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UNIVERSIDADE ESTADUAL DE SANTA CRUZ
JOÃO VITOR DE AZEVEDO MANHÃES
CARBOIDRATOS SOLÚVEIS NA DIETA DE JUVENIS DE PIRARUCU,
Arapaima gigas
ILHÉUS – BAHIA
2017
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JOÃO VITOR DE AZEVEDO MANHÃES
CARBOIDRATOS SOLÚVEIS NA DIETA DE JUVENIS DE PIRARUCU,
Arapaima gigas
Dissertação apresentada ao Programa de Pós-graduação em
Ciência Animal da Universidade Estadual de Santa Cruz,
para obtenção do título de Mestre em Ciência Animal.
Área de concentração: Nutrição e produção de organismos
aquáticos
Orientador: Prof. DSc. Luís Gustavo Tavares Braga
ILHÉUS – BAHIA
2017
iii
M266 Manhães, João Vitor de Azevedo.
Carboidratos solúveis na dieta de juvenis de pira-
rucu, Arapaima gigas / João Vitor de Azevedo
Manhães. – Ilhéus, BA: UESC, 2017.
vii, 59 f. : il.
Orientador: Luís Gustavo Tavares Braga.
Dissertação (Mestrado) – Universidade Estadual
de Santa Cruz. Programa de Pós-Graduação em
Ciência Animal.
Inclui referências bibliográficas.
1. Aquicultura. 2. Pirarucu (Peixe) – Alimentos. 3. Nutrição animal. 4. Metabólitos. 5. Carboidratos – Metabolismo. I.Título.
CDD 639.3
iv
JOÃO VITOR DE AZEVEDO MANHÃES
CARBOIDRATOS SOLÚVEIS NA DIETA DE JUVENIS DE PIRARUCU,
Arapaima gigas
Ilhéus-BA, 17/02/2017.
___________________________________
Luís Gustavo Tavares Braga – DSc
UESC/DCAA
(Orientador)
___________________________________
Luiz Vítor Oliveira Vidal
UFBA
_____________________________________
Denise Soledade Peixoto Pereira
UFRB
ILHÉUS – BAHIA
2017
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AGRADECIMENTOS
Ao professor Luis Gustavo Tavares Braga pela orientação e incentivo durante
todo o curso do mestrado.
Agradeço a toda a minha família que sempre estiveram comigo nas horas difíceis
me ajudando, orientando e nunca me deixaram desistir pelo caminho.
Agradeço aos ensinamentos que me foram passados por todos os professores da
UESC.
Agradeço aos meus companheiros de laboratório Marcel Santos, Ana Paula,
Joaldo Rocha, Bruno Urach, Francisco Oliveira, Adenilson Gomes, Karina
Moraes, Itamar Jouguet e Deise Costa pela vivência e companheirismo.
Agradeço a todos os amigos da área de aquicultura pela paciência em
compartilhar seus conhecimentos.
Agradeço a CAPES por financiar o meu mestrado.
A UNIVASF e ao professor Fernando Bibiano por me receber e auxiliar nas
análises experimentais.
Agradeço aos laboratórios da UESC de Hematologia, Histopatologia e Nutrição
animal pelo auxílio nas fases experimentais.
Agradeço também a Pratigi alimentos por disponibilizar os ingredientes para as
dietas experimentais.
A Agua vale piscicultura por disponibilizar os peixes.
E agradeço também ao laboratório de aquicultura da UFV pela confecção das
dietas.
Obrigado a todos!
vi
CARBOIDRATOS SOLÚVEIS NA DIETA DE JUVENIS DE PIRARUCU,
Arapaima gigas
RESUMO
Objetivou-se com esse estudo, avaliar a influência de cinco níveis de
carboidratos solúveis na dieta sobre o desempenho, respostas fisiológicas,
metabólicas e composição do filé de juvenis de pirarucu. Para tanto, 200 peixes
com peso médio inicial de 182 ± 3,6 g e comprimento inicial de 29,5 ± 2,2 cm
foram distribuídos em 20 tanques (250 L), totalizando 10 peixes cada,
configurando um delineamento inteiramente casualizado composto de cinco
tratamentos e quatro repetições. As unidades experimentais fizeram parte de um
sistema de recirculação, acoplado a um filtro biomecânico. Durante 62 dias, os
juvenis de pirarucu foram alimentados até a saciedade aparente com dietas
extrusadas contendo diferentes níveis de carboidratos solúveis (220, 240, 260,
280 e 300 g kg−1). Ao final do experimento os dados obtidos foram submetidos à
análise estatística utilizando o programa estatístico R Development Core Team
(2008). Após a análise estatística foi verificado que houve influência significativa
no desempenho e a ração com nível de 220 g kg−1 proporcionou maior ganho de
peso. A relação vicerossomatica também foi influenciada pelo nível de
carboidrato onde a ração com 240 g kg−1 apresentou maior relação em
porcentagem, enquanto que a menor relação foi observada para o tratamento com
330 g kg−1. A composição centesimal do filé e tamanhos das vilosidades não
apresentaram diferença significativa entre os tratamentos, ao contrario do
observado para as variáveis metabólicas, que apresentaram diferentes padrões de
significância entre as tratamentos.
Palavras chave: Aquicultura. Metabolitos. Nutrição. Energia digestivel.
vii
SOLUBLE CARBOHYDRATES ON THE JUVENILE DIET OF PIRARUCU,
Arapaima gigas
ABSTRACT
The objective of this study was to evaluate an influence of five levels of soluble
carbohydrates in the diet on the performance, physiological, metabolic and
composition of juvenile fillets of pirarucu. For this purpose, 200 fishes with
initial mean weight of 182 ± 3,6 g and 29,5 ± initial length of 2,2 cm were
distributed in 20 tanks (250 L), totalling 10 fish each, setting up a completely
randomized design composed of five treatments and four replicates. The
experimental units were part of a recirculation system coupled to a
biomechanical filter. During 62 days, juveniles of pirarucu were fed until the
apparent satiety with extruded diets containing different levels of soluble
carbohydrates (220, 240, 260, 280 and 300 g.kg-1). At the end of the experiment,
the data were submitted to statistical analysis using the statistical program R
Development Core Team (2008). After the statistical analysis, it was verified that
there was a significant influence on the performance, and the ration with a level
of 220 g.kg-1 provided greater weight gain. The vicerosomatic relationship also
was influenced by the level of carbohydrate, where the ration with 240 g.kg-1
presented higher ratio in percentage, while the lowest relation was observed for
the treatment with 330 g.kg-1. The centesimal composition of the fillet and villus
sizes showed no significant difference between the treatments, contrary to the
observed for the metabolic variables, which presented different patterns of
significance between the treatments.
Key words: Aquaculture, Metabolites, Nutrition, Energy.
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SUMÁRIO
1.INTRODUÇÃO ......................................................................................................................... 9
2.REVISÃO DE LITERATURA ................................................................................................ 10
2.1.AQUICULTURA .................................................................................................................. 10
2.2.ESPÉCIE ............................................................................................................................... 11
2.3.NUTRIÇÃO E ALIMENTAÇÃO ........................................................................................ 12
2.3.1.CARBOIDRATO ............................................................................................................... 14
2.4.ENZIMAS DIGESTIVAS..................................................................................................... 14
2.5.HEMATOLOGIA NA AQUICULTURA ............................................................................. 15
2.6.HISTOLOGIA DO INTESTINO .......................................................................................... 16
3.REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ..................................................................................... 18
ARTIGO CIENTÍFICO............................................................................................................... 27
9
1. INTRODUÇÃO
Segundo dados da FAO (2014), a produção mundial de pescado passou de
aproximadamente 125,9 milhões de toneladas em 2000, para 167.2 milhões de toneladas
em 2014. Tendo como principal responsável por este incremento a aquicultura, que
representava apenas 25,7% da produção de pescado mundial em 2000, e passou em
2014 a representar 44,1%, experimentando uma taxa média de crescimento anual de
6%, enquanto a pesca extrativa apresentou apenas 0,7% no mesmo período.
No Brasil, diversas espécies nativas que possuem potencial zootécnico vêm sendo
estudadas com o objetivo de obter pacotes tecnológicos que auxiliem em sua produção.
Em 2011, a produção aquícola continental nacional foi de 544.490 toneladas,
representando crescimento de 38% em relação a 2010. Desse total as espécies nativas
como o pirarucu (Arapaima gigas) representaram juntas 44,5% (BRASIL, 2013a).
O pirarucu é um dos maiores peixes de escama do mundo e tem como seu habitat
natural lagos de várzea e florestas inundadas da bacia amazônica (CASTELLO, 2008).
Esta espécie possui características interessantes ao cultivo, é rústica ao manejo de
produção, aceita bem alimentos artificiais, expressa rápido crescimento em cativeiro,
além de apresentar boa conversão alimentar e aceitação de mercado. Para que seja
otimizado este potencial produtivo, é necessária a utilização de rações bem elaboradas e
completas a fim de atender as exigências nutricionais da espécie (FURUYA et al.,
2010).
Dentre os principais entraves para formulação de dietas para organismos
aquáticos, principalmente para peixes carnívoros, está a alta relação entre proteína e
energia nas dietas (BOOTH et al., 2013) sendo parte dessa proteína utilizada como fonte
energética. Para espécies carnívoras a utilização e a digestibilidade de carboidratos
como fonte de energia é limitada (ALMEIDA FILHO et al., 2012). A ação poupadora
da proteína por fontes de energia como o carboidrato tem sido amplamente estudada, o
que possibilita ajustes energéticos mais refinados, pois a possibilidade de diminuir a
fração de proteína da dieta, por menor que seja, pode representar expressivo ganho
ambiental, financeiro (JIRSA et al., 2013) e zootécnico.
10
2. REVISÃO DE LITERATURA
2.1. AQUICULTURA
O pescado é uma excelente fonte de proteínas de alto valor biológico, vitaminas e
ácidos graxos insaturados, possui baixo colesterol, sendo considerada uma das carnes
mais saudáveis (GONÇALVES, 2011). Estima-se que o pescado corresponda a 16,7%
da proteína animal consumida por humanos no planeta (FAO, 2014). E essa
porcentagem tende a aumentar com o constante crescimento da produção aquícola e
consequente aumento da disponibilidade desse pescado nas refeições humanas.
A aquicultura mundial produziu no ano de 2014, 73,8 milhões de toneladas de
pescado, sendo que deste total, 63,8% é referente à produção continental enquanto que a
produção marítima correspondeu a apenas 36,2% (FAO, 2014). Levando em
consideração o crescente aumento da população humana mundial, e a necessidade dessa
população por proteína de boa qualidade, a aquicultura vem se apresentando como
alternativa provável e viável a esta demanda.
A maior produção aquícola mundial fica concentrada no continente asiático com
65,6 milhões de toneladas de pescado produzido em 2014, apresentando como o líder
absoluto a China com seus 45,5 milhões de toneladas. Enquanto o Brasil ocupa a 13°
posição neste ranking, produzindo 561,8 mil toneladas de pescados oriundos da
aquicultura (FAO, 2014).
O Brasil possui diversas características favoráveis ao desenvolvimento da
aquicultura, detendo 12% da água doce do planeta, litoral de 8.500 km, 5,5 milhões de
hectares de lâmina d’água em reservatórios públicos, clima tropical em grande parte do
território, significativa produção de grãos e grande diversidade de espécies com
potencial zootécnico e mercadológico (BRASIL, 2013a; BRASIL, 2013b).
Em 2011, os principais organismos produzidos na maricultura brasileira foram o
camarão marinho Litopenaeus vannamei com 65,2 mil toneladas, principalmente na
região Nordeste, e o mexilhão Perna perna com 16 mil toneladas, na região Sul
(BRASIL, 2013a). Enquanto que na aquicultura continental brasileira, o total de
organismos aquáticos produzidos foi de 544,4 mil toneladas em 2011, e foi baseada
principalmente na piscicultura visto que os outros seguimentos praticados em água doce
não apresentaram somatórios significativos (BRASIL, 2013a). A espécie mais
produzida foi a tilápia (Oreochromis niloticus), que é uma espécie exótica e uma das
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mais produzidas também no mundo, porém existe uma tendência de mudança neste
ranking com a obtenção de pacotes tecnológicos específicos para as espécies nativas.
Tal avanço de produtividade fica evidente ao comparar os dados do boletim estatístico
de pesca e aquicultura do Brasil de 2008 para 2011, que evidencia aumento de 32,81%
para 44,5% de representatividade das espécies nativas brasileiras em relação às exóticas
mais produzidas (BRASIL, 2012; BRASIL, 2013a).
Mesmo sendo o segmento mais promissor da aquicultura brasileira, a piscicultura
ainda esbarra em diversos entraves para o seu desenvolvimento como dificuldade de
regularização ambiental, assistência técnica insuficiente, elevado custo de produção,
baixa qualificação dos produtores; linhas de crédito burocráticas e em número
insuficiente, dificuldade de acesso à tecnologia, baixos preços pagos ao piscicultor,
limitações do mercado regional e mortalidade de peixes por enfermidades
(OSTRENSKY, 2008).
2.2. ESPÉCIE
O pirarucu (Arapaima gigas) é um peixe pertencente à família Osteoglossidae (LI
& WILSON, 1996; NELSON, 1994), nativo da bacia amazônica, podendo chegar a
pesar 250 quilos e alcançar 3 m de comprimento (SOUZA & VAL, 1991). Essa espécie
é caracterizada pela respiração aérea obrigatória com o auxílio da bexiga natatória
altamente vascularizada, na qual 78% do oxigênio que é utilizado provêm do ar
atmosférico, o que facilita o seu adensamento e tolerância a situações críticas de
qualidade de água (BRAUNER & VAL, 1996). Além disso, o pirarucu apresenta hábito
alimentar carnívoro e captura sua presa realizando um forte movimento de sucção com a
boca, mediante pressão negativa obtida com a oclusão das membranas do opérculo
(PINESE, 1996).
Na Amazônia, o pirarucu é explorado desde o século XVIII (VERÍSSIMO, 1895),
sendo uma das espécies mais comercializadas na região durante a segunda metade do
século XIX (SANTOS & SANTOS, 2005). Em 1998, iniciou-se o manejo da exploração
sustentável do pirarucu na Reserva Mamirauá, na qual eram feitas estimativas da
abundância do peixe pelos próprios pescadores envolvidos nesta exploração, que
determinavam o número de indivíduos no momento da “boiada”. Ou seja, no momento
em que o peixe vinha à superfície para respirar, para estipular as cotas de captura
(CASTELLO, 2004).
12
Em cativeiro, o pirarucu tem se mostrado uma das espécies mais promissoras para
a piscicultura brasileira (OLIVEIRA et al., 2012). Mesmo confinado em altas
densidades não realiza o canibalismo, aceita facilmente alimentação artificial após o
treinamento alimentar (CAVERO, 2002) e é rústico ao manejo (FONTENELE, 1955).
Sua carne possui ótimas características biológicas e elevado valor econômico, além de
expressar um excelente desempenho zootécnico, podendo em cultivo atingir mais de 10
kg em um ano (IMBIRIBA, 2001) e seu rendimento de filé pode chegar a 50%
(FOGAÇA et al., 2011).
O pirarucu já é criado em toda região Norte do Brasil, principalmente em viveiros
escavados e barragens, em diferentes densidades e com ou sem renovação de água
(SEBRAE, 2013). Nas regiões Centro-Oeste e Nordeste tem-se observado a
implantação de projetos voltados para produção da espécie. A produção nacional da
espécie em 2011 foi de aproximadamente 1 mil toneladas (BRASIL, 2013a), já em 2015
este número subiu para mais de 8 mil toneladas, tendo como maior estado produtor
Rondônia, que sozinho produziu 7,7 mil toneladas (IBGE, 2015). Porém, os principais
gargalos da espécie ainda são o controle sobre a reprodução, o que resulta em baixa
oferta e alto custo de alevinos de pirarucu no mercado (LIMA et al., 2015) e a carência
de informações para que seja formulada uma dieta completa e balanceada para o
pirarucu, possibilitando assim de forma mais sustentável e representativa a produção da
espécie na piscicultura brasileira (CYRINO & FRACALOSSI, 2012).
2.3. NUTRIÇÃO E ALIMENTAÇÃO
O conhecimento da nutrição e alimentação balanceada são requisitos essenciais à
aquicultura, considerando o alto custo que as dietas ocupam dentro dos sistemas de
produção (CYRINO & FRACALOSSI, 2012). O uso de sistemas produtivos cada vez
mais intensivos tem contribuído para a elaboração de dietas nutricionalmente completas,
com alta digestibilidade, específicas para cada fase de crescimento (MONTEIRO et al.,
2007).
Em relação as peculiaridades fisiológicas de cada espécie de peixe, a nutrição
deve ser espécie-específica, a fim de atender as exigências nutricionais e garantir o
máximo potencial produtivo da espécie (PEZZATO et al., 2004). Estudos que visam
atender as exigências nutricionais de diferentes espécies e fases de criação ainda são
incipientes (BOSCOLO et al., 2011; FREITAS et al., 2011). Por esse motivo, obter
informações sobre as necessidades nutricionais torna-se importante para a permanência
13
de uma espécie na aquicultura. Uma vez que dietas dentro de níveis ideais promovem o
crescimento e a higidez, além de serem mais eficientes sobre a perspectiva econômica e
ambiental (JIRSA et al., 2014; PORTZ & FURUYA, 2012).
No entanto, a variedade de espécies, matérias-primas e métodos utilizados, aliados
a complexa interação entre os fatores endógenos, exógenos e ambientais dificultam
pesquisas voltadas ao campo da nutrição de peixes (HUA & BUREAU, 2009). Além
disso, aspectos relacionados ao tamanho do peixe, composição da dieta, manejo
alimentar e sistemas de produção podem influenciar os resultados sobre as exigências
nutricionais de uma espécie (PEZZATO et al., 2004).
Outra característica importante na formulação de dietas para organismos aquáticos
está na alta relação entre proteína e energia nestas dietas, principalmente para peixes
carnívoros (BOOTH et al., 2013). Como o catabolismo das proteínas é pouco eficiente,
a ação poupadora da proteína por fontes de energia como o carboidrato tem sido
amplamente estudada (HONORATO et al., 2010).
Proteína e energia digestíveis devem estar estreitamente relacionadas aos
ingredientes empregados na formulação das dietas para peixes, de acordo com sua
inclusão e valor, além de ser específico para cada espécie. É importante ressaltar que em
espécies carnívoras, a utilização e a digestibilidade de carboidratos como fonte de
energia é aparentemente limitada (ALMEIDA FILHO et al., 2012) sendo necessário o
estudo da digestibilidade dos ingredientes utilizados na formulação das dietas. Existem
também diversos estudos (SÁ et al., 2002; SERAFINI et al., 2003; SIGNOR et al.,
2004; BOMFIM et al., 2005; PIEDRAS et al., 2006; SIGNOR et al., 2010) para
determinar a exigência de proteína para peixes que podem estar superestimados ou
subestimados, por não considerarem a digestibilidade dos ingredientes utilizados nestas
dietas (GONÇALVES & CARNEIRO, 2003), muitas vezes trabalhando apenas com
proteína e energia bruta e consequentemente expressam resultado de desempenho
produtivo insatisfatório.
2.3.1. CARBOIDRATO
Carboidratos são estruturas formadas por carbono, hidrogênio e oxigênio, e
encontrados nos seres vivos (MELO et al., 1998). São classificados, geralmente em
duas categorias: polissacarídeos de reserva ou carboidratos solúveis e polissacarídeos
estruturais (VOET & VOET, 2006). Nas plantas os carboidratos são encontrados
principalmente como reserva e estrutura de sustentação, já em animais, os carboidratos
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são encontrados no sangue, em forma de glicose, e no fígado e nos músculos, em forma
de glicogênio (SALWAY, 1994).
Carboidratos são considerados como boa fonte de energia na dieta para diversas
espécies animais, tendo ainda baixo custo. Porém, em peixes existe grande variação da
metabolização desta energia entre as espécies, principalmente em relação às
características anatômicas e fisiológicas ao trato digestório observadas neste grupo
(SOLER-JARAMILLO, 1996; SILVEIRA et al., 2009). Estudo de níveis ideais de
carboidrato vem sendo conduzidos ao longo dos anos, demonstrando esta grande
variação, como os resultados encontrados por Wilson (1994), de até 20% de carboidrato
indicado para peixes marinhos e o Abimorad et al. (2007) de 50% de carboidrato
indicado para pacu (Piaractus mesopotamicus).
Peixes que possuem o hábito alimentar carnívoro geralmente expressam uma
deficiência natural na regulação metabólica do carboidrato, tanto na utilização
(glicólise) quanto na produção (gliconeogênese) (ENES et al., 2009). Após a ingestão
de carboidratos pelos peixes, o nível de glicose no sangue aumenta imediatamente
(WILSON & POE, 1987) sendo esta utilizada como fonte imediata de energia ou
estocada na forma de glicogênio hepático, ou ainda, utilizada para a síntese de
triacilgliceróis e aminoácidos não essenciais (DENG et al., 2001).
O estabelecimento do nível de inclusão de carboidratos na dieta de peixes é de
extrema importância para que os aminoácidos não sejam utilizados na via oxidativa, e
resulte no efeito poupador de proteína (HEMRE et al., 2002; FERNÁNDEZ et al.,
2007). Por outro lado, níveis elevados de carboidrato na dieta podem levar à deposição
lipídica, devido ao estímulo que produz na atividade de enzimas lipogênicas no fígado
dos peixes (MOHANTA et al., 2009) podendo até levar a redução do rendimento de
carcaça deste animal.
Hilton et al. (1987) definiram como sendo nível tolerável de carboidratos para
peixes, o nível que não prejudica o crescimento e não resulta no aumento da
mortalidade. Enquanto, o nível ótimo de carboidratos para peixes é o nível em que a
glicose é totalmente oxidada para produção de energia e a proteína é reservada para
outros fins.
2.4. ENZIMAS DIGESTIVAS
A atividade de enzimas digestivas em peixes comporta-se de maneira distinta
entre as espécies (STONE et al., 2003). A eficiência na digestão dos alimentos depende
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da secreção e da proporção da enzima específica para a composição deste alimento
(SMITH, 1980). Quando o alimento é ingerido pelos peixes, a ação enzimática digestiva
ocorre apenas no trato intestinal (BALDISSEROTTO, 2013) já que os peixes não
possuem ação enzimática na boca como os mamíferos. Por meio da ação destas
enzimas, o alimento é quebrado em moléculas menores e mais simples para que haja a
absorção ainda no intestino destes nutrientes (BAKKE et al., 2011).
Dentre as enzimas digestivas a amilase desempenha papel fundamental na
quebra de carboidratos ingeridos pelos peixes (BAKKE et al., 2011). Os peixes
onívoros tropicais são os que aproveitam mais eficientemente os carboidratos na dieta,
em função da elevada atividade de amilase (MORAES & ALMEIDA, 2014).
A lipase é a enzima que atua sobre os lipídeos da dieta dos peixes, reduzindo-os
a ácidos graxos (BAKKE et al., 2011). A atividade desta enzima varia entre os peixes
em relação ao hábito alimentar, ambiente onde vive (marinho ou dulcícola) (JI et al.,
2012), o tipo e a quantidade de lipídeos na dieta (LI et al., 2012). Segundo Rotta (2003),
peixes carnívoros apresentam maior atividade enzimática da lipase que peixes de hábito
alimentar herbívoro ou onívoro.
Proteases são enzimas que atuam nas proteínas ingeridas pelo peixe, rompendo
as cadeias polipepitídicas dessa proteína reduzindo suas partes a aminoácidos
(NELSON & COX, 2007) que em seguida são absorvidas. A tripsina é uma protease
que possui especial importância no processo de digestão das proteínas, pois além de
atuar diretamente na digestão, serve de gatilho de ativação para outras proteases como a
quimiotripsina e o tripsinogênio (MORAES & ALMEIDA, 2014).
2.5. HEMATOLOGIA NA AQUICULTURA
As primeiras pesquisas sobre nutrição de peixes eram direcionadas para a
determinação mínima da necessidade dos nutrientes, de maneira que pudessem conferir
o bom desempenho das diferentes espécies. Entretanto, a composição de uma dieta pode
ocasionar alterações na homeostase dos peixes durante o cultivo. Logo, além do
desempenho zootécnico, os parâmetros hematológicos, fisiológicos e de qualidade do
produto devem ser avaliados (MERRIFIELD et al., 2010; SANTOS et al., 2013).
Os parâmetros sanguíneos podem ser usados como ferramenta para entender a
atuação do sistema fisiológico frente às mudanças físicas, químicas, biológicas e de
manejo durante o cultivo (HARPER & WOLF, 2009). A hematologia também pode ser
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utilizada para diagnosticar estresse animal e desequilíbrios influenciados pela presença
de agentes infecciosos (SATAKE et al., 2009; SILVA et al., 2012).
O monitoramento de parâmetros sanguíneos, como método de avaliação em
estudos sobre as exigências nutricionais de peixes, tem sido utilizado por diversos
pesquisadores (CHAMY et al., 2015; FALAHATKAR et al. (2014); FRECCIA, et al.,
2016; SARDAR et al., 2007; WEINERT et al., 2014). Dessa forma, o conhecimento das
respostas hematológicas para diferentes dietas podem ser usadas para formular novas
estratégias viáveis à alimentação dos peixes (BICUDO et al., 2009). Isto pode contribuir
para o desenvolvimento de novos procedimentos que visam mitigar os efeitos do
estresse e aumentar a resistência imunológica dos animais expostos a situações adversas
(OLIVA-TELES, 2012; POHLENZ & GATLIN, 2014).
Resultados de trabalhos realizados com diferentes espécies contendo informações
acerca de alguns parâmetros sanguíneos são cada vez mais frequentes. Nesse sentido,
Pereira Junior et al. (2015) avaliaram os parâmetros hematológicos de juvenis de
tambaqui alimentados com dietas contendo níveis crescentes de substituição do milho
pela farinha de crueira de mandioca. Os autores verificaram que os peixes alimentados
com as dietas contendo diferentes níveis de crueira de mandioca mantiveram os mesmos
parâmetros hematológicos (hematócrito, glicose plasmática, proteína plasmática)
obtidos para os peixes alimentados com a dieta controle.
O efeito de diferentes níveis de inclusão do ácido ascórbico sobre o perfil
hematológico do esturjão branco foi realizado por Falahatkar et al. (2014) e os
resultados desse estudo indicaram que a partir dos teores de glicose e cortisol, a
suplementação da vitamina pode atuar de forma benéfica no restabelecimento da
homeostase em níveis superiores a 200 mg kg-1.
Desse modo, o estabelecimento de padrões sanguíneos para diferentes espécies de
peixes frente a todos esses desafios torna-se algo complexo, muito por conta das
distintas condições ambientais e laboratoriais a que são expostos. Assim, a utilização da
hematologia pode fornecer respostas úteis à formulação de dietas que proporcionem o
máximo desempenho produtivo aos peixes.
2.6. HISTOLOGIA DO INTESTINO
Rotta (2003) define o trato gastrointestinal como um órgão tubular que se inicia
na boca e continua até o ânus, sendo subdividido em cavidade bucal, intestino anterior,
intestino médio e intestino posterior. O órgão possui funcionalidades de apreensão,
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mastigação e deglutição dos alimentos, digerindo-os e absorvendo os nutrientes,
culminando na excreção das porções não aproveitadas.
Devido à ampla diversidade de espécies que compõe o grupo zoológico dos
peixes, grandes variações morfológicas e funcionais seriam plausíveis no que se refere
às características histológicas intestinais. Porém, apesar das diferenças interespecíficas,
semelhanças estruturais básicas são comumente encontradas entre as espécies de peixes
(DIAZ et al., 2003). Geralmente, as principais diferenças estão relacionadas com o
hábito alimentar (ABAURREA et al., 1993)
Quatro camadas distintas estão descritas compondo a parede intestinal: A camada
mucosa é constituída por epitélio cilíndrico simples com borda em escova e células
caliciformes, com lâmina própria contendo linfócitos intraepiteliais; a submucosa é
formada por células, fibras colágenas e vasos sanguíneos; a camada muscular, de
músculo liso em disposição circular e externamente à camada serosa, que é
caracterizada por tecido conjuntivo e células pavimentosas (HONORATO et al., 2011).
O intestino com tamanho curto, e grande presença, na camada mucosa, de células
caliciformes, que produzem intensa lubrificação, são características que podem estar
associadas a tendências de ictiofagia da espécie (SANTOS, et al., 2007) O estudo sobre
as características da mucosa e vilosidades intestinais dos peixes fornecem importantes
informações no que tange a busca incessante de se atender às exigências nutricionais de
cada espécie de peixe, para alcançar melhores desempenhos na produção (SILVA, et al.,
2010) .
As projeções digitiformes formadas a partir da mucosa denominadas vilos
aumentam a superfície de contato da mucosa, ampliando a área de absorção de
nutrientes. Dietas que proporcionam o aumento do perímetro das vilosidades acabam
por melhorar a conversão alimentar do animal (SCHWARZ et al., 2010). O aumento da
altura e espessura do epitélio das vilosidades pode ser entendido como a melhora na
integridade da mucosa, o que permite que a vilosidade se desenvolva e hipertrofie como
resposta positiva ao estimulo alimentar, como sugere Carvalho et al. (2011).
O fósforo também exerce efeito sobre as vilosidades intestinais dos peixes, pois
em níveis abaixo da exigência para a espécie, causa a redução do desenvolvimento das
vilosidades intestinais e prejudica a eficiência alimentar (BOMFIM, 2013).
18
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27
ARTIGO CIENTÍFICO
Os resultados obtidos serão apresentados em forma de artigo científico, o qual será
submetido ao periódico Aquaculture. Desta forma, a formatação do manuscrito aqui
apresentado seguirá as normas do periódico.
28
CARBOIDRATOS SOLÚVEIS NA DIETA DE JUVENIS DE PIRARUCU,
Arapaima gigas
João Vitor de Azevedo MANHÃES¹; Francisco Oliveira de Magalhães JÚNIOR¹;
Marcel José Martins dos SANTOS¹; Deise Silva COSTA¹; José Fernando Bibiano
MELO²; Luís Gustavo Tavares BRAGA¹*
¹ Laboratório de Nutrição e Alimentação de Peixes - AQUANUT, UESC, Rodovia
Jorge Amado, Km 16 – Salobrinho, Ilhéus – BA – CEP: 45662-900.
² Laboratório de Aquicultura, UNIVASF, BR 407, km 12, lote 543, Projeto de irrigação
Nilo Coelho, S/N, C1, Petrolina-PE – CEP: 56300-00. [email protected]
* Autor correspondente
RESUMO
Objetivou-se com esse estudo, avaliar a influência de cinco níveis de
carboidratos solúveis na dieta sobre o desempenho, respostas fisiológicas,
metabólicas e composição do filé de juvenis de pirarucu. Para tanto, 200 peixes
com peso médio inicial de 182 ± 3,6 g e comprimento inicial de 29,5 ± 2,2 cm
foram distribuídos em 20 tanques (250 L), totalizando 10 peixes cada,
configurando um delineamento inteiramente casualizado composto de cinco
tratamentos e quatro repetições. As unidades experimentais fizeram parte de um
sistema de recirculação, acoplado a um filtro biomecânico. Durante 62 dias, os
juvenis de pirarucu foram alimentados até a saciedade aparente com dietas
extrusadas contendo diferentes níveis de carboidratos solúveis (220, 240, 260,
280 e 300 g kg−1). Ao final do experimento os dados obtidos foram submetidos à
análise estatística utilizando o programa estatístico R Development Core Team
(2008). Após a analise estatística foi verificado que houve influência significativa
no desempenho, e a ração com nível de 220 g kg−1 proporcionou maior ganho de
peso. A relação vicerossomatica também foi influenciada pelo nível de
carboidrato onde a ração com 240 g kg−1 apresentou maior relação em
porcentagem, enquanto que a menor relação foi observada para o tratamento com
330 g kg−1. A composição centesimal do filé e tamanhos das vilosidades não
apresentaram diferença significativa entre os tratamentos, ao contrario do
observado para as variáveis metabólicas, que apresentaram diferentes padrões de
significância entre as tratamentos.
Palavras chave: Aquicultura, Metabolitos, Nutrição, Energia.
29
1. INTRODUÇÃO
O pirarucu (Arapaima gigas) é um dos maiores peixes de escama do mundo e tem
como seu habitat natural os lagos de várzea e florestas inundadas da bacia amazônica
(CASTELLO, 2008). Devido ao seu grande porte, tornou-se o peixe mais popular da
ictiofauna amazônica, simbolizando papel histórico na pesca e no desenvolvimento
socioeconômico da região. Essa espécie possui respiração aérea obrigatória com o
auxílio da bexiga natatória altamente vascularizada, onde 78% do oxigênio que utiliza
provêm do ar atmosférico, o que garante tolerância a situações críticas de qualidade de
água (BRAUNER & VAL, 1996), apresenta hábito alimentar carnívoro, características
zootécnicas favoráveis, podendo atingir mais de 10 kg em um ano, além do elevado
valor econômico (IMBIRIBA, 2001).
Nos sistemas intensivos de produção de peixes a densidade de estocagem é
elevada (AYROZA et al., 2011), tornando a nutrição de vital importância para o
atendimento das necessidades nutricionais de crescimento, reprodução e mantença.
Dentre os entraves da formulação de dietas específicas para peixes carnívoros, está a
alta relação entre proteína e energia nas dietas (BOOTH et al., 2013). A possibilidade de
diminuição dos níveis de proteína da dieta, por menor que seja, pode representar
expressivo ganho ambiental e financeiro (JIRSA et al., 2013).
A fim de poupar o uso de proteína da dieta para fins energéticos, outras fontes
naturalmente energéticas como os carboidratos, estão sendo amplamente estudadas na
nutrição de peixes (HONORATO et al., 2010). É importante ressaltar que para espécies
carnívoras, a utilização e a digestibilidade de carboidratos como fonte de energia da
dieta é aparentemente limitada (ALMEIDA FILHO et al., 2012) sendo necessário o
estudo da digestibilidade dos nutrientes utilizados como fonte energética. Comparados
às proteínas, os carboidratos constituem a fonte energética de menor custo na confecção
de rações balanceadas para os peixes (SILVEIRA et al., 2009). O uso de fontes
alternativas de carboidratos tem apresentado diferentes respostas ao desempenho e ao
processo de digestão dos peixes (MELO et al., 2012).
Visando a otimização da produção do pirarucu, é necessária a criação de um
pacote tecnológico para a espécie, incluindo o conhecimento das exigências
nutricionais. Com isso, objetivou-se avaliar o efeito de dietas contendo níveis crescentes
de carboidratos solúveis sobre o desempenho, respostas fisiológicas, metabólicas e a
composição do filé de juvenis de pirarucu.
30
MATERIAL E MÉTODOS
Um experimento com duração de 62 dias foi conduzido no Laboratório de
Nutrição e Alimentação de Peixes (AQUANUT), na Universidade Estadual de Santa
Cruz, localizada em Ilhéus-BA (latitude 14º 47' 20" S, longitude 39º 02' 58" W). Foram
utilizados 200 juvenis de pirarucu, com peso médio de 182 ± 3,6 g e comprimento
médio de 29,5 ± 2,2 cm, adquiridos na Piscicultura Aguavale S.A. (Igrapiuna, BA). Os
peixes foram transportados em caixas isotérmicas (2600 L) com água ocupando 70% de
seu volume total, permitindo a respiração aérea dos mesmos. No laboratório os peixes
foram distribuídos aleatoriamente em 20 caixas (250 L) dispostas em um sistema de
recirculação fechado de água, com aeração e filtro biológico. Foi estabelecido um
período de adaptação de 15 dias, sendo fornecido aos peixes ração comercial extrusada
(4-6 mm) com 400 g kg−1 de proteína bruta (PB), três vezes ao dia, 8:00, 12:00 e 16:00
horas.
A qualidade da água foi monitorada periodicamente, sendo a temperatura, o
oxigênio dissolvido e o pH aferidos diariamente com o auxílio de um multiparâmetro
digital (YSI Pro Plus) e a amônia (NH3) mensurada semanalmente por meio de análise
fotocolorimétrica utilizando um fotocolorímetro de bancada (HANNA, modelo
HI83203). As caixas foram sifonadas duas vezes por semana e diariamente o decantador
do filtro acoplado ao sistema experimental foi drenado, para a retirada das partículas
sólidas.
O planejamento experimental foi composto por cinco tratamentos com quatro
repetições. Os tratamentos corresponderam a dietas experimentais isoproteicas e
isoenergéticas, contendo níveis crescentes de carboidrato solúvel (220, 240, 260, 280 e
300 g kg-1) (Tabela 1). As formulações das cinco dietas experimentais foram elaboradas
com o auxílio do programa computacional SUPER CRAC® e a extrusão foi realizada
na Fábrica de Rações da Universidade Federal de Viçosa-MG (UFV) com
granulometria de 3 mm. Após este processo, as dietas foram acondicionadas em câmara
fria a -10°C até o início do experimento. Foi utilizada a frequência do arraçoamento de
três vezes ao dia, às 8:00, 12:00 e 16:00 horas, sendo as dietas fornecidas até a
saciedade aparente dos peixes, tendo cada unidade experimental seu respectivo
recipiente para o controle do consumo.
|
31
Tabela 1. Composição das dietas experimentais para juvenis de pirarucu com níveis
crescentes de carboidrato solúvel
Ingrediente (g kg-1) Níveis de inclusão de carboidratos solúveis (g kg−1)
220 240 260 280 300
Farelo de soja 45 30,00 130,00 180,00 200,00 287,00
Farelo de milho 39,50 82,00 100,00 80,00 30,00
Farelo de trigo 162,70 120,00 80,00 80,00 88,00
Glúten de milho 21 127,00 34,00 74,00 74,00 32,20
Amido de milho 1,00 35,00 27,00 59,00 112,00
Farinha de vísceras de aves 173,00 130,00 143,00 130,00 87,00
Farinha de peixe 55 115,00 145,00 145,00 145,00 187,00
Farinha de carne e ossos 45 225,00 195,00 120,00 68,00 13,00
Farinha de penas hidrolisada 117,00 110,20 110,20 144,20 140,00
Antioxidante2 (BHT) 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20
Premix1 6,10 6,10 6,10 6,10 6,10
Sal comum 2,50 2,50 2,50 2,50 2,50
Óleo de peixe 1,00 10,00 12,00 11,00 15,00
Total 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00
Composição Centesimal
Proteína digestível (g kg−1) 360,9 360,6 360,5 360,1 359,8
Proteína bruta (g kg−1) 477,3 474,4 444,6 455,4 455,6
Energia digestível (MJ Kg−1) 12,52 12,45 12,65 12,88 12,97
Energia bruta (MJ Kg−1) 18,02 18,24 18,38 18,47 18,59
FDN (g kg−1) 426,6 542,0 353,8 500,9 401,4
FDA (g kg−1) 48,4 41,8 46,8 67,5 66,0
Extrato etéreo (g Kg−1) 78,0 78,0 75,0 68,0 61,0
Carboidratos solúveis (g kg−1) 220,7 240,6 260,1 280,3 299,9
Umidade (g kg−1) 71,0 56,0 69,0 60,0 60,0
Cinzas (g kg−1) 165,0 158,0 150,0 124,0 128,0
¹Premix vitamínico mineral (Composição/ kg do produto): vit. A = 6.000.000 UI; vit.
D3 = 2.250.000 UI; vit. E = 75.000mg; vit. K3 = 3.000mg; vit. tiamina= 5.000mg;
riboflavina = 10.000mg; vit.pirodoxina = 8.000mg; biotina = 2.000mg; vit. C =
192.500mg; niacina = 30.000mg; ácido fólico = 3.000mg; Fe = 100.000mg; Cu =
600mg; Mn = 60.000mg; Zn = 150.000mg; I = 4.500mg; Cu = 15.000mg; Co =
2.000mg; Se = 400mg ;
²BHT = Butil-hidroxi-tolueno.
Ao final do período experimental os juvenis foram submetidos a um jejum de 24
horas para realização da biometria e, posteriormente, serem submetidos à avaliação dos
parâmetros produtivos: ganho de peso, consumo de ração, conversão alimentar aparente,
sobrevivência, taxa de crescimento específico.
Um peixe por unidade experimental foi amostrado e eutanasiado utilizando
superdosagem anestésico (0,4 mL eugenol/L) para a coleta de sangue, fígado, intestino,
32
víscera e filé e avaliação da relação viscerossomática. As análises de sangue foram
realizadas no Laboratório de Hematologia da UESC, sendo a coleta realizada por meio
de punção da veia caudal. Foram quantificadas as concentrações de glicose, colesterol,
creatinoquinase séricas através da técnica de refletância, com o uso do equipamento
Reflotron plus (Roche). A determinação do volume globular foi através da técnica do
microhematócrito, enquanto a dosagem das proteínas plasmáticas totais foi realizada
com um refratômetro clínico manual. O cortisol foi determinado pela técnica de
imunoensaio enzimático por competição (EIA, Kit 55050, Human®).
As análises metabólicas foram realizadas no Laboratório de Aquicultura da
Universidade do Vale do São Francisco (UNIVASF). O fígado foi utilizado na
determinação da atividade das enzimas alanina aminotransferase e aspartato
aminotransfrase e também das concentrações de glicogênio. O intestino foi utilizado na
determinação da atividade da amilase, lípase e protease alcalina. Todos os parâmetros
enzimáticos foram determinados por meio de kit comercial (Labtest Ref. 11, 76, 85,
108, 109) e as determinações de glicogênio foram realizadas conforme técnica descrita
por (BIDINOTTO et al., 1997).
As análises histológicas foram realizadas no Laboratório de Histopatologia da
UESC. Para observação histológica, porções do intestino delgado (anterior e médio)
foram fixadas em solução de Bouin (TIMM, 2005) e transferidas para álcool 70%,
seguindo-se o procedimento de rotina até a inclusão em parafina e coloração com
hematoxilina e eosina (H-E). As amostras foram cortadas em secções de 7 µm de
espessura e as lâminas obtidas foram fotografadas com auxílio de uma câmera digital
acoplada a um microscópio óptico. As mensurações das alturas das vilosidades
intestinais foram realizadas utilizando o programa Image-Pro Plus 5.2 (Media
Cybernetics).
As análises bromatológicas (proteína bruta, energia bruta, extrato etéreo, matéria
seca, cinzas, fibra detergente neutro e fibra detergente ácido) das rações foram
executadas no Laboratório de Nutrição Animal do Departamento de Ciências Agrárias e
Ambientais da UESC, conforme procedimentos descritos por (AOAC, 2000).
Os dados zootécnicos obtidos foram submetidos à análise de variância (ANOVA),
e à análise de regressão quando observado diferenças. As análises de regressão foram
usadas para estabelecer a relação entre os níveis de carboidratos das dietas
experimentais com o ganho de peso, conversão alimentar, consumo de ração e relação
viscerossomática. Já os parâmetros metabólicos que apresentaram diferenças
33
estatísticas, hematológicos e histológicos, foram submetidos ao teste Tukey a 5% de
probabilidade para comparar as médias entre os tratamentos. Todas as análises foram
conduzidas usando o programa estatístico R Development Core Team (2008).
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Os valores registrados de qualidade de água para o cultivo foram de 5,66 ± 0,5
mg/L para oxigênio dissolvido, 68,56 ± 6,4% de saturação de oxigênio, 25,31 ± 1,1oC
para temperatura, 5,20 ± 0,4 para o pH e 8,77 mg/L de amônia (NH3). Os parâmetros
não diferiram entre os tratamentos e encontraram-se dentro do tolerável para a espécie
segundo Del Risco et al. (2008) e Núñez et al. (2011), salvo a amônia que apresentou
valor considerado elevado por estes autores. Porém, estudos demonstram a resistência
do pirarucu á elevadas concentrações de amônia no ambiente (CAVERO et al., 2004;
BRANDÃO et al., 2006).
Observou-se efeito linear para o ganho de peso médio (y = -7,007x + 493,2) e
consumo de ração (y = -3,983x + 366,5) frente aos diferentes níveis de carboidratos
solúveis testados. O ganho de peso médio e o consumo de ração foram decrescentes
estatisticamente de acordo com o aumento do nível de carboidrato na dieta. A carência
ou o excesso de carboidratos na dieta pode ser prejudicial ao desempenho de diversas
espécies de peixes (ZHOU et al. 2013), nos moldes deste trabalho os resultados
encontrados para o desempenho demonstraram a influência desse excesso. Zamora-
Sillero et al. (2013) afirmam que o carboidrato em altas quantidades na dieta podem
diminuir o consumo de alimento pelos peixes. Portanto a redução no consumo de
alimento pode ter afetado o ganho de peso, ao diminuir o aporte nutricional para os
juvenis de pirarucu.
Para a conversão alimentar e a relação viscerosomática foi verificado efeito
quadrático (y = 0,001x2 - 0,085x + 1,820 e y = -0,048x2 + 2,353x - 18,43),
respectivamente. Por meio da derivação da equação da conversão alimentar, foi possível
definir o ponto mínimo da conversão alimentar em 230,69 g kg-1 de inclusão de
carboidrato. Estes dados se aproximam do obtido por Mattos et al. (2016), que ao
avaliarem o ritmo alimentar do pirarucu com base no sistema de auto seleção dos
alimentos, para o balanceamento nutricional, observaram ingestão de carboidratos na
dieta de 242 g kg-1, como sendo a quantidade naturalmente ingerida pela espécie.
34
A conversão alimentar das dietas testadas pode ser considerada baixa em relação a
outros trabalhos que utilizaram a mesma espécie (ITUASSÚ et al., 2005; OLIVEIRA et
al., 2012). Esse resultado positivo provavelmente foi alcançado em função de três
principais fatores: a formulação da dieta, utilizando dados nutricionais de energia e
proteína digestíveis para a espécie, o processamento da dieta que foi extrusada,
proporcionando flutuabilidade de 97% dos péletes e, assim, melhorando a
digestibilidade dos nutrientes (FURUYA et al., 1998) e pela idade dos pirarucus, que
assim como em outras espécies apresenta a melhor conversão alimentar nos estágios
iniciais do seu desenvolvimento.
A relação víscerossomática esboçou efeito quadrático, iniciando com elevação até
240,41 g kg−1 de carboidrato solúvel, e posteriormente reduzindo até o último nível
testado. Este resultado demonstra que provavelmente houve maior acúmulo lipídico
visceral ao nível de 240,41 g kg−1 de carboidrato solúvel, sendo que este acúmulo não
prosseguiu com o aumento do carboidrato dos outros tratamentos. Entretanto, para a
taxa de crescimento específico não houve diferenças entre os níveis de carboidratos
avaliados.
Tabela 2. Desempenho de juvenis de pirarucu alimentados com níveis crescentes de
inclusão de carboidratos
Variável Níveis de carboidratos solúveis (g kg−1)
220 240 260 280 300 CV Valor de p
Ganho de peso médio (g) * 347,00 315,73 310,94 293,98 287,80 6,38 0,0034
Consumo de alimento (g) * 278,34 272,82 260,82 246,78 256,28 6,23 0,0248
Conversão alimentar** 0,83 0,80 0,84 0,86 0,89 3,37 0,0028
Relação viscerosomática (%) ** 9,85 10,64 9,95 9,56 8,85 6,95 0,0025
TCE NS 0,17 0,16 0,16 0,16 0,14 11,84 0,1371
NS: não significativo; CV: Coeficiente de variação; Efeito Linear*; Efeito Quadrático**; TCE: Taxa de
Crescimento Específico
O balanço ou desbalanço nutricional nas dietas de peixes podem influenciar na
composição do filé, porém neste trabalho o nível de carboidrato solúvel na dieta não
influenciou significativamente a matéria seca, proteína bruta, energia bruta e cinzas do
filé de juvenis de pirarucu. Em trabalho feito por Martino et al. (2002) com surubim que
também é um peixe de hábito alimentar carnívoro, não foi observado mudança na
composição corporal entre os peixes alimentados com diferentes proporções entre
carboidratos e lipídeos. Já Sanchez et al. (2016) ao testar níveis de sorgo em
35
substituição ao milho na dieta do pacu, obtiveram diferença significativa para proteína
bruta, extrato etéreo e cinzas na composição centesimal do filé destes peixes.
Outros fatores a influenciar a composição química do filé do pirarucu são o peso
e a parte do peixe á compor o filé. Em análise centesimal comparativa do músculo
dorsal e ventral do pirarucu previamente estocado em gelo, Oliveira et al. (2014)
observaram que não houve diferença significativa para matéria seca, proteína bruta e
cinzas entre os tecidos, porém foi constatada diferença significativa para lipídeos,
demonstrando maior deposição lipídica no músculo ventral. Já Fogaça et al. (2011)
compararam pirarucus de diferentes grupos de peso (grupo I: de 7 a 9 kg; Grupo II: de
11 a 13 kg; Grupo III: de 14 a 16 kg), quanto a composição do filé, proteína bruta e
lipídeos não apresentaram diferença entre os grupos, porém para umidade e cinzas foi
constatada diferença significativa.
Tabela 3. Composição do filé de juvenis de pirarucu alimentados com níveis crescentes
de inclusão de carboidratos (matéria natural).
Variável Níveis de carboidratos solúveis (g kg−1)
CV Valor de p 220 240 260 280 300
Matéria seca (%) NS 17,71 18,32 18,26 18,17 17,96 2,16 0,2097
Proteína bruta (%) NS 13,69 14,39 14,33 14,11 13,95 2,93 0,1351
Energia bruta (MJ Kg-1) NS 3,47 3,65 3,70 3,60 3,52 2,12 0,1915
Cinzas (%) NS 1,12 1,11 1,11 1,11 1,12 4,62 0,7125 CV: coeficiente de variação; NS: não significativo.
Em relação aos valores hematológicos do pirarucu, os parâmetros de proteína
plasmática, glicose e colesterol total apresentaram diferença significativa entre os
tratamentos. Para as variáveis creatinoquinase e cortisol não foi observado diferença
significativa entre os níveis de carboidratos testados (Tabela 4). Baseado na
similaridade dos valores observados de creatinoquinase entre os tratamentos é possível
afirmar que houve uniformidade durante as práticas experimentais de contenção e coleta
das amostras para este trabalho. Pois a elevação da creatinoquinase pode indicar lesão
muscular ou infecções sistêmicas no músculo esquelético ou cardíaco (CAMPEBELL,
2006). Outra indicação dessa elevação seria durante a contenção e coleta de sangue dos
animais, em situações de grande esforço e estresse (ALMOSNY & MONTEIRO, 2006).
O nível de 240 g kg−1 de carboidrato solúvel foi o que apresentou o maior nível
de proteínas plasmáticas, corroborando com o valor mais alto encontrado para a relação
viscerosomático, evidenciando aumento de nutrientes e seus carreadores circulantes no
36
sangue, como os quilomicrons para ácidos graxos, que pode ter levado a um acúmulo
lipídico visceral maior que nos outros tratamentos.
Peixes carnívoros geralmente apresentam hiperglicemia persistente após serem
alimentados com dietas ricas em carboidratos (Kamalam et al., 2016 ). Porém quanto
aos valores de glicose encontrados no sangue, mesmo os que apresentaram diferença
significativa entre eles, permaneceram na faixa da normalidade, ou seja, não houve
picos ou valores baixos para a espécie, comparado aos níveis de glicose sanguínea
encontrados por Brandão et al.,(2006, 2008) para o pirararucu em repouso, antes de
sofrer o estresse do transporte e adensamento.
O colesterol possui diversas funções no metabolismo do peixe dentre elas,
precursor de hormônios e ácidos biliares, podendo atuar no transporte de lipídeos e
também na permeabilidade celular (Stickney, 2000). O nível de colesterol sanguíneo
dos peixes neste trabalho diminuiu inversamente ao acréscimo de carboidratos solúveis
na dieta, efeito semelhante ao encontrado por Hansen et al. (2007), que testaram níveis
crescentes de ingredientes de origem vegetal na dieta para Gadus morhua e o
encontrado por Gao et al. (2010) que testaram níveis crescentes de carboidrato para
carpa Ctenopharyngodon idella.
Para inferir a confiabilidade nos resultados deste trabalho, foram testadas
respostas de estresse dos tipos primário, secundário e terciário nos peixes. Podem ser
considerados bons indicadores de resposta primária ao estresse o teor de cortisol
(MOMMSEN et al., 1999), de resposta secundária ao estresse, a glicose sanguínea
(WELLS & PANKHURST, 1999) e para resposta terciária ao estresse, o
comportamento e desempenho dos peixes (BARTON et al., 2002). Para as respostas
primárias e secundárias, os trabalhos de Cavero et al. (2004), Brandão et al. (2006),
Gomes et al., (2006) e Brandão et al. (2008) apresentam nos grupos de pirarucu que não
foram expostos aos agentes estressores (grupo controle) valores semelhantes aos
encontrados para cortisol e glicose nos peixes deste trabalho. Já quanto á terceira
resposta ao estresse, os peixes não apresentaram anomalias comportamentais durante a
condução experimental, demonstrando grande apetite durante as alimentações e obtendo
uma excelente conversão alimentar descaracterizando uma possível situação de estress.
Tabela 4. Valores médios das características hematológicas do pirarucu submetidos a
dietas com diferentes níveis de carboidratos
37
Variáveis
Níveis de carboidratos solúveis (g kg−1)
220 240 260 280 300 CV Valor de
p
Proteínas plasmáticas (mg/dl)* 3,00ab 3,13a 3,07ab 3,00ab 2,87bc 3,43 0,0291
Glicose (mg/dl)* 62,83ab 58,53b 68,40a 61,25ab 62,85ab 6,3 0,0384
Colesterol total (mg/dl)* 139,75a 132,5ab 130,25ab 126b 125b 4,21 0,0124
Creatinoquinase NS 307 351,67 332 361,5 283,67 34,88 0,8635
Cortisol ng/ml NS 6,65 4,78 4,35 4,4 4,63 38,56 0,9414
CV: coeficiente de variação; NS: não significativo.
*Significativo ao nível de 5% de probabilidade (p <0,05)
Entre as características metabólicas avaliadas a lipase, a protease alcalina, a
alanina amino transferase e a transaminase oxalacética apresentaram diferenças
significativas entre os níveis de carboidratos testados. Apenas o glicogênio e a amilase
não foram influenciados significativamente pelas dietas testadas (Tabela 5).
A atividade da lípase aumentou significativamente em resposta ao aumento dos
níveis de carboidrato até o pico em 280 g kg−1 , logo em seguida diminuiu sua atividade
em 300 g kg−1 de carboidrato. Porém mesmo sendo lípase a principal enzima
responsável pela digestão lipídica (Zhou et al., 2015, 2016), não foi observada relação
direta entre o nível de lipídeos nas dietas experimentais e sua atividade. Comportamento
semelhante em relação à atividade da lípase foi observado por Sterzelecki et al. (2017)
que testou relações crescentes de carboidrato e lipídeos na deita de Sardinella
brasiliensis. Para a mesma espécie foi observado que o consumo de alimento pode
influenciar a secreção de enzimas digestivas (Baloi et al., 2017) corroborando com a
relação observada neste trabalho entre o consumo alimentar e a atividade da lípase. Já a
atividade da protease alcalina acompanhou o aumento do nível de carboidratos solúveis
nas dietas.
A atividade das enzimas alanina aminotransferase e transaminase oxalacética
decresceu referente ao aumento da inclusão de carboidratos solúveis nas dietas. Estas
enzimas estão diretamente relacionadas ao catabolismo proteico na utilização desta
molécula como substrato energético, ou seja, com aumento dos níveis testados ocorreu
um possível efeito poupador de proteína. Segundo Wilson. (2002) a utilização dos
aminoácidos para síntese proteica ou como fonte de energia para os peixes depende de
uma relação proteína-energia dietética ideal. Porém, esse efeito não culminou em maior
ganho de peso e menor conversão alimentar, pelo contrário, nos tratamentos onde a
atividade destas enzimas catalíticas foi mais baixo, o desempenho também foi inferior,
38
provavelmente devido a diminuição do consumo de ração que prejudicou este
desempenho.
A amilase atua catalisando a hidrólise dos carboidratos no intestino dos peixes,
porém não foi evidenciado elevação da sua atividade proporcional ao aumento da
inclusão de carboidratos solúveis. Resultado similar foi encontrado por Lundstedt et al.
(2004) que testaram níveis decrescentes de amido na dieta do pintado e não constataram
variação significativas na atividade da amilase no intestino. Krogdahl et. al (2005)
sugerem que os peixes utilizam a mesma rota para a digestão e a absorção de
carboidratos independente do hábito alimentar carnívoro, onívoro ou herbívoro. Porém,
mesmo utilizando as mesmas rotas, existe grande variação entre as espécies, e a
secreção de amilase é uma delas. Os valores encontrados de amilase para o pirarucu
neste trabalho, podem significar que a espécie já está no limite da otimização da
metabolização de carboidratos a níveis ainda inferiores aos testados neste trabalho, ou
seja, o pâncreas não produziu amilase em proporções diretas à quantidade de substrato
dos níveis testados que chegou ao intestino.
O glicogênio hepático possui como principal função a manutenção da glicemia
nos animais. Parte da glicose do sangue é extraída para ser armazenada na forma de
como glicogênio e, em caso de necessidade, ocorre a sua hidrólise (RAMIREZ, 2005).
Para os níveis testados de carboidratos solúveis, não houve diferença significativa do
glicogênio hepático.
Tabela 5. Valores médios das características metabólicas do pirarucu submetidos a
dietas com níveis crescentes de carboidrato solúvel.
Variáveis Níveis de carboidratos solúveis (g kg−1)
220 240 260 280 300 CV Valor de p
Lipase** 38,00b 45,68b 151,02a 161,29a 94,41ab 43,86 0,002
Protease alcalina** 1,57c 2,07c 6,6b 8,56a 8,63a 16,24 0,0001
Alanina aminotransferase** 238,09a 236,28a 141,58b 56,46bc 51,22bc 28,33 0,0001
Aspartato aminotransferase** 19,40ab 16,42ab 10,61bc 7,23c 6,78c 29,67 0,0003
Glicogênio hepático NS 44,2 74,29 23,26 69,02 81,89 50,99 0,0751
Amilase NS 91,33 114,55 116,73 93,38 80,81 21,92 0,1373 CV: coeficiente de variação; NS: não significativo.
**Significativo ao nível de 5% de probabilidade (p < 0,05)
Diversas adaptações morfológicas são observadas no intestino dos peixes em
resposta a aumento na ingestão de alimentos, mudanças na dieta e jejum ( Naya,
39
Karasov & Bozinovic 2007; Olsson et al., 2007). As vilosidades intestinais possuem
plasticidade para ampliar sua área de absorção de nutrientes. Essa adaptação possui
influência direta da dieta consumida pelos peixes (SCHWARZ et al., 2010). Porém
neste trabalho os níveis de carboidratos solúveis testados não exerceram influência
adaptativa no comprimento das vilosidades do intestino anterior e médio de juvenis de
pirarucu, mesmo que o intestino e secos pilóricos sejam os locais onde ocorre a digestão
e absorção de carboidratos em peixes. Resultado semelhante foi encontrado por
Lundstedt (2003) ao aferir a altura das vilosidades intestinais de juvenis de surubim
alimentados com diferentes níveis de proteína, onde não houve alterações. Já em tilápia,
Honorato et al. (2011) observou alterações na altura da vilosidade intestinal, com
relação ao nível de proteína da dieta.
Tabela 6. Valores médios das características histológicas (tamanho da vilosidade) do
pirarucu submetidos a dietas com níveis crescentes de carboidrato solúvel
Variável Níveis de carboidratos solúveis (g kg−1)
220 240 260 280 300 CV Valor de p
Intestino anterior NS 63,85 65,12 72,03 78,83 60,05 16,43 0,4692
Intestino médio NS 63,1 50,13 51,29 59,08 54,07 17,06 0,2207
NS: não significativo; CV: Coeficiente de variação.
A dieta com inclusão de 240 g kg−1 de carboidratos solúveis demonstrou a
melhor conversão alimentar, porém, também promoveu a maior relação
viscerosomática, ou seja, maior acúmulo de gordura visceral. Já o nível de 220 g kg−1 de
carboidratos solúveis proporcionou o maior ganho de peso nos peixes.
Com o aumento dos níveis de carboidratos solúveis testados neste trabalho
houve a diminuição da atividade das enzimas alanina e aspartato aminotransferases, ou
seja, houve diminuição da utilização dos aminoácidos para finalidades energéticas,
porém contrariamente, houve decréscimo no desempenho dos pirarucus.
A atividade da amilase não foi influenciada significativamente pelos níveis de
carboidratos solúveis testados, o que demonstra a incapacidade da espécie de
intensificar a digestão de carboidratos a níveis acima de 220 g kg−1.
40
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carbohydrate to lipid ratios on growth performance, digestive enzyme and hepatic
carbohydrate metabolic enzyme activities of large yellow croaker (Larmichthys crocea).
Aquaculture 452, 45 –51.
45
ANEXO
FORMATAÇÃO E ESTRUTURAÇÃO DO TRABALHO
Aquaculture an International Journal
GUIDE FOR AUTHORS
INTRODUCTION
Types of paper Research Papers should report the results of original research. The
material should not have been previously published elsewhere. Articles are
expected to contribute new information (e.g. novel methods of analysis with added
new insights and impacts) to the knowledge base in the field, not just to confirm
previously published work. Review Articles can cover either narrow disciplinary
subjects or broad issues requiring interdisciplinary discussion. They should provide
objective critical evaluation of a defined subject. Reviews should not consist solely
of a summary of published data. Evaluation of the quality of existing data, the status
of knowledge, and the research required to advance knowledge of the subject are
essential. Short Communications are used to communicate results which represent a
major breakthrough or startling new discovery and which should therefore be
published quickly. They should not be used for preliminary results. Papers must
contain sufficient data to establish that the research has achieved reliable and
significant results. Technical Papers should present new methods and procedures
for either research methodology or culture-related techniques. The Letters to the
Editor section is intended to provide a forum for discussion of aquacultural science
emanating from material published in the journal. Contact details for submission
Papers for consideration should be submitted via the electronic submission system
mentioned below to the appropriate Section Editor:
Nutrition: D.M. Gatlin
The Nutrition Section welcomes high quality research papers presenting novel data
as well as original reviews on various aspects of aquatic animal nutrition relevant to
aquaculture. Manuscripts addressing the following areas of investigation are
encouraged:
1) determination of dietary and metabolic requirements for various nutrients by
representative aquatic species. Studies may include environmental/stress effects on
animal's physiological responses and requirements at different developmental
stages; 2) evaluation of novel or established feedstuffs as well as feed processing
and manufacturing procedures with digestibility and growth trials. Such studies
should provide comprehensive specifications of the process or evaluated
ingredients including nutrients, potential anti-nutrients, and contaminants; 3)
46
comparison of nutrient bioavailability from various ingredients or product forms as
well as metabolic kinetics of nutrients, food borne anti-nutrients or toxins; 4)
identification of key components in natural diets that influence attractability,
palatability, metabolism, growth reproduction and/or immunity of cultured
organisms; 5) optimization of diet formulations and feeding practices; 6)
characterization of the actions of hormones, cytokines and/or components in
intracellular signaling pathway(s) that influence nutrient and/or energy utilization.
7) evaluation of diet supplementation strategies to influence animal performance,
metabolism, health and/or flesh quality.
Manuscripts concerning other areas of nutrition using novel or advanced methods
are also welcome. Please note that in regard to various diet additives such as
probiotics, prebiotics, herbal extracts, etc., a very large number of papers have
already been published. Therefore, Aquaculture will not continue to accept
manuscripts that present initial and preliminary investigations of such additives.
Manuscripts addressing these and other feed additives will be accepted for review
only if they are of the highest scientific quality and they represent a significant
advance in our knowledge of the mechanisms involved in their metabolism.
Manuscripts may also be considered if they present clinical efficacy data generated
in large-scale trials and economic cost-benefit analysis of these applications.
Aquaculture Production Science: B.Costa-Pierce
AQUACULTURE PRODUCTION SCIENCE (PS) is one of 5 sections of the
international journal
AQUACULTURE dedicated to research on improvements and innovations in
aquatic food production.
This section supports worldwide dissemination of the results of innovative, globally
important, scientific research on production methods for aquatic foods from fish,
crustaceans, mollusks, amphibians, and all types of aquatic plants. Contributions
are encouraged in the following areas: 1) Improvement of production systems that
results in greater efficiencies of resource usage and sustainability of aquaculture; 2)
Effective applications of technologies and methods of aquaculture production for
improved stocking regimes; 3) The use of new species and species assemblages; and,
4) Investigations to minimize aquaculture wastes and improve water quality,
including technologies for nutrient recycling in aquaculture ecosystems, and
potential synergy of aquaculture and other food production systems using methods
such as polyculture and integrated aquaculture. Aspects of seafood processing and
technology will not be considered in this section although aquaculture techniques
that may influence the nutritional value of aquatic food products may be considered
in the Nutrition Section. Physiology: Fish: A. P. (Tony) Farrell Invertebrates: J.
Benzie
47
The Physiology Section welcomes high quality papers that present either novel
research data or original reviews. The content must be relevant to solving
aquaculture problems on all aspects of the physiology of cultured aquatic animals
and plants.
Submitted manuscripts must have a valid hypothesis or objective, clearly state the
relevance to aquaculture, have proper experimental design with appropriate
controls and utilize appropriate statistical analysis. Mention of trade names is
limited to the main text.
Relevant physiological topics include, but are not limited to: Reproductive and
endocrine physiology, including control of development and sex differentiation,
induced ovulation and spermiation, gamete quality, storage and cryopreservation,
physiology of gynogenetic, and triploid and transgenic organisms
Cardiorespiratory, muscle and exercise physiology Osmoregulatory physiology
Digestive physiology, including endocrine and environmental regulation of growth
Larval physiology and ontogeny, including metamorphosis, smolting and molting
Performance under variable culture conditions, including temperature, water
quality, rearing density, and stress and disease physiology Physiology of harvest
and handling techniques Genetics: G. Hulata
The Genetics Section welcomes high-quality research papers presenting novel data,
as well as critical reviews, on various aspects of selective breeding, genetics and
genomics. Submitted manuscripts must have a valid hypothesis or objective, clearly
state the relevance to aquaculture, have proper experimental design with
appropriate sample size and controls and utilize appropriate statistical analysis.
Relevant genetics topics include, but are not limited to: Breeding programs using
classic selection procedures, markers or combining marker assisted selection with
classic selection Applications of crossbreeding and interspecific hybridization
Evaluation of commercially important phenotypes among cultured strains,
populations or stocks Applications of biotechnology and genetic manipulation
methods Development of linkage maps, identification of QTL or association of
commercially important traits with specific gene(s). Where appropriate, linkage
maps should include co-dominant markers, such as microsatellite DNA and SNP
markers, to enable application to other populations and facilitate comparative
mapping. Aquaculture will NOT accept manuscripts dealing with the application of
welldescribed techniques to yet another species, unless the application solves a
specific biological problem important to aquaculture production; or manuscripts
dealing with gene cloning, characterizing of microsatellites, species identification
using molecular markers, EST papers with small collections, or mapping papers
with a small number of markers, unless the papers also deal with solving a
biological problem that is relevant to aquaculture production.
Aquaculture will not accept manuscripts focusing mainly on population genetics
studies that are based on RAPD and AFLP markers, since the dominance and
48
multilocus nature of the fingerprints are not suitable for making inferences about
population genetic diversity and structure. Sustainability and Society: D.C. Little
The Sustainability and Society section of the journal Aquaculture invites articles at
the interface of natural and social sciences that address the broader roles of
aquaculture in global food security and trade.
Aims and scope of the Sustainability and Society section are the: global
dissemination of interdisciplinary knowledge regarding the management of aquatic
resources and resulting impacts on people. Interconnections with other sectors of
food production; resource management and implications for societal impact. Going
beyond a narrow techno-centric focus, towards more holistic analyses of
aquaculture within well-defined contexts. Enquiry based on understanding
trajectories of change amid the global challenges of climate change and food
security. Mixed methods and approaches that incorporate and integrate both social
and natural sciences. Relevance for the diverse range of policy makers, practitioners
and other stakeholders involved. Articles that take a value chain approach, rather
than being wholly production orientated, are encouraged.
Disease B. Austin
The Disease sections welcomes critical reviews and high quality articles containing
novel data on all aspects concerning diseases of farmed aquatic species. The aims of
the section are: description of new and emerging diseases including characterization
of the causal agent(s), development in the understanding of fish pathogens for
example including new methods of growth where this has been a problem for
fastidious organisms, pathogenicity and epizootiology, developments in the
diagnosis of disease going beyond the use of standard well used methods, and
methods of disease control, notably new developments in vaccines,
immunostimulants, dietary supplements, medicinal plant products, probiotics,
prebiotics and genetically-disease resistant stock. Relevance to aquaculture must be
demonstrated. Articles, which adapt well known methods without further
refinement of those methods, are unlikely to be accepted. Submission checklist You
can use this list to carry out a final check of your submission before you send it to
the journal for review. Please check the relevant section in this Guide for Authors
for more details.
Ensure that the following items are present:
One author has been designated as the corresponding author with contact details: •
E-mail address • Full postal address
All necessary files have been uploaded: Manuscript: • Include keywords • All
figures (include relevant captions) • All tables (including titles, description,
footnotes) • Ensure all figure and table citations in the text match the files provided
• Indicate clearly if color should be used for any figures in print Graphical Abstracts
/ Highlights files (where applicable) Supplemental files (where applicable)
49
Further considerations • Manuscript has been 'spell checked' and 'grammar
checked' • All references mentioned in the Reference List are cited in the text, and
vice versa • Permission has been obtained for use of copyrighted material from
other sources (including the Internet) • Relevant declarations of interest have been
made
Journal policies detailed in this guide have been reviewed • Referee suggestions
and contact details provided, based on journal requirements
For further information, visit our Support Center. BEFORE YOU BEGIN Ethics in
publishing Please see our information pages on Ethics in publishing and Ethical
guidelines for journal publication. Human and animal rights If the work involves
the use of human subjects, the author should ensure that the work described has
been carried out in accordance with The Code of Ethics of the World Medical
Association (Declaration of Helsinki) for experiments involving humans; Uniform
Requirements for manuscripts submitted to Biomedical journals. Authors should
include a statement in the manuscript that informed consent was obtained for
experimentation with human subjects. The privacy rights of human subjects must
always be observed.
All animal experiments should comply with the ARRIVE guidelines and should be
carried out in accordance with the U.K. Animals (Scientific Procedures) Act, 1986
and associated guidelines, EU Directive 2010/63/EU for animal experiments, or the
National Institutes of Health guide for the care and use of Laboratory animals (NIH
Publications No. 8023, revised 1978) and the authors should clearly indicate in the
manuscript that such guidelines have been followed. Declaration of interest All
authors are requested to disclose any actual or potential conflict of interest including
any financial, personal or other relationships with other people or organizations
within three years of beginning the submitted work that could inappropriately
influence, or be perceived to influence, their work. More information. Submission
declaration and verification Submission of an article implies that the work described
has not been published previously (except in the form of an abstract or as part of a
published lecture or academic thesis or as an electronic preprint, see
http://www.elsevier.com/postingpolicy), that it is not under consideration for
publication elsewhere, that its publication is approved by all authors and tacitly or
explicitly by the responsible authorities where the work was carried out, and that, if
accepted, it will not be published elsewhere in the same form, in English or in any
other language, including electronically without the written consent of the
copyright-holder. To verify originality, your article may be checked by the
originality detection service CrossCheck
http://www.elsevier.com/editors/plagdetect.
If the manuscript to be submitted was previously rejected by Aquaculture or
another journal, it is necessary to specify what substantive new work and/or
revisions have been included to elevate the manuscripts quality for consideration by
Aquaculture. Contributors Each author is required to declare his or her individual
50
contribution to the article: all authors must have materially participated in the
research and/or article preparation, so roles for all authors should be described. The
statement that all authors have approved the final article should be true and
included in the disclosure. Changes to authorship Authors are expected to consider
carefully the list and order of authors before submitting their manuscript and
provide the definitive list of authors at the time of the original submission. Any
addition, deletion or rearrangement of author names in the authorship list should be
made only before the manuscript has been accepted and only if approved by the
journal Editor. To request such a change, the Editor must receive the following from
the corresponding author: (a) the reason for the change in author list and (b) written
confirmation (e-mail, letter) from all authors that they agree with the addition,
removal or rearrangement. In the case of addition or removal of authors, this
includes confirmation from the author being added or removed. Only in exceptional
circumstances will the Editor consider the addition, deletion or rearrangement of
authors after the manuscript has been accepted. While the Editor considers the
request, publication of the manuscript will be suspended. If the manuscript has
already been published in an online issue, any requests approved by the Editor will
result in a corrigendum.
Article transfer service This journal is part of our Article Transfer Service. This
means that if the Editor feels your article is more suitable in one of our other
participating journals, then you may be asked to consider transferring the article to
one of those. If you agree, your article will be transferred automatically on your
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by the new journal. More information. Copyright Upon acceptance of an article,
authors will be asked to complete a 'Journal Publishing Agreement' (see more
information on this). An e-mail will be sent to the corresponding author confirming
receipt of the manuscript together with a 'Journal Publishing Agreement' form or a
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Subscribers may reproduce tables of contents or prepare lists of articles including
abstracts for internal circulation within their institutions. Permission of the
Publisher is required for resale or distribution outside the institution and for all
other derivative works, including compilations and translations. If excerpts from
other copyrighted works are included, the author(s) must obtain written permission
from the copyright owners and credit the source(s) in the article. Elsevier has
preprinted forms for use by authors in these cases.
For open access articles: Upon acceptance of an article, authors will be asked to
complete an 'Exclusive License Agreement' (more information). Permitted third
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license.
Author rights As an author you (or your employer or institution) have certain rights
to reuse your work. More information. Elsevier supports responsible sharing Find
out how you can share your research published in Elsevier journals. Role of the
51
funding source You are requested to identify who provided financial support for
the conduct of the research and/or preparation of the article and to briefly describe
the role of the sponsor(s), if any, in study design; in the collection, analysis and
interpretation of data; in the writing of the report; and in the decision to submit the
article for publication. If the funding source(s) had no such involvement then this
should be stated. Funding body agreements and policies Elsevier has established a
number of agreements with funding bodies which allow authors to comply with
their funder's open access policies. Some funding bodies will reimburse the author
for the Open Access Publication Fee. Details of existing agreements are available
online. Open access This journal offers authors a choice in publishing their research:
Open access • Articles are freely available to both subscribers and the wider public
with permitted reuse. • An open access publication fee is payable by authors or on
their behalf, e.g. by their research funder or institution. Subscription • Articles are
made available to subscribers as well as developing countries and patient groups
through our universal access programs. • No open access publication fee payable by
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Regardless of how you choose to publish your article, the journal will apply the
same peer review criteria and acceptance standards.
For open access articles, permitted third party (re)use is defined by the following
Creative Commons user licenses:
Creative Commons Attribution (CC BY) Lets others distribute and copy the article,
create extracts, abstracts, and other revised versions, adaptations or derivative
works of or from an article (such as a translation), include in a collective work (such
as an anthology), text or data mine the article, even for commercial purposes, as
long as they credit the author(s), do not represent the author as endorsing their
adaptation of the article, and do not modify the article in such a way as to damage
the author's honor or reputation. Creative Commons Attribution-NonCommercial-
NoDerivs (CC BY-NC-ND) For non-commercial purposes, lets others distribute and
copy the article, and to include in a collective work (such as an anthology), as long
as they credit the author(s) and provided they do not alter or modify the article. The
open access publication fee for this journal is USD 3600, excluding taxes. Learn more
about Elsevier's pricing policy: https://www.elsevier.com/openaccesspricing.
Green open access Authors can share their research in a variety of different ways
and Elsevier has a number of green open access options available. We recommend
authors see our green open access page for further information. Authors can also
self-archive their manuscripts immediately and enable public access from their
institution's repository after an embargo period. This is the version that has been
accepted for publication and which typically includes author-incorporated changes
suggested during submission, peer review and in editor-author communications.
Embargo period: For subscription articles, an appropriate amount of time is needed
for journals to deliver value to subscribing customers before an article becomes
freely available to the public. This is the embargo period and it begins from the date
52
the article is formally published online in its final and fully citable form. Find out
more. This journal has an embargo period of 24 months. Elsevier Publishing
Campus The Elsevier Publishing Campus (www.publishingcampus.com) is an
online platform offering free lectures, interactive training and professional advice to
support you in publishing your research. The College of Skills training offers
modules on how to prepare, write and structure your article and explains how
editors will look at your paper when it is submitted for publication. Use these
resources, and more, to ensure that your submission will be the best that you can
make it. Language (usage and editing services) Please write your text in good
English (American or British usage is accepted, but not a mixture of these). Authors
who feel their English language manuscript may require editing to eliminate
possible grammatical or spelling errors and to conform to correct scientific English
may wish to use the English Language Editing service available from Elsevier's
WebShop. Submission Our online submission system guides you stepwise through
the process of entering your article details and uploading your files. The system
converts your article files to a single PDF file used in the peer-review process.
Editable files (e.g., Word, LaTeX) are required to typeset your article for final
publication. All correspondence, including notification of the Editor's decision and
requests for revision, is sent by e-mail. Authors should avoid responding by
messages received from the system using the 'Reply' button on their e-mail message;
this will send the message to the system support and not to the editorial office, and
will create unnecessary load of sorting out and forwarding Please submit your
article via http://www.evise.com/evise/jrnl/AQUA Referees Please submit the
names and institutional e-mail addresses of several potential referees. For more
details, visit our Support site. Note that the editor retains the sole right to decide
whether or not the suggested reviewers are used. PREPARATION Use of word
processing software It is important that the file be saved in the native format of the
word processor used. The text should be in single-column format. Keep the layout
of the text as simple as possible. Most formatting codes will be removed and
replaced on processing the article. In particular, do not use the word processor's
options to justify text or to hyphenate words. However, do use bold face, italics,
subscripts, superscripts etc. When preparing tables, if you are using a table grid, use
only one grid for each individual table and not a grid for each row. If no grid is
used, use tabs, not spaces, to align columns. The electronic text should be prepared
in a way very similar to that of conventional manuscripts (see also the Guide to
Publishing with Elsevier). Note that source files of figures, tables and text graphics
will be required whether or not you embed your figures in the text. See also the
section on Electronic artwork. To avoid unnecessary errors you are strongly advised
to use the 'spell-check' and 'grammar-check' functions of your word processor.
LaTeX You are recommended to use the Elsevier article class elsarticle.cls to prepare
your manuscript and BibTeX to generate your bibliography. Our LaTeX site has
detailed submission instructions, templates and other information. Article structure
Subdivision - numbered sections Divide your article into clearly defined and
numbered sections. Subsections should be numbered 1.1 (then 1.1.1, 1.1.2, ...), 1.2,
53
etc. (the abstract is not included in section numbering). Use this numbering also for
internal cross-referencing: do not just refer to 'the text'. Any subsection may be
given a brief heading. Each heading should appear on its own separate line.
Introduction State the objectives of the work and provide an adequate background,
avoiding a detailed literature survey or a summary of the results. Material and
methods Provide sufficient detail to allow the work to be reproduced. Methods
already published should be indicated by a reference: only relevant modifications
should be described. Theory/calculation A Theory section should extend, not
repeat, the background to the article already dealt with in the Introduction and lay
the foundation for further work. In contrast, a Calculation section represents a
practical development from a theoretical basis. Results Results should be clear and
concise. Discussion This should explore the significance of the results of the work,
not repeat them. A combined Results and Discussion section is often appropriate.
Avoid extensive citations and discussion of published literature. Conclusions The
main conclusions of the study may be presented in a short Conclusions section,
which may stand alone or form a subsection of a Discussion or Results and
Discussion section. Appendices If there is more than one appendix, they should be
identified as A, B, etc. Formulae and equations in appendices should be given
separate numbering: Eq. (A.1), Eq. (A.2), etc.; in a subsequent appendix, Eq. (B.1)
and so on. Similarly for tables and figures: Table A.1; Fig. A.1, etc. Essential title
page information
• Title. Concise and informative. Titles are often used in information-retrieval
systems. Avoid abbreviations and formulae where possible.
•Numbering.Manuscripts that are sequentially numbered (e.g., I, II, etc.) are no
longer accepted.
•Author names and affiliations. Where the family name may be ambiguous (e.g., a
double name), please indicate this clearly. Present the authors' affiliation addresses
(where the actual work was done) below the names. Indicate all affiliations with a
lower-case superscript letter immediately after the author's name and in front of the
appropriate address. Provide the full postal address of each affiliation, including the
country name and, if available, the e-mail address of each author.
• Corresponding author. Clearly indicate who will handle correspondence at all
stages of refereeing and publication, also post-publication. Ensure that phone
numbers (with country and area code) are provided in addition to the e-mail
address and the complete postal address. Contact details must be kept up to date by
the corresponding author.
• Present/permanent address. If an author has moved since the work described in
the article was done, or was visiting at the time, a 'Present address' (or 'Permanent
address') may be indicated as a footnote to that author's name. The address at which
the author actually did the work must be retained as the main, affiliation address.
Superscript Arabic numerals are used for such footnotes. Abstract A concise and
54
factual abstract is required. The abstract should state briefly the purpose of the
research, the principal results and major conclusions. An abstract is often presented
separately from the article, so it must be able to stand alone. For this reason,
References should be avoided, but if essential, then cite the author(s) and year(s).
Also, non-standard or uncommon abbreviations should be avoided, but if essential
they must be defined at their first mention in the abstract itself. The abstract should
be not longer than 400 words. Keywords Immediately after the abstract, provide a
maximum of 4-6 keywords, using American spelling and avoiding general and
plural terms and multiple concepts (avoid, for example, "and", "of"). Be sparing with
abbreviations: only abbreviations firmly established in the field may be eligible.
These keywords will be used for indexing purposes. Highlights of the manuscript
As part of the submission process, authors are required to provide 3 or 4 highlights,
each one sentence long. Beyond stating key discoveries, these highlights must
explicitly establish why the work is novel and why it has an application to
aquaculture. It is not sufficient to state that the species is one that is farmed.
Abbreviations Define abbreviations that are not standard in this field in a footnote
to be placed on the first page of the article. Such abbreviations that are unavoidable
in the abstract must be defined at their first mention there, as well as in the footnote.
Ensure consistency of abbreviations throughout the article. Acknowledgements
Collate acknowledgements in a separate section at the end of the article before the
references and do not, therefore, include them on the title page, as a footnote to the
title or otherwise. List here those individuals who provided help during the
research (e.g., providing language help, writing assistance or proof reading the
article, etc.). Formatting of funding sources List funding sources in this standard
way to facilitate compliance to funder's requirements:
Funding: This work was supported by the National Institutes of Health [grant
numbers xxxx, yyyy]; the Bill & Melinda Gates Foundation, Seattle, WA [grant
number zzzz]; and the United States Institutes of Peace [grant number aaaa].
It is not necessary to include detailed descriptions on the program or type of grants
and awards. When funding is from a block grant or other resources available to a
university, college, or other research institution, submit the name of the institute or
organization that provided the funding.
If no funding has been provided for the research, please include the following
sentence:
This research did not receive any specific grant from funding agencies in the public,
commercial, or not-for-profit sectors. Nomenclature and units Follow
internationally accepted rules and conventions: use the international system of units
(SI). If other quantities are mentioned, give their equivalent in SI. You are urged to
consult IUPAC: Nomenclature of Organic Chemistry for further information. 1.
Authors and editors are, by general agreement, obliged to accept the rules
governing biological nomenclature, as laid down in the International Code of
Botanical Nomenclature, the International Code of Nomenclature of Bacteria, and
55
the International Code of Zoological Nomenclature. 2. All biota (crops, plants,
insects, birds, mammals, etc.) should be identified by their scientific names when
the English term is first used, with the exception of common domestic animals. 3.
All biocides and other organic compounds must be identified by their Geneva
names when first used in the text. Active ingredients of all formulations should be
likewise identified.
4. For chemical nomenclature, the conventions of the International Union of Pure
and Applied Chemistry and the official recommendations of the IUPAC IUB
Combined Commission on Biochemical Nomenclature should be followed. DNA
sequences and GenBank Accession numbers. Many Elsevier journals cite "gene
accession numbers" in their running text and footnotes. Gene accession numbers
refer to genes or DNA sequences about which further information can be found in
the databases at the National Center for Biotechnical Information (NCBI) at the
National Library of Medicine. Authors are encouraged to check accession numbers
used very carefully. An error in a letter or number can result in a dead link. Note
that in the final version of the electronic copy, the accession number text will be
linked to the appropriate source in the NCBI databases enabling readers to go
directly to that source from the article.
Example 1: "GenBank accession nos. AI631510, AI631511, AI632198, and BF223228, a
B-cell tumor from a chronic lymphatic leukemia (GenBank accession no. BE675048),
and a T-cell lymphoma (GenBank accession no. AA361117)".
Authors are encouraged to check accession numbers used very carefully. An error in
a letter or number can result in a dead link.
In the final version of the printed article, the accession number text will not appear
bold or underlined (see Example 2 below).
Example 2: "GenBank accession nos. AI631510, AI631511, AI632198, and BF223228),
a B-cell tumor from a chronic lymphatic leukemia (GenBank accession no.
BE675048), and a T-cell lymphoma (GenBank accession no. AA361117)".
In the final version of the electronic copy, the accession number text will be linked to
the appropriate source in the NCBI databases enabling readers to go directly to that
source from the article (see Example 3 below).
Example 3: "GenBank accession nos. AI631510, AI631511, AI632198, and BF223228),
a B-cell tumor from a chronic lymphatic leukemia (GenBank accession no.
BE675048), and a T-cell lymphoma (GenBank accession no. AA361117)". Math
formulae Please submit math equations as editable text and not as images. Present
simple formulae in line with normal text where possible and use the solidus (/)
instead of a horizontal line for small fractional terms, e.g., X/Y. In principle,
variables are to be presented in italics. Powers of e are often more conveniently
denoted by exp. Number consecutively any equations that have to be displayed
separately from the text (if referred to explicitly in the text). Give the meaning of all
56
symbols immediately after the equation in which they are first used. In chemical
formulae, valence of ions should be given as, e.g. Ca2+ and not Ca++. Isotope
numbers should precede the symbols, e.g., 18O. The repeated writing of chemical
formulae in the text is to be avoided where reasonably possible; instead, the name of
the compound should be given in full. Exceptions may be made in the case of a very
long name occurring very frequently or in the case of a compound being described
as the end product of a gravimetric determination (e.g., phosphate as P2O5).
Footnotes Footnotes should be used sparingly. Number them consecutively
throughout the article. Many word processors can build footnotes into the text, and
this feature may be used. Otherwise, please indicate the position of footnotes in the
text and list the footnotes themselves separately at the end of the article. Do not
include footnotes in the Reference list. Artwork Electronic artwork General points •
Make sure you use uniform lettering and sizing of your original artwork. • Embed
the used fonts if the application provides that option. • Aim to use the following
fonts in your illustrations: Arial, Courier, Times New Roman, Symbol, or use fonts
that look similar.
• Number the illustrations according to their sequence in the text. • Use a logical
naming convention for your artwork files. • Provide captions to illustrations
separately. • Size the illustrations close to the desired dimensions of the published
version. • Submit each illustration as a separate file. A detailed guide on electronic
artwork is available. You are urged to visit this site; some excerpts from the detailed
information are given here. Formats If your electronic artwork is created in a
Microsoft Office application (Word, PowerPoint, Excel) then please supply 'as is' in
the native document format. Regardless of the application used other than Microsoft
Office, when your electronic artwork is finalized, please 'Save as' or convert the
images to one of the following formats (note the resolution requirements for line
drawings, halftones, and line/halftone combinations given below): EPS (or PDF):
Vector drawings, embed all used fonts. TIFF (or JPEG): Color or grayscale
photographs (halftones), keep to a minimum of 300 dpi. TIFF (or JPEG): Bitmapped
(pure black & white pixels) line drawings, keep to a minimum of 1000 dpi. TIFF (or
JPEG): Combinations bitmapped line/half-tone (color or grayscale), keep to a
minimum of 500 dpi. Please do not: • Supply files that are optimized for screen use
(e.g., GIF, BMP, PICT, WPG); these typically have a low number of pixels and
limited set of colors; • Supply files that are too low in resolution; • Submit graphics
that are disproportionately large for the content. Color artwork Please make sure
that artwork files are in an acceptable format (TIFF (or JPEG), EPS (or PDF), or MS
Office files) and with the correct resolution. If, together with your accepted article,
you submit usable color figures then Elsevier will ensure, at no additional charge,
that these figures will appear in color online (e.g., ScienceDirect and other sites)
regardless of whether or not these illustrations are reproduced in color in the
printed version. For color reproduction in print, you will receive information
regarding the costs from Elsevier after receipt of your accepted article. Please
indicate your preference for color: in print or online only. Further information on
the preparation of electronic artwork. Figure captions Ensure that each illustration
57
has a caption. Supply captions separately, not attached to the figure. A caption
should comprise a brief title (not on the figure itself) and a description of the
illustration. Keep text in the illustrations themselves to a minimum but explain all
symbols and abbreviations used. Text graphics Text graphics may be embedded in
the text at the appropriate position. See further under Electronic artwork. Tables
Please submit tables as editable text and not as images. Tables can be placed either
next to the relevant text in the article, or on separate page(s) at the end. Number
tables consecutively in accordance with their appearance in the text and place any
table notes below the table body. Be sparing in the use of tables and ensure that the
data presented in them do not duplicate results described elsewhere in the article.
Please avoid using vertical rules and shading in table cells. References Citation in
text Please ensure that every reference cited in the text is also present in the
reference list (and vice versa). Any references cited in the abstract must be given in
full. Unpublished results and personal communications are not recommended in the
reference list, but may be mentioned in the text. If these references are included in
the reference list they should follow the standard reference style of the journal and
should include a substitution of the publication date with either 'Unpublished
results' or 'Personal communication'. Citation of a reference as 'in press' implies that
the item has been accepted for publication.
Reference links Increased discoverability of research and high quality peer review
are ensured by online links to the sources cited. In order to allow us to create links
to abstracting and indexing services, such as Scopus, CrossRef and PubMed, please
ensure that data provided in the references are correct. Please note that incorrect
surnames, journal/book titles, publication year and pagination may prevent link
creation. When copying references, please be careful as they may already contain
errors. Use of the DOI is encouraged.
A DOI can be used to cite and link to electronic articles where an article is in-press
and full citation details are not yet known, but the article is available online. A DOI
is guaranteed never to change, so you can use it as a permanent link to any
electronic article. An example of a citation using DOI for an article not yet in an
issue is: VanDecar J.C., Russo R.M., James D.E., Ambeh W.B., Franke M. (2003).
Aseismic continuation of the Lesser Antilles slab beneath northeastern Venezuela.
Journal of Geophysical Research, https://doi.org/10.1029/2001JB000884. Please
note the format of such citations should be in the same style as all other references
in the paper. Web references As a minimum, the full URL should be given and the
date when the reference was last accessed. Any further information, if known (DOI,
author names, dates, reference to a source publication, etc.), should also be given.
Web references can be listed separately (e.g., after the reference list) under a
different heading if desired, or can be included in the reference list. Data references
This journal encourages you to cite underlying or relevant datasets in your
manuscript by citing them in your text and including a data reference in your
Reference List. Data references should include the following elements: author
name(s), dataset title, data repository, version (where available), year, and global
58
persistent identifier. Add [dataset] immediately before the reference so we can
properly identify it as a data reference. The [dataset] identifier will not appear in
your published article. References in a special issue Please ensure that the words
'this issue' are added to any references in the list (and any citations in the text) to
other articles in the same Special Issue. Reference management software Most
Elsevier journals have their reference template available in many of the most
popular reference management software products. These include all products that
support Citation Style Language styles, such as Mendeley and Zotero, as well as
End Note. Using the word processor plug-ins from these products, authors only
need to select the appropriate journal template when preparing their article, after
which citations and bibliographies will be automatically formatted in the journal's
style. If no template is yet available for this journal, please follow the format of the
sample references and citations as shown in this Guide. Users of Mendeley Desktop
can easily install the reference style for this journal by clicking the following link:
http://open.mendeley.com/use-citation-style/aquaculture When preparing your
manuscript, you will then be able to select this style using the Mendeley plugins for
Microsoft Word or Libre Office. Reference formatting There are no strict
requirements on reference formatting at submission. References can be in any style
or format as long as the style is consistent. Where applicable, author(s) name(s),
journal title/book title, chapter title/article title, year of publication, volume
number/book chapter and the pagination must be present. Use of DOI is highly
encouraged. The reference style used by the journal will be applied to the accepted
article by Elsevier at the proof stage. Note that missing data will be highlighted at
proof stage for the author to correct. If you do wish to format the references yourself
they should be arranged according to the following examples: Reference style Text:
All citations in the text should refer to: 1. Single author: the author's name (without
initials, unless there is ambiguity) and the year of publication; 2. Two authors: both
authors' names and the year of publication; 3. Three or more authors: first author's
name followed by 'et al.' and the year of publication.
Citations may be made directly (or parenthetically). Groups of references should be
listed first alphabetically, then chronologically. Examples: 'as demonstrated (Allan,
2000a, 2000b, 1999; Allan and Jones, 1999). Kramer et al. (2010) have recently shown
....' List: References should be arranged first alphabetically and then further sorted
chronologically if necessary. More than one reference from the same author(s) in the
same year must be identified by the letters 'a', 'b', 'c', etc., placed after the year of
publication. Examples: Reference to a journal publication: Van der Geer, J.,
Hanraads, J.A.J., Lupton, R.A., 2010. The art of writing a scientific article. J. Sci.
Commun. 163, 51–59. Reference to a book: Strunk Jr., W., White, E.B., 2000. The
Elements of Style, fourth ed. Longman, New York. Reference to a chapter in an
edited book: Mettam, G.R., Adams, L.B., 2009. How to prepare an electronic version
of your article, in: Jones, B.S., Smith , R.Z. (Eds.), Introduction to the Electronic Age.
E-Publishing Inc., New York, pp. 281–304. Reference to a website: Cancer Research
UK, 1975. Cancer statistics reports for the UK. http://www.cancerresearchuk.org/
aboutcancer/statistics/cancerstatsreport/ (accessed 13.03.03). Reference to a
59
dataset: [dataset] Oguro, M., Imahiro, S., Saito, S., Nakashizuka, T., 2015. Mortality
data for Japanese oak wilt disease and surrounding forest compositions. Mendeley
Data, v1. https://doi.org/10.17632/ xwj98nb39r.1. Journal Abbreviations Source
Define abbreviations that are not standard in this field at their first occurrence in the
article: in the abstract but also in the main text after it. Ensure consistency of
abbreviations throughout the article. Video Elsevier accepts video material and
animation sequences to support and enhance your scientific research. Authors who
have video or animation files that they wish to submit with their article are strongly
encouraged to include links to these within the body of the article. This can be done
in the same way as a figure or table by referring to the video or animation content
and noting in the body text where it should be placed. All submitted files should be
properly labeled so that they directly relate to the video file's content. In order to
ensure that your video or animation material is directly usable, please provide the
files in one of our recommended file formats with a preferred maximum size of 150
MB. Video and animation files supplied will be published online in the electronic
version of your article in Elsevier Web products, including ScienceDirect. Please
supply 'stills' with your files: you can choose any frame from the video or animation
or make a separate image. These will be used instead of standard icons and will
personalize the link to your video data. For more detailed instructions please visit
our video instruction pages. Note: since video and animation cannot be embedded
in the print version of the journal, please provide text for both the electronic and the
print version for the portions of the article that refer to this content. Supplementary
material Supplementary material such as applications, images and sound clips, can
be published with your article to enhance it. Submitted supplementary items are
published exactly as they are received (Excel or PowerPoint files will appear as such
online). Please submit your material together with the article and supply a concise,
descriptive caption for each supplementary file. If you wish to make changes to
supplementary material during any stage of the process, please make sure to
provide an updated file. Do not annotate any corrections on a previous version.
Please switch off the 'Track Changes' option in Microsoft Office files as these will
appear in the published version. Data linking If you have made your research data
available in a data repository, you can link your article directly to the dataset.
Elsevier collaborates with a number of repositories to link articles on Science Direct
with relevant repositories, giving readers access to underlying data that give them a
better understanding of the research described.
There are different ways to link your datasets to your article. When available, you
can directly link your dataset to your article by providing the relevant information
in the submission system. For more information, visit the database linking page.
For supported data repositories a repository banner will automatically appear next
to your published article on Science Direct.
In addition, you can link to relevant data or entities through identifiers within the
text of your manuscript, using the following format: Database: xxxx (e.g., TAIR:
60
AT1G01020; CCDC: 734053; PDB: 1XFN). AudioSlides The journal encourages
authors to create an AudioSlides presentation with their published article.
AudioSlides are brief, webinar-style presentations that are shown next to the online
article on ScienceDirect. This gives authors the opportunity to summarize their
research in their own words and to help readers understand what the paper is
about. More information and examples are available. Authors of this journal will
automatically receive an invitation e-mail to create an AudioSlides presentation
after acceptance of their paper. Interactive plots This journal enables you to show an
Interactive Plot with your article by simply submitting a data file. Full instructions.
AFTER ACCEPTANCE Online proof correction Corresponding authors will receive
an e-mail with a link to our online proofing system, allowing annotation and
correction of proofs online. The environment is similar to MS Word: in addition to
editing text, you can also comment on figures/tables and answer questions from the
Copy Editor. Web-based proofing provides a faster and less error-prone process by
allowing you to directly type your corrections, eliminating the potential
introduction of errors. If preferred, you can still choose to annotate and upload your
edits on the PDF version. All instructions for proofing will be given in the e-mail we
send to authors, including alternative methods to the online version and PDF. We
will do everything possible to get your article published quickly and accurately.
Please use this proof only for checking the typesetting, editing, completeness and
correctness of the text, tables and figures. Significant changes to the article as
accepted for publication will only be considered at this stage with permission from
the Editor. It is important to ensure that all corrections are sent back to us in one
communication. Please check carefully before replying, as inclusion of any
subsequent corrections cannot be guaranteed. Proofreading is solely your
responsibility. Offprints The corresponding author will, at no cost, receive a
customized Share Link providing 50 days free access to the final published version
of the article on ScienceDirect. The Share Link can be used for sharing the article via
any communication channel, including email and social media. For an extra charge,
paper offprints can be ordered via the offprint order form which is sent once the
article is accepted for publication. Both corresponding and co-authors may order
offprints at any time via Elsevier's Webshop. Corresponding authors who have
published their article open access do not receive a Share Link as their final
published version of the article is available open access on ScienceDirect and can be
shared through the article DOI link. AUTHOR INQUIRIES Visit the Elsevier
Support Center to find the answers you need. Here you will find everything from
Frequently Asked Questions to ways to get in touch. You can also check the status
of your submitted article or find out when your accepted article will be published.