Métodos em MicroscopiaReações citoquímicas e

imunohistoquímicas

Instituto Brasileiro de Medicina de Reabilitação

Disciplina: Biologia Celular e Molecular

- Microscopia de luz

- Microscopia de contraste de fase

- Microscopia Confocal

- Microscopia de fluorescência

Citologia: Métodos em Microscopia

Microscopia Óptica (Campo claro)

Citologia: Métodos em Microscopia

Oculares

Objetivas

Condensadora Macro/Micro

Filtros

Charriot

Células e tecidos → tratamento químico

que garanta sua preservação

Citologia: Métodos em Microscopia# Preparo de amostras

1. Fixação 2. Desidratação3. Emblocamento 4. Microtomia5. Coloração

Citologia: Métodos em Microscopia

# Coloração Hematoxilina-Eosina

Hematoxilina: cora azul estruturas ácidas (núcleo)Eosina: cora rosa estruturas básicas (citoplasma)

Microscopia de Contraste de fase

- Sistema de lentes- Luz muda de velocidade em estruturas com índice de refração diferentes- Estruturas mais claras e escuras- Células vivas

Citologia: Métodos em Microscopia

Espécimes transparentes????

Microscopia de Contraste de fase

Microscopia confocal- Plano focalizado de cada vez- Reconstrução tridimensional

Citologia: Métodos em MicroscopiaImagens NÃO são compostas de 1 plano

Superposições em foco simultâneo

Vasos sanguíneos da retina a partir do disco óptico

Glicogênio em neurônios

• Direta: Anticorpo fluorescente (fluorocromo) • Indireta: Adicionar um fluorocromo

Anticorpos → ligação específica ao antígeno Localizar moléculas-alvo

Microscópio de fluorescênciaFiltros seletivos → apenas a luz do corante usado é detectada

Citologia: Métodos em Microscopia

Microscopia Fluorescência

# Imunocitoquímica DiretaReação antígeno-anticorpo auxiliando a localização de estrutura celulares

Marcação direta

Citologia: Métodos em Microscopia

Marcação Direta

Antígeno

Coelho

Anticorpos+

Ligante

Imunocitoquímica:(anticorpo secundário)

Marcação indireta

Flurocromo verde (1 canal) Vermelho e amarelo (2 canais)

Glomérulo: Anti-IgM

T. cruzi

C. botulinum

CÉLULA E SUAS ORGANELAS

Instituto Brasileiro de Medicina de Reabilitação

Disciplina: Biologia Celular e Molecular

Unidades estruturais e funcionais dos organismos vivosForma, tamanho e funções Características estruturais =

CÉLULAS

“... De um começo tão simples, formas infindáveis, as mais belas e as mais maravilhosas, evoluíram e estão evoluindo.”

Charles Darwin - On the Origin of Species (1859)

AmbientesextremosPatogênicas

PROCARIONTES:

EUCARIONTES:

1º células surgiram há 3,5 bilhões de anos

PRINCIPAL DIFERENÇA ENTRE PROCARIONTE E EUCARIONTE?

Membrana nuclear e organelas limitadas por membrana

COMO OS CONSTITUINTES CELULARES SÃO ORGANIZADOS NAS CÉLULAS?

Procariontes Eucariontes

Citoesqueleto e membranas

Estabiliza a forma celular, organiza o citoplasma e produz movimento

CITOESQUELETO

Procariontes Eucariontes

CITOESQUELETO EUCARIONTES

• Microfilamentos - contração muscular

Actina (todas as células) e miosina

• Filamentos intermediáriosVimentina (mesênquima), desmina (músculo liso), queratina (epitélio)

• MicrotúbulosTubulina (fuso mitótico)

Diferem em:largura, composição e função

QUEM DELIMITA O QUE É INTRA OU EXTRA CELULAR?

Superfície externa da célula está em contato com outras células, com o matriz extracelular, nutrientes, hormônios, fatores de crescimento e antígenos.

MEMBRANA PLASMÁTICA DELIMITA O QUE É INTRA OU EXTRA CELULAR

MEMBRANA PLASMÁTICA

Componentes: Bicamada lipídica (colesterol, fosfolipídios) e proteínas imersas

Funções:• Limita o que é intra e extracelular

MEMBRANA PLASMÁTICA

• Regula o que entra e sai da célula (seletiva)• “Antenas moleculares” altamente específicas

Endocitose e Exocitose

GLICOCÁLICE

MEMBRANA PLASMÁTICA

TRANSPORTES DE MEMBRANA

QUAL COMPONENTE PREENCHE O CITOPLASMA?

- Partículas e organelas- H2O, proteínas, sais minerais, aa, açúcares, precursores de ácidos nucléicos

CITOSOL

CITOSOL

COMPONENTES CELULARES?

RETÍCULO ENDOPLASMÁTICO

Rede intercomunicante de vesículas achatadas Membrana contínua

RETÍCULO ENDOPLASMÁTICO RUGOSO

# Contínuo a membrana externa nuclear

# Ribossomos

# Secreção de proteínas

RETÍCULO ENDOPLASMÁTICO LISO

# Contínuo ao rugoso

# Síntese hormonal

# Fármacos

# Glicose-6-fosfataseHidrólise do glicogênio

COMPLEXO DE GOLGI

Direcionamento das proteínas“Correio”

Proteínas são modificadas (adição na cadeia lateral dos aminoácidos de grupamentos sulfato, carboidratos e lipídios)

COMPLEXO DE GOLGI

ESTRUTURAS RESPONSÁVEIS PELA DEGRADAÇÃO?

LISOSSOMOS

Vesículas esféricas com grande número de grânulos

Digerir moléculas sólidas (grandes)

Enzimas hidrolíticas

# Originados no complexo de Golgi

LISOSSOMOS

LISOSSOMOS E A DIGESTÃO CELULAR

 Pinocitose

- Líquidos extra-celulares

Fagocitose

- Partículas sólidas- Estruturas de grandes dimensões

ENDOCITOSE

FAGOCITOSE

PINOCITOSE

PEROXISSOMO

# Reações oxidativas: radicais livres# Oxidam moléculas menores → retiram átomos de H

Peróxido de hidrogênio

ORGANELA RESPONSÁVEL PELA PRODUÇÃO DE ENERGIA?

MITOCÔNDRIA

# Membrana Externa - lisa

# Membrana interna - invaginada (cristas)

# Matriz - solução aquosa com enzimas e substâncias envolvidas na produção de energia

Produtoras de ATP → ????

MITOCÔNDRIA

GLICOSE

Citosol

Ácido Pirúvico

Ácido oxalacético

CICLO DE KREBS

ATP

CENTRÍOLO

# Estruturas cilíndricas# Microtúbulos# Divisão celular“Orientam" o deslocamento dos cromossomos

Informação Genética

QUAL A FUNÇÃO DA MEMBRANA NUCLEAR?

NÚCLEO PRESENTE APENAS EM EUCARIONTES

NÚCLEO

Terra

Distância 1,5 x 1011

DNA corpo poderia ser esticado até o Sol e voltar ~ 50 vezes

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