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3. MTODO DE RITCHIE OU FORMOL-TER (Centrfugo-sedimentao): Foi descrito por Ritchie em 1948.

FUNDAMENTO e FINALIDADE:

Um mtodo de concentrao para visualizar cistos de protozorios e ovos leves de helmintos.

Utilizado principalmente para deteco de oocistos de coccdeos: Isospora belli, Cryptosporidium sp.

TCNICA: Utilizar material fecal a fresco;

1) Colocar 1 ou 2g de fezes coletadas de vrias partes do bolo fecal em frasco contendo 10ml de gua corrente ou soluo salina a 0,85%;

2) Filtrar a suspenso atravs de gaze dobrada quatro vezes, e receber o filtrado em um tubo cnico de centrfuga de 15 mL;

3) Centrifugar (1500rpm por um minuto);

4) Decantar o sobrenadante e adicionar 1 a 2mL de gua corrente ou soluo salina a 0,85% ao sedimento antes de ressuspend-lo. Completar com gua corrente (ou soluo salina a 0,85%) 2/3 do volume do tubo. Agitar e centrifugar (1500rpm por 1 min).TCNICA: Utilizar material fecal a fresco;

5) Repita a etapa 4, at que o sobrenadante se apresente relativamente claro.

6) Depois que o ltimo sobrenadante decantado, ressuspender o sedimento com 1 a 2mL de formalina a 10%. Completar o volume da suspenso em 10 mL com formalina a 10%. Deixar em repouso em repouso durante 5 minutos.

7) Adicionar 3ml de ter ou acetado de etila, fechar o tubo e agitar vigorosamente, na posio invertida, por 30 minutos. Remover a tampa com cuidado.

TCNICA: Utilizar material fecal a fresco;

8) Centrifugar (1500rpm por 1 min). Quatro camadas se formaro:

(1) sedimento no fundo do tubo contendo os parasitos,

(2) camada de formalina,

(3) tampo de detritos fecais,

(4) camada de ter na superfcie;

9) Afrouxar e separar o tampo de detritos das paredes do tubo com um estilete fino e com cuidado decantar as trs camadas superiores. Limpar com swab de algodo as paredes do tubo, removendo os detritos remanescentes;

TCNICA: Utilizar material fecal a fresco;

10) Uma pequena quantidade de lquido que permanece nas paredes do tubo escorre para o fundo junto ao sedimento.

11) Misturar o lquido e o sedimento, preparando as lminas para a pesquisa de ovos, lavas e cistos.

12) Cobrir com lamnula e examinar com as objetivas de l0x e/ou 40x.

TCNICA:

VANTAGENS DA TCNICA: Pode ser usada para ovos de helmintos e cistos de protozorios;

Pode ser utilizada para observao de oocistos de coccdeos.

DESVANTAGEM DA TCNICA:

Uso de diversos reagentes perigosos.

No pode ser usada para os ovos pesados de helmintos, principalmente ovos de Schistosoma mansoni e ovos infrteis de Ascaris lumbricoides.TCNICA:

OBSERVAO:

Foi lanado no mercado o Coprotest, que um processo simplificado e seguro de sedimentao por centrifugao.

Consiste no seguinte:

o paciente compra em farmcia o recipiente Coprotest, o qual j vem com o conservador (formol a 10%);

coloca as fezes na cavidade do coletor, fecha o frasco e agita por dois minutos para homogeneizar, enviando, em seguida, ao laboratrio;TCNICA:

OBSERVAO:

c) o laboratorista recolhe a amostra em um tubo de centrfuga; acrescenta 3mL de acetato de etila ou ter, agita e centrifuga por trs minutos; despreza os detritos e o lquido sobrenadante e acrescenta uma gota de lugol ao sedimento:

c) recolhe uma amostra numa lmina, cobre com lamnula e examina ao microscpio.