que não só prevalecem em condições de

pobreza, mas também contribuem para a manutenção do quadro de desigualdade, já que

representam forte entrave ao desenvolvimento dos países. Como exemplos de doenças

negligenciadas, podemos citar: dengue, doença de Chagas, esquistossomose, hanseníase,

leishmaniose, malária, tuberculose, entre outras. Segundo dados da Organização Mundial

de Saúde (OMS), mais de um bilhão de pessoas estão infectadas com uma ou mais doenças

negligenciadas, o que representa um sexto da população mundial (BRASIL, 2010).

Essas doenças têm sido progressivamente marginalizadas por aqueles encarregados

pelos programas de pesquisa tanto do setor público quanto do privado, essencialmente

porque as pessoas que sofrem de doenças negligenciadas são pobres, e não oferecem um

retorno lucrativo suficiente para que a indústria farmacêutica invista em pesquisa e

desenvolvimento de novos medicamentos voltados para tais doenças. Fica claro, portanto,

que a crise na falta de medicamentos para doenças negligenciadas não chegou às atuais

proporções por falta de conhecimento científico, e nem somente pelo hiato entre a pesquisa

básica e a pré-clínica. Esta crise é o resultado tanto das insuficientes políticas públicas

voltadas para P&D de medicamentos de interesse nacional dos países em desenvolvimento,

quanto da falha de mercado, provocada pelo baixo interesse econômico que esses pacientes

representam para a indústria (CHIRAC e TORREELE, 2006; MJUR, 2007).

Entre 1975 e 2004, apenas 21 medicamentos (figura 01) foram registrados para

doenças tropicais e tuberculose, ainda que estas doenças constituam mais de 11% da carga

global de doenças. Durante o mesmo período, 1.535 medicamentos foram registrados para

outras doenças (CHIRAC e TORREELE, 2006).

.

Figura 1: Medicamentos desenvolvidos entre 1975 a 2004. Fonte: CHIRAC e TORREELE,

2006.

Um estudo sobre o financiamento mundial de inovação terapêutica para doenças

negligenciadas revelou que menos de 5% deste financiamento foram investidos no grupo

das doenças negligenciadas, ou seja, doença do sono, leishmaniose visceral,

esquistossomose e doença de Chagas, ainda que mais de 500 milhões de pessoas sejam

ameaçadas por estas quatro doenças parasitárias (MORAN, 2009).

No intuito de agregar grupos de pesquisa e apoiar atividades de pesquisas

científicas, tecnológicas e de inovação (tabela 1), em 2008, foram selecionados projetos

para formação e consolidação de institutos nacionais de ciência e tecnologia (INCT), em

uma iniciativa do MS, MCT, Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível

Superior (CAPES), Banco Nacional de Desenvolvimento Econômico e Social (BNDES) e

das FAP do Amazonas, Minas Gerais, Pará, Rio de Janeiro, São Paulo e Santa Catarina.

Entre os INCT que tiveram recursos do MS, existem alguns com grande potencial de

contribuição para a temática de doenças negligenciadas e o combate às doenças: INCT em

Tuberculose, INCT de Gestão da Inovação em Doenças Negligenciadas, INCT de

Biotecnologia Estrutural e Química Medicinal em Doenças Infecciosas e INCT de Vacinas

(BRASIL, 2010).

Tabela 1. Grandes editais temáticos na área de doenças negligenciadas.

ANO EDITAL RECURSOS

2003 Rede Tuberculose R$ 1,9 milhões

2004 Dengue R$ 945 mil

2005 Hanseníase R$ 2,5 milhões

2006 Doenças negligenciadasa R$ 17 milhões

2007 Doenças negligenciadas R$ 22 milhões

2008 Rede Malária R$ 15,4 milhões

2009 Rede Dengue R$ 22,7 milhões aDiferentemente do edital de 2008, o edital de doenças negligenciadas de 2006 não incluiu

esquistossomose (BRASIL, 2010).

2.2 Esquistossomose

Foi Bilharz (figura 2), em 1852, quem descreveu um parasita intravascular durante

uma necropsia em um rapaz, para qual deu o nome de Distomum haematobium e

posteriormente em 1858 Weinland denominou o gênero deste helminto de Schistosoma.

A doença é popularmente conhecida como “xistose”, “barriga-d’água” ou “mal-do-

caramujo” o qual foi trazida durante o tráfico de escravos e com os imigrantes orientais e

asiáticos, entretanto, apenas o S. mansoni se fixou por encontrar bons hospedeiros

intermediários e pelas condições ambientais semelhantes às da região de origem (figura 06)

(REY, 2001; NEVES, 2005).

De acordo com a Organização Mundial da Saúde existem cinco espécies de

Schistosoma que representam risco a saúde publica devido a sua capacidade de infectar

humanos (tabela 2).

Figura 2: Theodor Bilharz. Fonte: www.yearofscience.org

http://www.yearofscience.org/

Tabela 2: Principais espécies que infectam seres humanos, as regiões onde são encontradas

e seus hospedeiros intermediários.

Espécies de Schistosoma Regiões Endêmicas Gêneros de caramujo

Esquistossomose intestinal

S. mansoni

África, Oriente Médio e América

do Sul

Biomphalaria

S. intercalatum África (raro, somente no oeste da

África)

Bulinus

S. japonicum Ásia (primeiramente encontrado

no Japão, hoje ocorre

principalmente na China).

Oncomelania

S. mekongi Ásia (próximo ao rio Mekongi) Neotricula

Esquistossomose urinária

S.haematobium

África e Oriente Médio

Bulinus

Fonte: WHO, 2009

As espécies do gênero Schistosoma, que têm importância epidemiológica em

medicina humana, são o S. haematobium, S. japonicum, S. mekongi, S. intercalantum e o S.

mansoni. Os vermes adultos vivem no sistema porta migrando para as veias mesentéricas

causando lesões em vários órgãos (MALTA, 1994; NEVES, 2005).

O Schistosoma é um trematódeo da família Schistosomatidae que compreende

espécies completamente adaptadas ao parasitismo que se aloja nos vasos sanguíneos. Ao

contrário de outros trematódeos, os causadores da esquistossomose não são hermafroditas,

ou seja, possuem sexos separados, os machos são achatados e as fêmeas são finas e

cilíndricas (figura 03). As espécies diferenciam por sua morfologia, forma de diagnóstico,

gêneros do hospedeiro intermediário e localização do parasita no hospedeiro.

Figura 3: Vermes adultos de Schistosoma. (A) Macho e (B) Fêmea. Fonte: PICASA,

2009.

2.3 Distribuição geográfica e dados epidemiológicos

Apesar do sucesso dos programas de controle, estima-se no mundo 207 milhões de

pessoas infectadas (BLANCHARD, 2004) com 120 milhões sintomáticas e 20 milhões com

a doença em estado agravado, sendo um total de 650 milhões expostos ao risco de contrair

a doença de uma das esquistossomoses (CHITSULO et al., 2000; WHO, 2009) (figura 4).

Entre 207 milhões de pessoas com a doença, 85 % vivem na África, onde a grande maioria

das fatalidades ocorre devido ao S. haematobium, porém o S. mansoni causa 130.000

mortes por ano, pela hipertensão portal (WHO, 2007). No mundo, existem

aproximadamente 70 milhões de infectados pelo S. mansoni (CHITSULO et al., 2004;

CIMERMAN, 2001).

A

B

Figura 4: Distribuição Mundial da Esquistossomose. Fonte: GRYSSELS et al, 2006.

No Brasil, antes da implantação do Programa Especial de Controle da

Esquistossomose (PECE), a esquistossomose atingia entre dez e doze milhões de pessoas,

sendo considerada uma das mais importantes áreas de ocorrência da doença (BINA e

PRATA, 2003). Há cerca de 7,01 milhões de portadores de esquistossomose mansoni

(CHITSULO et al., 2004; CIMERMAN, 2001) (figura 5).

No país, a área endêmica para esquistossomose abrange 19 estados com

aproximadamente 26 milhões de habitantes expostos ao risco. Ocorre de forma endêmica e

focal desde o estado do Maranhão até Minas Gerais (FUNASA, 2002).

Figura 5: Áreas endêmicas da esquistossomose mansônica no Brasil. Fonte: AMARAL et

al., 2006.

A esquistossomose é primariamente uma endemia rural e periurbana que, em

algumas cidades como Belo Horizonte, Salvador e Recife estão tornando-se urbana, devido

à migração descontrolada e à falta de saneamento básico. No Nordeste vem sendo

registrado na Região Metropolitana do Recife, imposta por uma mudança na indústria agro-

açucareira que vem promovendo o deslocamento de trabalhadores para a periferia das

grandes cidades, onde não há condições básicas de saneamento e moradia, favorecendo o

surgimento de novos focos urbanos da doença como os registrados em São Lourenço da

Mata e na Ilha de Itamaracá (IGLÉSIAS, 1997; BARBOSA et al. 2000; XIMENES et al.,

2000; BERGQUIST, 2002).

A esquistossomose é endêmica em 90 dos 185 municípios do Estado de

Pernambuco. Com uma área total de 98.933 Km², o Estado possui 19.425 Km² de área

esquistossomótica, sendo 16.693 Km² de área endêmica e área focal de 2.732 Km², os quais

correspondem a um percentual de 19,63 % da superfície pernambucana. A prevalência

média foi de 8,7 % e a média anual de internações, de 1999 a 2003, foi de 377, taxa de

5,12/10 mil internações. O número médio de óbitos, de 1998 a 2002, foi de 139,2 com taxa

de mortalidade de 1,76/100 mil habitantes (GGVS/LABEND/ESQ, 2001; BRASIL, 2005).

A figura 6 mostra a prevalência da esquistossomose nos municípios da Zona da Mata do

estado de Pernambuco, na parte mais clara com prevalência moderada de 10 a 50% e na

parte mais escura com prevalência baixa, menor que 10% (BARBOSA et al., 2006), na

tabela 3 mostra o número de infecções das cidades da Zona da Mata, destacando-se os

municípios de Aliança, Condado, Escada, Itambé, Itaquitinga, Jaqueira, Rio Fomoso e

Tracunháem com prevalência alta de número de pessoas infectadas com Schistosoma

mansoni.

Figura 6: Prevalência da esquistossomose dos municípios da Zona da Mata no

estado de Pernambuco (BARBOSA et al., 2006).

10%-50% (prevalência

moderada)

< 10% (baixa prevalência)

Tabela 3: Número de infecções das cidades da Zona da Mata do estado de Pernambuco, em

destaque as cidades com maior número de infecções.

(BARBOSA et al., 2006)

Município Escolas Examinados %SM GM

epg

2.4 Hospedeiro intermediário

Em 1913, foi descrito o hospedeiro intermediário da doença: moluscos do gênero

Biomphalaria (figura 7) com concha espiral plana, que podem medir de 10 a 40 mm.

Miyaki e Suzuki, autores do feito inédito, demonstraram também que a cercária (larva do

Schistosoma) transmite a doença ao homem quando penetra em sua pele.

Os caramujos transmissores da esquistossomose mansoni no Brasil pertencem ao:

Filo Mollusca

Classe Gastropoda

Subclasse Pulmonata

Ordem Basommatophora

Família Planorbidae

Gênero Biomphalaria

Já foram identificadas dez espécies pertencentes ao gênero Biomphalaria no Brasil.

São elas: B. glabrata, B. tenagophila, B. straminea, B. amazonica, B. peregrina, B.

occidentalis, B. intermedia, B. schrammi, B. oligoza e B. kuhniana. Destas, apenas as três

primeiras foram encontradas eliminando cercárias na natureza, sendo, portanto,

transmissoras da esquistossomose mansoni nas Américas (BARNES, 1996).

São moluscos de água doce, conhecidos como planorbídeos e, popularmente, como

caramujos, têm a concha em espiral, com as voltas ou giros no mesmo plano e, por isso,

recebem a denominação de planorbídeo. Os caramujos planorbídeos criam-se e vivem na

água doce de corrégos, riachos, valas, alagados, brejos, açudes, represas ou outros locais

onde haja pouca correnteza, quando jovens alimentam-se de vegetais em decomposição e

de folhas verdes e põem ovos, dos quais, depois de alguns dias, nascem novos caramujos

Figura 7: Caramujo do gênero Biomphalaria. Fonte: www.york.ac.uk, 2009

que crescem e tornam-se adultos. O hábitat de preferência do Biomphalaria para

colonização é de microflora rica, bastante matéria orgânica, boa insolação, temperatura

média da água entre 20°C e 26°C, pH neutro tendendo a alcalino, salinidade abaixo de 3

por 1.000, pouca turbidez e velocidade da água inferior a 30cm/s, com leito raso, lodoso ou

rochoso e vegetação enraizada mais próxima das margens (NEVES, 2005).

O B. glabrata é o mais importante transmissor de S. mansoni na região neotropical,

não só pelo alto grau de suscetibilidade de suas populações ao parasito como pela extensão

de sua distribuição geográfica (CARVALHO, 2008).

2.5 Classificação e morfologia

Os parasitas transmissores da esquistossomose pertencem.

Reino Animalia

Sub-reino Metazoa

Filo Platyhelmintes

Classe Trematoda

Subclasse Digenea

Superfamília Schistosomatoidea

Família Schistosomatidae

Subfamília Schistosomatinae

Gênero Schistosoma (BARNES, 1996).

O S. mansoni macho mede entre 0,6 a 1,4 cm de comprimento por 0,11 cm de

largura e sua cor é branca. É largo na posição mediana e afilado nas extremidades do corpo.

Na extremidade anterior traz uma ventosa oral afunilada e logo após uma segunda ventosa,

a ventral, pedunculada, também denominada de acetábulo e ainda um canal ginecóforo,

onde fica alojada a fêmea. O aparelho genital masculino compreende de seis a oito massas

testiculares pequenas, situadas dorso ventralmente, no início do segmento posterior. A

fêmea tem o corpo cilíndrico comprido e fino medindo cerca de 1,2 a 1,6 cm de

comprimento por 0,016 cm de largura, sua cor é acinzentada devido ao tubo digestivo

conter um pigmento derivado da digestão sanguínea, hemozoína. Em sua região anterior,

existem estruturas especializadas na fixação do verme ao hospedeiro, as ventosas, estando a

ventosa acetabular e pedunculada muito perto da oral. O ovário é oblongo e lobado, ficando

na metade anterior do corpo. Nos dois sexos, o tubo digestivo se inicia na extremidade

anterior, no fundo da ventosa oral, compreendendo um esôfago sem espessamento

muscular, o sistema excretor, tem início nos solenócitos, convergindo para dois canais

longitudinais que desembocam em uma pequena vesícula excretora (BARNES et al., 1996;

REY, 2001) (figura 8).

Figura 8: Segmento anterior do corpo do macho (à esquerda) e da fêmea (à direita),

mostrando os principais órgãos: a-ventosa oral e boca, b-porção anterior do intestino, c-

acetábulo ou ventosa ventral, d-vesícula seminal, e-canal deferente, f-testículos, g-porção

média bifurcada do intestino, h-ceco, i-orifício genital feminino, j-útero contendo dois

ovos, k-um ovo em processo de formação da casca no oótipo, l-oviduto, m-ovário, n-

viteloduto, o-glândulas vitelinas (REY, 2001).

Após alguns dias de infecção no hospedeiro definitivo, os esquistossômulos chegam

ao fígado e alimentam-se de sangue, na terceira semana começa a atração dos sexos por

quimiotaxia, iniciando o acasalamento e completam seu desenvolvimento na quarta semana

e migram para as vênulas, mesentério e plexo hemorroidário. A nutrição deles é feita

através da ingestão de sangue venoso (REY, 2002; NEVES, 2005).

2.6 Morbidade, fisiopatologia e imunopatologia

Embora a parasitose possa resultar em morte, a sua natureza crônica reduz a

capacidade das pessoas infectadas para o trabalho. Em crianças, pode causar anemia,

nanismo e de uma reduzida capacidade de aprender (WHO, 2009).

A principal causa de mortalidade e morbidade na esquistossomose humana são as

fibroses hepáticas, que envolve o espaço portal, devido a isso a resposta granulomatosa e a

fibrose hepática vêm sendo intensamente estudadas na patogênese da resposta imune

celular do S. mansoni. O granuloma tem um papel hepatoprotetor por sequestrar as toxinas

secretadas pelos ovos (PHILLIPS e COLLEY, 1978).

A doença é causada principalmente pela deposição dos ovos dos vermes adultos nos

vasos sanguíneos que rodeiam a bexiga ou intestinos. O sinal clássico da esquistossomose

urinária é hematúria (sangue na urina). Fibrose ureteral e hidronefrose são achados comuns

em casos avançados, e o câncer na bexiga também é uma possível complicação em estágio

final. Na esquistossomose intestinal um quadro clínico de dor abdominal, diarréia, sangue

nas fezes e fígado aumentado é comum em casos avançados e freqüentemente associada à

ascite e outros sinais de aumento da pressão portal. Nesses casos, pode haver também

esplenomegalia (LOPES et al., 2008; WHO, 2008).

Diante diso, a formação de granuloma associada a fibrose poderá conduzir a

hipertensão portal, uma das maiores causas de mortalidade e morbidade da esquistossomose

(LOPES et al., 2008).

As agressões que ocorrem no organismo parasitado pelo S. mansoni são decorrentes

das lesões diretas do parasito e da resposta do hospedeiro a tais lesões (PRATA, 1996). A

maioria das pessoas infectadas permanece assintomáticas. A sintomatologia clínica

corresponde ao estágio de desenvolvimento do parasito no hospedeiro, podendo ser

dividida em:

a)Dermatite Cercariana, fase de penetração das cercárias através da pele. Varia desde

assintomática até uma dermatite urticariforme, com erupção papular, eritema, edema e

prurido, podendo durar até cinco dias após a infecção;

b)Esquistossomose Aguda caracteriza-se após 3-7 semanas de exposição com febre,

anorexia, dor abdominal e cefaléia. Com menor freqüência, o paciente pode apresentar

diarréia, náuseas, vômitos, tosse seca. Também conhecida como febre de KATAYAMA

(DOHERTY et al., 1996), a esquistossomose aguda é comum em áreas de alta taxa de

transmissão, que são mediados por formação de imunocomplexos e na maioria do casos

com a deposição de ovos nos tecidos do hospedeiro. Sintomas respiratórios também foram

descritos, (70% dos casos) do que em pacientes infectados por S. haematobium

(BETHLEM et al., 1997; COOKE et al., 1999). As manifestação inflamatória deve-se ao

processo migratório do parasita, que passa pelos pulmões (pequena circulação), antes de

atingir o sistema hepático (SCHWARTZ et al., 2000; SALANTRINI et al., 2002; ROSS et

al., 2002).

c)Esquistossomose Crônica, fase que se inicia a partir dos seis meses após a infecção,

podendo durar vários anos. Podendo surgir os sinais de progressão da doença em diversos

órgãos, atingindo graus extremos de severidade como hipertensão pulmonar e portal, ascite,

ruptura de varizes do esôfago (figura 10) (REESE et al., 1989; REY, 2002; GRYSSELS et

al, 2006).

Figura 9 - Fígado sem alterações (A); hepatomegalia com o lóbulo esquerdo aumentado

(B), baço com conformações normais (C); esplenomegalia mostrando um crescimento do

órgão ultrapassando o ultimo arco costal na altura do umbigo (D).

Fonte:medlineplus, 2009.

A esquistossomose humana e experimental é uma doença sistêmica podendo

comprometer vários órgãos, como fígado, baço, intestino e outros. Porém, a maioria dos

estudos se concentra nas alterações hepáticas e intestinais. Três alterações patológicas

merecem mais destaque: presença de granulomas, fibrose de Symmer e alterações

vasculares, como hipertensão portal, varizes esofágicas (ANDRADE, 2004). Os

granulomas provocados por ovos de Schistosoma mansoni expressam durante o seu

desenvolvimento (maturação e involução) vários componentes de matriz extracelular

(MEC) (figura 11) e várias moléculas de adesão (CAMs) (figura 12), os quais são

especialmente distribuídos em seu interior e sofrem variações (modulações) temporais, em

suas expressões.

Figura 10: Composição celular e de componentes da matri extraceular em

granulomas esquistossómticos hepáticos (Modificado a partir de CARVALHO, et al 2008).

Figura 11: Tipos de moléculas de adesão, fatores de crescimento e seus receptores

em granulomas esquistossomóticos (Modificado a partir de CARVALHO, et al 2008).

TIPOS DE CÉLULA

Monócitos/Macrófagos

Células epitelióides

Eosinófilos

Neutrófilos

Mastócitos

Linfócitos (T, B, K)

Fibroblastos

Miofibroblastos

COMPONENTES DA MATRIZ

EXTRACELULAR

Colágenos

Fibronectina

Fibras elásticas

Laminina

MOLÉCULAS DE

ADESÃO

Integrinas

Selectinas

Imunoglobulinas

Caderina

Octudinas

Conexinas

FATORES DE CRESCIMENTO

Fator estimulador de colônias (CSF)

Entropoetina

Leptina

Fator transformador de crescimento

beta (TGF- )

Interferon gama (IFN- )

Com a maturação dos ovos, os neutrófilos começam a infiltra-se em torno deles com

aproximadamente oito dias de implantação dos ovos. Com o surgimento de uma extensa

necrose aparecem células como macrófagos, linfócitos, fibroblastos e eosinófilos entorno

da lesão (10 dias). O aumento da reação do tecido chega ao máximo em duas semanas, com

necrose dos hepatócitos, rodeados de componentes da matriz extracelular. Em quatro

semanas a reposta Th1 diminui e a Th2 aumenta juntamente com as IL-4, IL-5, e IL-13 e

com seis semanas a fibrose hepática (HIRATA e FUKUMA, 2003) (figura 13).

Figura 12: Esquema da reação granulomatosa em fígado de camundongo. Fonte:

HITARA e FUKUMA, 2003.

O granuloma é um nódulo de tecido inflamatório composto de agregado de

macrófagos ativados e de linfócitos T, muitas vezes com associação de necrose e fibrose

0 dia 8 dias 10 dias

2 semanas 4 semanas 6 semanas

(figura 14). A inflamação granulomatosa é uma forma de reação de hipersensibilidade

tardia (TH), frequentemente em resposta aos microrganismos persistentes. Ele é encontrado

num grupo relativamente pequeno de doenças infecciosas e autoimunes, sendo definido

como uma área focal de inflamação granulomatosa (WYNN e CHEEVER, 1995).

Figura 13: Granuloma esquistossomótico. Fonte: PEARCE e MACDONALD, 2002.

O granuloma atinge o seu maior tamanho durante a fase aguda da infecção,

diminuindo na fase crônica. Nesse processo são envolvidos vários mecanismos, incluindo

alterações nos padrões de citocinas produzidas por células Th1 e Th2 (MONTESANO et

al., 1997).

Consiste de um agregado microscópico de células epitelióides rodeadas por um

colar de linfócitos e eventualmente alguns plasmócitos. Sua gênese está fortemente

relacionada a processos imunes e suas células apresentam, nas preparações de rotina, um

Hepatócitos

Ovo

Colágeno Eosinófilo

Macrófago

CD4+ T

Outras Cél

citoplasma rosa-pálido, com grânulos, que aparenta se fundir com o citoplasma das células

vizinhas. O núcleo é oval ou alongado, menos denso que o de um linfócito e pode

apresentar dobras na membrana nuclear. Granulomas de idade ”avançada” desenvolvem

uma cápsula formada por fibroblastos e tecido conectivo (NEVES, 2005).

O elemento anatopatológico básico do processo esquistossomótico crônico e sua

lesão típica é o granuloma que se forma do ovo do parasita. Os antígenos secretados no

interior do ovo maduro atravessam os tecidos e se disseminam nas circunvizinhanças

destes, que são chamados de antígenos solúveis do ovo (SEA) que são fundamentais para a

formação da reação granulomatosa, ou seja da doença (REY, 2001; NEVES, 2005).

2.7 Ciclo Biológico

O ciclo evolutivo do S. mansoni é do tipo heteroxênico com dois hospedeiros, um

intermediário (molusco) e um definitivo (vertebrado). Os ovos do S. mansoni são

eliminados pelas fezes do hospedeiro definitivo (figura 9), homem. Na água, estes eclodem,

liberando larvas microscópicas, ciliadas, chamadas de miracídio, que completam o seu ciclo

vital em apenas 48 horas. Se não encontram um hospedeiro intermediário, essas larvas,

ficam incapazes de infestar o homem e morrem. Mas se encontram os hospedeiros

apropriados, nele penetram e aí continuam o seu ciclo evolutivo formando esporocistos

dando origem a novas larvas que retornam ao meio líquido. Após 4-6 semanas os

caramujos começam a liberar as cercarias, elas nadam através de movimentos vibratórios e

circulares até encontrar um hospedeiro vertebrado, e penetrar ativamente por sua pele, onde

perdem a cauda e transformam-se em esquistossômulos (BLANCHARD, 2004).

Aqueles que não são destruídos pelo sistema imunológico do hospedeiro, seguem

através da corrente sanguínea, passando pelo coração, pulmões e fígado. Nos vasos do

sistema porta-hepático, eles alcançam a fase adulta, acasalam-se e migram para as vênulas

da parede intestinal, onde o ciclo começa novamente (ROSS et al, 2002). Um verme adulto

vive, em média, 3-5 anos, mas pode alcançar 30 anos. O potencial teórico de reprodução de

um par de vermes é aproximadamente de 600 bilhões de esquistossomos (GRYSSELS et al,

2006).

Figura 14: Ciclo de vida do Schistosoma mansoni. Fonte: GRYSSELS et al, 2006.

2.8 Diagnóstico

No diagnóstico clínico, deve-se levar em conta a fase da doença e o histórico do

paciente tais como origem, hábitos, contato com água, entre outros. Algumas formas de

diagnósticos podem ser aplicadas: exame parasitológico das fezes, biópsia ou raspagem da

mucosa retal, testes sorológicos, ultra-sonografia, palpação do fígado e baço. A

esquistossomose pode ser confundida com diversas doenças, em função das diferentes

manifestações que ocorrem durante sua evolução:

Dermatite cercariana – seu quadro clínico pode ser confundido com manifestações

exantemáticas como sarampo, rubéola, escarlatina e dermatites causadas por outros tipos de

cercárias de aves aquáticas.

Esquistossomose aguda ou toxêmica – o diagnóstico diferencial deve ser feito com outras

doenças infecciosas agudas, tais como febre tifóide, malária, hepatite viral anictérica,

estrongiloidíase, amebíase, mononucleose, tuberculose miliar e ancilostomose aguda.

Esquistossomose crônica – nessa fase, a doença pode ser confundida com amebíase,

estrongiloidíase, giardiase e demais parasitoses, além de outras afecções que cursam com

hepatoesplenomegalia, tais como calazar, leucemia, linfoma, salmonelose prolongada,

esplenomegalia tropical e cirroses. Para se chegar ao diagnóstico da esquistossomose é

muito importante não apenas os resultados laboratoriais mas também os dados

epidemiológicos, como história de banhos em águas com caramujos e procedência do

doente. A esquistossomose aguda, por exemplo, é mais freqüente em pessoas que não

vivem em áreas endêmicas (BRASIL, 2005).

No diagnóstico parasitológico ou exame de fezes pode ser feito utilizando o método

de Hoffman, que é uma técnica qualitativa de sedimentação espontânea, e pelo o método de

Kato-Katz que é uma técnica quantitativa que determina o número de ovos por grama de

fezes indicando a carga parasitária (KATZ et al., 1972).

A biópsia ou raspagem da mucosa retal, apesar de não fazer parte dos exames de

rotina, é recomendável em casos suspeitos com parasitológico negativo, além de permitir

uma verificação mais rápida do efeito da quimioterapia, entretanto o resultado não significa

necessariamente a cura, pois as fêmeas podem não terem sido mortas, mas somente cessado

temporariamente a postura de ovos (NEVES, 2005). Os testes sorológicos não possuem

sensibilidade/especificidade suficiente para sua aplicação. A ultra-sonografia é um dos

diagnósticos mais importantes, principalmente na fase crônica da doença onde são

observadas as alterações hepáticas e determinado com precisão o grau de fibrose (REY,

2001; FUNASA, 2003).

2.9 Controle e prevenção quimioterápica

O controle da esquistossomose é um desafio para muitos países endêmicos. Apesar

dos esforços para controlar a doença ela continua sendo uma das infecções parasitárias mais

prevalentes do mundo e um problema de saúde pública mundial, perdendo apenas para a

malária nos países tropicais e subtropicais (SAVIOLI et al., 1997).

A nova estratégia coordenada pela Organização Mundial de Saúde (OMS) sobre uso

de drogas antihelmintica tornará possível o controle da esquistossomose em comunidades

pobres e marginalizados, por conta do baixo custo e segurança dos medicamentos que agora

estão amplamente disponíveis (WHO, 2008).

No combate à esquistossomose várias medidas devem ser adotadas como,

eliminação sistemática dos hospedeiros intermediários no seu habitat natural, drenagem de

lagos e córregos ou pelo combate biológico empregando peixes, a tilápia, que se alimenta

desse molusco. No entanto não é uma medida correta vista o desequilíbrio ecológico. Outra

medida seria identificar as áreas contaminadas e submetê-las a processos de saneamento.

Evitando que os excrementos de pessoas portadoras da doença possam ser carregados pela

água das chuvas. As medidas de profilaxia consistem basicamente em medidas preventivas,

de fundamental educação sanitária das populações sobre o modo de transmissão da doença.

Assim como o tratamento da população infectada (OLIVEIRA, 1997; REY, 2002).

A estratégia para o controle da esquistossomose tem como objetivo reduzir a

mortalidade através do tratamento com praziquantel, que é a única droga disponível.

Praziquantel tem sido utilizado com sucesso nos últimos 20 anos para a esquistossomose no

Brasil, Camboja, China, Egito, Marrocos e Arábia Saudita. Tratamento pelo menos três

vezes durante a infância para a prevenção da doença na idade adulta. O recente foco e

consenso sobre doenças tropicais negligenciadas, sublinharam que algumas destas doenças

podem ser tratadas em larga escala com medicamentos seguros e eficazes, e em intervalos

regulares. Tal tratamento é feito individualmente, sem diagnóstico, assim que defini a área

hiperendêmica. O Praziquantel é o fármaco utilizado para o tratamento de todas as

esquistossomoses, no entanto está havendo falhas em estudos nos laboratórios e no campo

(CIOLI e PICA-MATTOCCIA, 2004; RENGANATHAN e CIOLI, 1998).

2.10 Resistência ao Tratamento

A evolução da resistência dos helmintos é decorrente da inexistência de métodos

para detectar o seu desenvolvimento. Então, muitos casos não são detectados em estágios

iniciais, reduzindo ou mesmo anulando, a possibilidade do processo ser revertido. Para

diminuir os níveis de resistência, recomenda-se prosseguir a terapia com cautela ou retirar

totalmente o medicamento. Para os portadores da esquistossomose torna-se impossível,

pois o Praziquantel representa o único medicamento capaz de combater a doença

(BENNETT et al., 1997; CIOLI e PICA-MATTOCCIA, 2004).

Resistência a um determinado fármaco, significa que houve uma redução na

sensibilidade após ter sido tratada por ele. Tolerância é uma insensibilidade ao fármaco

inata, onde a população não tinha tido contato prévio com o mesmo (DOENHOFF et al.,

2002).

O uso de quimioterápicos no controle de doenças infecciosas ao longo do tempo

pode ser apontado como fator principal no desenvolvimento de resistências. O uso

extensivo e doses exageradas de anti-helmínticos poderá resultar na resistência, afetado o

controle das parasitoses. A resistência aos fármacos tem ocorrido em conseqüência do uso

abusivo (COLES, 1999; SANGSTER e GILL, 1999).

Os primeiros relatos da resistência ao praziquantel registrados na literatura vieram

de um foco no Norte do Senegal na África, onde o fármaco não teria sido eficaz em torno

de 18-39 % dos casos (GRYSEELS et al., 1994; STELMA et al., 1995), o qual poderia ter

sido devido a sua epidemiologia, ou seja, de acordo com a imunologia do paciente, a carga

parasitária, o número de vermes imaturos e a reinfecção (CIOLI e PICA-MATTOCCIA,

2003). A diminuição da susceptibilidade dos esquistossômulos com a administração do

Praziquantel foi repentina e a monitoração desse fenômeno deve ser ativa assim como o

desenvolvimento de novos fármacos esquistossomicida, visto que ao longo do tempo as

conseqüências podem se agravar (DOENHOFF et al., 2002).

2.11 Imunopatologia

A esquistossomose mansônica é basicamente uma doença que decorre da resposta

inflamatória granulomatosa que ocorre em torno dos ovos vivos do parasito. Os antígenos

são secretados pela membrana interna da casca do ovo maduro, chamada envelope de Von

Lichtenberg, que apresenta toda maquinaria de síntese protéica, núcleo próprio, inúmeras

mitocôndrias e uma extensa rede de retículo endoplasmático rugoso indicando alto nível de

síntese protéica (NEVES, 2005). Os antígenos induzem a uma resposta imunológica

humoral e celular que são elementos fundamentais na formação da reação granulomatosa e,

portanto da doença.

O organismo apresenta múltiplas camadas de defesa, pelas quais o organismo se

defende contra a invasão de patógenos. As mesmas podem ser classificadas em: barreiras

físicas – que compreendem a pele, a autolimpeza e a microbiota normal do indivíduo;

imunidade inata e imunidade adaptativa. A pele é a primeira defesa do corpo humano

contra a infecção armando uma barreira resistente e impenetrável de epitélio protegido por

camadas de células queratinizadas (PARHAM, 2001).

Quando a barreira física é rompida e os patógenos penetram nos tecidos moles do

corpo, entra em ação a imunidade inata, que utiliza mecanismos de reconhecimento

molecular geral para detectar a presença de microrganismos e não leva à imunidade

prolongada contra aquele patógeno em particular. A resposta imune adaptativa, em

contraste, focaliza especificamente o invasor em questão gerando memória imunológica

para o mesmo, através da seleção clonal de células imunes para esse patógeno. As células

responsáveis por ambas as respostas imunes, inata e adaptativa, são principalmente os

leucócitos e as células teciduais relacionadas a eles (BENJAMINE et al., 2002; PARHAM,

2001).

A infecção parasitária pode ser particularizada pela alta resistência dos parasitos às

defesas imunes e pela cronicidade de sua ação. Os parasitos são capazes de sobreviver e de

replicar-se nos seus hospedeiros, porque são bem adaptados para resistirem às defesas

imunes. Resistem à fagocitose, multiplicam-se no interior de macrófagos e, em alguns

casos, resistem a lise mediada pelo complemento. Os helmintos, de uma maneira geral,

sobrevivem nos tecidos extracelulares e, com freqüência, sua eliminação é dependente de

tipos especiais de resposta de anticorpo (ABBAS et al. 2003).

Na infecção pelo S. mansoni tem-se uma resposta Th1 e Th2, o que chamamos de

uma dicotomia da resposta imune, antes da oviposição ocorre a resposta Th1 e depois da

oviposição ocorre a resposta Th2 (GRYZCH et al., 1991; WYNN et al., 1993; KUBY,

2002; PEARCE e MACDONALD, 2002) (figura 15). E é na resposta Th2 que se tem uma

reação granulomatosa de agregados de leucócitos, linfócitos, eosinófilos e macrófagos

(PEARCE e MACDONALD, 2002; STADECKER et al., 2004).

Figura 15: Desenvolvimento da resposta imune na infecção pelo Schistosoma Fonte: PEARCE e

MACDONALD, 2002.

A resposta Th1 é definida pela produção de interferon gama (INF-γ) e está

associada com a imunidade mediada por células, incluindo reações de hipersensibilidade

tardia, recrutamento e ativação de macrófagos inflamatórios e leucócitos e respostas

citotóxicas que levam a proteção contra microrganismos celulares. Os linfócitos Th1

respondem otimamente aos antígenos apresentados pelas células B, utilizando como co-

estimulante o CD80 e produzem ainda IL-2, linfotoxinas e fator de necrose tumoral, não

possuindo receptores para a IL-1 e TNF-β (CHTANOVA e MACKAY, 2001).

A resposta Th2 é caracterizada pela produção de IL-4 e IL-5 e está associada com a

imunidade humoral, incluindo a ativação de eosinófilos e mastócitos levando a proteção

contra microrganismos extracelulares. Os linfócitos Th2 respondem otimamente aos

antígenos apresentados pelos macrófagos e células dendríticas mielóides, são

especificamente ativados por sinais gerados pelo CD86 e mediante o estímulo do antígeno

ou na presença de IL-1, citocina fundamental em seu processo de ativação, produzem IL-4,

IL-5, IL-6, IL-10, IL-13 (YANG et al., 2005). O subtipo Th3 foi identificado

posteriormente por produzir elevados níveis do fator de crescimento transformante (TGF-

, além de IL-4 e IL-10 em quantidades variáveis. As células Th3 apresentam um fenótipo

imunossupressor de tolerância oral e autoimunidade em modelos experimentais (SING et

cercária esquistosômulo

vermes adultos ovos

Após infecção Aguda Crônica

al., 1999). Além das células T CD4+, que deram origem ao paradigma Th1/Th2, outros

tipos celulares como linfócitos T CD8+, células dendríticas, macrófagos e células NK

também produzem citocinas de ambos os tipos, ou seja, tipos 1 e 2 (KIM et al., 2002). Isso

levou a divisão do estudo das respostas imunológicas em resposta do tipo Th1 ou Th2

intrinsecamente relacionadas aos tipos de citocinas produzidas pelas diferentes populações

celulares (KOURILSKY e TRUFFA-BACHI, 2001).

As interleucinas 5 e 10 desempenham papéis importantes na infecção, quando estão

ausentes durante a infecção aguda a IL-5 impede a eosinofilia, mas não tem nenhum efeito

sobre o tamanho e a fibrose do granuloma (SHER, 1990). Sugerindo que a IL-5

desempenha um papel secundário na patogênese. Contudo, a IL-10 parece desempenhar um

papel na regulação do tamanho do granuloma (FLORES-VILLANUEVA et al., 1996). Este

fato levanta indícios de que a IL-10 diminui a quantidade das populações de células Th1

inflamatórias, ou torna-as anérgicas, levando a um desenvolvimento de uma resposta Th2

estável (FLORES-VILLANUEVA et al., 1996; REISER e STADECKER 1996).

As células como os macrófagos possuem funções na imunidade inata e como células

efetoras atuam na imunidade adquirida. Os macrófagos que são ativados na resposta Th1

secretam mediadores inflamatórios, como o óxido nítrico (NO) (JORENS et al., 1995;

MACMICKING et al., 1997).

Na infecção pelo S. mansoni, a ativação dos macrófagos pelo IFN- e por outros co-

fatores induz à produção de NO pela reação enzimática. O NO torna-se uma molécula

efetora, causando a morte do verme (JAMES, 1995).

O maior aumento na produção de NO é na oviposição dos vermes adultos, no

entanto, com o início de resposta Th2 por parte do hospedeiro, a produção de NO diminui,

uma vez que a resposta Th1 foi inibida (BRUNET et al., 1999). Estudos em camundongos

infectados deficientes em IL-4 demonstraram, através de uma polarização da resposta Th1,

com alta produção de IFN- e NO após a oviposição, que a citocina IL-4 tem grande

importância no controle do NO e na produção do granuloma, fazendo assim com que a

sobrevida do camundongo aumente (PATTON et al., 2002).

2.12 Imidazolidinas Bioativas

As imidazolidinas ou hidantoínas e seus derivados são uma classe de substâncias

que despertam grande interesse por apresentarem importantes atividades farmacológicas,

tais como anticonvulsivante, antiarrítmico e no tratamento de complicações diabéticas

crônicas. Esses compostos também promovem agregação de plaquetas e inibição da aldose

redutase. As imidazolidinas possuem um grupo metilênico muito reativo no carbono-5, o

que permite a síntese de inúmeros derivados a partir da condensação com aldeídos

aromáticos (ROSSI, 2000).

Luttermoser e Bond (1954) a partir de modificações estrutural no anel

imidazolidínico, observaram que a 5,5-difenil-imidazolidina-2,4-diona e a 5-(p-clorofenil)-

5-metil-imidazolidina-2,4-diona obtidas (figura 12) apresentavam atividade frente a vermes

adultos em S. mansoni de ratos infectados.

Figura 16: (I) 5,5-Difenil-imidazolidina-2,4-diona e (II) 5-(p-clorofenil)-5-metil-

imidazolidina-2,4-diona

A imidazolidina-2,4-diona foi descoberta em 1861 por Bayer durante um trabalho

com ácido úrico. Em 1875 Bayer sintetizou a imidazolidina-2,4-diona pela primeira vez

através do aquecimento do bromo-acetiluréia com amônia alcoólica, mais tarde Harries e

Weiss em 1900 obtiveram a imidazolidina-2,4-diona a partir do éter etílico de glicina e

cianato de potássio em presença do ácido clorídrico (ELDERFIELD et al., 1957;

FINKBEINER, 1965).

Em 1899, Ruhemann e Cunnington obtiveram derivados do 5–benzilideno

imidazolídínicos pelo aquecimento do fenil proprionato de etila com uréia em solução

alcoólica na presença de etóxido de sódio, onde substituiu a uréia pela tioúreia e guanidina,

obtendo o 5–benzilideno-2-tioxo-imidazolidin-2-ona e o 2-amino-5-benzilideno-

imidazolidin-4-ona (figura 13) (JOHNSON et al., 1915).

I

N

N O

O H

H

N

N O

O H

HH3C

II

Figura 17: (I) 5-Benzilideno-2-tioxo-imidazolidin-4-ona e (II) 2-amino-5-benzilideno-

imidazolidina-2,4-diona

Derivados imidazolidínicos sintetizados por nossa equipe no Laboratório de Síntese

e Planejamento de Fármacos ressaltam a contribuição química do núcleo imidazolidínico.

Os resultados já obtidos com derivados imidazolidinônicos-3,5-dissubstituídos revelam que

essas moléculas são portadores de significante atividade esquistossomicida (OLIVEIRA et.

al., 2004; SOARES, 2004; ALBUQUERQUE et. al., 2005; PITTA, 2005). Alguns desses

derivados já se encontram patenteados pelo INPI sob o numero de depósito 000362/03, em

02/10/2003, e vários em fase de desenvolvimento (PITTA et. al, 2003).

Atualmente observa-se o aparecimento rápido de cepas resistentes aos fármacos

disponíveis Praziquantel e Oxamniquine, sendo este último não mais incluso dentre os

medicamentos essenciais (WHO, 2003), porém ainda utilizado na clínica médica em

Pernambuco.

Os resultados obtidos em nosso Laboratório de Planejamento e Síntese como os

derivados imidazolidínicos frente aos vermes adultos de Schistosoma mansoni (OLIVEIRA

et al., 2004; ALBUQUERQUE et al.,2005), nos impulsionou ao planejamento e a síntese de

novos derivados 3-benzil-5-benzilideno-4-tioxo-imidazolidin-2-onas e a avaliação da

atividade esquistossomicida in vitro e in vivo na busca de novos agentes esquistosomicidas.

2.13 Fármacos esquistossomicidas

Vários fármacos foram desenvolvidos para o combate do Schistosoma, desde do

começo do século XX, estas apresentaram graves efeitos colaterais que tornaram a sua

utilização terapêutica proibida.

N

N NH

O

CH

H

H

N

N S

O

CH

H

H

I II

A história da quimioterapia esquistossomicida representou sempre um desafio no

encontro de um tratamento eficaz e seguro desde o começo do século XX. Foram utilizados

vários fármacos para o tratamento da esquistossomose, tais como: Tártaro emético,

Niridazol, Lucantone, Hicantone, entre outros (COLES, 2002).

Foram usados na quimioterapia esquistossomicida há aproximadamente 50 anos,

mas hoje obsoleto por boas razões. O tártaro emético (tabela 4) foi descoberto

acidentalmente em 1918 por Christopherson, observando uma tribo Berbere que estavam

sendo tratados com a droga para leishmaniose. Ele percebeu uma interrupção no parasita S.

hematobium. A droga foi injetada por via intravenosa e com doses crescentes. As maiores

preocupações foram os efeitos colaterais como, diarréias, cólicas, vômitos, rachaduras na

pele e até mesmo problema cardiovasculares; sendo mais freqüentes com o uso da terapia e

por ser uma droga de uso prolongado. Muitos médicos preferiram dar o antimônio somente

aos pacientes hospitalizados. O tártaro emético é eficaz contra as três espécies de

Schistosoma o S. haematobium, S. japonicum e S. mansoni com menor índice de eficácia

para o S. japonicum (CIOLI et al., 1995).

A emetina (tabela 4) foi usada a partir de 1920 para o tratamento das infecções do S.

japonicum e seu uso mais tarde foi estendido para o S. mansoni. Seu efeito era satisfatório,

no entanto as doses eram próximas do limite da toxicidade (CIOLI et al., 1995). Logo após

introduziu a 2,3 dehidroemetina (tabela 4), que tem as mesmas atividades da emetina, mas

com metade da toxicidade e com efeitos colaterais modestos sendo necessário o

acompanhamento dos pacientes. Mas a droga ainda é usada para o tratamento da amebíase

(CIOLI et al., 1995).

O niridazol (tabela 4) é um derivado do nitrotiazol que foi introduzido em 1964 por

Ciba-Geigy com o nome de Ambilhar . A droga recebeu atenção considerável, por ser

uma das alternativas adiantadas dos antimoniais e por ter vantagens na administração oral

(CIOLI et al., 1995). O composto não é muito eficaz e apresenta diversos inconvenientes

sérios, tais como varias doses orais e ocorrência de efeitos colaterais como mutagenicidade,

carcinogenicidade, embriotoxicidade, imunossupressão (FONTANILLES, 1969). A

experiência clínica diz que o niridazol é mais eficaz em crianças do que em adultos (CIOLI

et al., 1995).

O metrifonato (tabela 4) é um composto organofosforado, 2,2,2-tricloro-1-

hidroxietil dimetil fosfanato, que foi introduzido em 1955 com os nomes de DipterexO ou

Dylox3 (LORENZ et al., 1955). Em 1962, um médico belga, Jaques Cerf observou a

possibilidade de atividade anticolinesterásica em helmintos e mais tarde observou eficácia

para o S. haematobium, no entanto comprovou que ele não tinha atividade frente ao S.

mansoni. Hoje, ele não é mais usado contra esse parasita (CIOLI et al., 1995).

O nitrofurano, em 1960, foi relatado alguma atividade para as infecções do S.

japonicum em animais e humanos. O furapromidium, derivado do nitrofurano foi usado

largamente na China, no entanto verificou-se alta toxicidade o que conduziu o abandono

dos nitrofuranos (tabela 4) (CIOLI et al., 1995). Robinson e colaboradores em 1970,

demonstraram atividade esquistossomicida em trans-5-amino-3-[2-(5-nitro-2- furil)-vinil]-

1,2,4-oxadiazole, molécula análogas ao niridazol. Observou-se que a toxicidade aguda era

baixa, porém mostrou mutações cancerígenas e a substância foi descontinuada para o

tratamento das esquistossomíases humana (CIOLI et al., 1995).

Em 1938, descobriu-se um composto ativo chamado de Miracil, outros três

compostos desta série foram sintetizados e testados o Miracil B, C e D. O Miracil D estava

pronto para ser experimentado clinicamente, logo seus estudos foram interrompidos devido

a segunda guerra mundial. Em 1945, foi introduzido na parte clínica com o nome de

lucantona (tabela 4) ou 1-[2-(dietilamino)etilamino]-4-metil-9H-tioxant-9-one, onde foi

eficaz frente ao S. mansoni e S. haematobium quando administrados oralmente. Devido aos

seus efeitos colaterais como problemas no sistema cardiovascular, sistema nervoso central e

gastrointestinais, não é mais utilizada (CIOLI et al., 1995).

O hicantona (tabela 4) é análogo do lucantona. O hicantona é ativa frente ao S.

mansoni e S. haematobium, porém com baixa atividade nos vermes adultos fêmeas e nas

formas imaturas, nos experimentos in vitro (CIOLI et al., 1995).

A atividade anti-helmíntica do amoscanato (tabela 4) ou 4-isotiocianato-4'-

nitrodifenilamino foi relatado, em 1976, por Striebel. O fármaco é uma substância cristalina

amarela, insolúvel em água e na maioria dos solventes orgânicos (STRIEBEL, 1976). Uma

característica atrativa do amoscanato é por sua larga atividade para as doenças como

esquistossomíase, filariose e até nematódeos gastrointestinais. Nos experimentos o

amoscanato mostrou-se eficaz a todas as principais espécies de Schistosoma. Com apenas

uma dose oral, os ratos infectados foram curados, a toxicidade era baixa (CIOLI et al.,

1995). No entanto ele não consta na lista modelo de medicamentos essenciais da World

Health Organization (WHO, 2003).

O oltipraz (tabela 4) é um derivado do ditiol-tiona, sintetizado em 1976 na indústria

Rhone-Poulenc, na França (BARREAU et al., 1977). É um pó vermelho fino, insolúvel na

água e solúvel em lipídeos. É ativo frente ao S. mansoni, S. haematobium e S. intercalatum

e inativo ao S. japonicum. Os efeitos tóxicos em longo prazo não foram relatados. Os

principais efeitos colaterais são náuseas, vômitos, dores abdominais, sonolência (CIOLI et

al., 1995).

A tubericidina (tabela 4) ou 7-deazoadenosina é um análogo da purina que pode ser

incorporado em ácidos nucléicos do Schistosoma. Seu uso como esquistossomicida foi em

1971, sendo eficaz na cura de ratos infectados com as principais espécies de Schistosoma,

nãosendo relatado nenhuma toxicidade aparente (JAFFE et al., 1971; CIOLI et al., 1995).

A atividade antiparasitária da ciclosporina A (tabela 4) foi descoberta, em 1981, por

Bueding e colaboradores ao tentar suprimir a formação de granuloma de ratos infectados

por S. mansoni. Observaram que ratos tratados tiveram uma redução drástica no número

dos vermes e que esta redução era mais pronunciadas ao tratar de infecções imaturas e os

mais afetados eram os machos. A ciclosporina A além de atividade contra o Schistosoma

tem atividade frente ao plasmódio, leishmania, cestodos, filaria entre outros (CIOLI et al.,

1995).

A oxamniquine (tabela 4) e o praziquantel (tabela 4), ambas são administradas por

via oral em dose única, que são relativamente bem toleradas, com baixa toxicidade, e

apresentam bons percentuais de cura, em torno de 80 % para adultos e de 70 % para

crianças abaixo de 15 anos (KATZ, 2004).

Estudos realizados em camundongos infectados experimentalmente por S. mansoni

e tratados com o oxamniquine mostraram que os vermes machos são mais susceptíveis, o

fármaco produz edema e necrose do tegumento, com posterior aparecimento de lesão em

bolhas. O praziquantel, em estudos in vitro, provoca contrações tônicos-clônicas no

parasito, com posterior parada na postura de ovos. O praziquantel é ativo contra todas as

espécies de Schistosoma que parasitam o homem, ao contrário da oxamniquine, que só é

ativa contra o S. mansoni. Sendo esta a razão principal para a retirada da oxamniquine da

lista dos medicamentos essenciais da Organização Mundial de Saúde (CIMERMAN, 2001;

WHO, 2003).

O praziquantel induz o influxo de cálcio através do tegumento e das células

musculares do verme causando contração, demonstrando a presença de sítios sensíveis ao

praziquantel. A eficácia do praziquantel foi constatada em estudos realizados na Zona da

Mata do Estado de Pernambuco, em 52 povoados, onde a substituição da oxamniquine que

foi usada durante dois anos pelo praziquantel usado durante um ano, em pessoas infectadas,

resultou em uma diminuição dos índices de infecção. Verificando-se então a melhor

eficiência do praziquantel (BECK et al., 2001).

Tabela 4: Principais fármacos esquistossomicidas desenvolvidos no século XX.

ANO NOME COMERCIAL ESTRUTURA

1918 Tártaro emético ou

Tártaro de antimônio e

potássio

1920 Emetina

1920 2,3 De-hidroemetina

COOH

Sb O Sb

O

OH

H

O C

C

H

H

COK

OH

O

O

C

C

H

H

C

OH

O

O

KO

OH

N

H

H

O

O H

HNO

O

CH2H

1945 Lucatona

1945 Hicantona

1955 Metrifonato

1964 Ambilhar ou

Niridazol

1964 Oxamniquine ou Mansil

S

NN

NH

OO2N

P

O

OO

OH

ClClCl

S

O HNN

O

NH

CH2NHCHCH3

CH3

NO2

CH2OH

N

N

O

O

1970 Praziquantel ou Cestox ou

Cisticid

1971 Tubericidina

1976 Amoscanato

1976 Oltipraz

1981 Ciclosporina A

NN

S

S

H3C

S

N

N

NH2

N

O

OHHO

HO

N C CO N C C N

O

C CO N C C

O

NH3C

CO

CH

N

C

HCH2C

H3C

O

H3C

H3C

CH N C C

O

CH3 H

N

CH3

C

H

O

C

CH2

CH

H3CCH3

H

NH C

O

C N

CHH3C CH3

H H

CH3CH2

CH3

CHCH2

CO C H

CH2

CHH3C CH3

N CH3

CO

CH2

CCH3

HCH2

C

C

H

HH3C

CH H3C

CH3H3C

H3C

CH

CH3H3C

OBJETIVOS

3. Objetivos

3.1. Geral

O presente trabalho pretendeu contribuir, no âmbito da Química Medicinal, no

desenvolvimento de novos agentes esquistossomicidas 5-arilazo-3-benzil-4-tioxo-

imidazolidin-2-onas (LPSF/PT) e 3-benzil-5-benzilideno-4-tioxo-imidazolidin-2-onas

(LPSF/RZS).

3.2. Específicos

Síntezar moléculas das séries 5-arilazo-3-benzil-4-tioxo-imidazolidin-2-onas

(LPSF/PT) e 3-benzil-5-benzilideno-4-tioxo-imidazolidin-2-onas (LPSF/RZS);

Elucidar e caracterizar as estruturas, através de métodos espectroscópicos

convencionais (infravermelho, ressonância magnética nuclear de hidrogênio,

ultravioleta e espectrometria de massas) dos compostos sintetizados;

Avaliar a suscetibilidade in vitro do Schistosoma mansoni (cepa BH) frente aos

derivados imidazolidínicos;

Analisar o tegumento do parasita através da microscopia eletrônica de varredura;

Avaliar a citotoxicidade, viabilidade celular, óxido nítrico e dosagem de

citocinas.

CONCLUSÃO

4 Conclusão

Os derivados imidazolidinicos testados tiveram resultados relevantes quanto a

viabilidade dos vermes apresentando uma mortalidade máxima nas doses maiores e

medianas, inibição da oviposição dos vermes, alterações tegumentares e descasalamentos.

Também houve uma indução significativa do óxido nítrico em quatro compostos analisados

LPSF/PT-9 e PT-10; LPSF/RZS-2 e RZS-5.

Na apoptose e na necrose celular os compostos imidazolidinicos apresentaram

valores inferiores ao praziquantel, assim como a citotoxicidade dos derivados

imidazolidinicos também foi inferior ao praziquantel.

Na microscopia eletrônica de varredura foi observado danos no tegumento dos

vermes muito semelhante ao praziquantel, único fármaco de referência para a

esquistossomose tendo então os compostos imidazolidinicos como possíveis candidatos a

fármacos.

PERSPECTIVAS

5 Perspectivas

Diante de todos os resultados favoravéis: citotoxicidade, viabilidade celular, análise da

microscopia eletrônica de varredura, fica claro que os derivados imidazolidínicos são fortes

candidatos a fármacos esquistossomicidas, fazendo-se necessários estudos mais

aprofundados no que diz respeito a elucidação do mecanismo de ação dos compostos.

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