o euo eu- ---estresse na micropropagaÇÃo da...

UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCOUNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCOUNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCOUNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCODEPARTAMENTO DE AGRONOMIADEPARTAMENTO DE AGRONOMIADEPARTAMENTO DE AGRONOMIADEPARTAMENTO DE AGRONOMIA

PROGRAMA DE PÓSPROGRAMA DE PÓSPROGRAMA DE PÓSPROGRAMA DE PÓS----GRADUAÇÃO EM AGRONOMIA GRADUAÇÃO EM AGRONOMIA GRADUAÇÃO EM AGRONOMIA GRADUAÇÃO EM AGRONOMIA ––––MELHORAMENTO GENÉTICO DE PLANTAS MELHORAMENTO GENÉTICO DE PLANTAS MELHORAMENTO GENÉTICO DE PLANTAS MELHORAMENTO GENÉTICO DE PLANTAS –––– PPGAMGP PPGAMGP PPGAMGP PPGAMGP

SEMINÁRIO IISEMINÁRIO IISEMINÁRIO IISEMINÁRIO II

Mestranda: Gemima Manço de MeloMestranda: Gemima Manço de MeloMestranda: Gemima Manço de MeloMestranda: Gemima Manço de MeloOrientadora: Profª. Dra. Lilia WilladinoOrientadora: Profª. Dra. Lilia WilladinoOrientadora: Profª. Dra. Lilia WilladinoOrientadora: Profª. Dra. Lilia Willadino

CoCoCoCo----orientador: Profº. Dr. Reginaldo de Carvalhoorientador: Profº. Dr. Reginaldo de Carvalhoorientador: Profº. Dr. Reginaldo de Carvalhoorientador: Profº. Dr. Reginaldo de Carvalho

O EUO EUO EUO EUO EUO EUO EUO EU--------ESTRESSE NA MICROPROPAGAÇÃO DA CANAESTRESSE NA MICROPROPAGAÇÃO DA CANAESTRESSE NA MICROPROPAGAÇÃO DA CANAESTRESSE NA MICROPROPAGAÇÃO DA CANAESTRESSE NA MICROPROPAGAÇÃO DA CANAESTRESSE NA MICROPROPAGAÇÃO DA CANAESTRESSE NA MICROPROPAGAÇÃO DA CANAESTRESSE NA MICROPROPAGAÇÃO DA CANA--------DEDEDEDEDEDEDEDE--------AÇÚCAR: VARIÁVEIS BIOQUÍMICAS E AÇÚCAR: VARIÁVEIS BIOQUÍMICAS E AÇÚCAR: VARIÁVEIS BIOQUÍMICAS E AÇÚCAR: VARIÁVEIS BIOQUÍMICAS E AÇÚCAR: VARIÁVEIS BIOQUÍMICAS E AÇÚCAR: VARIÁVEIS BIOQUÍMICAS E AÇÚCAR: VARIÁVEIS BIOQUÍMICAS E AÇÚCAR: VARIÁVEIS BIOQUÍMICAS E

MOLECULARESMOLECULARESMOLECULARESMOLECULARESMOLECULARESMOLECULARESMOLECULARESMOLECULARES

ROTEIROROTEIROROTEIROROTEIROROTEIROROTEIROROTEIROROTEIRO

� INTRODUÇÃO E SÍNTESE DE LITERATURA

� OBJETIVOS�Geral� Específicos

� METAS

� METODOLOGIA� METODOLOGIA

� CRONOGRAMA

� ORÇAMENTO

� RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIO-ECONÔMICO

� APOIO FINANCEIRO

INTRODUÇÃO E SÍNTESE DE LITERATURAINTRODUÇÃO E SÍNTESE DE LITERATURAINTRODUÇÃO E SÍNTESE DE LITERATURAINTRODUÇÃO E SÍNTESE DE LITERATURAINTRODUÇÃO E SÍNTESE DE LITERATURAINTRODUÇÃO E SÍNTESE DE LITERATURAINTRODUÇÃO E SÍNTESE DE LITERATURAINTRODUÇÃO E SÍNTESE DE LITERATURA

AAAAAAAA canacanacanacanacanacanacanacana--------dededededededede--------açúcaraçúcaraçúcaraçúcaraçúcaraçúcaraçúcaraçúcar

Setor sucroalcooleiro brasileiro

↑ Competitivo mundialmente↑ Competitivo mundialmente

↑ Níveis de produtividade e rendimento industrial

↓ Custos de produção



� Possui cadeia produtiva estruturada

� Domina estágios da tecnologia de produção� Domina estágios da tecnologia de produção

� Gera várias oportunidades de negócios



� Produção nordestina 2008/2009 � 64 milhões detoneladas

Nordeste12%

Brasil88%

Produção Nacional

(CONAB, 2009)



� Produção pernambucana 2008/2009 � 19 milhõesde toneladas

ÁlcoolProdução pernambucana

Açúcar67%

Álcool33%

(CONAB, 2009)



� Uso de tecnologias � matérias genéticos dequalidade superior

� Teor de açúcares� Teor de açúcares� Teor de fibras

� Melhoramento genético � prioridade



� Variedades RB � Programa Nacional de

Melhoramento de cana-de-açúcar conduzido pela

RIDESARIDESA

� Produtividade

�Adaptação


MicropropagaçãoMicropropagaçãoMicropropagaçãoMicropropagaçãoMicropropagaçãoMicropropagaçãoMicropropagaçãoMicropropagação

� Processo

� Benefícios


SistemasSistemasSistemasSistemasSistemasSistemasSistemasSistemas dededededededede micropropagaçãomicropropagaçãomicropropagaçãomicropropagaçãomicropropagaçãomicropropagaçãomicropropagaçãomicropropagação


EstresseEstresseEstresseEstresseEstresseEstresseEstresseEstresse

� Cultivo in vitro x Cultivo em casa de vegetação ecampo

Estresse do cultivo in vitroEstresse do cultivo in vitro

Eu-estresse Dis-estresse



Estresse oxidativo

↑ ROS

O2•- H2O2 OH•-

Mensageiro molecularMorte celular



� Controle do nível de ROS � ação de enzimasantioxidantes

� Superóxido desmutase (SOD)

� Catalase (CAT)� Catalase (CAT)

� Peroxidade (POD)

� Compostos sequestradores de radicais livres� 2,2 –difenil-1-picrilhidrazila � atividadeantioxidativa


FidelidadeFidelidadeFidelidadeFidelidadeFidelidadeFidelidadeFidelidadeFidelidade genéticagenéticagenéticagenéticagenéticagenéticagenéticagenética

Micropropagação

Mesmo genótipo da planta doadora

Variações genéticas � cultivo in vitro



Mudanças epigenéticas e genéticas

Variação somaclonal

Nº cromossômico, deleções, rearranjos no genoma e substituição de nucleotídeos



� Polimorfismo nos cinco subcultivos � cultura demeristemas de cana-de-açúcar (ZUCCHI et al., 2002)

� Faixa esperada� Faixa esperada (SKIRVIN et al., 1994)

� Influência do genótipo � diferenças nas variedades

estudadas



� Variações somaclonais � não podem ser previstas

� Aumento na utilização de sistemas demicropropagação� monitoramento das variaçõesmicropropagação� monitoramento das variações

� Detecção de polimorfismos de DNA amplificado(RAPD)

� Os marcadores (sob efeitos) � ≠ tecidos e estádios de

desenvolvimento

OBJETIVOSOBJETIVOSOBJETIVOSOBJETIVOSOBJETIVOSOBJETIVOSOBJETIVOSOBJETIVOS

ObjetivoObjetivoObjetivoObjetivoObjetivoObjetivoObjetivoObjetivo geralgeralgeralgeralgeralgeralgeralgeral

Avaliar, por meio de análises bioquímicas e moleculares, a

produção de mudas de cana-de-açúcar micropropagadas pelo

sistema convencional e por imersão temporária.sistema convencional e por imersão temporária.


ObjetivosObjetivosObjetivosObjetivosObjetivosObjetivosObjetivosObjetivos específicosespecíficosespecíficosespecíficosespecíficosespecíficosespecíficosespecíficos

� Aferir o nível de estresse a que está submetido o material

vegetal;

� Definir o nível de eu-estresse adequado à otimização do

processo micropropagativo utilizando análises bioquímicas e suas

correlações com parâmetros de crescimento;


ObjetivosObjetivosObjetivosObjetivosObjetivosObjetivosObjetivosObjetivos específicosespecíficosespecíficosespecíficosespecíficosespecíficosespecíficosespecíficos

� Avaliar a fidelidade genética das mudas produzidas nos dois

sistemas de micropropagação por meio da detecção das taxas de

variação somaclonal ao longo dos sucessivos subcultivos;

� Correlacionar os efeitos dos reguladores de crescimento,

utilizados nas distintas fases do cultivo in vitro, sobre o nível de

estresse e a ocorrência de variação somaclonal.

METASMETASMETASMETASMETASMETASMETASMETAS

� Inocular ápices caulinares de cana-de-açúcar de variedades RB

em meio de cultivo semi-sólido e em Sistema de Imersão

Temporária;

� Multiplicar o material inoculado tanto no Sistema� Multiplicar o material inoculado tanto no Sistema

Convencional quanto no Sistema de Imersão Temporária;

� Avaliar o crescimento a cada subcultivo e coletar plantas para

análises bioquímicas e moleculares;


� Definir o estresse a que estão submetidas às plantas em ambos

os sistemas de micropropagação, por meio de avaliação das

atividades enzimáticas e da quantificação da produção de

radicais livres;

� Detectar a taxa de variação somaclonal por meio de marcador

molecular (RAPD);

� Analisar os resultados visando caracterizar e comparar os dois

sistemas de micropropagação a fim de definir o que resulta em

menor taxa de variação somaclonal associando este dado ao nível

de estresse in vitro ao qual as plantas micropropagadas são

submetidas.


submetidas.

METODOLOGIAMETODOLOGIAMETODOLOGIAMETODOLOGIAMETODOLOGIAMETODOLOGIAMETODOLOGIAMETODOLOGIA

MaterialMaterialMaterialMaterialMaterialMaterialMaterialMaterial vegetalvegetalvegetalvegetalvegetalvegetalvegetalvegetal

RB934465 RB867515

Biofábrica Governador Miguel Arraes


CultivoCultivoCultivoCultivoCultivoCultivoCultivoCultivo inininininininin vivivivivivivivi trotrotrotrotrotrotrotro

Segmentos apicais (10 cm)

Detergente neutro

Álcool 70%

Hipoclorito de sódio (3%)

Tríplice lavagem

Segmentos de 2 cm

Inoculação


Estabelecimento

Multiplicação

0,3 mg.L-1 de BAP0,1 mg. L-1 de AIA

Meioconvencional

Sistema de imersão temporária

GA3 GA3

0,2 mg.L-1 de BAP1,0 mg.L-1 de AIA

0,2 de BAP1,0 de AIA


Sala de Crescimento ⇒ 27 ± 2°CFotoperíodo16 horas

Intensidade luminosa de 47 µmol m-2 s-1.

Análises bioquímicas e molecularesAnálises bioquímicas e moleculares

Nitrogênio líquido

Freezer a -80ºC


AvaliaçãoAvaliaçãoAvaliaçãoAvaliaçãoAvaliaçãoAvaliaçãoAvaliaçãoAvaliação dodododododododo crescimentocrescimentocrescimentocrescimentocrescimentocrescimentocrescimentocrescimento (a(a(a(a(a(a(a(a cadacadacadacadacadacadacadacada subcultivosubcultivosubcultivosubcultivosubcultivosubcultivosubcultivosubcultivo))))))))

� Produção de biomassa fresca

Número de plantas� Número de plantas

� Tamanho médio


Estudo da atividade Estudo da atividade Estudo da atividade Estudo da atividade Estudo da atividade Estudo da atividade Estudo da atividade Estudo da atividade antiantiantiantiantiantiantianti--------radicalarradicalarradicalarradicalarradicalarradicalarradicalarradicalar

Extratos brutos (0,5 mg.mL-1)

Tubos de ensaio – 5 mL de 2,2-difenil-Tubos de ensaio – 5 mL de 2,2-difenil-1-picrilhidrazila (100 mM EtOH)

Agitação (30 min.) em aparelho de ultra-som


Quantificação de radicais de DPPH

Eficiência anti-radicalar → regressão

UV-Vis –comprimento de onda de 517nm

Eficiência anti-radicalar → regressão linear (GraphPad Prism 4.0)


Enzimas antioxidantesEnzimas antioxidantesEnzimas antioxidantesEnzimas antioxidantesEnzimas antioxidantesEnzimas antioxidantesEnzimas antioxidantesEnzimas antioxidantes

�� CatalaseCatalaseCatalaseCatalase –––– CAT CAT CAT CAT 15 µL do extrato

1 mL do tampão fosfato de potássio 100 mM (pH7,5) + 2,5 µL de H O 30%mM (pH7,5) + 2,5 µL de H2O2 30%

Decomposição do H2O2 por 1 min.

Espectrofotômetro (240nm) – 25ºC


� AscorbatoAscorbatoAscorbatoAscorbato peroxidaseperoxidaseperoxidaseperoxidase –––– APXAPXAPXAPX

50 µL do extrato

650 µL do tampão fosfato de potássio 80 mM (pH7,0) + 100 µL de ascorbato (5mM) + 100 µL de EDTA (1mM) + 100 µL de H O 1mMµL de EDTA (1mM) + 100 µL de H2O2 1mM

Banho-maria a 30ºC

Espectrofotômetro (290nm)


� SuperóxidoSuperóxidoSuperóxidoSuperóxido dismutasedismutasedismutasedismutase –––– SODSODSODSOD::::

Gel de poliacrilamida

5 µL de SOD bovina

Coloração → Azul de nitro tetrazólio(NBT) e riboflavina (CAKMAK E HORST, 1991)


� PeroxidasePeroxidasePeroxidasePeroxidase –––– PODPODPODPOD

Processadas → tampão fostato 0,2 M (pH 6,7) à 0-4ºC

Centrifugado por 15 min a 10.000g

Adição de solução H2O2 e fenol → banho-maria (5 min)

Etanol

Atividade expressa em mol de H2O2 decomposto


� PolifenoloxidasePolifenoloxidasePolifenoloxidasePolifenoloxidase –––– PPOPPOPPOPPO::::

Será determinada pelo mesmo método daperoxidase.


FenóisFenóisFenóisFenóisFenóisFenóisFenóisFenóis totaistotaistotaistotaistotaistotaistotaistotais

1 mL de extrato metanólico

Reagente de Folin-Ciocalteu + Reagente de Folin-Ciocalteu + carbonato de sódio (75 g.L-1)

30 minutos → Leitura em espectrofotômetro UV-Vis a 20ºC a 765 nm


AnálisesAnálisesAnálisesAnálisesAnálisesAnálisesAnálisesAnálises molecularesmolecularesmolecularesmolecularesmolecularesmolecularesmolecularesmoleculares –––––––– ExtraçãoExtraçãoExtraçãoExtraçãoExtraçãoExtraçãoExtraçãoExtração dededededededede DNADNADNADNADNADNADNADNA

300 mg – macerada em almofariz contendo

nitrogênio

Adição de 800 µL de tampão de extração

Aquecimento a

65ºC – 40 min

Lavagem em clorofórmio-álcool isoamílico (centrífuga por 5 min

a 14.000 rpm

Adição de álcool isopropílico Repouso de 2 h


Centrifugação por 10 min a 14.000 rpm

Re-suspensão em 300 µL de tampão

Contendo RNAseRe-precipitação do DNA com NaCl (5M) e isopropanol

Contendo RNAse(40 µg. mL-1)

Re-precipitação do DNA com NaCl (5M) e isopropanol

Centrifugação por 10 min

Extração avaliada em minigel de agarose 8% a

80 volts por 30 min


ReaçõesReaçõesReaçõesReaçõesReaçõesReaçõesReaçõesReações dededededededede AmplificaçãoAmplificaçãoAmplificaçãoAmplificaçãoAmplificaçãoAmplificaçãoAmplificaçãoAmplificação

TermocicladorPrograma –40 ciclos

Etapa de desnaturação a 94ºC (15 seg)

Etapa de ligação Etapa de Etapa de ligação do iniciador a 35ºC ( 30 seg)

Etapa de extensão a 72ºC (60 seg)

Ciclo final de 72ºC (7 min)

Separação em eletroforese

100 volts (4h) em gel de agarose 1,2% com 10 mL-1

de brometo de etídio


Visualização das bandas

Luz ultravioleta

Ausência e presença de bandas específicas comparadas ao padrão → detecção de

variantes somaclonais


AnáliseAnáliseAnáliseAnáliseAnáliseAnáliseAnáliseAnálise dosdosdosdosdosdosdosdos dadosdadosdadosdadosdadosdadosdadosdados obtidosobtidosobtidosobtidosobtidosobtidosobtidosobtidos

As médias dos somaclones obtidos serão calculadas,

para cada subcultivo em cada sistema de micropropagação

e as diferenças serão analisadas utilizando-se o teste do

Qui-quadrado (SOKAL e ROHLF, 1981).

CRONOGRAMACRONOGRAMACRONOGRAMACRONOGRAMACRONOGRAMACRONOGRAMACRONOGRAMACRONOGRAMA

ATIVIDADESATIVIDADESATIVIDADESATIVIDADES2009200920092009 2010201020102010 2011201120112011

MMMM JJJJ JJJJ AAAA SSSS OOOO NNNN DDDD JJJJ FFFF MMMM AAAA MMMM JJJJ JJJJ AAAA SSSS OOOO NNNN DDDD JJJJ FFFF

Revisão bibliográfica x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x

Inoculação de ápices caulinares

x x

Estabelecimento dos sistemas de micropropagação x x

Subcultivos x x x x x x x x x x x x x

Coleta de amostras x x x x x x x x x x x x xColeta de amostras x x x x x x x x x x x x x

Avaliação de crescimento/ multiplicação x x x x x x x x x x x x x

Análises bioquímicas x x x x x x x

Análises moleculares x x x x x x x

Elaboração de artigos para eventos científicos x x x

Elaboração do relatório x

Escrita da dissertação x x x x x

Defesa da dissertação x

ORÇAMENTOORÇAMENTOORÇAMENTOORÇAMENTOORÇAMENTOORÇAMENTOORÇAMENTOORÇAMENTO

MateriaisMateriaisMateriaisMateriais UnidadeUnidadeUnidadeUnidade QuantidadeQuantidadeQuantidadeQuantidade V. V. V. V. unitário (R$)unitário (R$)unitário (R$)unitário (R$) V.V.V.V. total total total total (R$)(R$)(R$)(R$)

Nitrato de potássioNitrato de amôniaCloreto de CálcioFosfato de potássio monobásicoPeróxido de hidrogênioEDTA6-benzilaminopurinaÁcido giberélicoÁcido indolácetico

KgKgKgKglitroKg

GramaGramaGrama

111121515

338,00338,0018,0058,0018,00110,00122,50233,90112,00

338,00338,0018,0058,0036,00110,00122,50233,90112,00Ácido indolácetico

SacaroseAga bacteriológicoKit de extração de DNALâmina para bisturi nº11Nitrogênio líquidoTubo eppendorf 1,5 mlEtiquetaFita crepeLuva de procedimento tam. PPapel alumínioPlastfilmTOTALTOTALTOTALTOTAL

GramaKgKg–

CaixaLitroCaixaPacoteUnidadeCaixa

UnidadeUnidade

551135025511510

112,0024,00

520,00765,0022,008,50

17,501,393,20

12,002,152,15

112,00120,00520,00765,0066,00

425,0035,006,95

16,0012,0032,2521,50

3.386,10

RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIOCIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIOCIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIOCIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIOCIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIOCIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIOCIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIOCIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIO--------ECONÔMICOECONÔMICOECONÔMICOECONÔMICOECONÔMICOECONÔMICOECONÔMICOECONÔMICO

Utilização de variedades RB (Programa Nacional de

Melhoramento da cana-de-açúcar + micropropagação ⇒ 30%

de produtividade

Sistema de imersão temporária ⇒ 1 milhão de mudas/mêsSistema de imersão temporária ⇒ 1 milhão de mudas/mês

Renovação de até 320.000 ha entre 2009 e 2012

Avaliação dos fatores estressantes ⇒ análises bioquímicas e

moleculares

RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO RELEVÂNCIA E IMPACTO NO DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIOCIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIOCIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIOCIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIOCIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIOCIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIOCIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIOCIENTÍFICO, TECNOLÓGICO E SÓCIO--------ECONÔMICOECONÔMICOECONÔMICOECONÔMICOECONÔMICOECONÔMICOECONÔMICOECONÔMICO

Avaliação molecular ⇒ controle da sanidade e da fidelidade

genética das mudas

Caracterização do nível de estresse ⇒ avaliar até que ponto o

estresse pode estar correlacionado à variação somaclonal

Contribuir para que os agricultores obtenham mudas

geneticamente fiéis

APOIO FINANCEIRO E INSTITUCIONALAPOIO FINANCEIRO E INSTITUCIONALAPOIO FINANCEIRO E INSTITUCIONALAPOIO FINANCEIRO E INSTITUCIONALAPOIO FINANCEIRO E INSTITUCIONALAPOIO FINANCEIRO E INSTITUCIONALAPOIO FINANCEIRO E INSTITUCIONALAPOIO FINANCEIRO E INSTITUCIONAL

“O “O “O “O “O “O “O “O eueueueueueueueu--------estresseestresseestresseestresseestresseestresseestresseestresse na na na na na na na na micropropagaçãomicropropagaçãomicropropagaçãomicropropagaçãomicropropagaçãomicropropagaçãomicropropagaçãomicropropagação da canada canada canada canada canada canada canada cana--------dededededededede--------açúcar: variáveis açúcar: variáveis açúcar: variáveis açúcar: variáveis açúcar: variáveis açúcar: variáveis açúcar: variáveis açúcar: variáveis bioquímicas e moleculares”bioquímicas e moleculares”bioquímicas e moleculares”bioquímicas e moleculares”bioquímicas e moleculares”bioquímicas e moleculares”bioquímicas e moleculares”bioquímicas e moleculares”

GemimaGemimaGemimaGemima MançoMançoMançoManço de Melode Melode Melode MeloGemimaGemimaGemimaGemima MançoMançoMançoManço de Melode Melode Melode Melo

Mestranda do Programa de Mestranda do Programa de Mestranda do Programa de Mestranda do Programa de PósPósPósPós----graduaçãograduaçãograduaçãograduação em Agronomia em Agronomia em Agronomia em Agronomia ––––Melhoramento Genético de Plantas Melhoramento Genético de Plantas Melhoramento Genético de Plantas Melhoramento Genético de Plantas –––– PPGAMGP da PPGAMGP da PPGAMGP da PPGAMGP da

Universidade Federal Rural de PernambucoUniversidade Federal Rural de PernambucoUniversidade Federal Rural de PernambucoUniversidade Federal Rural de Pernambuco

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