preinforme corregido c-3

8/15/2019 PREinforme Corregido C-3

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I .OBJETIVOS

LABORATORIO DE

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

Alumnas:

- LAZARO CAJUSOL Jenifer

- LOPEZ BENITES Anaaria

- OLIVARES CANOVer!ni"a

- SALVADOR RE#ESRe$e"a

- SOTELO %ERRERA

'CULTIVO POR

LOTE ALIENTADOAEREADO DESaccharomyces

Cerevisiae(

PRE


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3 3

). *ENERAL:

'Dise+ar , realiar una e/erien"ia &e "ul0i1! "elular /!r l!0es

en alimen0a&!2CLA34 "!n airea"i5n , alimen0a"i5n "!ns0an0e 4

em/lean&! una "e/a &e saccharomyces Cerevisiae ATCC 6)78

.

7. ESPEC9ICOS:

I&en0i;"ar las /ar0es4 a""es!ri!s , ermen0a&!r a ni1el &e la$!ra0!ri!Dise+ar , /re/arar l!s me&i!s &e "ul0i1! /ara

Saccharomyces Cerevisiae ATCC 6)78 . A"0i1a"i5n "elular , &esarr!ll! &el in!"ul!. De0erminar l!s /er;les &e masa "elular4 >uen0e &e

"ar$!n! , !=


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3 3

II. ETODOLO*9A EPERIENTAL:

). DISEO DE EDIOS DE CULTIVO

El diseño de un medio de fermentación tiene como nalidad la

ele""i5n &e l!s "!m/!nen0es ne"esari!s /ara l!!rma"i5n &e /r!&u"0!s correspondientes al

proceso a desarrollar. Con tal objeto se debe tener en cuenta todos

aquellos aspectos relacionados con el microorganismo, el proceso y

los sustratos a ser empleados como son los requerimientos

nutricionales del microorganismo y algunos especícos del proceso.

ara la formulación del diseño de culti!o se tiene en cuenta lossiguientes requerimientos nutricionales para el culti!o

Saccharomyces Cerevisiae ATCC 6)78.

Para el Dise+! &el me&i! &e "ul0i1!:

a"r!nu0rien0es : C4 N4 a0! &e am!ni!uen0e &e < .6G , S 47FG : Sul>a0! &e maa0! &iK"i&! &eP!0asi!uen0e &e P 7.G : !s>a0! &iK"i&! &e

P!0asi!

μ Max ".3# $%& en glucosa a 3'(C 2Lane4. , !rrisse,4

7)3. C!n&i"i!nes &e "ul0i1!:

Tem/era0ura : MFC |


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3 3

Vel!"i&a& &e a


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3 3

s n0e

Sa"ar!sa C ' *.&"' ".'-& 3.*"- 3.*"-2N%637SO6 ) + *&.*&* *.3'# ".+ &.*#3

%7PO6 / ".' *.-#- '#.3'3 "."3' "."'*%7PO6 * **.#+ &&.3+# ".' ".*-3


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3 3

).6 SOLUCIN DE SALES:TABLA 8: Composición de la solución de sales &"" !eces concentrado,

utili


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• Encender el mec$ero Aunsen.• 1ostener los matraces. 1i los matraces tienen un tapón de

algodón, s>calo un poco de manera que no est? muy

apretado.• 4lamear en el mec$ero Aunsen, el cual da un >rea de

desinfección de 3" cm a la redonda.• @etirar una tapa con el meñique, mientras sostienes los

matraces. )unca poner las tapas sobre la mesa.• 4lamear la boca de ambos matraces para matar cualquier

microorganismo presente en el aire y que pueda

contaminar la parte superior durante las manipulaciones.• os matraces abiertos deben mantenerse en posición

inclinada para que el riesgo de contaminación sea

mínimo.• 1embrar en el matra< est?ril el inoculo.• 8e nue!o Bamea las bocas de los matraces y t>palos de

nue!o. 9segrate de me


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PESAR

DILUIR

CALENTAR-

A*ITAR

DIVIDIR

ESTERILIZAR

EN:RIAR

RESERVAR

3 3

B.SIEBRA EN EDIO DE ANTENCION 2SOLIDO

SOLIDO3:- a0eriales , eui/!s a u0iliar:

• 9

- El /r!"e&imien0! &e siem$ra se @a"e en l!s 0u$!s &eensa,!s /re/ara&!s "!n me&i! s5li&! 2"!n a


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3 3

- La aa&a se realia en el 0u$! &es&e a&en0r! @a"ia>uera.

- Se lle1an a la in"u$a&!ra a MF XC &uran0e 76 a 6@!ras.

C. PREPARACION DEL e&i! liui&! &e a"0i1a"i5n 2M ml3

ara la preparación de este medio líquido, pre!iamente se deben

esterili


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ESTERIZAR2/!r se/ara&!3

EN:RIAR

CALENTAR

AADIR

A*ITAR

ESTERILIZAR

EN:RIAR

RESERVAR

3 3

D.ACTIVACION DE LA CEPA:

- a0eriales , eui/!s:• 0atra< de &""" ml.• 9lgodón Fasa• 9gua destilada• 9


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PESAR

DILUIR

ENRASAR

A*ITAR

ESTERILIZAR

3 3

*.ERENTACION DEL LA CEPA: CL , CLA

a0eriales , eui/!s

• 0atra< de & conteniendo el medio de fermentación• Airreactor 't• pH%metro• Fasa y algodón• ;ubos de ensayo

Pr!"e&imien0!: - Es0eriliar l!s ma0eriales a u0iliar.- En el $i!rea"0!r &e F ml4 ue "!n0iene el me&i! &e;ni&!

27)ml34 a+a&ir l!s Mml &e "al&! 2me&i! [ $i!masa3/re/ara&!s /re1iamen0e.

- e"lar , 0!mar F ml /ara el anKlisis &e $i!masa , sus0ra0!ini"ial.

- Ta/ar "!n un 0a/5n &e

sus0ra0! , &ear "ul0i1an&! la "e/a /!r 6 @!ras en CLA.

|

W0u$! &e ensa,! Y

W /!r )F minu0!sY

WVarilla &e 1i&ri!Y

A


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ENRIAR

CALENTAR

A*RE*AR

A*RE*AR

3 3

M. ONTAJE DEL EUIPO EPERIENTAL4 CULTIVO DEL .O4ETC.

A. DETERINACIN DE AZ\CARES REDUCTORES: ]TODO DELDNS 2^CIDO DINITROSALIC9LICO3

TRATAIENTO PREVIO

a sacarosa es un disac>rido que no posee carbonos anom?ricos librespor lo que carece de poder reductor. 1in embargo, en presencia de HCl yen caliente, la sacarosa se $idroliridos que la forman, glucosa yfructosa, que sí son reductores.

- a0eriales , eui/!s:

• Aarra magn?tica

• Iaso de precipitado *'" ml.

• 0atra< de aforo de &"" ml. |

)a7H

NEUTRALIZ

;ubo de ensayo

Aaño 0aría 2 ' min

&" gotas de HC ;ubo de ensayo

3 ml de


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3 3

• apel aluminio

• Aalancido 3,' dinitrosalicílico J8)1K• *"" ml2l de )a7H *)• 3"" g2l de tartrato de sodio y potasio tetra$idratado

- Pr!"e&imien0!:

ara la preparación de este reacti!o, se disuel!e el tartrato enapro=imadamente '"" ó -"" ml de agua, paralelamente sedisuel!e el >cido 8)1. 9mbas soluciones se me

F.- La "!n"en0ra"i5n se !$0iene in0er"e/0an&! la me&i&a&e a$s!r$an"ia en la "ur1a &e "ali$ra&!.

La "ur1a &e "ali$ra&! /ara el a"ar se !$0iene a /ar0ir&e mues0ras &e "!n"en0ra"i5n "!n!"i&a , analia&asse


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3 3

De0ermina"i5n &e la "in?0i"a &e "!nsum! &e la >uen0e &e

"ar$!n!.

-&S Q &0 2)Q # QS3 2&Q&03

@eemplau a&!. ˃

EDIR ` A$s!r$an"ia a 86nm , /%

COPLETAR ` Fml en el 0u$! &e "en0ri>u


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C. 8eterminación de la concentración celular por 8.7

a0eriales , eui/!s:• Espectrofotómetro.• Centrífuga.• Estufa.

Rea"0i1!s:• 0uestra del medio.• 9gua destilada.

Pr!"e&imien0!:

-9l medio que contiene la biomasa nal le $acemos diferentes

diluciones en tubos de ensayoD &D& &D* &D3 &D y &D' mas el

blanco que ser> agua.- 0edimos la absorbancia de cada dilución y de!ol!emos lo

utili


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3 3

;endremos una absorbancia y un peso Jbiomasa peso secoK paracada capac$o Jpor cada diluciónK. Con ambos se construye la cur!a

de calibrado de biomasa. En esta cur!a se reempla


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D5n&e:

μ J7*K es la !elocidad especíca de respiración y

X , es la concentración de biomasa

a aireación se reinicia en el punto A Jgura &K y la concentración

de o=ígeno disuelto aumenta $asta alcanca de la ecuación anterior, gura *, con cl en

las ordenadas y Rdcl 2dt S μ J7*K X T en las abcisas, es una línea

recta cuya pendiente es igual a J%&2k la K. a recta se construye con

los !alores de las tangentes a la cur!a AC, gura &, correspondiente

a diferentes !alores de cl .

|


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3 3

Figura

2. Representación esquemática de la determinación del

coefciente volumétrico de transerencia de o!geno" # l a"

por el método dinámico

E. 0E;7877F:9 9@9 8E;E@0:)9C:Q) 8E 7MUFE)7 8:15E;7

5n m?todo nue!o para la determinación de la tasa de respiración y

del coeciente de transferencia de o=ígeno en bioreactores.

In0r!&u""i5nara conocer la tasa de respiración de los microorganismos y

el coeciente !olum?trico de transferencia de o=ígeno, se

puede utilimico. Es un m?todo que se

realindolo a

tra!?s de tubería a una


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3 3

o=ígeno disuelto, debido a que es consumido por los

microorganismos. En condiciones estacionarias, el cambio de la

concentración de o=ígeno disuelto con respecto al tiempo en el

circuito Jdc2dtKC, es igual a la tasa de respiración JV7*=KC. Con estainformación y con la diferencia de concentraciones de

o=ígeno en el bioreactor, en condiciones estacionarias, es posible

conocer el coeciente !olum?trico de transferencia de o=ígeno.

9) 8E 05E1;@E71 L @EF:1;@7 8E 89;71

*ru/!: C% 3

D=a &e la e/erien"ia:

i"r!!r


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N%OR

A

TIEP

O

2@!ras3

A$s!r$an"

ia 286

nm3

O=


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3 3

). EDIOS DE CULTIVOS:− E=tracto de e!adura

− eptona

− E=tracto de malta− 9gar

− glucosa

− sacarosa

−

7. REACTIVOS:− /*H7

− J)HK* 17

− 0g17.#H*7

− 8)1 J9C:87 8:):;@719:C::C7K

− )a7H *)

− 1olución de sales

M. INSTRUENTOS

M.) ACTIVACIN CELULAR # DESARROLLO DEL INCULO

• 0atra< de '" ml.

• 9lgodón|


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3 3

• Fasa• 9gua destilada• 9


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3 3

pHmetro

Fasa y algodón Centrifuga ;ubos de ensayo

Capac$os de papel aluminio @ecipientes para recolección de muestra

IV. CRONO*RAIA DE ACTIVIDADES #QO TAREAS

ACTIVIDADES e"@aI&en0i;"a"i5n &e >ermen0a&!r ,

"ali$ra"i5n &e sens!res

)8 &e !"0u$re

Pre/ara"i!n &e "ur1a &e "ali$ra&! &e

DNS

7M &e !"0u$re

/re/ara"i5n &e me&i! &e man0en"i5n 7M &e !"0u$re

In!"ula"i5n en me&i! &e man0en"i5n 76 &e !"0u$re

Pre/ara"i!n &e me&i! &e a"0i1a"i!n 7H &e !"0u$reIn!"ula"i5n en me&i! &e >ermen0a"i5n 7H &e !"0u$re

Desarr!ll! e/erimen0al &e la "ine0i"a 8 &e n!1iem$re

Analisis &e $i!masa4 "ur1as &e "ali$ra&!

, anKlisis DNS

n!1iem$re

ACTIVIDADES

Tareas e"@aPre/ara"i5n &e /re in>!rme +%3 2&"2&Cali$ra"i5n &e sens!res &- 2&"2&•

Pre/ara"i5n &e rea"0i1!s DNS , !$0en"i5n &e|


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la "ur1a &e "ali$ra"i5n.• Pre/ara"i5n &el me&i! &e man0en"i5n aermen0a"i5n ,

es0erilia"i5n &e me&i! l=ui&! /ara "in?0i"a

&e "re"imien0! mi"r!$ian!.

*+2&"2&

• Es0erilia"i5n &e ma0eriales &e 1i&ri!

ne"esari!.

• De0ermina"i5n &e "ur1as &e "ali$ra"i5n

&e 0?"ni"as anal=0i"as.

• In!"ula"i5n &e me&i!s , se


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ANEOS:

). CALCULOS DE LOS VOLUENES DE ACTIVACION #

ERENTACION:

Se sa$e ue:

V f =4


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7. CALCULO DE LAS CONCENTRACIONES DE BIOASA EN LAACTIVACION # ERENTACION:

El asa $a"0eri!l5ermen0a"i5n es .7 &e nues0r! me&i! &e a"0i1a"i5n &esea&!.

" 1

V 1="

2V

2

" 1=0.22.4 L

0.3 L =1.6 g/ L -Y D!n&e C) es la "!n"en0ra"i5n al ;nal &e

la a"0i1a"i5n.

P!r l! 0an0! el 0iem/! &e a"0i1a"i5n serK

1.6=0.033 e0.37 t

t =10.5horas Tiem/! &e a"0i1a"i5n

ue&an&!:

% 0=0.2

g

l al iniciodela fermentacion

M. CALCULOS PARA:

EDIO DE ANTENCION: VOL F mL

|


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3 3

NUTRIENTECONCENTRAC

ION 2


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3 3

x&0.05 L

x=0.05∗10

1=0.5g

EDIO DE ACTIVACION:

VOLUEN M ml

NUTRIENTE CONCENTRACION 2


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3 3

SOLUCIONES DE SALES:

5g&1 L

x&0.3 L

x= 0.3∗51

=1.5 g

EDIO DE ERENTACION:

ara encontrar las cantidades necesarias para el medio de fermentaciónse necesitaron los siguientes datosD

ELEENTO PESOOLECULAR

2


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3 3

6. CALCULO DEL TIEPO DE TRANSICION , S>:

% 0

V 0

eut = * ( Sf )((xs ) t +S0V 0

(x

s + %

0V

0

D!n&e:

% 0=1.8g / L &e$i&! a la >ase la< n! se lle


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34/36

3 3

estequometricamente equi!alente al consumo de "* y @VX& J 4iec$ter,et al., &+&K. 1in embargo , si la glucosa en la alimentación e=cede lacapacidad respiratoria de la le!adura J Cooney, et al., &++#K se obser!auna ligera tendencia de incremento en el coeciente respiratorio,

comportamiento.

os

Bujos metabólicos in!olucrados en la producción de etanol permiten laestimación de las concentraciones de dic$o metaboli


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reproduciendo m>s cercanamente los !alores e=perimentadosencontrados.

|


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