progoral

INSTITUTO SUPERIOR CIÊNCIAS DA SAÚDE-SUL

Curso Medicina Dentária

Ano lectivo 02/03

MICROBIOLOGIA ORAL

PROGRAMA PRÁTICO E TEÓRICO-PRÁTICO

Regente:Dr.Samuel LlobetAssistente:Dra.Teresa Nascimento

1ªSEMANA

Ecologia microbiana oral:- Mecanismos de colonização oral- Interacção bactéria-hospedeiro- Interacção bactéria-bactéria

Composição; tipos de microorganismos

2ªSEMANA

Métodos de estudo microbiológicos e imunológicos da flora oral normal e da flora associada a patologia oral.

Colheitas:- Importância no diagnóstico clínico- Conceitos acerca da qualidade dos produtos a submeter a exame

microbiológico- Métodos de colheita de amostras para estudo bacteriano e fungico:

- saliva- placa dentária- punção de abcessos

- Acondicionamento e transporte de amostras:- aeróbios- anaeróbios

3ªSEMANA

Aula PráticaExecução de colheitas dos diferentes ecossistemas orais:

- Saliva (Método indirecto de colheita)- Placa bacteriana (supra e subgengival)- Dorso da lingua

Exame microscópico directo- Coloração de GramDeterminação dos morfotipos bacterianosExame cultural- Meio Mitis Salivarius Agar (com e sem bacitracina)

4ªSEMANA

Aula Prática:Leitura macroscópica e microscópica do exame cultural executado na aula anteriorIdentificação dos Estreptococos orais com Galeria API 20Strep.Realização de provas de aglutinação para identificação de Estreptococos

5ªSEMANA

Aula Teórico-prática:Identificação e caracterização dos Estreptococos implicados em patologia oral.

6ªSEMANA

Antibióticos e antifungicos- Mecanismos de acção- Mecanismos de resistência- Importância clínica

7ªSEMANA

Avaliação.

8ªSEMANA

Bacilos anaeróbios Gram negativosBacilos anaeróbios Gram positivosCocos anaeróbios Gram negativosCocos anaeróbios Gram positivos

Importância na patologia infecciosa oral:- Cárie- Doença periondontal- Doença endodontal

Diagnóstico laboratorial:-meios de cultura-incubação-galerias de identificação

9ªSEMANA

Aula prática:

Diagnóstico microbiológico de amostras a partir do sulco gengival e bolsa periodontal:- Colheita- Transporte- Processamento das amostras- Inoculação em meios de cultura- Atmosfera de anaerobiose

10ªSEMANA

Aula prática:

Diagnóstico microbiológico de amostras do sulco gengival e bolsa periodontal: (CONT.)- Leitura e interpretação das placas- Exame macroscópico e microscópico das colónias- Identificação presuntiva:

- Testes bioquímicos convencionais- Galeria API 20A

11ªSEMANA

Aula prática:

Diagnóstico microbiológico de amostras do sulco gengival e bolsa periodontal: (CONT.)- Leitura dos testes de identificação - Execução de antibiogramas por sistema API, com galerias ATB ANA

12ªSEMANA

Aula teórico-prática:Cárie dentária

-Espécies implicadas-Diagnóstico laboratorial

Aula prática:Leitura e interpretação dos antibiogramas realizados na semana anterior

Testes para avaliar o risco bacteriológico à cárie:

- Determinação da capacidade tampão da saliva- Contagem de S.mutans e Lactobacilos através do diagnóstico microbiológico tradicional e pelo sistema Dentocult SM e LB

13ªSEMANA

Aula teórico-prática:Doença periondontal e endodontal


Aula prática:Comparações e conclusões sobre as duas metodologias utilizadas para avaliar o risco bacteriológico de cárie.

14ªSEMANA

Avaliação.

1ªSEMANA 18 e 19 Março

Ecologia microbiana oral:- Mecanismos de colonização oral- Interacção bactéria-hospedeiro

- Interacção bactéria-bactériaComposição;tipos de microorganismos

2ªSEMANA 25 e 26 Março

Métodos de estudo microbiológicos e imunológicos da flora oral normal e da flora associada a patologia oral.Colheitas:

- Importância no diagnóstico clínico- Conceitos acerca da qualidade dos produtos a submeter a exame

microbiológico- Métodos de colheita de amostras para estudo bacteriano e fungico:

- saliva- placa dentária- punção de abcessos

- Acondicionamento e transporte de amostras:- aeróbios- anaeróbios

3ªSEMANA 1 e 2 Abril

Aula Prática

Execução de colheitas dos diferentes ecossistemas orais:- Saliva (Método indirecto de colheita)- Placa bacteriana (supra e subgengival)- Dorso da lingua

Exame microscópico directo- Coloração de GramExame cultural- Meio Mitis Salivarius Agar

Material necessário:- Lâminas/lamelas- Reagentes de coloração de Gram- Zaragatoas (200)- Meio Mitis Salivarius Agar (50 placas)- Meio Mitis Salivarius Bacitracina Agar (adicionar 0.2U/ml + 15 g de sacarose em 100 de MSA) (50 placas)- Tubos de ensaio com 0.5ml de SF (25x)- Tubos de ensaio com 1.0ml de BHI (50x)

- Meio BHI + agar (25x)- Meio TSA + 5% de sangue de carneiro- Meio Columbia agar + 10% de sangue de cavalo


Aula Teórico-prática:Identificação e caracterização dos Estafilococos e Estreptococos implicados em patologia oral.

Aula Prática:Leitura macroscópica e microscópica do exame cultural executado na aula anteriorIdentificação dos Estreptococos orais com Galeria API 20 Strep.Realização de provas de aglutinação para identificação de Estreptococos

Material necessário:- 50 Galerias API 20 Strep- Tubos com 2ml/cd de SF (50x)- Micropipetas de 100 e 1000 µl- Pontas amarelas e azuis estereis- 1 Slidex Strepto-Kit (teste latex) - Lâminas q.b.- 2 frascos com A.D.E:- Reagentes da Coloração de Gram- 1 Kit para tipagem dos Estreptococos- Densitómetro (escala de Mc-Farland)- H2O2 (10 vol.)- Pipetas Pasteur de plástico (20x)- Agitador mecânico


Antibióticos e antifungicos- Mecanismos de acção- Mecanismos de resistência- Importância clínica

6ªSEMANA 6 e 7 Maio

Avaliação.


Bacilos anaeróbios Gram negativosBacilos anaeróbios Gram positivosCocos anaeróbios Gram negativosCocos anaeróbios Gram positivos



8ªSEMANA 20 e 21 de Maio

Aula prática:

Diagnóstico microbiológico de amostras a partir do sulco gengival e bolsa periodontal:- Colheita- Transporte- Processamento das amostras- Inoculação em meios de cultura- Atmosfera de anaerobiose

Material necessário: (Grupos de 4 alunos) (25 grupos)

- Vortex- Placa rotativa de aquecimento (35-37ºC)- 125 tubos com 900µl /cd de Meio API 20A- Micropipetas de 100 e 1000µl- 6 espalhadores de vidro- 100 placas de gelose CDC (5% sangue desfribinado de carneiro)- 100 placas de gelose BHI (+ hemina + vitamina K) - 50 placas de meio TSBV (tripticase-soja-bacitracina-vancomicina)- Jarras de anaerobiose q.b. (150 placas)- Geradores de anaerobiose – GENbox anaer / GENbox CO2- Reagentes para a coloração de Gram- Lâminas q.b.- Cultura pura de Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia,

Bacteroides forsythus

9ªSEMANA 27 e 28 Maio

Aula prática:

Diagnóstico microbiológico de amostras do sulco gengival e bolsa periodontal: (CONT.)- Leitura e interpretação das placas

- Exame macroscópico e microscópico das colónias- Identificação presuntiva:

- Testes bioquímicos convencionais- Galeria API 20A

Material necessário: (grupos de 4 alunos)

- Lupas q.b.- Discos de oxidase- Pipetas Pasteur de vidro- H2O2 a 10 vol.- Lâmpada de UV- Lâminas e lamelas- 25 sistemas API 20 A- 25 ampolas com meio API 20A- Micropipetas de 100 e 1000µl- 25 sistemas ID 32 A- Suspension Medium (pode ser A.D.E.) (2ml x 25 tubos)- Óleo de parafina q.b.- Densitómetro (escala de Mc-Farland)- Geradores de CO2 + jarras- PerioScan Cards (BANA test)- Lab. Oral B

10ªSEMANA 3 e 4 Junho

Aula prática:

Diagnóstico microbiológico de amostras do sulco gengival e bolsa periodontal: (CONT.)- Leitura dos testes de identificação - Execução de antibiogramas por sistema API, com galerias ATB ANA

Material necessário:

- 20 galerias ATB ANA- Densitómetro- Micropipetas de 100 e 1000µl- Reagentes de revelação para as galerias API 20 A - Livros de sequenciação numérica para identificação


Aula teórico-prática:Cárie dentária


Aula prática:Leitura e interpretação dos antibiogramas realizados na semana anterior

12ªSEMANA 11 de Junho

Aula prática:

Testes para avaliar o risco bacteriológico à cárie:

- Determinação da capacidade tampão da saliva- Contagem de S.mutans e Lactobacilos através do diagnóstico microbiológico tradicional e pelo sistema Dentocult SM e LB


- 25 comprimidos de parafina (pastilhas s/ açucar)- Recipientes para recolha de saliva- 25 tubos com 1ml cd/ de solução 0.005N HCl- Papel indicador de pH- 2 sistemas Dentocult SM (Strip Mutans)- 1 sistema Dentocult LB- 25 ansas calibradas de 10µl- 6 espalhadores de vidro- 25 placas de gelose Mitis-Salivarius-Bacitracina - 25 placas de gelose BHI- 50 placas de gelose Mitis-Salivarius- 75 tubos de SF com 900µl cd/- Vortex- Micropipetas de 100µl- Pontas amarelas estereis

13ªSEMANA

Aula teórico-prática:Doença periondontal e endodontal


Aula prática:

Comparações e conclusões sobre as duas metodologias utilizadas para avaliar o risco bacteriológico de cárie.


Avaliação.

INSTITUTO SUPERIOR CIÊNCIAS DA SAÚDE SUL

CURSO DE MEDICINA DENTÁRIA Microbiologia Oral

2ºAno/2ºSemestreAno lectivo 02/03


Material necessário para as aulas práticas de Microbiologia Oral:

Previsão para 100 alunos:

- Lâminas/lamelas- Cristal Violeta (8 frascos)- Lugol (8 frascos)- Alcool-acetona (8 frascos)- Fucsina diluida (8 frascos)- Zaragatoas (200)- Meio de transporte: 30 frascos de Meio VMGA III (anaerobic)- 200 placas de Meio Mitis-Salivarius-Agar- 200 placasde Meio Mitis-Salivarius-Bacitracina-Agar- Bacitracina (5g) Ref: 106992 (Merck)- Sacarose- Cultura pura de Estreptocos B-hemolíticos em columbia agar.- 1 Slidex Strepto Kit (teste latex) Ref: 58810 bioMérieux- 3 caixas de Galerias API 20 Strep Ref: 200600 bioMérieux- 40 tubos de ensaio com 0.5ml de SF- 40 tubos de ensaio com 1ml de BHI- 50 tubos de hemólise com 2ml de SF- 6 micropipetas de 100 e 1000µl- Pontas amarelas e azuis estéreis- 2 caixas de Dentocult SM- 1 caixa de Dentocult LB- 25 recipientes graduados para recolha de saliva- 25 tubos com 1ml/cd de solução 0.005 N de HCl- Papel indicador de pH- 25 Comprimidos de parafina- 6 espalhadores de vidro- 50 ansas calibradas de 10µl- 3 Vortex- Placa rotativa de aquecimento (35-37ºC)- 1 caixa de Meio API 20 A (25 x 6 ml) Ref: 20320 bioMérieux - 3 caixas de galerias API 20 A Ref: 20300 bioMérieux- 1 ampola Ehrlich Ref: 70520 bioMérieux- XYL (xileno) Ref: 70530 bioMérieux- BCP (púrpura de bromocresol) Ref: 70510 bioMérieux- 2 caixas de GENbox anaer (10 geradores) Ref: 96124 bioMérieux- 2 caixas de GENbox CO2 (10 geradores) Ref: 96126 bioMérieux- 1 caixa de Suspension Medium Ref: 70700 bioMérieux - 1 caixas de ATB ANA (10gal + 10 amp.) Ref:14269 bioMérieux

- 20 tubos de caldo de carne- 200 placas de BHI + agar + hemina + vitamina K- sangue de cavalo- columbia agar- BHI- Anaerobic Blood Agar Base acc. to CDC (500g) Ref: 116331.0500

(Merck)- Vitamina K1 (1g) Ref: 5.01890.0001 (Merck)- Etanol (1l) Ref: 1.00983.1000 (Merck)- Solução de hemina- Sangue desfibrinado de carneiro (50 ml)- TSBV (tripticase-soja-bacitracina-vancomicina)- Lâmpada de UV- H2O2 a 10 volumes- Discos de oxidase- Lupas q.b.- Óleo de parafina (6 frascos)- Densitómetro (escala de Mc Farland)- Reagentes de revelação para as galerias API 20 A - Livros de sequenciação numérica para identificação do API 20A - PerioScan Card (BANA test) Oral-B- Estirpes ATCC:- Porphyromonas gingivalis ATCC 33277- Prevotella intermedia ATCC 25611- Bacteroides forsythus ATCC 29522- Streptococcus mutans- Streptococcus sanguis- Streptococcus sobrinus- Streptococcus anginosus- Lactobacillus salivarius- Lactobacillus acidophilus

Antibióticos e antifúngicos- Mecanismos de acção- Mecanismos de resistência- Importância clínica


-Antibiogramas para Gram-/+ e Pseudomonas (2 placas de cada)

5ªSEMANA

Identificação e caracterização dos Estafilococos e Estreptococos implicados em patologia oral.


- Cultura pura de Estreptocos B-hemolíticos e Estafilococos em gelose sangue.- Serologia para identificação de Estreptococos (aglutinação)- Discos de Bacitracina - 12 placas de Mueller-Hinton (adicionado de 5% de sangue)- Galeria API para Estreptococos (S.salivarius;S.mutans;S.pyogenes)

6ªSEMANA

Avaliação.

7ªSEMANA

Anaeróbios: -Gram negativos e Gram positivos



8ªSEMANA

Manifestações orais de infecções sistémicas ao nível da mucosa e submucosa oral.- Etiologia bacteriana

Estudo da familia Treponemataceae e associação a patologia oral.Estudo do género Mycobacterium sp. e associação a patologia oral.Mycobacterium tuberculosisMycobacterium leprae

Coloração de Zhiel-Neelson.

9ªSEMANA

Manifestações orais de infecções sistémicas ao nível da mucosa e submucosa oral.- Etiologia viral,micológica e parasitológica.

Fungos , parasitas e virus na cavidade oral- Espécies mais importantes- Papel na patologia infecciosa oral- Diagnóstico laboratorial


- Candida albicans em cultura pura- Soro humano- prova da blastese- Trichomonas tenax em BHI

10ªSEMANA

Cárie dentária-Espécies implicadas-Diagnóstico laboratorial

11ªSEMANA

Aula prática:

-Determinação da capacidade tampão da saliva-Contagem de S.mutans e lactobacilos


-Dentocult SM (Strip Mutans)-Dentocult LB -Solução 0.005 N de HCL/papel indicador de pH-Comprimidos de parafina

12ªSEMANA

Doença periondontal e endodontal-Espécies implicadas-Diagnóstico laboratorial

13ªSEMANA

Avaliação.

INSTITUTO SUPERIOR CIÊNCIAS DA SAÚDE CURSO DE MEDICINA DENTÁRIA

MICROBIOLOGIA GERAL (2ºAno-1ºSemestre)

Programa Prático e Teórico-Prático

REGENTE:Prof.Doutor Nuno Taveira

ASSISTENTES:Dra.Ausenda Oliveira Dra.Teresa Nascimento

1ªSEMANA

1ªAULA (Teórico-prática)

-Apresentação-Noções de comportamento laboratorial

a.Assépsiab.Precauções na manipulação de produtos contaminados


-Estudo da célula bacteriana por microscopia ópticaa.Exame a fresco

-estudo da mobilidade-estudo da morfologia

b.Exame após coloração

b.1-Tipos de corantes e coloração usados em microbiologiab.2-Colorações simples pelo azul de metilenob.3-Coloração diferencial de Gram

b.4-Colorações especiaisb.4.1.-Coloração de cápsulab.4.2.-Coloração de esporosb.4.3.-Coloração de flagelosb.4.4.-Coloração de micobactérias pela técnica de Ziehl-Neelson

3ªAULA

-Exame fresco entre lâmina-lamela-Coloração de Azul de metileno-Coloração de Gram

MATERIAL

-3 caixas de lâminas-3 caixas de lamelas-30 ansas de Henle-30 pinças-15 microscópios ópticos-15 frascos de óleo de imersão-6 frascos de azul de metileno

-8 frascos de:cristal violetalugolalcool-acetonafucsina diluida

Estirpes bacterianas em BHI

-Escherichia coli-Proteus mirabilis-Pseudomonas sp.-Staphylococcus epidermidis

2ªSEMANA

1ªAULA

-Exame a fresco entre lâmina/lamela-Coloração de Gram

2ªAULA

-Coloração de cápsulaa.Método com tinta da chinab.Método com fucsina diluida

-Coloração de micobactérias pela técnica de Ziehl-Neelson

MATERIAL

-8 frascos com tinta da china-1 saco de papel de filtro-8 frascos com fucsina diluida-8 frascos com:

-Fucsina fenicada (Zhiel)-Alcool etilico 95%-Ácido sulfúrico 25-30%-Azul de metileno

-20 ansas com algodão em mecha

Estirpes bacterianas em BHI

-Klebsiella pneumoniae-Mycobacterium smegmatis

3ªAULA

-Observação de colorações de esporos e flagelos-Exame a fresco e coloração de Gram

3ªSEMANA

1ªAULA

Cultura de bactérias (teórico-prática)

-Meios de culturaa.Tipos de meios e a sua constituiçãob.Técnicas de preparação

-Técnicas de inoculação para isolamento bacteriano-Caracteristicas macroscópicas das colónias bacterianas

2ªAULA

-Demonstração das técnicas de preparação de meios de cultura-Inoculação de meios de cultura sólidos

a.Meio de Gelose -Tripticase-Soja

b.Meio de Drigalskyc.Meio de Chapmand.Meio de Gelose Chocolatee.Meio Manitol mobilidade

MATERIAL:

-30 ansas de Henle-30 zaragatoas-1 caixa de pipetas Pasteur de vidro

POR GRUPO (grupos de 4 alunos) (por turma/6 grupos)

-1 placa de GTS,Drigalsky,Chapman e Gelose Chocolate-2 tubos de Manitol Mobilidade-1 tubo de BHI com:

-Escherichia coli-Proteus mirabilis-Staphylococcus epidermidis

3ªAULA

-Leitura das inoculações executadas na aula anterior-Coloração de Gram a partir do meio sólido

MATERIAL:

-2 Tubos com A.D.E. ou S.F. por grupo-Reagentes para a coloração de Gram

4ªSEMANA


-Genética bacteriana-Transferência de AND plasmidico entre bactérias por transformação

2ªAULA

-Transformação de E.coli por AND pasmidico (pSK29)

MATERIAL

-Bactérias competentes (E.coli DH5)

-Plasmidio pUC19 (solução a 200ng/ul de plasmidio purificado)-Banho a 42ºC-Gelo-Suportes de eppendorfs em esferovite-Micropipetas automáticas p20,p100-200 e p1000/ 3 de cada-Pontas estéreis para as micropipetas (pontas amarelas e azuis)

Por grupo (cd/ com 4 alunos):

-Meio de cultura liquido sem ampicilina (BHI) em 10 tubos de vidro,cada com 5 ml-Meio de cultura sólido (TSA) com ampicilina /100 placas-Frascos de 20ml de etanol (2 por grupo)-Pipetas Pasteur (2 por grupo)

3ªAULA

-Determinação da eficiência da transformação.

5ªSEMANA


-Controlo dos microorganismos por agentes quimicosa)Determinação da sensibilidade bacteriana aos antibióticos

-Revisão dos diferentes métodos-Execução,leitura e interpretação de um antibiograma

b)Efeitos dos agentes quimicos nas bactérias;desinfectantes.

2ªAULA

MATERIAL:

-1 caixa de pipetas Pasteur de vidro-1 aparelho de medição da escala de McFarland-3 aplicadores de discos de antibióticos-3 micropipetas de 500ul e de 100ul-2 caixas de pontas estereis azuis e amarelas-1litro de hipoclorito de sódio-1litro de glutaraldeido-1 caixa de ATB Gnegativo (25galerias/25 meios)-20 tubos de BHI com Pseudomonas-20 tubos de BHI com Estafilococos

-20 tubos de BHI com E.coli-Discos de antibióticos para Escherichia coli

-Amoxacilina-Augmentin-Gentamicina-Netilmicina-Furadantina-Ác.nalidixico-Norfloxacina-Ciprofloxacina-Cefuroxina-Cefotaxina

-Discos de antibióticos para Pseudomonas aeruginosa-Ticarcilina-Piperacilina-Imidazol-Cefatazidima-Tobramicina-Gentamicina-Netilmicina-Colistina-Ciprofloxacina

-Discos de antibióticos para Staphylococcus aureus-Penicilina-Kanamicina-Gentamicina-Tetraciclina-Eritromicina-Furadantina-Vancomicina-Amoxacilina-Augmentin

Material por grupo (cd/com 2 alunos):

-1 placa de Mueller-Hinton-1 tubo de hemólise com ADE-1 placa de TSA (tripticase-soja-agar)

3ªAULA

-Leitura e interpretação dos antibiogramas-Leitura sobre a acção dos desinfectantes

6ªSEMANA

1ªAULA

-Micologia;estudo dos fungos unicelulares e fungos filamentosos-Inoculação do meio de Sabouraud com cloranfenicol

Material: (grupos de 2 alunos)

-1 placa de Sabouraud-1tubo com Candida albicans-1 tubo com Candida torulopsis-1 tubo com Geotrichum sp.

2ªAULA

-Caracterização macroscópica-Caracterização microscópica

-Exame a fresco com colorações simples (azul de metileno,azul de lactofenol)

-Coloração de Gram-Prova de filamentação em soro fresco-Identificação bioquimica de fungos

-Auxonograma-Zimograma

-Pesquisa de fungos na face interna da lingua

Material: (Por turma)

-3 caixas de laminas/lamelas-10 xizatos-30 ansas de Henle-30 tubos de hemólise com soro humano fresco-1 caixa de API 20C-2 micropipetas de 500 e 1000ul-Pontas azuis estéreis-8 frascos de azul de metileno/azul de lactofenol-8 frascos de cada reagente para a coloração de Gram-15 tubos com Candida albicans

Candida tropicalisCandida glabrata

Geotrichum sp.-5 tubos com Penicillium sp.

Aspergillus sp.

-24 zaragatoas-24 placas de meio de Sabouraud

3ªAULA

-Leitura e conclusão dos resultados obtidos

7ªSEMANA

1ªAULA

-Estudo bioquimico e metbólico de cocos de Gram positivo-Provas bioquimicas para os Estafilococos

-Prova da fermentação do manitol-Estudo das caracterisiticas hemoliticas-Pesquisa de enzimas elaboradas como a catalase,coagulase,DNAse,fosfatase e

gelatinase-Provas bioquimicas para os Estreptococos

-Estudo das caracterisiticas hemoliticas-Estudo da sensibilidade a antibióticos (bacitracina e trimetroprim-

sulfometoxazol)-Prova da bilis-esculina

-Isolamento da pele do antebraço para meio de gelose sangue com zaragatoa embebida em soro fisiológico.

Material necessário por grupo:

-1 placa de meio de Chapman-1 placa de Gelose Sangue-1 placa de D-cocccosel-1 tubo com S.epidermidis-1 tubo com S.aureus-1 tubo com S.pyogenes-1 tubo com Enterococcus faecalis

2ªAULA

Material necessário por turma:

-6 frascos de cada reagente para a coloração de Gram-6 frascos com água oxigenada (10vol)-1 caixa de pipetas Pasteur de vidro-3 caixas de lâminas-30 ansas de Henle-1 API Strept.-Micropipetas de 500 e 1000 ul (2 de cada)-Pontas azuis estéreis-Parafina liquida q.b.


-2 placas de Gelose Sangue-1 disco de bacitracina e SXT-1 pinça-1 tubo de hemólise com plasma de coelho-1 placa com meio DNAse-1 meio de fosfatase-1 frasco com SF-1 zaragatoa

3ªAULA


-4 frascos de HCL 1N-8 frascos de cada reagente da coloração de Gram-Reagentes de revelação de API Strept.

8ªSEMANA

1ªAULA

-Estudo bioquimico e metabólico de bactérias das familias Pseudomonaceae e Enterobacteriaceae.-Inoculação de meios selectivos e diferenciais-Exame morfológico após coloração de Gram-Provas do metabolismo glucidico

-Estudo da fermentação da lactose em meios diferenciais-Provas especificas dos produtos de degradação

a)Vermelho de metilob)Voges-Proskauer

-Pesquisa da -galactosidase (teste ONPG)

-Estudo do metabolismo respiratório-Pesquisa de citocromo-oxidase

-Prova da utilização de um subtracto especifico-Utilização do citrato


-2 meios de Drigalsky-1 meio de TSA-4 ansas de Henle-Estirpes bacterianas:

-E.coli-Klebiella oxytoca-Salmonella-Proteus mirabilis-Proteus vulgaris-Pseudomonas aeruginosa-Enterobacter cloacae

2ªAULA


-1 tubo de hemólise com ADE (2ml)-1 tubo com meio de Kliger-2 tubos com meio de Clark-Lubs-1 placa com Citrato de Simmons-1 disco de ONPG-1 ansa-1 lamina/lamela-1 disco de Oxidase-1 pipeta Pasteur de vidro

3ªAULA


-3 frascos com vermelho de metilo-3 frascos com solução VP1-3 frascos com solução VP2

9ªSEMANA

1ªAULA

-Estudo bioquimico e metabólico dos bacilos Gram negativos

-Inoculação de meios selectivos e diferenciais-Inoculação de meios combinados para a identificação de Enterobactérias

-Meio de Hajna-Kliger-Exame morfológico após coloração de Gram-Estudo do metabolismo respiratório

-Pesquisa de citocromo-oxidase-Estudo do metabolismo proteico

-Pesquisa da Urease-Pesquisa da triptofano desaminase-Pesquisa do indol

-Utilização de micrométodos de leitura automatizados na identificação microbiana-Galerias API (e similares)


-2 meios de Drigalsky-1 meio de TSA-4 ansas de Henle-Estirpes bacterianas:

-E.coli-Klebiella oxytoca-Salmonella-Proteus mirabilis-Proteus vulgaris-Pseudomonas aeruginosa-Enterobacter cloacae

2ºAULA


-1 disco de oxidase-1 pipeta Pasteur de vidro-2 tubos com meio de Ureia-Indol-1 tubo com meio de Hajna-Kliger-1 API 10S-Micropipetas de 500 e 1000ul e pontas respectivas-1 frasco com parafina liquida-1 lamina-Reagentes para a coloração de Gram

3ªAULA

-Leitura e identificação das bactérias Gram negativas

-Elaboração de quadro com identificação bioquimica das bactérias Gram negativas


-3 frascos com reagente de Kovacks-3 frascos com TDA

ESQUEMA DA AULA

2ªAULA

a.No meio de GTS inocular por espalhamento E.coli-Pipeta Pasteur (espalhador)-Tubo de BHI com E.coli

b.No meio de Drigalsky dividir em dois e inocular Proteus e E.coli-Ansa de Henle

c.No meio de Chapman dividir em dois e inocular Staphylococcus e E.coli -Ansa de Henle

d.Na Gelose Chocolate dividir em três e inocular com zaragatoa E.coli,Proteus e Estafilococos.

e.Nos tubos de Manitol mobilidade com ansa de Henle por picada central inocular Estafilococos e Proteus

3ªAula

-Leitura dos meios-No meio de Drigalsky:estudo da fermentação da lactose-No meio de Chapman: estudo da fermentação do manitol

a.Com ansa de Henle retirar 3-4 colóniasa.1-do meio de Chapman e suspender em SF ou BHIa.2-do meio de Drigalsky

b.Tirar 4-5 gotas para lâmina e fazer esfregaço,utilizar a coloração de Gram

Ficha para preparação da aula:

1ºdia

Dividir o meio de Sabouraud em 3,em cada parcela inocular Candida albicansCandida tropicalisGeotrichum sp.

Incubar 24-48h/37ºC

2ºdia

a)Executar a prova de filamentação em soro frescoEm 2 tubos com soro fresco inocular em cada Candida albicans e Candida

tropicalisb)Executar o exame a fresco com azul de lactofenol

-Candida albicans-Geotrichum sp.

c)Coloração de Gram a partir do Sabouraud de Candida sp. e Geotrichum sp.d)Exame a fresco com azul de lactofenol para Penicillium e/ou Aspergilluse)Demonstração em cada turma da realização do API 20C para Candida albicans e Candida tropicalisf)Cada 4 alunos -pesquisa de fungos na face interna da lingua

Lista de antibióticos necessários :

-Discos de antibióticos para Escherichia coli

-Amoxacilina-Augmentin-Gentamicina-Netilmicina-Furadantina-Ác.nalidixico-Norfloxacina-Ciprofloxacina-Cefuroxina-Cefotaxina

-Discos de antibióticos para Pseudomonas aeruginosa-Ticarcilina-Piperacilina-Imidazol-Cefatazidima-Tobramicina-Gentamicina-Netilmicina-Colistina-Ciprofloxacina

-Discos de antibióticos para Staphylococcus aureus-Penicilina-Kanamicina-Gentamicina-Tetraciclina

-Eritromicina-Furadantina-Vancomicina-Amoxacilina-Augmentin

Estirpes bacterianas e micológicas:

-Klebsiella pneumoniae-Mycobacterium smegmatis-Escherichia coli-Klebsiella oxytoca-Salmonella sp.-Proteus mirabilis-Proteus vulgaris-Pseudomonas aeruginosa-Enterobacter cloacae-Staphylococcus epidermidis-Staphylococcus aureus-Streptococcus pyogenes-Enterococcus faecalis-Candida albicans-Candida tropicalis-Candida glabrata-Candida torulopsis-Geotrichum sp.-Penicillium sp.-Aspergillus sp.

1ªe 2ªSEMANA

-Apresentação-Noções de comportamento laboratorial

a.Assépsiab.Precauções na manipulação de produtos contaminados

-Estudo da célula bacteriana por microscopia ópticaa.Exame a fresco

-estudo da mobilidade-estudo da morfologia

b.Exame após coloraçãob.1-Tipos de corantes e coloração usados em microbiologiab.2-Colorações simples pelo azul de metilenob.3-Coloração diferencial de Gramb.4-Colorações especiais

b.4.1.-Coloração de cápsulab.4.2.-Coloração de esporosb.4.3.-Coloração de flagelosb.4.4.-Coloração de micobactérias pela técnica de Ziehl-Neelson

3ªSEMANA

Cultura de bactérias -Meios de cultura

a.Tipos de meios e a sua constituiçãob.Técnicas de preparação

-Técnicas de inoculação para isolamento bacteriano-Caracteristicas macroscópicas das colónias bacterianas-Demonstração das técnicas de preparação de meios de cultura-Inoculação de meios de cultura sólidos

a.Meio de Gelose -Tripticase-Sojab.Meio de Drigalskyc.Meio de Chapmand.Meio de Gelose Chocolatee.Meio Manitol mobilidade

4ªSEMANA

-Genética bacteriana-Transferência de AND plasmidico entre bactérias por transformação-Transformação de E.coli por AND pasmidico (pSK29)-Determinação da eficiência da transformação.

5ªSEMANA

-Controlo dos microorganismos por agentes quimicos

a)Determinação da sensibilidade bacteriana aos antibióticos-Revisão dos diferentes métodos-Execução,leitura e interpretação de um antibiograma

b)Efeitos dos agentes quimicos nas bactérias;desinfectantes.

6ªSEMANA

-Micologia;estudo dos fungos unicelulares e fungos filamentosos-Inoculação do meio de Sabouraud com cloranfenicol

-Caracterização macroscópica-Caracterização microscópica-Exame a fresco com colorações simples (azul de metileno,azul de

lactofenol)-Coloração de Gram

-Prova de filamentação em soro fresco-Identificação bioquimica de fungos

-Auxonograma-Zimograma

-Pesquisa de fungos na face interna da lingua

7ªSEMANA

-Estudo bioquimico e metabólico de cocos de Gram positivo-Provas bioquimicas para os Estafilococos

-Prova da fermentação do manitol-Estudo das caracterisiticas hemoliticas-Pesquisa de enzimas elaboradas como a catalase,coagulase,DNAse,fosfatase e

gelatinase-Provas bioquimicas para os Estreptococos

-Estudo das caracterisiticas hemoliticas

-Estudo da sensibilidade a antibióticos (bacitracina e trimetroprim-sulfometoxazol)

-Prova da bilis-esculina-Isolamento da pele do antebraço para meio de gelose sangue com zaragatoa embebida em soro fisiológico.

8ªSEMANA

-Estudo bioquimico e metabólico de bactérias das familias Pseudomonaceae e Enterobacteriaceae.-Inoculação de meios selectivos e diferenciais-Exame morfológico após coloração de Gram-Provas do metabolismo glucidico

-Estudo da fermentação da lactose em meios diferenciais-Provas especificas dos produtos de degradação

a)Vermelho de metilob)Voges-Proskauer

-Pesquisa da -galactosidase (teste ONPG)-Estudo do metabolismo respiratório

-Pesquisa de citocromo-oxidase-Prova da utilização de um subtracto especifico

-Utilização do citrato

9ªSEMANA

-Estudo bioquimico e metabólico dos bacilos Gram negativos-Inoculação de meios selectivos e diferenciais-Inoculação de meios combinados para a identificação de Enterobactérias

-Meio de Hajna-Kliger-Exame morfológico após coloração de Gram-Estudo do metabolismo respiratório

-Pesquisa de citocromo-oxidase-Estudo do metabolismo proteico

-Pesquisa da Urease-Pesquisa da triptofano desaminase-Pesquisa do indol

-Utilização de micrométodos de leitura automatizados na identificação microbiana-Galerias API (e similares)

10ªSEMANA

-Avaliação

Bibliografia Aconselhada:

Brisou,J.Techniques d’Enzymologie Bactériene. 1971 Masson & Cie.

Buttiaux,R.,H. Beerens and A.Tacquet.Manuel de Techniques Bacteriológiques. 4ªEdition 1974 Flammarion Médécine-Sciences.

Harley,J.P., and L.M. Prescott.Laboratory Exercises in Microbiology. 2nd Edition.1993.W.C. Brown.

Larone,D.H.Medically Important Fungi. A Guide to Identification.3rd Edition.1995.American Society for Microbiolgy Press.

INSTITUTO SUPERIOR CIÊNCIAS DA SAÚDE SULCURSO DE MEDICINA DENTÁRIA

Microbiologia Oral

2ºAno/2ºSemestre Ano lectivo 00/01


Material necessário para as aulas práticas de Microbiologia Oral:

Previsão para 100 alunos:

- Lâminas/lamelas-Cristal Violeta (8 frascos)-Lugol (8 frascos)-Alcool-acetona (8 frascos)-Fucsina diluida (8 frascos)-Zaragatoas (200)-Meio de transporte:

- Meio VMGA III (anaerobic)- Meio Mitis-Salivarius-Agar- Meio Mitis-Salivarius-Bacitracina-Agar- Bacitracina (5g) Ref: 106992 (Merck)- Cultura pura de Estreptocos B-hemolíticos e Estafilococos em gelose sangue.- 1 Slidex Strepto Kit (teste latex) Ref: 58810 bioMérieux- 2 caixas de Galerias API 20 Strep Ref: 200600 bioMérieux- 40 tubos de ensaio com 0.5ml de SF- 40 tubos de ensaio com 1ml de BHI- 50 tubos de hemólise com 2ml de SF- 6 micropipetas de 100 e 1000µl

- Pontas amarelas e azuis estéreis- 2 caixas de Dentocult SM Medicinália- 1 caixa de Dentocult LB Medicinália- 25 recipientes para recolha de saliva- 25 tubos com 1ml/cd de solução 0.005 N de HCl- Papel indicador de pH- 25 Comprimidos de parafina- 6 espalhadores de vidro- 25 ansas calibradas de 10µl- 3 Vortex- Placa rotativa de aquecimento (35-37ºC)- Meio API 20 A (25 x 6 ml) Ref: 20320 bioMérieux- 25 galerias API 20 A Ref: 20300 bioMérieux- 1 ampola Ehrlich Ref: 70520 bioMérieux- XYL (xileno) Ref: 70530 bioMérieux- BCP (púrpura de bromocresol) Ref: 70510 bioMérieux- GENbox anaer (10 geradores) Ref: 96124 bioMérieux- GENbox CO2 (10 geradores) Ref: 96126 bioMérieux- ID32 A Ref: 32300 bioMérieux- Suspension Medium Ref: 70700 bioMérieux

- 2 caixas de ATB ANA (10gal + 10 amp.) Ref:14269 bioMérieux- - Anaerobic Blood Agar Base acc. to CDC (500g) Ref: 116331.0500

(Merck)- Vitamina K1 (1g) Ref: 5.01890.0001 (Merck)- Etanol (1l) Ref: 1.00983.1000 (Merck)- hemina- Sangue desfibrinado de carneiro (50 ml)- Brucella Blood Agar- TSBV (tripticase-soja-bacitracina-vancomicina)

- Lâmpada de UV- H2O2 a 10 volumes- Discos de oxidase- Lupas q.b.- Óleo de parafina (6 frascos)- Densitómetro (escala de Mc Farland)- Reagentes de revelação para as galerias API 20 A e ID32 A

- Livros de sequenciação numérica para identificação do API 20A - PerioScan Card (BANA test) Oral-B- Estirpes ATCC

Porphyromonas gingivalis ATCC 33277Prevotella intermedia ATCC 25611Bacteroides forsythus ATCC 29522Actinobacillus actinomycetemcomitans ATCC 43037

progoral

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