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MÉTODOS DIAGNÓSTICOS DE INFEÇÃO LATENTE POR MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

Ramiro José Nunes Sá Lopes1

PORTO, 2013

Artigo de Revisão Bibliográfica


Ramiro José Nunes Sá Lopes1

Mestrado Integrado em Medicina do Instituto de Ciências Biomédica Abel Salazar

Ano Letivo 2012/2013

Orientador: Doutora Margarida Maria de Mendonça Correia e França2

1Instituto de Ciências Biomédicas Abel Salazar 2Assistente Hospitalar de Medicina Interna, Hospital Geral de Santo António

RESUMO

A Tuberculose (TB) permanece uma ameaça mundial sendo a segunda causa de

morte infeciosa. Os dados da Organização Mundial de Saúde (OMS) de 2012 dão conta

de cerca 9 milhões de novos casos de TB doença. Estima-se que cerca de 2 biliões de

indivíduos estejam infetados de forma latente pelo Mycobacterium tuberculosis (MT)

representado um grande reservatório para potencial disseminação e reativação.

Existe uma enorme variabilidade no curso de uma infeção por MT porém apenas

5-10% desenvolverão TB doença no decurso da vida, permanecendo os restantes com a

forma latente.

Existem numerosos fatores que colocam determinados grupos em maior risco de

serem portadores de infeção ou tuberculose latente (TL) e com maior risco de

desenvolver doença. Entre eles encontram-se os indivíduos com infeção por Vírus da

Imunodeficiência Humana (VIH), os doentes a receber terapêuticas imunossupressoras,

as crianças com menos de 6 anos de idade, os prestadores de cuidados de saúde e os

imigrantes de países com elevada prevalência de TB. Desta forma e após excluir TB

doença, torna-se necessário usar testes que detetem a TL para se poder instituir

terapêutica profilática.

Os testes disponíveis são a Prova Tuberculínica (TST), os testes baseados no

Interferon Gama Release Assay (IGRA) e, mais recentemente o doseamento da Proteína

10 Indutível pelo Interferão ϒ (IP10). A sua aplicação está dependente da sensibilidade e

especificidade de cada um.

Existem dados que sugerem a possibilidade de usar quer o TST quer os testes

IGRA dependendo do objetivo pretendido. Se esse for aumentar a especificidade, então

confirma-se a positividade de um resultado TST com o IGRA. Por outro lado, se o

objetivo for aumentar a sensibilidade, confirma-se a negatividade de um resultado TST

com o IGRA. Existem, no entanto, particularidades no seu uso dependendo do grupo em

que são usados.

PALAVRAS CHAVE: Tuberculose latente; Prova Tuberculínica; Testes IGRA; IP10;

Grupos de Risco; Sensibilidade; Especificidade.

ABSTRACT

Tuberculosis (TB) stills a worldwide threat being the second major infectious cause

of death. The 2012 World Health Organization data reported about 9 million of new TB

cases. Latent infection or tuberculosis (LT) by Mycobacterium tuberculosis (MT) is

estimated in 2 billion persons, representing the biggest reservoir for spread and

reactivation.

There’s an enormous progression possibilities for the MT infection, but only 5-10%

will have TB in their lifetime. The other will maintain the latent form.

There’re a lot of factors that contribute to increase the risk for latent infection and

for the progression to TB in some individual groups. Some of them are patients infected

with Human Immunodeficiency Virus (HIV), patients in immunosuppressant treatment,

children younger than 6 years old, healthcare workers and migrants from countries with

high TB prevalence. So, and after the exclusion of TB, there’s the need of biochemical

tests to detect LT to decide about prophylactic therapy.

There are available the Tuberculin Skin Test (TST), the Interferon Gama Release

Assay (IGRA) test and, recently developed the Interferon gamma-induced protein 10 (IP-

10). Sensibility and specificity of each one will set their use.

Some data suggests the possibility of TST and IGRA test use but it depends on

the main target. If the target is to increase the specificity , we have to use the IGRA to

confirm a positive TST result. In the other hand, if we need to increase the sensibility, we

need to use the IGRA to confirm a negative TST result. There are some special features

in their use dependent of the group of persons they will be used.

KEY WORDS: Latent Tuberculosis; Tuberculin Skin Test; IGRA test; IP10; Risk Groups;

Sensibility; Specificity


Ramiro José Nunes Sá Lopes 5

INTRODUÇÃO

A TB continua a ser um problema de saúde mundial. Segundo o Global

Tuberculosis Report 2012, afecta milhões de pessoas e, a nível mundial é considerada a

segunda causa de morte por doença infeciosa, depois da infeção pelo VIH, tendo-se

registado 9 milhões de novos casos em 2011 e 1,4 milhões de mortes (990 000 em VIH

negativos e 430 000 em VIH positivos). É no continente asiático e em África que se

verifica o maior número de casos. Destes, a Índia e a China totalizam 40% dos mesmos.

Em África registaram-se 24% dos casos e é onde se regista o maior número de mortes

per capita. Em 80% dos casos de TB coexiste infeção pelo VIH. Em crianças com menos

de 15 anos, estima-se a existência de 0,5 milhões de casos e 64000 mortes em 20111.

Calcula-se que um terço da população mundial esteja infetada pelo MT, e as estimativa

nos Estados Unidos da América (EUA) dão conta de mais de 11 milhões de indivíduos

infetados de forma latente2.

Dados do Programa Nacional Contra a Tuberculose3 dão conta de 2480 novos

casos e re-tratamentos em 2012, tendo-se assistido a um decréscimo de 6,1

comparativamente a 2011. Apesar de se continuar a assistir a uma diminuição constante

da taxa de incidência, Portugal continua a ser um país de incidência intermédia, o único

na Europa Ocidental. A prevalência TL em Portugal é estimada entre 15%4 e 25%5 no

total de indivíduos rastreados.

O agente etiológico da TB é o MT, um bacilo álcool-acido resistente, e a

transmissão é feita pelo contato com um individuo com doença ativa6, 7. A TB tem

manifestação pulmonar em cerca de 85% dos casos e extrapulmonar nos restantes8-10.

Existe uma grande variabilidade no curso da infeção. Algumas pessoas mantêm-se não

infetadas apesar de exposição prolongada6, 11, 12.Estima-se que 30% dos indivíduos

expostos terão evidência de infeção6, mas só 5-10% terão manifestações de TB doença

nos 2 anos após exposição. No entanto, na maioria dos indivíduos a infeção por MT

induz uma resposta imunitária especifica adquirida mediada por células que inibe o

crescimento do bacilo, não o erradicando11, 13. Nestes casos, estabelece-se um estado de

TL , o maior reservatório para uma potencial transmissão11, 14, 15.

A TL não é causa de morte. O risco está na reativação e na transmissão

silenciosa subsequente6, 7, 16, 17. Nos EUA, 47-87% dos casos de TB doença são

atribuídos à reativação de TL. Estima-se que 10% dos indivíduos infectados

desenvolverão doença ao longo da sua vida e, em indivíduos imunodeprimidos, como os

VIH-positivos, o risco aumenta para cerca de 10% ao ano18.

A infeção inicia-se com a entrada dos bacilos nos alvéolos e a sua fagocitose

pelos macrófagos e células dendríticas residentes. Como já dito anteriormente, a maioria



dos indivíduos expostos não fica infetado, facto que sugere a possível existência de

indivíduos resistentes à infeção, com influência importante da resposta imunológica inata

no contato inicial das células dendríticas e macrófagos com o bacilo. O MT ou os seus

componentes são reconhecidos por receptores do hospedeiro como os receptores Toll-

like (TLRs), os receptores NOD-like (NLRs) e as lecitinas tipo C8, 19, 20. A interação do MT

com os TLRs inicia a sequência de sinalização intracelular levando a uma resposta pro-

inflamatória, com ativação do Factor de Transcrição Nuclear (NF)-kB e produção de

citoquinas pro-inflamatórias como Fator de Necrose Tumoral (TNF)- α, interleucinas (IL)-

1, IL-12, quimiocinas e ácido nítrico, também através da resposta dependente de

diferenciação mieloide primária da proteína 88 (MyD88) ou do pathway independente de

MyD8819, 21. Existe evidência de que os TLR são importantes na resposta inicial à infeção

por MT19, 22-25, e que a deficiência do MyD88 em ratos aumente a susceptibilidade ao MT,

facto este também encontrado em polimorfismos genéticos dos TLR’s26-28.

É então iniciada uma resposta mediada por células T (quer CD4+ quer CD8+)

pelo estímulo feito pelos antigénios e pelas células dendríticas nos gânglios linfáticos

mediastínicos. Após o início da resposta T, há migração de linfócitos ativados e

macrófagos, juntamente com outras células do hospedeiro, para o local primário de

infeção, onde se estabelece a formação de um granuloma6 29-31. Tal acontecimento

representa uma barreira física e imunológica de contenção da infeção e disseminação,

permitindo aqui a interação entre os macrófagos e outras células imunitárias e as

citoquinas por eles produzidas. As células TCD4+ produtoras de interferão gama (INF-ϒ)

identificam e eliminam os macrófagos infetados32. Desta forma, estabelece-se um

processo dinâmico contínuo de controlo imunológico da replicação bacteriana. Contudo,

alguns bacilos resistentes às condições de stress no hospedeiro escapam à eliminação e

entram num estado de latência33-35.

A transição entre a infeção controlada e o estabelecimento de infeção latente

ainda não é bem conhecida. No entanto, o aumento do INF-ϒ reflete aumento da

atividade e carga bacteriana, sugerindo que o controlo precoce bacteriano no pós-infeção

é determinante no estabelecimento de TL6.

A principal característica da TL em humanos é a incapacidade de eliminar o MT.

Os bacilos desenvolveram inúmeras estratégias de forma a contornar e modificar a

resposta imunitária das células do hospedeiro infetado, evitando a sua eliminação e

persistindo no hospedeiro. Foram identificados fatores como ManLAM (componente do

MT) ou a lipoproteína 19 kDa que modulam a cascata de apresentação de antigénios,

inibindo as funções microbiocidas dos macrófagos e de outras células, inibindo até a sua

maturação. Uma parte do genoma do MT também se especializou em promover a



sobrevivência intracelular dentro das células dos mamíferos como os macrófagos,

através de fosfolipases codificadas por proteínas regulatórias plcA, plcB, plcC e plcD e

proteínas codificados por operões mce8, 36, 37.

Diversos fatores podem ser envolvidos na reativação de TL provocando a saída

do estado prévio de latência do MT para um estado de doença. Tal fato acontece por

enfraquecimento ou debilidade do sistema imunitário alterando-se o equilíbrio dinâmico

de contenção antes estabelecido8, 38. A infeção VIH é o fator de risco mais importante

para a progressão para TB doença em adultos por causar diminuição de células TCD4+ e

alteração funcional das células TCD4+ e CD8+, essenciais na prevenção de doença1.

Outros factores como má nutrição e patologias que enfraquecem o sistema imunitário

como a Diabetes Mellitus (DM) , Insuficiência Renal (IR) e terapêutica com fármacos

imunossupressores, contribuem para estados de imunodepressão e reativação de TL8, 38-

42.

Sendo assim, o diagnóstico ou rastreio de TL torna-se essencial e é efetivo em

dois grupos de indivíduos, sendo que apenas deve ser feito se o processo seguinte de

tratamento estiver garantido para quem for elegível43. No primeiro grupo aqueles em risco

de contrair doença por MT, e no segundo grupo aqueles com risco de progressão de TL

para TB doença (Tabela 3)42, 44-50.

Existem vários testes bioquímicos para o diagnóstico ou rastreio de TL. O primeiro

passo deve ser a exclusão de TB doença através de história clínica e radiografia

pulmonar43, 51, após a qual se podem usar o IGRA, o TST e mais recentemente surgiram

evidências da utilidade no doseamento da IP10.



MÉTODOS DIAGNÓSTICOS DE INFEÇÃO LATENTE POR MYCOBACTERIUM

TUBERCULOSIS

Os indivíduos infetados de forma latente não mostram quaisquer sinais clínicos ou

radiológicos de TB. A forma de rastrear esses casos baseia-se na detecção de

marcadores imunológicos resultantes de uma possível resposta imunológica eficaz11.

A melhoria dos métodos de diagnóstico de TL por MT é um passo fulcral para

cumprir o objectivo da erradicação da TB exposto na estratégia da OMS. Tal objetivo é

também partilhado pelo Centro Europeu de Prevenção e Controlo de Doenças com o

Plano de Ação de Luta contra a Tuberculose na União Europeia52-54. De forma a tentar

atingir aquele objetivo, é necessário identificar os indivíduos infetados com MT para lhes

oferecer tratamento preventivo de forma a travar o aparecimento de novos casos de

doença e prevenir a sua transmissão43, 51, 55. Por isso, e na inexistência de um método

Gold-standard para o diagnóstico, é necessário que se desenvolvam meios mais

sofisticados para a detecção de TL, que antes de serem adoptados no mercado bem

como pelas guidelines nacionais, necessitam de ser comprovados com base em

evidência documentada 53, 56, 57.

Até 2001, o TST era o único método diagnóstico de TL. Este foi primeiramente

descrito por Robert Koch em 1890 e chamado teste de Mantoux após ter sido posto em

prática em 1907 por Charles Mantoux e Clemens von Pirquet11, 58. A tuberculina é um

estrato de glicerol da micobactéria e, o derivado de proteínas purificadas (DPP) é um

precipitado não espécie-especifico obtido de filtrados de culturas micobacterianas. Deve-

se fazer a administração de 0,1 mL de 5 unidades de tuberculina (UT) purificada,

bioequivalente à dose de 5UT de DPP-S (standardizada) ou de 2UT de DPP RT23 SSI,

injetado na derme da face anterior do antebraço esquerdo. Esta última formulação é a

recomendada pela OMS para o diagnóstico de TL43. Este procedimento provoca o

aparecimento de uma pápula num período de 48-72h, sendo que quando existem

reações positivas se pode prolongar por uma semana44, 46. Este teste provoca uma

reação clássica de hipersensibilidade tardia mediada por células T (HTT)11, 59, 2 a 12

semanas após a infeção pelo MT11, 47. Na interpretação do resultado do teste, deve ser

medido o diâmetro transverso, em milímetros, da induração e não do eritema. O método

pode variar entre palpar ou delimitar com uma esferográfica os limites da pápula e, deve

ser medido o maior diâmetro ao longo do antebraço, perpendicular ao maior eixo46.

Os critérios para uma reação positiva dependem do status de saúde do doente,

bem como do risco de TB do mesmo, determinando por isso diferentes cut-off.



REAÇÃO ≥ 5mm REAÇÃO ≥10 mm (continuação)

• Indivíduos com infeção VIH;

• Indivíduos transplantados, ou que estão

imunocomprometidos (incluindo aqueles

com doses ≥15mg/dia de Prednisolona ou

equivalente por mais de 1 mês, ou com

terapêutica imunossupressora);

• Contatos recentes com indivíduos com TB

ativa conhecida não vacinados com BCG.

• Seguintes condições clínicas:

-‐ Indivíduos com ≥10% do peso abaixo do

normal com suspeita de doença;

-‐ Doença Renal Terminal;

-‐ Diabetes M;

-‐ Gastrectomizados ou com bypass intestinal;

-‐ Neoplasia;

-‐ Silicose;

• Residentes/funcionários das seguintes

instituições de alto risco:

- Cadeias;

- Lares de cuidados a idosos, ou pacientes

com imunodeficiências adquiridas;

- Hospitais;

- Lares de acolhimento de sem-abrigos.

REAÇÃO ≥10 mm

• Crianças com <4anos, ou adolescentes

sem BCG com contato com adultos com

alto risco;

• Minorias étnicas e raciais com alto risco;

• Imigrantes provenientes de países de

elevada prevalência de TB nos últimos 5

anos;

• Indivíduos utilizadores de drogas

endovenosas, ou de outras de alto risco

(e.g. crack, cocaína);

• Funcionários de laboratório;

REAÇÃO ≥15mm

• Indivíduos sem fatores de risco para TB

independentemente do estado vacinal e de

contato.

Tabela 1. Critérios de positividade do TST consoante grupo de risco42, 43, 47-50, 60, 61

Os critérios para um resultado positivo variam de região para região e dependem

da dose e do tipo de antigénios proteicos usados no teste. Em muitos países o uso de 2

UI de preparado de DPP RT23 (Statens Serum Institut, Dinamarca) provoca uma

induração que sendo ≥6mm (num país de baixa prevalência como a Noruega14), ou ≥10

mm (num país de média prevalência como a Polónia62) é considerado positivo. Uma dose

maior de 5UI de DPP foi usado para estimar a frequência de resultados positivos em

indivíduos com contatos próximos com TB doença, e sem-abrigo em Itália. Foram

considerados positivos os resultados com pelo menos 5mm de induração em indivíduos

com contatos próximos e naqueles sem abrigo e trabalhadores saudáveis sem contacto

com MT e com uma induração ≥ 10mm63.

As taxas de testes TST falsos-negativos situam-se entre 10 a 20% em doentes

com infeção MT comprovada e com integridade imunológica conservada47, 64. Existe uma

vasta lista de factores que provocam reações falso-positiva e falso-negativa.



Falsos-positivos Falsos-negativos (continuação)

• Efeito boost;

• Reações cruzadas com infeções causadas

por outras Micobactérias não tuberculosas;

• Erros na execução do teste;

• Vacinação prévia com BCG.

• Erros na leitura do teste;

• Vacinas com vírus atenuados como

papeira, rubéola, poliovírus;

• Má nutrição;

• Insuficiênia Renal;

• Sarcoidose;

• Infeções víricas, fúngicas e bacterianas

sistémicas;

• Uso de terapias imunossupressoras;

• Deficiência de Zinco

Falsos-negativos

• Síndrome de Imunodeficiência Adquirida;

• Alcoolismo;

• Gastrectomia ou bypass intestinal;

• Doenças linfoproliferativas;

Tabela 2- Causas de resultados falso-positivos e falso-negativos61, 65

A vacinação com Bacilo de Calmette-Guérin (BCG), usada em áreas endémicas

de forma a prevenir formas graves de TB doença na primeira infância, é uma causa

notável de resultados falsos-positivos46. Num estudo, o TST com 5UI de DPP RT23 feito

a indivíduos com TB doença e em indivíduos saudáveis, todos eles vacinados com BCG

e pertencentes a uma área endémica (China), provocou uma induração ≤ 5mm em 42,7

e 37,7% respectivamente, 5-10 mm em 18,4 e 28,3%, e ≥10mm em 55,3 e 34,0%

respetivamente. A diferença da frequência bem como da induração provocada pela

injeção de DPP nos dois grupos não foi muito diferente provavelmente devido ao efeito

da vacinação com BCG66. Como é sabido, a vacinação com BCG resulta no

desenvolvimento de HTT ao DPP62. Este facto limita largamente o uso do TST para a

detecção de TL particularmente em países onde é feita vacinação de rotina com BCG em

crianças11, não permitindo distinguir uma reação positiva no TST entre a vacinação com

BCG e entre a infeção por MT11, 67. Similarmente, a reatividade do TST pode diminuir

após uma infeção micobacteriana. Num primeiro TST, o doente pode não apresentar

induração, mas esse procedimento provocou um efeito boost no sistema imunitário, e um

próximo TST pode provocar reação. Em profissionais de saúde, o TST poderá ser

interpretado como positivo, indicando erradamente infeção recente. Para estabelecer

uma reação TST exata, estes indivíduos deveriam fazer um teste em dois tempos, em

que seria realizado um novo TST entre uma e três semanas após um teste negativo

inicial61. Este procedimento determinará se ocorreu ou não infeção prévia. Porém, na

investigação com indivíduos com contato com outros infetados com TB doença não existe

lugar a este tipo de procedimento em dois tempos46. Contato próximo é definidos como

sendo aquelas pessoas que vivem na mesma casa ou em condições similares ou em



contato persistente ou recorrente, com um caso de tuberculose infeciosa em espaço

confinado e por um período acumulado de pelo menos 8h43.

Grandes variações na performance do TST e na interpretação dos resultados

tornam muito difícil fazer uma estimativa da sua sensibilidade e especificidade na

detecção de TL11. Uma meta-análise com 20 estudos mostrou que a sensibilidade do

TST é heterogénea, com uma estimativa combinada de 77% (IC95%, 71-82%). A

especificidade em populações não vacinadas com BCG é elevada com uma estimativa

combinada de 97% (IC, 95-99%). Já a especificidade em populações vacinadas com

BCG é baixa e heterogénea, 59% (IC95%, 46-73%)68. Noutro estudo compararam-se

taxas de sensibilidade e especificidade de vários testes, incluindo o TST, em indivíduos

com culturas positivas para MT. A sensibilidade estimada do TST foi calculada em 89%, e

a sua especificidade estimada em 85%56, 69. Noutros estudos, a especificidade varia

entre 15% numa população japonesa com vacinação BCG repetida70 e 99% em

indivíduos canadianos não vacinados com BCG71. Apesar do TST continuar a ser usado

para o rastreio de TL e para tomadas de decisão sobre quimioprofilaxia e tratamento, a

sua desvantagem mais importante é a sua baixa especificidade11, 72. O DPP contém mais

de 200 antigénios, que não sendo específicos do MT, também estão presentes na vacina

BCG de M. Bovis e em várias cadeias micobacterianas no ambiente, não diferenciando

as possíveis reações cruzadas73. A sua sensibilidade foi também baixa em indivíduos

VIH-positivos e outros imunocomprometidos nos quais o risco de progressão para doença

é elevado15, 74. Nos primeiros, a reatividade do TST diminui drasticamente com a redução

das células TCD4+. Também se constatou que muitos indivíduos imunocompetentes e

com TB confirmada não respondem ao DPP aquando do diagnóstico devido à anergia74.

Contudo, o TST apresenta muitas vantagens e, sendo um teste centenário

frequentemente usado e com aplicações clínicas amplamente estudadas, tem pontos de

cut-off estabelecidos nas indicações de Terapêutica Preventiva com Isoniazida (TPI) para

diferentes idades e grupos de risco75, 76. Mais importante, o benefício de TPI em grupos

com TST positivo foi extensamente provado, bem como o foi a sua ausência nos casos

de TST negativo76, 77. A conversão é definida como uma induração de mais de 10 mm

com um aumento de pelo menos 6mm relativamente ao resultado anterior. Espera-se,

assim, que 95% dos indivíduos apresentem um aumento de menos de 6mm sem relação

com exposição a MT. Em suma, a principal aplicação do TST é na detecção de TL mas o

seu valor preditivo positivo para doença ativa encontra-se limitado (cerca de 3%). Deve

haver uma contextualização na interpretação dos resultados tendo em conta a situação

clinica e epidemiológica para permitir a avaliação do risco de doença75.



Desenvolveram-se entretanto novos testes para a detecção de TL, sendo os IGRA

atualmente os mais promissores44. O conhecimento completo da sequência genómica da

micobactéria levou à descoberta de uma região de diferença (RD1) que está presente em

todos MT e em todos os M. bovis patogénicos mas ausente das cadeias do BCG e de

micobactérias atípicas78. Tal região constitui um dos mais interessantes loci genómicos

do bacilo tuberculinico pois existem indícios do seu envolvimento na promoção da

virulência micobacteriana uma vez que codifica duas proteínas secretoras, Early Secretor

Antigenic Target-6 (ESAT-6) e Culture Filtrate Protein-10 (CFP-10)79. Descobriu-se que

estes dois antigénios são fortes indutores da produção de INF-Υ e do desenvolvimento

de HTT em animais72, 78. O ESAT-6 recombinante (rESAT-6) obtido de E.coli foi usado

com sucesso como antigénio no diagnóstico com teste intradérmico de TB em humanos80,

81. A combinação do rESAT-6 e o CFP-10 é mais especifica que o DPP quer no

diagnóstico in vitro quer in vivo da infeção por MT, facto este encontrado num estudo11, 82 83. Assim, este complexo antigénico parece ser muito promissor na identificação de TL,

podendo vir a substituir o DPP como reagente do teste intradérmico11. A base do

desenvolvimento dos IGRA é a forte antigenicidade do ESAT-6 e do CFP-10. São testes

diagnósticos que medem a libertação de INF-ϒ pelos linfócitos T como resposta aos

antigénios específicos do MT. Em 2001 o primeiro IGRA aprovado pela Food and Drugs

Administration (FDA) como arma de detecção da infeção por MT foi o QuantiFERON-TB

(QFT) 69, 84. Este teste usa o método Enzime-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) de

forma a medir o INF-ϒ produzido em resposta ao DPP comparando com controlos. A

especificidade do QFT era menor que a do TST apesar de usar o M. avium como controlo

para a sensibilização de bactérias não tuberculosas e uma solução salina como controlo

negativo. Encontra-se agora fora do mercado69.

Para melhorar a especificidade ao longo dos anos foram desenvolvidos mais 3

testes IGRA. Estes avaliam a resposta a péptidos sintéticos sobrepostos que

representam proteínas especificas do MT, como a ESAT-6 e o CFP-1085. Assim, como

antigénios, essas proteínas constituem um teste com especificidade melhorada quando

comparados com o DPP. Contudo, aquelas proteínas estão presentes no M. kansasii, M.

szulgai, e M. marinum e, funcionam como antigénios que provocam sensibilização e

induzem produção de INF-ϒ, facto este que pode estar na origem de resultados falsos-

positivos em alguns testes IGRA. Como a ESAT-6 e o CFP-10 são reconhecidos por

poucos linfócitos T e a sua estimulação na libertação de INF-ϒ é menor que a dos DPP,

foi necessário desenvolver um novo teste ELISA mais sensível que aquele usado no

QFT, para medir as concentrações de INF-ϒ e as respostas do ESAT-6 e CFP-1069. Em

2005 foi aprovado um novo IGRA, o QuantiFERON-TB Gold (QFT-G) que detecta a



resposta imunológica de indivíduos testados para o ESAT-6 e CFP-10. Neste teste,

porções (alíquotas) separadas de sangue são incubadas com controlos e duas misturas

separadas de péptidos, uma que representa o ESAT-6 e outra o CFP-10. A quantidade

de INF-ϒ libertada em resposta àqueles antigénios, é calculada como a diferença na

concentração de INF-ϒ no plasma do sangue incubado com controlo. No QFT-G, é

considerada a maior resposta com ESAT-6 ou CFP-10 como resposta a TB. Uma das

condições para a aprovação pela FDA foi o facto de ter sido correlacionado o valor obtido

no controlo (> 0,7 UI/mL) com o potencial para resultados falsos-positivos 69.

As guidelines86 do Centre for Disease Control (CDC) de 2005 indicam que o QFT-

G pode ser usado em todas as mesmas circunstâncias que o TST era recomendado,

incluindo investigação de contactos, avaliação de imigrantes recentes, e nos vários

sistemas de rastreio (exemplo profissionais de saúde)86, apesar de fazerem ressalva no

caso de rastreios em pessoas com risco aumentado para progressão para TB , como é o

caso de profissionais de saúde ou imigrantes provenientes de países de alta prevalência

de TB69. Os IGRA devem medir a produção de INF-ϒ, e para o fazerem de uma forma

rigorosa, é necessária uma amostra de sangue que contenha leucócitos viáveis. Tal

exigência limita o uso dos primeiros IGRA às instalações dos laboratórios onde indivíduos

experientes poderiam iniciar o processo de análise e teste após algumas horas após a

colheita de amostras69. Para contornar esta limitação, foi desenvolvido o QuantiFERON-

TB Gold In-Tube (QFT-GIT), sendo aprovado em 2007 pela FDA84. Neste teste, os

materiais de controlo e os antigénios para o QFT-GIT estão em tubos especiais para

fazer a colheita de amostras de sangue diretamente. Um tubo contém os antigénios que

consistem numa mistura de 14 péptidos representantes da sequência de aminoácidos do

ESAT-6 e do CFP-10 e ainda o péptido micobacteriano TB7.7(p4). Mais dois tubos

servem como controlos, o positivo contendo heparina, e o e negativo com heparina,

dextrose e fitohemaglutinina. É colhido e misturado 1mL de sangue em cada tubo, e

incubados durante 16-24h. O plasma é separado e a concentração do INF-ϒ no plasma é

determinada usando o mesmo ELISA do QFT-G. A resposta é verificada usando o

mesmo princípio do QFT-G69.

Em 2008, foi aprovado um quarto teste, o T-Spot (T-SPOT.TB)87. É um teste tipo

Enzime Linked Immunospot Assay (ELISPOT)11 que mede o número de linfócitos T

produtores de INF-ϒ após estimulação com duas mistura de péptidos, uma representada

pela sequencia completa de aminoácidos do ESAT-6 e outra com a sequência completa

de aminoácidos do CFP-1069. As moléculas de INF-ϒ secretadas pelas células

responsivas aos antigénios, ligam-se especificamente a anticorpos anti- INF-ϒ

monoclonais imobilizados numa placa88. Todas as células T especificas para o MT e



produtoras de INF-ϒ são vistas como pontos pretos que são contados usando

dispositivos de ampliação ou um contador automático11. Comparando com o teste QFT-

GIT, o T-SPOT.TB requer fraccionamento de células mononucleares de sangue

periférico, facto que torna este teste mais complicado de efetuar. No entanto, garante um

numero fixo de células em cada ensaio11. Apenas estes dois últimos IGRA se encontram

no mercado.

A avaliação da performance dos IGRA tem sido complicada pela inexistência de

um método Gold-standard para o diagnóstico de TL. A maioria dos estudos, de forma a

avaliar a validade destes testes, baseia-se no uso de aproximações ou representantes da

TL como a TB doença, gradientes de exposição a TB, taxas de incidência de TB em

coortes não tratados e em resultados de estudos randomizados que comparam o

benefício da TPI em doentes com testes positivos e com testes negativos75.

A maioria dos estudos sobre a sensibilidade dos IGRA foram realizados em

indivíduos com TB doença tendo como fundamento o facto de que tais doentes estavam

necessariamente infetados. A maior desvantagem desta aproximação deve-se ao facto

de os doentes com TB doença têm comummente imunodepressão devido à doença ou à

má nutrição, limitando resposta quer a antigénios específicos usados nos IGRA e mesmo

no TST68. Por essa razão, a sensibilidade apresentada nos vários estudos para os IGRA

e também para o TST na detecção de TL está provavelmente subestimada. Por outro

lado, a especificidade foi estimada a partir de indivíduos que se acredita não terem sido

expostos a antigénios do MT, facto este difícil de provar75. Numa meta-análise68 foi

estabelecido o valor diagnóstico dos IGRA no diagnóstico de TL. A sensibilidade foi

determinada usando doentes com diagnóstico recente de TB doença, como

representante de TL. Os estudos foram realizados em países de baixa e elevada

prevalência de TB e foi encontrada uma sensibilidade combinada de 78% (IC 95% 73-

82%) para o QFT-GIT e de 92% (IC 95% 90-93%) para o T-SPOT.TB. As sensibilidades

encontradas quer do TST quer do QFT-GIT foram muito heterogéneas, possivelmente

devido à infeção por VIH, doença avançada, e/ou malnutrição, fatores que reduzem a

resposta imunitária75.

Estudos sobre a especificidade dos IGRA foram realizados em países de baixa

prevalência de TB e com diferentes politicas sobre a vacinação com BCG. Estes,

encontraram uma especificidade combinada de 98% (IC 95% 96-99%) para todos os

testes QFT-GIT, com uma pequena diferença reduzida entre indivíduos vacinados com

BCG e não vacinados (96% vs 99%, respectivamente). Para o T-SPOT.TB a

especificidade combinada é de 93% (IC 95% 86-100%)68.



O princípio na avaliação da performance dos testes quanto ao gradiente de

exposição baseia-se na proporção de resultados positivos que deve ter correlação direta

com o gradiente de exposição a TB, sendo que o melhor teste deve demonstrar uma

correlação positiva o mais próxima possível com o gradiente75. Porém, torna-se difícil

quantificar o grau exato de exposição a TB. Foi usado este método num total de 10

estudos em populações pediátricas89-98, com uma enorme variação na definição de

grupos com exposição a TB. No entanto, quer para o TST quer para os IGRA, a

performance foi semelhante99.

Outro facto importante para a avaliação da validade dos testes diagnósticos, é a

sua capacidade para reconhecer quais os indivíduos com TL vão progredir para TB

doença, pois estes beneficiarão de TPI. Até agora, os IGRA mostraram ter uma baixa

capacidade de prever a progressão de TL para TB doença, apesar de indivíduos com

IGRA positivos se mostrarem em maior risco para progressão que aqueles com TST

positivos100-102. Recentemente, o valor preditivo dos TST e IGRA foi analisado por duas

meta-análises100, 103. Uma revisão incluiu 15 estudos que compararam a incidência de TB

doença em IGRA e TST positivos103 incluindo crianças, prestadores de cuidados de

saúde e indivíduos com infeção VIH99, 104, 105. Desses, 5 analisaram o risco de progressão

para TB doença em indivíduos com infeção VIH , e 3 dos quais mostrando um maior risco

de progressão quando comparados resultados de IGRA positivo com negativo106-108, ao

contrário dos outros 2 74, 109. Contrastando e estando muito bem documentado pro vários

estudos, é o facto de um doente com infeção VIH e tendo um TST positivo, é grande o

risco de progredir para TB doença assim como o benefício da TPI nessas mesmas

circunstâncias77, 110. Em geral, as taxas de incidência de TB num tempo médio de 4 anos,

em indivíduos com TST e IGRA positivos, são muito baixas (3,7-4,8 e 1,0-4,5/1000

indivíduos/ano, respectivamente), demonstrando que ambos os testes têm um baixo valor

preditivo para TB doença75. Outro estudo sobre o valor preditivo dos IGRA e TST concluiu

que, apesar de as taxas de progressão com um IGRA positivo serem mais elevadas que

com um TST positivo (2,7% vs 1,5%), ambos apresentam valores absolutos muito

baixos100.

Mais importante do que estabelecer o rigor e o valor preditivo destes testes é

estabelecer e avaliar o benefício de TPI na redução do risco para progressão para TB

doença em indivíduos com resultados positivos. Enquanto que para indivíduos com

resultados positivos no TST existe uma forte evidência de proteção com TPI76, 77, não há

estudos que demonstrem evidência direta na eficácia da TPI baseada em resultados dos

IGRA. Um estudo recente no Botswana mostrou um forte impacto na sobrevivência, com



TPI de longo-termo em indivíduos com infeção VIH e com resultado TST positivo e, um

beneficio reduzido em indivíduos com infeção VIH e TST negativo110, 111.

A conversão do TST reflete, normalmente, infeção recente. O risco de progressão

para doença em indivíduos com conversões recentes mantém-se elevado, sendo por isso

recomendada a TPI, independentemente do status VIH ou dos dados sobre a incidências

da TB75.

Visto existir semelhança entre o TST e os IGRA nos estudos de coorte, será

razoável pensar que a TPI em indivíduos com resultado IGRA-positivo possa garantir o

mesmo benefício que em indivíduos imunocomprometidos com resultado TST-positivo,

continuando por validar a ausência de benefício em casos de IGRA negativo112.

A procura de alternativas para a detecção de marcadores de TB levou vários

estudos à identificação de uma quimiocina chamada Proteína 10 Indutível pelo Interferão

ϒ (IP10)113. Também chamada de CXCL10, pertence à família das quimiocinas-CXC. As

quimiocinas são uma classe de citocinas com propriedades quimiotáticas,

desempenhando um papel importante na ativação e migração leucocitária. A IP10 é

expressa quer em linfócitos quer em monócitos e está envolvida no recrutamento de

linfócitos Th1 para áreas de inflamação, onde se liga ao CXCR3 (um receptor partilhado

pelo IP10, Mig e I-TAC)114. O RNAm CXCR3 é expresso somente em células T e, por

isso, o IP10 difere de outras quimiocinas por ter como alvo especifico os linfócitos, não

tendo qualquer atividade nos neutrófilos. Estudos em adultos encontraram altos níveis de

IP10 relacionados com reações de hipersensibilidade tardia a DPP da Tuberculina113, em

estudos histológicos de biopsias ganglionares e pulmonares com evidência de

granulomas115, em derrames pleurais e em plasma de pacientes infetados com MT116, 117

e, em plasma de indivíduos com co-infeção VIH-TB e diagnosticados com Síndrome

Inflamátorio de Reconstituição Imunológica(SIRI)118. Existem também sugestões de que o

IP10 é um marcador da eficácia do tratamento de TB117. Os níveis de IP10 são mais

elevados em indivíduos com sintomas sistémicos como anorexia e febre118. Indivíduos

(adultos e crianças) com contato com portadores de TB doença, também apresentaram

valores mais elevados de IP10 que os controlos, sugerindo o seu potencial como

marcador para o diagnóstico de TL117, 119. Num estudo com crianças entre os 2 meses e

os 16 anos, a IP10 foi usada como biomarcador para diferenciar TB doença de TL120.

Apesar de ter sido demonstrado que o IP10 é um marcador para TB doença e TL, não se

demonstrou ser útil para fazer a discriminação entre ambas120. Notaram também que o

nível basal de IP10 é mais elevado na TL que na TB doença, provavelmente devido a um

estado crónico de inflamação associado à tentativa de controlo da infeção por MT pelo

sistema imunitário. Por outro lado, o efeito imunossupressor na TB doença, que altera a



resposta às quimiocinas, pode explicar essas diferenças. No entanto, não há dados

suficientes para validar estes factos como possível valor prognóstico de progressão de

TL para TB doença120. Noutro estudo121 comparou-se a sensibilidade do teste baseado

na IP-10 com o QFT-GIT no diagnóstico de infeção por MT em indivíduos VIH positivos e

negativos com cultura positiva para TB doença. A performance do QFT-GIT é alterada

pela contagem reduzida de TCD4+ em indivíduos VIH positivos e, diminui juntamente

com a sua sensibilidade. Contrariamente, demonstraram que o IP-10 não é influenciado

pelo número de células TCD4+. A sensibilidade do IP-10 em VIH-negativos foi estimada

em 86% (IC 95%), e 76% (IC 95%) em VIH-positivos. Já para o QFT-GIT, a sensibilidade

em VIH-negativos foi de 88% (IC 95%), enquanto que para VIH-positivos foi de 82% (IC

95%). Concluíram também que entre pacientes de baixo risco, a combinação destes dois

testes aumenta a sensibilidade para 96% (IC 95%) em VIH-negativos, e para 88% (IC

95%) em VIH-positivos, sem alterar a especificidade121. No entanto, uma das limitações

deste estudo é a inexistência de um grupo de controlo, o que compromete a avaliação da

especificidade.

No estudo de Whittaker120, apesar de terem sido encontradas maiores taxas de

estimulação do INF-ϒ na TL que na TB doença, esses resultados não foram

estatisticamente significativos, e como tal, não podem ser usados como teste diagnóstico.

Embora o IP10 ainda não pareça suficientemente sensível e específico para superar o

QFT-GIT como ferramenta de diagnóstico de TB, ou para distinguir TB doença de TL,

levanta a hipótese de que os elevados níveis de IP-10 em amostras de sangue de

indivíduos com TL, além de poderem servir como marcadores de diagnóstico e

prognóstico, podem indicar a existência de um mecanismo protetor para o

desenvolvimento de TL em vez de doença120. Foi desenvolvido outro estudo122 com o

objectivo de explorar o potencial diagnóstico do IP-10 baseado em pontos de plasma

secos (Dried Plasma Spots) (DPS) colocados em papel de filtro. Neste estudo, o IP-10 e

o INF-γ foram determinados quer no plasma e quer em DPS por ELISA e, foi usada uma

população com TB e outra com controlos saudáveis. As amostras de plasma foram

medidas em Barcelona e os DPS na Dinamarca. A conclusão a que chegaram foi que,

além de o IP-10 ter uma capacidade diagnóstica semelhante ao QFT-GIT, que o

processo de análise das amostras de plasma se torna mais fácil e menos dispendioso

com o uso dos DPS ao contrário do processo inerente à execução dos IGRA. Este novo

método não necessita de laboratórios locais e possibilita a criação de um centro de

análise de referência, sem que, durante o transporte, existam alterações das

características da amostra. A forma de leitura é toda automática, eliminando por isso

possíveis erros humanos associados quer aos métodos ELISA e ELISPOT.



Apesar de parecer uma promissora alternativa aos IGRA, precisa de ser mais

intensamente estudado de forma a poder estabelecer-se o seu verdadeiro valor

diagnóstico nas várias populações.



DIAGNÓSTICO EM GRUPOS DE RISCO

O rastreio de TL não constitui um fim per se, mas deve ter implicações

terapêuticas e contribuir para a estratificação de risco de desenvolvimento de TB

doença123. Com a diminuição dos casos de TB, existe uma diminuição da suspeita e

atenção para com pacientes de alto-risco, sendo que esse diagnóstico é menos vezes

considerado124. Os grupos com maior risco de infeção incluem profissionais de saúde, em

hospitais, clinicas e laboratórios, imigrantes provenientes de países de alta prevalência,

prestadores de cuidados em lares ou prisões e, pessoas com contato próximo com outras

com TB doença conhecida ou suspeita44. O maior risco de progressão de TL para TB

doença ocorre nos primeiros dois anos depois da infeção. Sendo que o risco de

progressão é de 5-10% ao longo da vida, nestes 2 anos ocorrem metade das

conversões45. Este risco está aumentado em crianças menores de 4 anos (em que atinge

os 40%), indivíduos com infeção VIH, com DM e outras patologias crónicas, aqueles com

terapêuticas imunossupressoras, entre outros43, 125, 126. São listados na tabela 3 os grupos

com risco aumentado de TL e em maior risco de progressão para TB doença, e que

devem ser rastreados42, 43, 45-50, 67, 127:

Risco aumentado de TL Risco aumentado de progressão de TL

para TB doença

Contatos próximos de pessoas com TB

infecciosa Indivíduos infetados com VIH

Pessoas com conversão tuberculínica nos

últimos 2 anos Utilizadores de drogas

Pessoas que imigraram nos últimos 5 anos

de países com alta incidência de TB

Indivíduos com evidencia de lesões antigas

de TB não tratada

Pessoas com estadia superior a 1 mês em

áreas com alta incidência de TB

Indivíduos com comorbilidades, como

Silicose, Insuficiência Renal Crónica (IRC),

DM, Neoplasia, Artrite Reumatóide (AR)

Pessoas que trabalham em locais onde a

exposição a TB é frequente

Indivíduos a receber terapia

imunossupressora (corticoterapia

prolongada, equivalente a > 15mg/dia de

prednisolona por período > 1 mês)

Recém-nascidos, crianças e adolescentes

com contatos próximos com adultos com

risco aumentado.

Indivíduos que vão iniciar terapia com anti-

Factor de Necrose Tumoral Alfa (TNF-α)

Tabela 3: Grupos de risco para TL e com risco aumentado de TL para TB doença.



O rastreio de rotina fora destes grupos de alto-risco constitui um desperdício de

recursos e leva a elevadas taxas de falsos-positivos47, 60.

No que respeita aos contatos, tendo em conta a elevada especificidade dos testes

sanguíneos, podem ser adoptadas duas estratégias no rastreio de TL. Uma delas propõe

a substituição do TST pelos IGRA, em todos os indivíduos imunocompetentes,

assumindo que a sensibilidade de ambos os testes é similar123, 128. A vantagem desta

estratégia prende-se com o facto de ser necessário apenas um teste e, por isso, uma

única visita médica. A desvantagem reside no duplicação dos custos, exigindo

laboratórios e técnicos especializados. Outra estratégia propõe a realização do TST de

forma a excluir todos os contatos não infetados, e depois apenas testar com os IGRA os

resultados de TST positivos. Desta forma, espera-se diferenciar os resultados

verdadeiros-positivos dos falsos-positivos. Esta estratégia é mais económica129, mas

além de requer duas visitas, requer que as amostras de sangue sejam bem colhidas,

transportadas, processadas e corretamente interpretadas. Em indivíduos onde a

probabilidade de imunodepressão é maior, ou em que a probabilidade de faltarem à

leitura do TST é maior, deve-se então realizar o IGRA123. Por outro lado, segundo um

modelo canadiano realizado em populações de baixa prevalência de TL ou elevada taxa

de falsos-positivos no TST por vacinação BCG prévia, o rastreio sequencial (TST positivo

seguido de IGRA) pode ter uma maior relação custo-benefício130. O mesmo modelo

conclui que em grupos em que a prevalência de resultados verdadeiro-positivos (como

em crianças não vacinadas com BCG), a estratégia sequencial tem menor relação custo-

beneficio que a estratégia única.

Apesar de alguns estudos demostrarem uma baixa sensibilidade dos IGRA em

crianças de idade precoce89, 91, 99, 131, a sensibilidade e especificidade dos IGRA em

crianças mais velhas, consideradas como contatos, é semelhante em adultos, salvo se

infeção com VIH132. Apesar de se esperar que a vacinação BCG não interfira com os

IGRA, a baixa sensibilidade encontrada quer com o TST quer com os IGRAs em crianças

de idade precoce parece estar relacionada com a imaturidade do sistema imunitário das

crianças, ou com condições subjacentes que interferem com este, como infeções

helmínticas ou má nutrição em determinadas populações 133. Apesar de tudo, em casos

de TB doença, a sensibilidade e especificidade é similar para o TST (80 e 85%,

respectivamente), QFT-GIT (83 e 91%, respectivamente) e T-SPOT.TB (84 e 94%,

respectivamente)99. Sendo assim, em crianças não vacinadas com BCG, e de regiões

com baixa prevalência de infecções por Micobacterias Não Tuberculosas, o TST parece

continuar a ser o teste ideal quando correlacionado com o risco futuro de TB134-136. Em

Portugal, as recomendações da DGS137 para crianças < de 5 anos e com contato próximo



de doentes infeciosos sugerem que estas devem fazer TPI desde o primeiro momento e

serem testados com TST em 3 situações:

- se a reação TST for ≥10mm, devem fazer TPI, sendo dispensável o IGRA;

- se a reação estiver entre 5 e 9mm e o teste IGRA for positivo, têm indicação para

TPI. Se o IGRA for negativo ou indeterminado, recomenda-se a realização de

novo TST às 8-12 semanas para avaliar a variação da reação. No caso de uma

criança não vacinada com BCG, um resultado TST≥5mm, torna-a elegível para

TPI;

- Se a reação ao TST <5mm, deve fazer IGRA, e se for positivo, deve iniciar TPI.

Caso contrário, deve aguardar-se até nova avaliação com TST após período de

quimioprofilaxia ou testar às 8-12 semanas com TST.

Os fármacos inibidores do TNF-α têm sido utilizados no tratamento de doenças

inflamatórias articulares (DIA) e auto-imunes como AR, a Artrite Psoriática (AP) e a

Espondilite Anquilosante (EA). Em populações com elevada incidência de TB,

documentou-se um aumento do número de casos nos doentes sob estas terapêuticas138.

De facto, o risco relativo de desenvolver TB em doentes com AR medicados com anti-

TNF-α é 19 vezes superior por comparação com os que não fazem esta terapêutica138.

De salientar que mesmo os doentes com AR e sob fármacos supressores convencionais

têm um risco relativo de TB 4 vezes superior ao da população em geral138. A TB que

surge em doentes sob anti-TNF-α resulta, na maioria das vezes, da reativação de uma

TL. Tem inicio geralmente nos primeiros meses de tratamento, exibindo frequentemente

um comportamento atípico, por vezes difícil de diagnosticar139. Em modelo animal é

possível documentar a reativação de TB após a administração de anti-TNF-α140. Dado o

compromisso imunitário que se verifica nos doentes com AR e outras DIA secundário à

própria patologia e às terapêuticas imunossupressoras o rastreio de TL e TB doença

deve ser feito o mais precocemente possível, de preferência no momento do diagnóstico

da DIA141. Tendo em conta os conhecimentos atuais e na ausência de testes Gold

standard no diagnóstico de TL, o seu rastreio requer uma combinação de história médica

detalhada com pormenores quanto à possibilidade de exposição ou infeção por MT,

radiografia torácica (de forma a excluir alterações atuais ou passadas) e ainda testes de

memória imunológica contra o MT (TST e IGRA). A sensibilidade de ambos pode estar

comprometida em doentes a receber terapêutica imunossupressora. Apesar disso, a

literatura sugere que os IGRA têm maior sensibilidade que o TST em indivíduos com

doenças imunes, mesmo após inicio de terapêutica imunossupressora. Com a dificuldade

em escolher o melhor teste, muitas guidelines propõem o uso de ambos. Visto que a

sensibilidade, especificidade e valores preditivos positivo e negativo dos IGRA ainda são



causa de dúvida em muitos estudos, estes testes não podem ser usados sozinhos, sendo

por isso prudente o uso de ambos de forma a maximizar a sensibilidade142. Sendo assim,

o rastreio prévio é mandatório para todos os doentes sob terapêutica anti-TNF-α e deve-

se realizar TST sempre com 2UI de Tuberculina RT23141. Segundo a prática

portuguesa141, um TST < que 5mm deverá ser repetido após 7 a 14 dias, no braço

oposto. Se o segundo teste for positivo (≥ 5mm), só este deve ser valorizado. Um TST ≥

5mm é considerado positivo em qualquer doente que vá iniciar anti-TNF-α ou na

avaliação inicial de um doente com DIA que preencha os critérios de doente

imunocomprometido. São considerados doentes imunocomprometidos aqueles com DIA

e medicados com corticoides (prednisolona ≥10mg/dia) e/ou com fármacos

imunossupressores como o metotrexato ou ciclofosfamida, independentemente das

doses. Se o TST for ≥ 10mm é considerado positivo na avaliação inicial de um doente

com DIA que não preencha os critérios de doente imunocomprometido141. O Tuberculosis

Network European Trials Group recomenda um valor de cut-off para o TST de 10mm,

justificado pelo fato de a perda de sensibilidade ser marginal e ser compensada pelo

ganho de especificidade aquando do aumento do cut-off de 5mm para 10mm. Com isto,

um TST de 10mm obriga a tratamento, não havendo necessidade de confirmação por

IGRA143.

No caso de indivíduos com infeção VIH, tal como para os indivíduos

imunocompetentes, a sensibilidade dos IGRA nesta população foi analisada em

indivíduos com TB doença. Em 18 estudos110, as sensibilidades quer do TST144 quer dos

IGRA são baixas neste grupo, pois ambos requerem uma resposta imunológica

adequada. A sensibilidade combinada do QFT-GIT foi de 60% e do T-SPOT.TB de

76%145. É necessária especial atenção na interpretação de conversões e reversões em

indivíduos VIH positivos e testados para TL69. A conversão é definida como um aumento

de 10mm entre duas provas tuberculínica realizadas entre um período máximo de 2 anos,

ou se se verificar passagem de não reativa a reativa (conversão tuberculínica recente)144.

Richeldi146 concluiu que a performance dos IGRA no diagnóstico de TL varia nos

diferentes grupos de imunodeprimidos. De forma a maximizar a eficácia nesse

diagnóstico, sugere o uso do TST e dos IGRA de forma complementar. Como a

contagem de células TCD4+ influencia a resposta dos IGRA, sugere também que o

rastreio se faça o mais precocemente possível. Um estudo147 encontrou resultados

indeterminados com o T-SPOT.TB que variam com a contagem de TCD4+ ser > 200, 51-

200 e ≤50 /µL que respectivamente corresponde a 14%, 25% e 30%. Ambos sugerem a

utilização dos IGRA no rastreio de TL, bem como a sua repetição após o inicio de

terapêutica antirretroviral altamente ativa (HAART).



De forma geral, as recomendações148 aceites em Portugal propõem o rastreio

realização a todos os indivíduos VIH+, mesmo sem história de contatos com doentes com

TB doença148. As normas da DGS137 sugerem que um resultado TST positivo (≥5mm)

torna dispensável a realização de IGRA. Quando o resultado TST for negativo (<5mm),

deve ser feito o IGRA, que sendo positivo torna o doente elegível para TPI. Perante um

resultado indeterminado ou negativo, deve repetir-se o TST às 8-12 semanas.

Os profissionais de saúde pertencem a um grupo altamente exposto à infeção por

MT e por isso têm um risco aumentado de TB doença127, 149, 150. O rastreio neste grupo é

essencial. Num estudo151, foram usados o TST e o QFT em simultâneo no rastreio dos

profissionais de saúde. Verificou-se uma elevada percentagem de resultados TST

positivos nos indivíduos com imunização frequente com BCG, o que leva a concluir, tal

como outros autores, que o TST não é muito útil em populações em que muitos

indivíduos estão vacinados com BCG ou em cuja vacinação é repetida152. Nesta

população, o QFT é uma alternativa promissora, apesar de ainda não estar estabelecida

a sua utilização em rastreios, nem a sua interpretação de conversões e reversões.

Considerando as limitações de ambos os testes, os autores151 concluem que a melhor

solução será o uso dos dois testes, usando a mais elevada especificidade dos IGRA na

confirmação de resultados TSTs positivos.

O uso de IGRA para o rastreio de grandes grupos provenientes de populações

com elevada taxa de infeção, como os imigrantes de países com elevada incidência de

TB, foi considerado mas não é feito em larga escala. No entanto, um estudo130 mostrou

que tal prática é apenas custo-efetiva em grupos de elevado risco de progressão para TB

doença e como teste confirmatório com IGRA após um resultado TST positivo.

Apesar de o TST e os IGRA serem amplamente usados, a OMS1 alerta para o

facto de o uso dos IGRA em países de baixo e médio rendimento, tipicamente com

maiores taxas de infeção por MT e VIH, poder levar a elevadas taxa de falsos-positivos

bem como a gasto excessivo de recursos económicos para a sua aplicação.



CONCLUSÃO Com cerca de 9 milhões de novos casos de TB doença e 2 milhões de mortes

todos os anos, a TB mantém-se uma infeção major no panorama mundial. A infeção

primária com MT pode levar a TB doença numa minoria dos indivíduos, sendo que a

grande parte evolui para um estado de latência. Neste caso, os bacilos que estão em

estado latente mantêm a sua capacidade de induzir reativação e causa TB doença caso

exista uma fragilidade do sistema imunitário. Tal fragilidade é mais provável acontecer em

determinados grupos com fatores de risco conhecidos quer para TL quer para a

reativação de TL e desenvolvimento de TB doença. Entre eles encontram-se indivíduos

imunocomprometidos quer por infeção VIH quer por receber terapêutica anti-TNF-α,

crianças na primeira infância, prestadores de cuidados de saúde, utilizadores de drogas e

indivíduos com contatos recentes com outros indivíduos portadores de TB doença, sendo

que o rastreio está apenas recomendado, como sendo custo-efetivo, nestes grupos.

É por isso crucial que nestes casos se inicie uma investigação com o objetivo

inicial de excluir TB doença e depois a possibilidade de haver infeção latente. Ora para

tal, estão disponíveis 3 testes. As recomendações atuais referem-se apenas ao TST e ao

IGRA. Sugerem a possibilidade do uso de ambos, dependendo das situações

pretendidas. Apesar ambos serem úteis na detecção de TL, nenhum deles sozinho é

suficiente para prever o risco de progressão, e os testes positivos têm que ser analisados

à luz do risco de cada indivíduo. Sendo assim, se se quiser aumentar a especificidade,

então confirma-se a positividade de um resultado TST com o IGRA. Por outro lado, se o

objetivo for aumentar a sensibilidade, confirma-se a negatividade de um resultado TST

com o IGRA. É no entanto necessário que mais estudos se façam no sentido de

esclarecer dúvidas quanto à fiabilidade dos IGRA para excluir TL principalmente em

indivíduos altamente imunocomprometidos e em crianças na primeira infância.

O teste IP10 parece uma alternativa revolucionária aos testes usados atualmente,

sendo a forma de processamento uma enorme vantagem. No entanto, ainda não existem

evidencias suficientes para que se possam adoptar nas estratégias de luta contra a TB.



AGRADECIMENTOS

Agradeço desde já e em geral à minha família, e em particular à minha Mãe que

sempre lutou e me apoiou.

Agradeço também à minha orientadora pela ajuda preciosa e pela disponibilidade

sempre mostrada, mesmo no meio de tanto trabalho. Não poderia deixar os meus

maiores agradecimentos aos meus amigos que sempre me lembraram das minhas

responsabilidades, e que tão bem souberam proporcionar-me momentos de

descontração.



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mÉtodos diagnÓsticos de infeÇÃo latente por ... · ... com ativação do factor de...

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