UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCODEPARTAMENTO DE BIOQUMICA

RELATRIO DE PRTICAS DE BIOQUMICAMEDICINA-121

Artur Filipe Ferreira DutraPrimeiro Perodo - mdulo III

RECIFE, PE 2006.2

PRTICA INTRODUO AO MTODO CIENTFICOIntroduo Metodologia cientfica o estudo sistemtico e lgico dos mtodos empregados nas cincias, seus fundamentos, sua validade e sua relao com as teorias cientficas. Em geral, o mtodo cientfico compreende basicamente um conjunto de dados iniciais e um sistema de operaes ordenadas adequado para a formulao de concluses, de acordo com certos objetivos predeterminados.A assimilao indiscriminada de percepes pode gerar erros de interpretao, lapsos e captao insuficiente das informaes recebidas. Por isso, a cincia precisa estabelecer regras que ajudem a classificar, registrar e interpretar os dados da percepo, o que garante ao mesmo tempo economia de tempo e um sistema de transmisso racional do saber entre as geraes. O emprego da metodologia cientfica tem por objetivo, pois, solucionar as questes relativas classificao de dados, segundo critrios preestabelecidos, e orientar as pesquisas futuras, alm de facilitar o treinamento de especialistas. Pelo fato de selecionar dados iniciais, toda metodologia se impregna de uma filosofia particular que se resume nas concluses a que conduz. A experincia histrica demonstrou que a excessiva rigidez nos postulados limita, mais do que favorece, o desenvolvimento de novas idias e descobertas. Por essa razo, as ltimas tendncias metodolgicas observam como princpios fundamentais a flexibilidade e o esprito aberto evoluo do pensamento humano.

ExperimentalUm lquido com propriedades intrigantes foi entregue aos alunos em um tubo de ensaio fechado com uma rolha. Consideraes foram feitas em relao ao primeiro contato com o liquido e aparentemente nada de diferente foi constatado. Ele apresentava uma colorao amarelada no repouso, levemente viscosa sugerindo ser algo como urina ou alguma mistura a base de gua com um corante especfico. Aps a agitao feita seguindo o roteiro de praticas laboratorial, a tonalidade azul no lquido foi notada com bolhas na superfcie e logo ao voltar ao repouso a colorao inicial foi re-estabelecida, descartando a possibilidade de ser gua pura, portanto. A partir desse momento, vrias hipteses foram formuladas e descartadas uma a uma. Primeiramente, foi sugerido que a rolha estaria impregnada de uma substancia azul, mas ao garantir o contato do liquido com a rolha sem agitao previa a tonalidade amarelada persistiu. Na segunda hiptese levantada, dizia que o amento do contato do lquido com as paredes do recipiente na agitao garantiria a cor azul, no houve confirmao desta, pois lentamente e sem agitao permitiu-se o contato do lquido com as paredes do recipiente e mesmo assim ele no mudou de cor. Na terceira hiptese, questionou-se que o aumento da agitao trmica das molculas devido a agitao produziria a cor azul,mas no houve mudana na colorao quando foi aquecida a parede do tubo.Por fim,restou a ltima hiptese segundo a qual existe um gs acima do lquido que ,ao misturar-se com ele durante a agitao,torna o lquido azul,essa foi a nica que no foi descartada pelos testes feitos.Resultados e discusses Como a ultima hiptese no foi descartada,sugeriu-se que alguns testes fossem relalizados para ratificao da hiptese.Sugeriu-se ser um frasco com lquidos imiscveis,que no foi aceita devido ao teste feito a hiptese que faz referencia a um possvel gs ainda persistiu.No entanto ainda h uma dvida se houve uma mistura do gs com o lquido ou uma reao qumica entre eles. Caso se trata-se de uma reao, a presso no interior do tubo diminuiria com o tempo, devido ao consumo do gs reagente.O que no ocorre. Em caso de mistura, h formao de bolhas devido ao retorno do gs superfcie, o que observado no experimento testado. Assim, comprova-se o acontecimento de mistura.

.Para anlise do caso,foram propostas questes no roteiro que foram assim discutidas:

1.Provar que no foi um milagre.Todas as anlises levam a crer que se trata de uma mistura entre o gs e o lquido do recipiente, pois h uma diferena nas fases e as bolhas formadas aps agitao do frasco se acumularam na superfcie como se fosse outra substancia.Provar que no foi um milagre simples porque se caso fosse uma milagre,no retornaria ao ponto inicial quando o estmulo,no caso a agitao,cessasse.Assim, confirmada a necessidade de fenmenos fisico-quimicos acontecendo e no um milagre visto que milagres no se encaixam no mtodo cientfico.

2.Um sujeito chato teima com voc que inicialmente no havia ar no frasco e sim um misterioso gs x,que produz o mesmo efeito.Como essa questao pode ser resolvida?Na qumica Lavoisier j falava em conservao de massa em uma reao e, baseando-se em tal princpio, comparando a massa do gs antes da abertura do frasco e depois da abertura do recipiente, possvel avaliar se o gs x, em caso de compatibilidade, era o prprio ar ou ainda o seu componente em maior quantidade de massa. 3. Vamos representar o aparecimento da cor azul pela reao:lquido + oxignio substncia azul,e vamos considerar duas possibilidades para o descoramento:a) substncia azul lquido + oxigniob) substncia azul + substncia B substncia incolor,Tente imaginar uma maneira de decidir experimentalmente entre estes dois mecanismos.Decidir entre esses experimentos depende de uma simples anlise de mistura.Considerando uma mistura o contedo do tubo de ensaio,a hiptese b no vivel,pois a substancia B seria consumida e a suposta reao entraria em equilbrio no voltando a condio inicial(o que no ocorre).E ainda considerando a mistura,ela garante que o resultado esperado,no caso o lquido ficar azul aps a agitao,ocorra indefinidamente enquanto as condies apresentadas pelo tudo persistirem e caso fosse includa a substancia B,e uma reao acontecesse, aps o equilbrio,o resultado no seria reversvel ao ponto de comear do zero e sempre haveria um percentual iniciador da reao que no permitiria o retorno ao estado inicial,no caso a coloraao amarelada. 4. Qual a concluso?Conclui-se que em um mtodo cientfico a anlise do sistema deve ser feita baseada nos indcios cientficos.Quando no caso,h um fato seguido de uma hiptese e terminamos com uma teoria a ser aceita ou no dentro dos padres da comunidade cientifica, obrigatrio a considerao sobre os testes a serem feitos para que no sejam aceitas referencias baseadas apenas na observao de um fato sem comprovao cientfica afim de que evitemos anlises simplrias de um fato como o ocorrido,afirmando que to somente se trata de um milagre sem antes usar dos meios da cincia para descartar as outras possveis concluses.Sendo assim,a concluso para o fato misterioso que acontece no tubo de que se trata de lquido que se mistura com o gs x, formando uma mistura azul. No h reao entre os reagentes apresentados e,portanto, no h consumo de gs , mantendo a presso constante no recipiente apresentado para anlise.

PRTICA PROTENASIntroduo geralAs protenas so as molculas orgnicas mais abundantes e importantes nas clulas e perfazem 50% ou mais de seu peso seco. Pertencem classe dos peptdeos, pois so formadas por aminocidos ligados entre si por ligaes peptdicas. Uma ligao peptdica a unio do grupo amino (-NH2) de um aminocido com o grupo carboxila (-COOH) de outro aminocido, atravs da formao de uma amida. As propriedades das protenas em soluo cida ou bsica determinado em grande parte pelo nmero e natureza dos grupos ionizveis nos radicais R dos resduos de aminocidos.Os grupos amnicos (-NH2) e carboxlicos (-COOH) terminais das cadeias polipeptdicas exercem pouca influncia.A intensidade de ionizao dos grupos funcionais dos radicais R ser influenciada pela natureza dos radicais R circunvizinhos.As protenas, do mesmo modo que os peptdeos e aminocidos, possuem pontos isoeltricos caractersticos nos quais o nmero de cargas positivas igual ao de cargas negativas.A solubilidade de uma protena depende do nmero e do arranjo de cargas na molcula, que por sua vez depende da composio em aminocidos. Partes no proticas da molcula, como lipdeos, carboidratos, fosfatos, etc., tambm afetam a solubilidade.A solubilidade da protena pode ser modificada por fatores como:pH,fora inica,constante dieltrica do solvente,temperatura. Uma das maneiras de promover a precipitao de uma protena atingir seu ponto isoeltrico,pois nele ela apresenta baixa solubilidade. No entanto, existem outros fatores que influem nessa propriedade fsica das protenas, como a ao de cidos, bases, sais e solventes orgnicos.A precipitao mxima no ponto isoeltrico da protena e pode sofrer alteraes pela adio de sais. A precipitao por solventes orgnicos depende muito da temperatura. Os solventes orgnicos, quando utilizados a temperaturas baixas, so bastante teis na separao de misturas de protenas.Em temperaturas mais elevadas esses solventes podem levar desnaturao por rompimento das pontes de hidrognio e estabelecimento de interaes apolares, importantes na manuteno da conformao protica. O objetivo desta prtica constatar a interferncia de algumas substncias na precipitao protica, para que possamos avaliar a modificao da sua estrutura devido aos nveis de desnaturao observados.Experimental1. PRECIPITAO PELO CIDO TRICLOROACTICOA protena albumina(2ml) foi utilizada para verificao da precipitao dela em presena de trs cidos distintos:foram separados trs tubos de ensaio,o primeiro com 1 ml de soluo de cido actico 20%; no segundo, 1 ml de cido clordrico 20% e no terceiro 1 ml de soluo de cido tricloroactico 20%. Aps misturar bem e agitar o recipiente,observou-se os resultados que seguem esquematizados para facilitar a anlise.Resultados e discusses prtica 1TUBOPRECIPITADO

1-

2++

3+++

A precipitao ocorreu de forma diversa entre os tubos. A precipitao abaixo do ponto isoeltrico pode ser feita atravs a adio de cidos fortes,quando a protena est abaixo do seu pI, a carga lquida total da molcula positiva. Isso facilita a interao da molcula com os nions provenientes de cidos como o cido clordrico, o cido tricloroactico e o acido actico. O acido tricloroactico casou uma maior precipitao mesmo no sendo ao mais forte dos trs,justifica-se isso pela capacidade dele de interagir diretamente com o centro hidrofbico da gua, alterando sua conformao devido desestruturao de suas interaes intramoleculares e interaes gua-protena,causando uma precipitao bastante notvel.Existe relaao entre a molaridade do cido e o seu efeito sobre a ovoalbumina?Sim, quanto maior for a molaridade da soluo, maior a precipitao protica.

2. PRECIPITAO COM SAIS DE METAIS PESADOSOs ctions de metais pesados como Hg2+, Pb2+, Cu2+, Fe2+, Cd2+ e Zn2+ formam precipitados insolveis de protenas, denominados de acordo com o elemento formador (exemplo: proteinato de mercrio, proteinato de chumbo, etc.). Essa precipitao mais intensa quando o pH est acima do ponto isoeltrico (pI). Isso porque, acima do pI, a carga lquida sobre a protena negativa favorecendo a interao com os ctions provenientes do sal. A precipitao abaixo do ponto isoeltrico o que difere esta reao da anterior.Comparando com o mecanismo anterior: quando a protena est abaixo do seu pI, a carga lquida total da molcula positiva. Isso facilita a interao da molcula com os nions provenientes de cidos.TCNICA Tubo 1 1 ml de ovoalbumina + 2 gotas de NAOH Tubo 2 1 ml de ovoalbumina e 5 gotas de soluo de acetato de chumbo 10 %+2 gotas de NAOH Tubo 3 1 ml de gua e 5 gotas de soluo de acetato de chumbo 10 % (tubo controle) + 2 gotas de NAOHResultados e discusses prtica 2Aps misturar por leve agitao dos tubos, esperar 10 minutos ,seguem os resultados: TUBOPRECIPITADO

1-

2+++

3+

(-) Teste Negativo (Sem precipitado); (+) Pouca Quantidade de Precipitado; (+++) Grande Quantidade de Precipitado

A natureza do precipitado no tubo n 2 O precipitado presente no tubo de ensaio n 2 de natureza protica, visto que embora a base presente no incio do experimento no seja capaz de precipitar a protena, aquela ainda capaz atravs da propriedade de promover um maior disposio das cargas negativas da protena, deixando-as mais disponveis para o ataque de ons de metais pesados, por conseguinte a presena de um corpo de fundo constitudo de um proteinato de metal.

Qual a influncia do pH do meio (alcalino ou cido) neste processo de precipitao de protenas? Em pH muito cido, a protena apresenta seus grupos ionizveis protonados, se comportando como um ction. Em pH muito alcalino, a protena seus grupos ionizveis desprotonados, se comportando como um nion. Os ctions dos sais de metais pesados( acetato de chumbo,no caso) so capazes de se combinar com protenas que possuam resduos de aminocidos na forma de nions, formando complexos insolveis.

3. PRECIPITAO POR SATURAO SALINA E COM SOLVENTE ORGNICOA solubilidade das protenas em solventes orgnicos menor do que em gua. Isso acontece porque a capacidade de interao com as partculas de soluto diferente para cada solvente. A grandeza que mede a capacidade de interao do solvente com o soluto denominada constante dieltrica. A gua apresenta constante dieltrica bastante elevada (aproximadamente 80). A gua possui grande capacidade de separao das partculas do soluto (constante dieltrica elevada). Para os solventes orgnicos a situao um pouco diferente. Como esse tipo de solvente apresenta valor de constante dieltrica bem inferior a da gua, a interao protena-protena "vence" o poder de solvatao da gua (interao gua-protena). A protena precipita. A precipitao por solventes orgnicos depende muito da temperatura. Os solventes orgnicos, quando utilizados a temperaturas baixas, so bastante teis na separao de misturas de protenas. A temperaturas mais elevadas esses solventes podem levar desnaturao por rompimento das pontes de hidrognio e estabelecimento de interaes apolares, importantes na manuteno da conformao protica.Muitas protenas so hidrosolveis. Todas elas devem sua solubilidade a uma extensa camada de gua estruturada que interage com cargas eltricas e resduos polares na superfcie da molcula protica. A adio de sais (sulfato de amnio) ou solventes misturveis com gua (lcool, acetona) leva a solvatao das respectivas molculas ou ons, em competio com a protena, que se torna insolvel na retirada de sua camada superficial de gua estruturada. No entanto, boa parte desta precipitao reversvel pela adio de mais gua, ao contrrio das experincias anteriores. A importncia do experimento mostrar a flexvel solubilidade de compostos proticos com substncias apolares. Em casos de precipitado, procura-se verificar a reversibilidade da quantidade em adio de gua destilada.

TCNICATUBO 1 3 ml de sol. Saturada de sulfato de amnio+1ml de ovoalbuminaTUBO 2 3 ml de lcool +1ml de ovoalbuminaAps misturar bem e deixar em repouso antes de anotar os resultados. E ainda esperar 5 min, adicionar a cada tubo, 5 ml de gua destilada e misturar outra vez.Sequem os resultados: Resultados e discusses prtica 3

TUBO1 PRECIPITADO2 PRECIPITADO

Adicionado de (NH4)2SO4+-

Adicionado de C2H5OH++

.

A reversibilidade das precipitaes nos tubos 1 e 2? Nos dois tubos houve a precipitao,mas quando a gua foi adicionada ela foi capaz de recompor a protena que havia sido desidratada.No entanto,o tubo com lcool a reversibilidade do precipitado foi menor por que o lcool mais desidratante do que o sulfato de amnio e por isso haveria a necessidade de maior quantidade de gua para obter-se o mesmo efeito.A reversibilidade das precipitaes est,portanto, ligada hidratao da soluo, a qual reestabelece a camada de solvatao inica da protena, que tinha sido perdida pela competio com os solventes orgnicos e sais.

Como se d a relao das molculas de gua com o sal e com o solvente orgnico?Muitas protenas so hidrosolveis. Todas elas devem sua solubilidade a uma extensa camada de gua estruturada que interage com cargas eltricas e resduos polares na superfcie da molcula protica. A adio de sais (sulfato de amnio) ou solventes misturveis com gua (lcool, acetona) leva a solvatao das respectivas molculas ou ons, em competio com a protena, que se torna insolvel na retirada de sua camada superficial de gua estruturada. No entanto, boa parte desta precipitao reversvel pela adio de mais gua, ao contrrio das experincias anteriores.4. PRECIPITAO ISOELTRICAPonto isoeltrico o ponto onde a carga lquida total da molcula de aminocido ou protena nula,ou seja, existe equivalncia entre as cargas positivas e negativas da molcula. A solubilidade das protenas depende de vrios fatores. Dentre eles, destaca-se a presena das cargas eltricas ao longo da molcula. A existncia de uma carga positiva ou negativa determina a interao com o meio aquoso, alm de estabelecer um estado de repulso entre as prprias molculas de protena, aumentando a interao com o solvente e, conseqentemente, favorecendo a solubilidade .No ponto isoeltrico existe um equilbrio entre o nmero de cargas positivas e negativas, o que gera uma situao em que as foras de repulso entre as molculas de protena e as foras de interao com o solvente so mnimas. Assim, as protenas vo formando aglomerados que, cada vez maiores, tendem a precipitar. importante destacar que essa diminuio de solubilidade varia de protena para protena.PRATICAtubo 1 2 ml soluo tampo pH 6,0+1 ml de ovoalbumina e 4 ml de lcooltubo 2 2 ml soluo tampo pH 4,7+1 ml de ovoalbumina e 4 ml de lcooltubo 3 2 ml soluo tampo pH 3,0+1 ml de ovoalbumina e 4 ml de lcoolResultados e discusses prtica 4Aps misturar bem por agitao eficiente e observou-se os seguintes resultados:TUBOREAO

1-

2+++

3+

Qual o ponto isoeltrico (aproximao) da ovoalbumina? Quais aminocidos ionizveis so mais abundantes nesta protena? Faa uma curva de ionizao (aproximada) para a lisina: No tubo 2 foi verificado uma maior precipitao do composto, estando em um pH de 4,7, logo o pI da albumina 4,7.Os aminocidos mais presentes na protena deve ser os mais cidos como lisina,arginina,histidina, metionina e cistina. .

Concluso geral

Ao longo do relatrio foram feitas observaes que garantiram a anlise dos questionamentos feitos em relao a precipitao de protenas.Os resultados,portanto,confirmam as reaes de precipitao. possvel observar que a precipitao de protenas (devido a cidos fortes, solues concentradas de sais, solventes orgnicos ou por sais de metais pesados) acontece juntamente com sua desnaturao, que pode ser reversvel ou no.A anlise do pH envolvido na precipitao,a fora cida e o ponto isoeltrico foram parmetros importantes nesta anlise.Conclui-se, desta forma, que a adio de soluo com pH igual ou aproximadamente igual ao pI da protena acarretar em precipitao mxima, devido ausncia de carga lquida. J a adio de sais, tal qual o sulfato de amnio, e de solventes orgnicos, como o lcool, provocam alteraes na solubilidade de protenas..Na anlise com metais pesados foi possvel a separao de protenas da soluo por precipitao comprovando a reao das protenas com os ctions destes metais e as conseqncias que esta interao promove na estrutura e solubilidade da protena Infere-se que a precipitao de protenas com o uso de cidos ocorre devido influncia dos ons H+ e de sua conseqente alterao de pH. A dissociao dos cidos e posterior liberao de ons promove alteraes nas interaes intra e intermoleculares de solues proticas, alterando a conformao da protena.

PRTICA DE LIPDEOS

Introduo geralOs lpideos so um grupo de molculas caracterizadas por serem insolveis na gua e solveis em solventes orgnicos ( como clorofrmio e metanol). Assim so facilmente separveis dos outros materiais biolgicos por extrao em tais solventes. Esta propriedade geral dos lipdios e compostos relacionados se deve ao predomnio de longas cadeias hidrocarbonadas alifticas ou de anis benznicos, que so estruturas no polares ou hidrofbicas. Em alguns lipdios, tais cadeias podem estar ligadas a um grupo polar, o que permite que se liguem tambm gua.Devido a sua insolubilidade em solues aquosas, os lipdios corporais geralmente so encontrados compartimentalizados, como no caso de lipdios associados membrana e gotculas de triacilglicerol nos adipcitos, ou transportados pelo plasma em associao a protenas, em forma de partculas lipoproticas.Alm disso, os lipdios realizam muitas funes no corpo; por exemplo, algumas vitaminas lipossolveis possuem funes reguladoras ou de coenzimas, e as prostaglandinas e hormnios esterides desempenham papis importantes no controle da homeostase do corpo. Os lipdios mais comuns nas clulas so os triacilgliceris, os fosfolipdios, os glicolipdios, os esterides e o dolicol. Os lipdeos definem um conjunto de substncias qumicas que, ao contrrio das outras classes de compostos orgnicos, no so caracterizadas por algum grupo funcional comum, e sim pela sua alta solubilidade em solventes orgnicos e baixa solubilidade em gua .A maioria dos lipdeos derivada ou possui na sua estrutura cidos graxo. Ao contrrio das demais biomolculas, os lipdeos no so polmeros, isto , no so repeties de uma unidade bsica. Embora possam apresentar uma estrutura qumica relativamente simples, as funes dos lipdeos so complexas e diversas, atuando em muitas etapas cruciais do metabolismo e na definio das estruturas celulares.O objetivo dessa prtica analisar as reaes seqenciadas para a formao de sabo a partir dos lipdeos,analisar a formao e solubilidade de cidos graxos livres e a reao do colesterol com reativo de LIEBERMAN-BURCHARD. Lembrando que essas reaes seguiram a ordem proposta pelo manual,pois o resultado de uma reao interfere no resultado da experincia seguinte,j que houve um reutilizao do material em anlise.

Experimental1. SAPONIFICAOO Objetivo deste experimento a sntese de um sabo a partir da reao de hidrlise de um ster. Esta reao de hidrlise chamada de Reao de Saponificao, uma vez que a hidrlise de um tipo especial de ester, que so as gorduras, produz sabes. No nosso caso ser utilizada gordura animal. A reao de hidrlise de esteres pode ser representada genericamente como:

A reao iniciou-se colocando num tubo de ensaio grande (25 x 200 mm) cerca de 0,5 g de gordura animal e adicionar 10 ml de soluo alcolica de KOH 0.5 N colocando o tubo de ensaio em um tubo condensador cheio de gua de torneira em banho-maria fervente e deixou l por 5 minutos. Retirar o tubo do banho e aps remover o tubo condensador, desprezou-se qualquer sobra eventual de material slido apenas com o lquido contido no tubo grande foi continuada a experiencia.adicionou-se 10 ml de gua destilada mistura de saponificao.

RESULTADOS E DISCUSSESO que se observou na reao em questo foi a formao de sabo a partir de gordura animal. As misturas de sais de cidos graxos, formados a partir a reao de uma base forte com glicerdeos em uma uma hidrlise bsica, em que um ster, em soluo bsica ,ira formar um sal e um lcool no caso o glicerol.O processo em questo foi acelerado pela soluo alcolica, devido a solubilidade dos lipdeos em solventes orgnicos como o lcool e pequena solubilidade em gua. A formao do sabo(sal de cido graxo) tornou-se visvel aps a formao de espuma de cor branca formando um anel na superfcie do lquido.

2. PREPARAO DE CIDOS GRAXOS LIVRES mistura de saponificao foi adicionada 1ml de HCL concentrado e o tubo foi novamente ao banho-maria at observar-se a formao de uma camada espessa branca na superfcie,aps o tubo esfriar em um recipiente de gua gelada.RESULTADOS E DISCUSSESHouve, portanto,a solidificao de um anel na superfcie,pois o cidos graxos de gordura animal so em maioria saturados e com cadeia apolar carbonada que impede a solubilizao em gua.O sal de cido graxo obtido na experincia 1, solvel em gua, foi convertido em cido graxo quando o meio foi acidificado. A reao com um haleto de hidrognio, no caso o HCl, trata-se de uma reao de dupla troca, em que o hidrognio tomar o lugar do K+ no sal e o K+ se ligar ao Cl-. Dessa forma, haver a formao de um sal inorgnico e a restaurao de cidos graxos livres. O alto ponto de fuso dos cidos graxos foi evidenciado pela sua solidificao em gua gelada.

3. SOLUBILIDADE DOS CIDOS GRAXOS LIVRESAps a retirada de uma pequena quantidade dos cidos graxos isolados e colocar num tubo de ensaio limpo e seco e adio de 2 ml ter observou-se que os cidos graxos so solveis em solventes orgnicos como o ter.

RESULTADOS E DISCUSSESA interao hidrofbica que ocorreu entre os cidos graxos e o ter adicionado garantiu a solubilizao dos cidos,pois na qumica semelhante dissolve semelhante e a apolaridade do cido graxo apresenta afinidade pelo solvente orgnico(apolar,por conseguinte) em questao.

4. FORMAO DE SABES SOLVEIS POR REDISSOLUO DOS CIDOS GRAXOS LIVRESAdicionar ao tubo da experincia 2, que contm a maior parte dos cidos graxos isolados, 10 ml de gua destilada e 5 ml de soluo alcolica de KOH 0,5 N Levar ao banho-maria por 3 minutos. Agitar. Observou-se a formao de espumas brancas como no incio. Conservou-se o contedo do tubo para a experincia seguinte.RESULTADOS E DISCUSSESA insolubilidade dos cidos graxos livres reversvel. Aps acrscimo de base forte, houve a formao de sais de cidos graxos, regenerando a solubilidade destes. A formao de sabo solvel a partir dos cidos graxos permitiu que fosse observado o aparecimento de espuma como no incio do experimento.5. FORMAO DE SABES INSOLVEISTUBO 1-2ml de sabes solveis da experincia anterior+ 10 gotas de cloreto de clcio 5%TUBO 2-2ml de sabes solveis da experincia anterior+ 10 gotas de acetato de chumboResultados e discussesObservou-se, em ambos os tubos, a formao de precipitados brancos. Os ons carbonato da parte polar do sabo ao se encontrarem com os ons clcio e chumbo formam compostos insolveis. No tubo 2,entretanto, houve a formao de mais precipitado (sabes insolveis de clcio e chumbo, alm dos respectivos hidrxidos), tendo em vista que o chumbo mais insolvel que o on clcio em soluo devido a formao dos respectivos hidroxidos. 6. REAO DO COLESTEROL COM O REATIVO DE LIEBERMAN-BURCHARDTubo- 1ml de uma soluo diluda de colesterol + 10 gotas de anidrido actico + 3 gotas de cido sulfrico concentrado. A reao se processa quando o cido sulfrico concentrado adicionado uma soluo de colesterol em anidrido actico. As cores produzidas variam do vermelho ao violeta e ao azul esverdeado como no caso dessa prtica.

RESULTADOS E DISCUSSESO objetivo reao de Liebermann-Burchard foi atingido ao identificar a presena de esterides que possuem dupla ligao entre os carbonos 5 e 6, como o colesterol, na amostra analisada. A reao se processou atravs de um mecanismo oxidativo capaz de identificar os esterides que possuem dupla ligao entre os carbonos 5 e 6 (anis A e B), como o colesterol. A cor esverdeada devida a formao de um derivado sulfnico de colesterialeno.CONCLUSESAtravs da realizao destas prticas laboratoriais envolvendo lipdeos, pode-se perceber a grande capacidade de manuseio das propriedades deles. Alterando-se o meio reacional qumica e fisicamente, manipulam-se as caractersticas intrnsecas dos lipdeos, atravs de reaes mais simples, como a saponificao, at reaes mais complexas e especficas, como a reao de Liebermann-Burchard. Os mtodos utilizados so os mais diversos, assim como so inmeros os possveis reagentes, que tornam os examinadores capazes de perceber atributos como solubilidade e densidade dos lipdeos. PRTICA DE CARBOIDRATOSIntroduo geralOs carboidratos (tambm chamados sacardeos, glicdios, oses, hidratos de carbono ou acares), so definidos, quimicamente, como poli-hidrxi-cetonas (cetoses) ou poli-hidrxi-aldedos (aldoses), ou seja, compostos orgnicos com, pelo menos trs carbonos onde todos os carbonos possuem uma hidroxila, com exceo de um, que possui a carbonila primria (grupamento aldedico) ou a carbonila secundria (grupamento cetnico)..Os monossacardeos,analisados neste prtica, tambm chamados de acares simples, consistem numa s unidade. O mais abundante o acar de seis carbonos D-glucose; o monossacardeo fundamental de onde muitos so derivados. A D-glucose o monmero primrio bsico dos polissacardeos mais abundantes, tais como o amido e a celulose. So carboidratos ditos glicosdeos, pois so formados a partir da ligao de 2 monossacardeos atravs de ligaes especiais denominadas "Ligaes glicosdicas". A ligao glicosdica ocorre entre o carbono anomrico de um monossacardeo e qualquer outro carbono do monossacardeo seguinte, atravs de suas hidroxilas e com a sada de uma molcula de gua.Nessa prtica objetivo analisar as reaes de identificao de pentoses e hexoses assim como aldoses e cetoses. Nesse momento, analisaremos algumas tcnicas realizadas na prtica que abordaro o reconhecimento dos carboidratos atravs da pesquisa das funes orgnicas presentes em suas molculas e das caractersticas por elas proporcionadas. Pode-se distinguir carboidratos de outros tipos de compostos verificando a sua reatividade qumica. Os cidos fortes podem causar a desidratao dos monossacridos, oligossacridos e polissacridos devido hidrlise cida das ligaes glicosdicas. As pentoses so convertidas em furfural pela ao do H2SO4 concentrado e hexoses, em hidroximetilfurfural. Estes aldedos cclicos podem sofrer reaes de condensao com fenis e aminas aromticas, o que origina produtos corados. A velocidade com que perde gua ou com que a cor do produto formado vai aparecendo depende da natureza do acar, e, dessa forma, torna-se possvel lanar mo destes tipos de reaes para a realizao de testes qualitativos para distino de carboidratos. (testes de Molisch, de Seliwanoff, de Bial por exemplo). Alm desses testes, ainda tem-se a oxidao por determinados reagentes, o que os classifica como redutores ou no, ao se analisar a velocidade da reao.Experimental1. TESTE DE MOLISCHReao geral para carboidratos. Reagem pentoses e hexoses no apenas como monossacardeos livres, mas tambm so positivos no teste todos os compostos que levam carboidratos ligados. Os cidos concentrados causam a desidratao de monossacardeos. As pentoses do como produto final o furfural, e as hexoses o hidroximetilfurfural. Estes derivados se condensam com o alfa-naftol,originando produtos coloridos. Se um oligossacardeo ou polissacardeo estiver presente, ele primeiro hidrolisado em seus monossacardeos constituintes, que so ento desidratados. Essa reao considerada geral para os carboidratos, e no especfica pois se processa com outras substncias.A reao negativa indica a ausncia de carboidratos.Tubo 1 2 ml de sol. glicose 1% + 5 gotas de sol. de alfa naftol +2 ml de cido sulfricoTubo 2 2 ml de sol. amido 1%+ 5 gotas de sol. de alfa naftol+2 ml de cido sulfricoTubo 3 2 ml de gua destilada (tubo controle) + 5 gotas de sol. de alfa naftol+2 ml de cido sulfrico

Resultados e discusses teste de MolischAps a adio do acido o tubo foi colocado na instante sem agitao e os resultados foram apresentados da seguinte forma:TUBOSCOLORAO VIOLETA

1 (GLICOSE)+

2 (AMIDO)+++

3 (GUA DESTILADA)---

O resultado para presena de carboidratos positivo nos tubos contendo glicose,uma vez que h formao de uma colorao violeta.A cor violeta mais pronunciada no tubo 2 em decorrncia da presena um polissacardeo formado por unidades sucessivas de glicose garantindo uma maior concentrao e consequentemente uma maior resposta a deteco de carboidrato na soluo.J no tubo 3,j era previsto a formao de uma colorao amarela/esverdeada devido apenas a impurezas do naftol j que no h carboidratos na soluo.2. TESTE DE BIALReao para identificao de pentoses(reativo HCl com orcinol e FeCl3). tubo 1- 1 ml de soluo de pentose (arabinose) +1 ml do reativo de Bial tubo 2 - 1 ml de soluo de glicose+1 ml do reativo de Bial tubo 3 - 1 ml de gua destilada (tubo controle)+ 1 ml do reativo de Bial Resultados e discusses teste de BialSendo o teste para identificao de pentoses,apenas o tubo 1 deu positivo (tornou-se esverdeado), j que, o nico tubo que contem pentose - a arabinose. O tubo 2, apresentava uma hexose a glicose-que no identificada pelo teste e o tubo 3 no possua carboidrato, apenas gua destilada resultando,portanto,em teste negativo.Nos tubos 1 e2 poderiam ter o mesmo resultado se o tempo de reao fosse maior,pois tanto o frufural resultante da pentose e o OHmetilfurfural resultante da hexose sao corados na presena de orcinol,no entanto a formao do furfural notavelmente mais rpida do que a formao do 0Hmetilfurfural sendo, portanto, corado primeiro da a reao do teste de Bial ser dito para identificar pentoses e no hexoses devido a rapidez da reao.3. TESTE DE SELIWANOFF Este teste permite diferenciar aldoses de cetoses, que sob ao desidratante de cidos concentrados so transformados em derivados do furfural, que por sua vez se condensam com o resorcinol formando um composto vermelho de composio incerta. A reao com cetoses mais rpida do que com as aldoses permitindo diferenci-los. Este teste especfico para a frutose.TCNICA:tubo 1 -1 ml de soluo de frutose + 3 ml do reativo de Seliwanoff (HCl com resorcinol). tubo 2 - 1 ml de soluo de glicose + 3 ml do reativo de Seliwanoff tubo 3 - 1 ml de soluo de sacarose + 3 ml do reativo de Seliwanoff). tubo 4 - 1 ml de gua destilada (tubo controle) + 3 ml do reativo de Seliwanoff Resultados e discusses teste de Seliwanoff1 min2 min4 min6 min

FrutoseGlicoseSacarosguaIncolorIncolorIncolorincolorRosaIncolorRoxoIncolorRosa(++)IncolorRosa(+)incolorRosa(+++) Incolor rosa(+) incolor

Qual o melhor tempo para diferenciar a frutose da glicose? Quais as funes qumicas dos monossacardeos do experimento? Por que a sacarose reage?O melhor tempo para se diferenciar a frutose (cetose) da glicose (aldose) est entre 4 e 6 minuto momento no qual a colorao se torna mais evidente. J que a cetose reage mais rapidamente (monossacardeo reage com o cido (HCl) e forma derivado de furfural, que, oxidado pelo resorcinol), comprova-se que a frutose a cetose. Como se pode notar, a sacarose reage (no tubo 3) quase que simultaneamente com a frutose (no tubo 1), pois ela um dissacardeo formado pela glicose (que no reage) e frutose (que reage). Certamente, foi possvel, por meio da experincia, verificar a diferena de reatividade (velocidade de reao) que h entre aldohexoses e cetohexoses, cujo valor ( aparecimento da colorao rosea) serve para distino de concentraes dos compostos.A sacarose reage pois tem frutose em sua constituio.4. TESTE DE BENEDICTReao para identificar carboidratos redutores.Os carboidratos redutores possuem grupos aldedos ou cetonas livres ou potencialmente livres sofrendo oxidao em soluo alcalina de ons metlicos como o cobre. Os ons cpricos (Cu++) so reduzidos pela carbonila dos carboidratos a ons cuprosos(Cu+) formando o xido cuproso, que tem cor vermelho tijolo. A glicose oxidada a cido glicurnico, reduzindo ons cpricos a ons cuprosos. A sacarose no sofre oxidao porque possui dois carbonos anomricos envolvidos na ligao glicosdica. TCNICA tubo 1 - 1 ml de soluo de glicose+3 ml do reativo de Benedict. tubo 2 - 1 ml de soluo de frutose+3 ml do reativo de Benedict. tubo 3 - 1 ml de soluo de sacarose+3 ml do reativo de Benedict. tubo 4 -1 ml de gua destilada (tubo controle) +3 ml do reativo de Benedict.Colocar todos os tubos no banho-maria fervente por 3 min. Retirar os tubos e anotar os resultados em forma de tabela. O que concluiu?Resultados e discusses teste de BenedictTUBOSREAOCONCLUSO

1 Glicose + ++ Redutor/vermelho

2 Frutose ++Redutor/vermelho

3 Sacarose No reageNo redutor/azul

4 gua destilada No reageNo redutor/azul

possvel observar que o carboidrato redutor tem que ser monossacardeo,no caso a glicose e a frutose,porque o grupo cetona ou aldedo tem que estar livre,no caso a glicose mais redutora pois a extremidade aldedo dela garante essa capacidade.No caso da sacarose,um dissacardeo,tem suas extremidades redutoras presas em ligaes glicosdicas entre os monossacardeos constituinte o que reduz a sua fora redutora. Concluso geralOs resultados para a presena de carboidratos foram identificados por vrios testes que fizeram uso de suas propriedades qumicas .Foram usados testes desde um carter mais geral como o teste de Molisch que apenas identifica se h ou no carboidratos em soluo por isso o resultado positivo para a glicose e o amido como de carter mais especfico representado pelos demais testes.No teste de Bial,por exemplo,a anlise passou a ser mais especfica e a penas pentoses foram identificadas devido a formao de furfural que corado mais rapidamente pelo reativo do que o hidroxifurfural resultante desse reativo com hexoses.No teste de Seliwanoff a reao a distino de cetoses e aldoses feita. A reao com cetoses mais rpida do que com as aldoses permitindo diferenci-los o que foi confirmado na reao quando os tubos com frutose e sacarose foram corados devido presena da cetose .No teste de Benedict cuja proposta na introduo foi identificar carboidratos redutores,foi confirmada na prtica pois a glicose e frutose foram identificadas por apresentarem seus grupos cetonas ou aldedos livres confirmando o potencial redutor deles.

Referncias Bibliogrficas:

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