métodos de laboratorio
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Universidad Autónoma de Coahuila Departamentode Investigación en AlimentosFacultad de Ciencias Químicas
1 Determinación monosacáridos por elmétodo de AntronaTomás López Altunar
Laboratorio de Microbiología. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad de
Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila%M&'ico.
FundamentoLa antrona (orma un compuesto verde en medio )cido (uerte *)cido sul(+rico,con ciertos carbohidratos - sac)ridos% en especial con a +cares - almidones. Lareacción de la antrona en medio sul(+rico produce un derivado del (urano /uetiene su m)'imo de absorción en 0 # nm.Reactivo antrona1l reactivo se prepara de la siguiente manera2
• A3adir 45# mL de agua destilada• Agregar 00# mL de 6 $7 5 concentrado• A3adir 8# g de tiourea• 9osteriormente agregar #.! g de antrona *cristali ado de etanol,
:ota2 el reactivo es estable por semanas almacenado a 5 ;C - la curvaest)ndar se reali a con glucosa.
Procedimiento8. Agregar #. ! mL de muestra a anali ar
. A3adir 8. ! mL reactivo antrona4. $ometer a ba3o maría - de
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PR'($D%#%$)T' PARA D$T$R#%)AR A*+(AR$S T'TAL$S ,D+-'%S.1/0 2
8. !# l de muestra hidroli ada. A3adir !# l de (enol al ! G
4. Agitar en vorte' - de
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Cu 7 Arseno=Molibdato A ul de molibdeno
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3 Determinación de az"cares reductorespor el método de Somo45i!)elsonAdriana (arolina Flores Galle4os
Laboratorio de iología Molecular. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad de
Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila%M&'ico.
Fundamento1l m&todo se basa en la capacidad /ue tienen los a +cares reductores *como laglucosa - la (ructosa, de reducir ciertos iones met)licos% como el cobre% en unmedio alcalino - caliente. 1n el proceso% la muestra /ue contiene el a +carreductor se calienta con la solución alcalina de tartrato de cobre *reactivo de
$omog-i,% - como resultado de la reacción se (orma ó'ido cuproso. Nstereacciona con el arseno=molibdato *reactivo de :elson, dando un compuestode color a ul *a ul de molibdeno, *Figura 8,.
Figura 8. Eeacción de a +cares reductores con los reactivos de $omog-i -:elson
La intensidad del color a ul obtenido es proporcional a la cantidad de a +carreductor presente en la muestra de acuerdo a la le- de Lambert - eer.
Reactivos
Reactivo de Somo45i= Eeactivo A
(ompuesto (antidad,46L2
Carbonato de sodio anhidro !
5DIA=UAD1C
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*:a C7 4,$al de Eochelle *@a:aC 56 57 0, !
icarbonato de sodio*:a6C7 4,
#
$ul(ato de sodio anhidro*:a $7 5,
##
1n la me cla de reacción se inclu-e sul(ato de sodio para minimi ar la entradade o'ígeno atmos(&rico en la solución% lo cual podría causar reo'idación deló'ido cuproso.1l reactivo se debe ltrar - almacenar a no menos de #OC% con el n de evitarla cristali ación del sul(ato de sodio.
Eeactivo
(ompuesto (antidad,177mL2
$ul(ato de cobre *Cu$7 5 !6 7, 8!Pcido sul(+rico *6 $7 5, 8= gotas
1l reactivo de $omog-i est) compuesto por ! partes de reactivo A - 8 partede reactivo *la me cla se reali a en el momento,. 1l reactivo es estable hastapor 8 a3o
Reactivo de )elson
Almacenar en un (rasco )mbar o en un (rasco cubierto con aluminio. 1l reactivoes estable por 0 meses.
!DIA=UAD1C
25 g Molidato de amonio ((NH 4)6Mo 7O24) en 450
ml21 ml de ácido sulfúrico (H 2 O4) concentrado
! g "rsenato de sodio (Na 2H"sO 4 7 H 2O) en 25 ml
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8 ml de lamuestra
Agregar 8 mlreactivo$omog-i
* ! partesreactivo A% 8
parte reactivo F,
Fa3o enebullición por #
min
1n(riar en ba3ode hielo # min
Agregar 8 mlreactivo :elson
Completar a !ml
Leer a !## nm
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Fi4ura . Desarrollo del compuesto cromog&nico a 4>O C. Curva 8% tiempo #Curva % 8 horas Curva 4% 5 horas Curva 5% 5" horas.
Procedimiento8
)otas8o 1l blanco consiste en agua destilada.o La curva de calibración debe reali arse con un est)ndar del a +car
reductor presente en la muestra *por e
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(uadro 19 (urva estándar 4lucosaSolución madre de
4lucosa,:L2A4ua destilada
,:L2(oncentra
ción,ppm
2# 8### 78## ## 177
## "## 774## >## 3775## 0## ;77!## !## 077
o 1l m&todo es mu- preciso para #.#8 mg de glucosa% galactosa - maltosa%los me
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; Determinación anal>tica de az"cares deacuerdo a sus propiedades ?u>micasDiana -eatriz #u@iz #ár?uez
Laboratorio de Microbiología. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad de
Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila%M&'ico.
Fundamento1l m&todo a continuación descrito (undamenta su principio /uímico en lacapacidad reductora de los grupos aldehído -?o cetónicos libres de loscarbohidratos% ante una solución cupro=alcalina% con la consiguiente o'idaciónde los a +cares en el grupo carbonilo - en la (unción alcohol primario% dicha
reacción se mani esta en la precipitación de cobre como ó'ido cuproso. Jalm&todo es aplicable a monosac)ridos% disac)ridos reductores - polisac)ridospreviamente hidroli ados.
#étodo volumétrico de Lane 5 $5non
1n este m&todo el carbohidrato reductor se encuentra en solución - con el sereduce un volumen medido - constante de licor cupro=alcalino *reactivo de
Fehling=$o'hlet,% en presencia de indicador a ul de metileno.
Determinación de az"cares reductoresEeactivos*ver ane'o de preparación de reactivos,
• $olución Fehling= $o'hlet A *F=$A,• $olución Fehling= $o'hlet *F=$ ,• Agua destilada• A ul de metileno 8G• $ubacetato o acetato de plomo 4#G
Material - e/uipo
• ureta• Matraces erlenme-er de !# mL• 9ipetas de ! - 8# mL• 1mbudo
"DIA=UAD1C
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• 9apel ltro Rhatman no.• 9arrilla
Procedimiento8.= $i la muestra es sólida% disolver g en un volumen conocido de agua
destilada - a(orar a 8## ó !# mL. 9ara muestras lí/uidas% hacer una dilución828% dependiendo de la concentración del carbohidrato en an)lisis o bientraba
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e Calcular2
G AT CAE1$ E1DUCJ7E1$ V J F=$ K ol. de a(oro ' 8## mL gastados K g de muestra
J F=$2 título de la solución Fehling= $o'hlet
Determinación de az"cares no reductores
1ste m&todo es aplicable a sacarosa% a +cares hidroli ables% almidón -de'trinas.
Eeactivos*ver ane'o de preparación de reactivos,
• 6Cl concentrado• :a76 5G• $olución F=$ A• $olución F=$ • Agua destilada• A ul de metileno 8G *solución acuosa,
Material - e/uipo• Ee(rigerante• Matra balón (ondo plano• ureta• Matraces erlenme-er de !# ml.• 9ipetas de ! - 8# mL.• 9arrilla
Procedimiento
A 6idrólisis por reWu
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.= 9asar la muestra a un matra balón (ondo plano - acidi carla con 8mL de6Cl concentrado.4.= Conectar el matra al re(rigerante e hidroli ar por 4# minutos *precalentarla parrilla - mantener alta la temperatura durante los 4# minutos /ue dura la
hidrólisis,.5.= 1n(riar el hidroli ado - neutrali ar con 8mL apro'imadamente de :a76 5G.!.= A(orar a ## mL con agua destilada.
, 6idrólisis por calor8. $i la muestra es sólida% disolver g en !# mL de agua destilada. 9aramuestras lí/uidas% hacer una dilución 828 *completando !# mL,% dependiendode la concentración del carbohidrato en an)lisis.
.= 9asar la muestra a un matra balón (ondo plano - acidi carla con 8mL de
6Cl concentrado.4. Introducir el matra con la muestra acidi cada en una estu(a a 5!;C durante
5 hrs.5. Comprobar la hidrólisis de los polisac)ridos adicionando una gota de lugol. $i&ste ad/uiere una coloración morada sobre la muestra% indica /ue la hidrólisisse ha completado% si no es así% continuar el calentamiento por 4 horas m)s.
:7JA2 Cuando la muestra sea colorida% como el caso de los re(rescos% n&ctares%
concentrados de (rutas% chocolates%
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b 9oner el matra en la parrilla caliente - esperar la ebullición.c 1mpe ar la titulación con la solución problema - una ve /ue presente un
ligero cambio de coloración la solución del matra % agregar una gota de a ul demetileno. Continuar titulando hasta el vire a color ro
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8, $olución A. 9esar e'actamente 45.0" g de sul(ato de cobre pentahidratado.Disolver en ## mL de agua destilada - calentar si es necesario. A(orar a!##mL.
, $olución . 9esar e'actamente 8>4 g de tartrato de sodio - potasio - !# g de
hidró'ido de sodio. Disolver por separado cada reactivo. Me clar - a(orar a !##mL.
1standari ación de la solución F=$
8, Medir ! mL de solución A - ! mL de solución *utili ar pipeta limpia - secapara medir cada reactivo,% me clarlos en matra 1rlenme-er de !# mL - diluircon 5# mL de agua destilada.
, 9oner el matra en la parrilla caliente - esperar la ebullición.4, A3adir a una bureta la solución de de'trosa anhidra 8G.5, 1mpe ar la titulación con la solución de de'trosa - una ve /ue presente un
ligero cambio de coloración la solución del matra % agregar una gota de a ul demetileno 8G. Continuar titulando hasta el vire a color ro
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:7JA2 1l J F=$ e'presado para 8# mL del reactivo tiene las siguientese/uivalencias2
• #.#!# g de de'trosa anhidra• #.#04 g de maltosa anhidra• #.#>! g de lactosa anhidra• #.#5>! g de sacarosa anhidra
Hidróxido de sodio 4%
Disolver 5 g de :a76 *lente! g de una u otra sal - a(orar a !# mL con agua destilada.
Referencia
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0Determinación de 4lucosamina ,#étodoindirecto para determinar
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1n el siguiente diagrama de Wu
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:ota2 Se re?uiere determinar la 4lucosamina asociada al Con4o. por lo cual se re?uiere
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Determinación de prote>na soluctor Rodr>4uez DuránLaboratorio de Microbiología. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad de
Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. $altillo% Coahuila% M&'ico.
Fundamento1sta es una t&cnica espectro(otom&trica% /ue se basa en la (ormación de unacoloración característica al acomple
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• 1n un tubo de ensa-e se colocan #.8## mL de muestra con unaconcentración de 8## a 8### ppm de proteína.
• $e agregan ! mL del reactivo de rad(ord.• Agitar - reposar a temperatura ambiente.• $imult)neamente se prepara un tubo blanco con #.8## mL de agua *o el
buYer apropiado, - ! mL de reactivo de rad(ord.• $e mide la absorbancia a ! ! nm del tubo muestra entre minutos - 8hora despu&s de reali ada la reacción contra el tubo blanco.
#icro!ensa5o
• 1n un tubo de ensa-e se colocan #.8## mL de muestra con unaconcentración de 8# a 8## ppm de proteína.
• $e agrega 8 mL del reactivo de rad(ord%• Agitar - reposar a temperatura ambiente.• $imult)neamente se prepara un tubo blanco con #.8## mL de agua *o el
buYer apropiado, - 8 mL de reactivo de rad(ord.• $e mide la absorbancia a ! ! nm del tubo muestra entre minutos - 8
hora despu&s de reali ada la reacción contra el tubo blanco.
(álculos9ara calcular la concentración de proteína en la muestra% se reali ó una curvapatrón utili ando Alb+mina $&rica ovina * $A, como est)ndar *Jablas 8 - ,.%nterferenciasLos +nicos componentes /ue se ha encontrado /ue producen una inter(erencia
e'cesiva durante la reacción son algunos detergentes en altas concentracionescomo2 dodecil sul(ato de sodio% Jritón Z=8##% - detergentes comerciales. Lasinter(erencias debidas a pe/ue3as cantidades de detergente pueden sereliminadas usando los controles adecuados.
Referencia 8rad(ord% M. M. *8 >0,. A rapid and sensitive method (or the /uantitation o(
microgram /uantities o( protein utili ing the principle o( protein=d-e binding.Anal-tical iochemistr- > *8= ,2 5"= !5.
8DIA=UAD1C
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(uanti=cación de polifenolesCidroliza
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E (uanti=cación de taninos condensadospor la técnica I(l!-utanol#ar>a %sa nanómetros respectivamente.La porción de 6Cl= utanol de 028 (ue propuesta por 6agerman% 8 ". Cuando laporción del reactivo es 528 o 028 sel desarrollo del color se ve incrementado*Dal ell - @erven% 8 ",. 7troo (actor es la temperatura - el tiempo de reacción
*$calbert% 8 ,.#aterial 5 reactivos
• #.! mL de muestra• 4 mL 6Cl= utanol• #.8 mL reactivo (&rrico• Jubos con tapa
DIA=UAD1C
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20 mL HClconcentrado
Aforar a 100 mLH2O
Adicionar 2 g desulfato férrico de
amonio
Conservar enfrasco ámbar 4 °C
10 mL HCl al 3 !
Aforar a 100 mLterbutanol
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• a3o metabólico• Agua• 1spectro(otómetro
9reparación de reactivos2
Reactivo férrico
$e agregan # mL de 6Cl concentrado% a(orar a 8## mL con agua destiladaposteriormente se adicionan g de reactivo sul(ato (&rrico de amonio - sealmacena en un (rasco )mbar en re(rigeración *5 ;C, hasta su empleo.
I(l!-utanol ,17 J2
$e agregan 8# mL de 6Cl al 4> G - se a(ora a 8## mL con terbutanol.
(ate?uina ,197 46L2
4DIA=UAD1C
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0"# mL demuestra
3 mL HCl $terbutanol
%1&'(
0"1 mLreactivoférrico
Cerrartubos
Calentar tubos)or 1 * %ba+o
metab,lico 100°C(
-nfriar atem)eratura
ambiente
Leeres)ectrofot,metro
4.0 nm
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Diluir ! mg de cate/uina en agua - a(orar a ! mL posteriormente se almacena enun (rasco )mbar en re(rigeración *5 ;C, hasta su uso.
(uanti=cación de taninos condensados por I(l
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cernua D. C., mediante Fermentación en 1stado sólido usando Asper$illus ni$er 9$6. Jesis Químico Farmac&utico iólogo. Universidad Autónoma de Coahuila.
/(uanti=cación de polifenolesCidroliza
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Fi4ura 19 La (ormación del )cido el)gico de un elagitanino - reacción de)cido el)gico con el electró lo :7 S .
La hidrólisis de los elagitaninos produce )cido he'ahidro'idi(&nico*66D9,% donde ocurre una lactoni ación espont)nea para (ormar al )cidoel)gico. Los carbonos /ue no est)n sustituidos en el )cido el)gico% sonsusceptibles al ata/ue electro(ílico. Dos productos posibles pueden ser(ormados% *A, una simple sustitución del producto% * , nitrosil dienona.Nstos (orman /uinona o'ima *C,% cuando se ioni a se (orma *D, productode A o .
$nsa5o• $e pesan 8# mg en caso de /ue la muestra sea sólida. $e
pueden medir !# / L en caso de /ue la muestra sea lí/uida.• $e pasa la muestra a tubos 1ppendor( limpios.• $e a3ade 8 mL de )cido sul(+rico *6 $7 5, :.• $e coloca en una estu(a a ># ;C por un período de 4# horas.
1sto con la nalidad de hidroli ar la muestra.• $e pasan por ltros hatman :o. 5#.• Una ve ltrada la muestra% se colocan mL de piridina en una
relación 828#. 1n esta sección es conveniente contar con todas"
DIA=UAD1C
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las medidas de seguridad personal debido a la to'icidad delreactivo.
• $e pasa 8 mL a un tubo de ensa-e.• $e colocan nuevamente 8.8 mL de piridina.
• $e colocan en ba3o de hielo por ! minutos.• $e a3ade #.8 mL de )cido clorhídrico *6Cl, concentrado.• $e de
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1s una t&cnica poco sensible% se debe de considerar con una cantidadconsiderable de )cido el)gico en tu muestra para /ue (uncionecorrectamente.La curva de calibración se empie a a reali ar a partir del punto n+mero>% estos tubos no son sometidos a previa hidrólisis. 1s importante /ue semane
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$e adicionaron 8.! mL de )cido sul(+rico metanólico *&ste reactivo seprepara adicionando #.8 # mL )cido sul(+rico concentrado por cada mlde metanol /ue se re/uiera,% la adición de &ste reactivo se llevó a caboen un congelador a [ # ;C% despu&s los tubos cerrados herm&ticamentese colocaron en una estu(a de calentamiento por 4# horas a unatemperatura de "# ;C% luego las muestras se destapan - se colocan denuevo en la estu(a de calentamiento ba
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(ondiciones para el análisis por IPL(9
Tiempo,min2 Flu o ,1mL6min29
J A J - J (
%nicial 8.# # # 8##8# 8.# # # 8##
# 8.# # # "#! 8.# # 4# >#0 8.# # 0# 5#
485#
8.#8.#
##
4##
>#8##
ReferenciaAscacio= ald&s% .% Aguilera=Carbó% A.% Martíne =6ern)nde % .L.%Eodrígue =6errera% E.% Aguilar% C.:. * #8#,. up&orbia antis!p&iliticaresidues as a neR source o( ellagic acid. Chemical 9apers. 052 ! " [ !4 .
1(uanti=cación de ácido 4álico por(romato4raf>a l>?uida de altaresolución ,IPL(2
#ónica LizetC (Cávez GonzálezLaboratorio de Fermentaciones. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad de
Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila%M&'ico.
Preparación de la curva de cali
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emplear) un est)ndar de )cido g)lico. La solución est)ndar ser)preparada con una concentración de !## ppm. A partir de &sta soluciónse reali ar)n diluciones% tantas como las /ue el operador considerenecesarias para posteriormente interpolar sus resultados. Una vepreparada las diluciones% ser)n micro ltradas por membrana de #.5!
m.
Preparación de las muestrasComo cual/uier otra muestra /ue ser) introducida en el e/uipo de69LC% deber) ser previamente ltrada *de ser necesario, -posteriormente micro ltrada empleando una membrana de #.5! m. Lo
anterior con la nalidad de evitar la obstrucción de la columna -?ocone'iones dentro del e/uipo. Las muestras se depositar)n en los vialesespeciales para el e/uipo
(ondiciones de operación de IPL(8Los viales /ue contienen tanto la curva de calibración como las muestrasa anali ar ser)n colocadas de manera ordenada en el carrusel del
e/uipo. $e veri car) /ue la numeración de la lista en el programa dele/uipo corresponda con la del carrusel.Las condiciones de uso del e/uipo son2
Columna 7ptisil 7D$ ! \m !# mm ' 5.0 mm.
Flu
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los !.0 min. $e tomar)n - medir)n las )reas ba
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Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila%M&'ico.
Una de las alternativas para la detección - cuanti cación de etanol es el uso de69LC *6igh 9er(ormance Li/uid Chromatograph-,.
Materiales
• 69LCo Detector con arreglo de diodoso Detector de índice de re(racción *IE,o Columna Metacarb 0>6 7rganic acids 4## ' 0.! mmo 6 $75 #.#5 : *Fase móvil,o #.0 mL?min de Wu
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Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. $altillo% Coahuila% M&'ico.
Fundamento1l m&todo consiste en la medición del )cido g)lico liberado durante la reacción
en im)tica% utili ando como sustrato para la tanasa un &ster del )cido g)lico*metil=galato,. La medición del )cido g)lico se basa en la (ormación de uncromó(oro entre dicho )cido - la =tio=5= cetotia olidina% tambi&n conocidacomo rodanina *Fig. 8,.
Fi4ura 19 Eeacción catali ada por la tanasa - posterior reacción del )cidog)lico con la rodaninaReactivos
9ara la cuanti cación de la actividad tanasa se re/uieren ! soluciones2• uYer de citratos !# mM a p6 !.#• Metil=galato #.#8M en buYer de citratos *!# mM p6 !.#,• Eodanina #.00>G p?v en metanol• @76 #.! :• Pcido g)lico 8## ppm en buYer de citratos *!# mM p6 !.#,
K1l metil=galato% el )cido g)lico - la rodanina deben protegerse de la lu .
$nsa5oLas soluciones se pre=incubaron a 4# ; C durante ! = 8# minutos. $eeti/uetaron tres tubos de ensa-e como blanco% muestra - control% se colocaron#. ! mL de metil=galato #.#8M en buYer de citratos !# mM a p6 !.#. Al tuboblanco se le a3adieron #. ! mL de buYer de citratos - al tubo muestra se leagregaron #. ! mL del e'tracto en im)tico% los tres tubos se incubaron !
40DIA=UAD1C
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minutos a 4# ;C. Despu&s de la incubación% se adicionaron #.4 mL derodanina metanólica *#.00> G p?v,% se incubó a 4# ;C por ! min% se agregaron#. mL de hidró'ido de potasio *#.! :, - se incubó otros ! min. $e agrega ele'tracto en im)tico al tubo control. Despu&s se agregaron 5 mL de agua
destilada% se agitó el contenido de los tubos - se incubaron durante 8# minutosa 4# ;C. $e le-ó la absorbancia a ! # nm en un espectro(otómetro. 1n la gura
se muestra un es/uema de esta t&cnica.
(álculos9ara cuanti car el )cido g)lico liberado se restó la absorbancia del tubomuestra a la absorbancia del tubo control *ecuación 8, - se calculó laconcentración a partir de una curva est)ndar de # a 8## ppm de A.H. en buYer
de citratos.
La unidad de actividad se de nió como la cantidad de en ima necesaria paraliberar 8 mol de )cido g)lico por min. B se calculó con la ecuación 2
⋅ ×
⋅⋅⋅⋅=min5
1
**1
**101
**12*170
**1
**1000
**1
25*0
5** 6
GmolAGmolA
G gAGmolA
GmgAG gA
mLmL
LGmgA
LUI µ
4>DIA=UAD1C
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Fi4ura 9 1s/uema del ensa-o en im)tico propuesto por $harma et al . * ###,ariantes
1sta t&cnica ha sido modi cada en m+ltiples ocasiones% a continuación semencionan las principales2
• 1l volumen se puede reducir para ahorrar reactivos -?o muestra o paraa
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10 Determinación de actividad ela4itanasaRe5naldo De La (ruz Muiroz
Laboratorio de Microbiología . Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad de
Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila%M&'ico.
#ateriales ReactivosMicropipetas de 8## l a 8### l -
de 8# l a !# l.9untillas de 8 ml - de 8## l
Jubos de ensa-e o tubos eppendorY Hradilla
$olución madre del est)ndar de)cido el)gico
1tanol absolutouYer de citratos p6 !
$olución de elagitaninos 8 mg?ml
Procedimiento$e usaron dos controles% uno de sustrato *C$, - el otro de en ima *C1,.
La me cla de reacción contenía elagitaninos *8 mg?mL, S e'tracto en im)tico.C$2 8 ml de elagitaninos *8 mg?ml, en buYer de citrato p6 ! *#.#! M, S !#
l de buYer de citratos.C12 8 ml de buYer de citratos p6 ! *#.#! M, S !# l de e'tracto en im)tico.Me cla reacción2 8 ml de elagitaninos *8 mg?ml, en buYer de citratos S !# l
de e'tracto en im)tico.• $e de
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A partir de la solución madre preparar soluciones a 5##% 4##% ##% 8## - # ppmde A1% para reali ar una curva de calibración.
Referencia
Míreles=Eamíre % M.C. ##". Determinación de las condiciones de reacción de laen ima elagitanasa obtenida por Asper$illus ni$er H68 en cultivo en mediosólido. Jesis de licenciatura. Universidad Autónoma de Coahuila.
5#DIA=UAD1C
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1 Determinación de actividadendo4lucanasa#i4uel Kn4el #edina #orales
Laboratorio de Microbiología. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad deCiencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila%
M&'ico.
9ara reali ar la detección de la acción responsable de la depolimeri ación de lacelulosa es necesario determinar tres actividades en im)ticas% las cuales son2actividad endoglucanasa% e'o=glucanasa - ^=glucosidasa.
Determinación de actividad endo4lucanasa
1n este caso se detecta la actividad de las en imas responsables de lahidrólisis de los enlaces ^=8%5 locali ados en las regiones internas de lamol&cula de celulosa% contribu-endo a la disminución del grado depolimeri ación.
#etodolo4>a#aterial
Jubos de ensa-e *84 ' 8##,
Carbo'imetil celulosa a !## ppm *$ustrato,uYer de ACC:a #.8 M a p6 5."a3o maría a !# ;C
Eeactivos para determinación de a +cares reductores *$omog-i=:elson,
Procedimiento-lanco de sustrato ,-S2 21n un tubo de ensa-e colocar ## L de buYer mas !# L de e'tracto
en im)tico
-lanco de enzima ,-$2 21n un tubo de ensa-e colocar ## L de sustrato m)s !# L de buYer.
#ezcla de reacción ,#R2 258
DIA=UAD1C
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1n un tubo de ensa-e colocar ## L de sustrato m)s !# L de e'tractoen im)tico.
Cada tubo se coloca en ba3o maría durante 8# minutos - se detiene la reacción
mediante ebullición en ba3o maría durante ! minutos.A cada tubo se le miden a +cares reductores. Cada una de las determinacionesdebe reali arse por triplicado o de acuerdo a las muestras /ue se tengan. Lostubos pueden ser incubados simult)neamente.
Referencia
Hhose% J.@. *8 ">,. Measurement o( cellulase activities. 9ure ] Appl. Chem. ! 2!> [ 0".
5DIA=UAD1C
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1 Determinación de actividade o4lucanasa#i4uel Kn4el #edina #orales
Laboratorio de Microbiología. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad deCiencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila%
M&'ico.
1n este caso se detecta la actividad de las en imas responsables de lahidrólisis de los enlaces ^=8%5 locali ados en las regiones e'ternas de lamol&cula de celulosa% contribu-endo a la disminución del grado depolimeri ación.
#etodolo4>a#aterial
Jubos de ensa-e *84 ' 8##, Jiras de papel ltro hatman _8 de 8 cm ' 0 cm *$ustrato,
uYer de ACC:a #.8 M a p6 5."a3o maría a !# ;C
Eeactivos para determinación de a +cares reductores *$omog-i=:elson,.
Procedimiento-lanco de sustrato ,-S2 21n un tubo de ensa-e colocar 8 mL de buYer - se colocan !# L de e'tractoen im)tico
-lanco de enzima ,-$2 21n un tubo de ensa-e colocar 8 mL de buYer - se colocan una tira de papel
ltro
#ezcla de reacción ,#R2 21n un tubo de ensa-e colocar 8 mL de buYer - se colocan una tira de papel
ltro. $e adicionan !# L de e'tracto en im)tico.
54DIA=UAD1C
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Cada tubo se coloca en ba3o maría durante 8 h - se detiene la reacciónmediante ebullición en ba3o maría durante ! minutos.A cada tubo se le miden a +cares reductores. Cada una de las determinacionesdebe reali arse por triplicado o de acuerdo a las muestras /ue se tengan. Los
tubos pueden ser incubados simult)neamente.
Referencia
Hhose% J.@. *8 ">,. Measurement o( cellulase activities. 9ure ] Appl. Chem. ! 2!> [ 0".
55DIA=UAD1C
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1E Determinación de actividad N!4lucosidasa#i4uel Kn4el #edina #orales
Laboratorio de Microbiología. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad deCiencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila%
M&'ico.
1n este caso se detecta la actividad de las en imas responsables de lahidrólisis de los enlaces ^=8%5 locali ados en la celobiosa liberada por e(ecto dela acción de la e'oglucanasa. La hidrólisis de la celobiosa libera glucosa comoproducto para nali ar la hidrólisis de la celulosa.
#etodolo4>a#aterial
Jubos de ensa-e *84 ' 8##,p=:9H mM *$ustrato,:a C7 4 #.8 M
uYer de AAA:a #. M a p6 5.0a3o maría a !# ;C
Eeactivos para determinación de a +cares reductores *$omog-i=:elson,.
Procedimiento#ezcla de reacción ,#R2 2
• 1n un tubo se colocan "## L de buYer• $e agregan 8## L de sustrato• A la me cla se adicionan 8## L de e'tracto en im)tico
Cada tubo se coloca en ba3o maría durante 8# minutos - se detiene la reacciónagregando 8## L de :a C7 4 #.8 M.A cada tubo se le miden a +cares reductores. Cada una de las determinacionesdebe reali arse por triplicado o de acuerdo a las muestras /ue se tengan. Lostubos pueden ser incubados simult)neamente.
5!DIA=UAD1C
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Referenciaattem% D - $hett-% @. * ## ,. $olid=state production o( phenolic antio'idants
(rom cranberr- pomace b- Ehi opus oligosporus. Food biotechnolog-. 802 8" [
8#.
50DIA=UAD1C
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1/ Determinación de actividad ilanasa#i4uel Kn4el #edina #orales
Laboratorio de Microbiología. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad de
Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila%M&'ico.
La actividad 'ilanasa es la responsable de la degradación de los 'ilanoscontenidos en la mol&cula de hemicelulosa
#etodolo4>a#aterial
Jubos de ensa-e *84 ' 8##,Zilanos a !## ppm *$ustrato,
uYer de ACC:a #.#! M a p6 5."a3o maría a !# ;C
Eeactivos para determinación de a +cares reductores *$omog-i=:elson,
Procedimiento-lanco de sustrato ,-S2 21n un tubo de ensa-e colocar ## L de buYer mas !# L de e'tractoen im)tico
-lanco de enzima ,-$2 21n un tubo de ensa-e colocar ## L de sustrato m)s !# L de buYer.
#ezcla de reacción ,#R2 21n un tubo de ensa-e colocar ## L de sustrato m)s !# L de e'tractoen im)tico.
Cada tubo se coloca en ba3o maría durante 8# minutos - se detiene la reacciónmediante ebullición en ba3o maría durante ! minutos.
5>DIA=UAD1C
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A cada tubo se le miden a +cares reductores. Cada una de las determinacionesdebe reali arse por triplicado o de acuerdo a las muestras /ue se tengan. Lostubos pueden ser incubados simult)neamente.Referencia
Hhose% J.@.% isaria% .$. *8 ">,. Measurement o( hemicellulase activities. 9art82 Zilanasas. 9ure ] Appl. Chem. ! 2 8>4 [ 8>! .
5"DIA=UAD1C
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• A3adir a la cubeta de reacción 8 mL de solución etanólica de A J$ - 8#L de muestra. De.
!#DIA=UAD1C
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1 Técnica para medir reducción de DPPI)orma Paola #eléndez Renter>a
Laboratorio de iología Molecular. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad de
Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. $altillo% Coahuila% M&'ico.Fundamento1l radical % =di(enil=8=picril=hidracil *D996, posee coloración morada% cuandoencuentra un 6 S con el cual complementar su estructura pierde la coloración.1l cambio de coloración es lo /ue permite cuanti car el poder antio'idante dela sustancia colocada como muestra.
Técnica8
• 9reparar el radical a una concentración de 0# M% en soluciónmetanólica.
• Determinar la longitud de onda de absorbancia del radical% mediante unbarrido en el rango visible.
• 1mplear como blanco de lectura solo metanol - como absorbanciacontrol la de la solución D996=metanol.
• A3adir a la cubeta de reacción ## L de solución metanólica de D996- 8## L de muestra. Cuanti car el cambio de absorbancia de maneracin&tica. $i es necesario deben hacerse diluciones de la muestra% dondela reacción de neutrali ación del radical sea paulatina.
• De nir el tiempo en el cual el valor de la absorbancia permanececonstante. Jomar este valor para hacer las reacciones a tiempo nal.
• $i las muestras son e'tractos de plantas% e'presar los resultados comoe/uivalentes de D996? g de material% utili ando el n+mero de Avogadropara su c)lculo. as)ndose en la concentración de la solución del radical- la cantidad de solución /ue reaccionó con la muestra.
!8DIA=UAD1C
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• 9ara gra car los datos% pueden emplearse tambi&n las relaciones de Abss concentración *curva de calibración, o bien el porcenta
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Técnica para medir reducción de DPPIen microplaca)orma Paola #eléndez Renter>a
Laboratorio de iología Molecular. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad deCiencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. $altillo% Coahuila% M&'ico.
Fundamento1l radical % =di(enil=8=picril=hidracil *D996, posee coloración morada% cuandoencuentra un 6 S con el cual complementar su estructura pierde la coloración.1l cambio de coloración es lo /ue permite cuanti car el poder antio'idante dela sustancia colocada como muestra.
Técnica8
• 9reparar el radical a una concentración de 0# M% en solución
metanólica.• Determinar la longitud de onda de absorbancia del radical% mediante un
barrido en el rango visible. $e puede usar el procedimiento espectroD996 del so(tRare Hen !.
• 1mplear como blanco de lectura solo metanol - como absorbanciacontrol la de la solución D996=metanol.
• Colocar en la microplaca las muestras del blanco.• Colocar en la microplaca 8 4 L de solución D996=metanol - > L de la
muestra a anali ar. Japar con un papel aluminio para evitar el contacto
directo con la lu mientras se llenan los pocillos con D996 - muestras.• Cuanti car el cambio de absorbancia de manera cin&tica. $i es necesario
deben hacerse diluciones de la muestra% donde la reacción deneutrali ación del radical sea paulatina. 1l nombre del programa en el1poch es D996 cin&tica.
!4DIA=UAD1C
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• De nir el tiempo en el cual el valor de la absorbancia permanececonstante. Jomar este valor para hacer las reacciones a tiempo nal.
• Modi car el tiempo de lectura del programa D996 punto nal delso(tRare Hen !.
• $i las muestras son e'tractos de plantas% e'presar los resultados comoe/uivalentes de D996? g de material% utili ando el n+mero de Avogadropara su c)lculo. as)ndose en la concentración de la solución del radical- la cantidad de solución /ue reaccionó con la muestra.
• 9ara gra car los datos% pueden emplearse tambi&n las relaciones de Abss concentración *curva de calibración, o bien el porcenta
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Referencia8 Mol-neu' 9. * ##5,. Jhe use o( the stable (ree radicaldiphen-lpicr-l=h-dra -l *D996, (or estimating antio'idant activit-.$ong lana arin . $ci. Jechnol. 0 * ,2 88= 8 .
!!DIA=UAD1C
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3 $valuación electro?u>mica de laactividad anti!radicalariaDulce A
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Flores=Maltos% D.A. * #8#,. Desarrollo de un microelectrodo para la evaluacióndel poder antio'idante total del e'tracto de damiana. Jesis de Maestría.Universidad Autónoma de Coahuila.
;Secado de muestras 5 determinaciónde materia seca total
Romeo Ro as #olinaLaboratorio de Jecnología de Alimentos. Departamento de Investigación en Alimentos.
Facultad de Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo%Coahuila% M&'ico.
%ntroducción
La humedad es una de las determinaciones m)s importantes -
ampliamente usadas en el control - procesamiento de muestras. 1nalimentos% inWu-e en las estructura% apariencia - gusto de los productos%determina su susceptibilidad al deterioro *(ísico% /uímico omicrobiológico, - permite determinar adulteraciones. La determinaciónde humedad puede ser el an)lisis m)s importante llevado a cabo en unproducto alimentario pero es posible /ue sea el an)lisis del /ue seobtienen resultados poco e'actos - precisos. 1ste valor analítico es degran importancia económica para un (abricante de alimentos% -a /ue elagua es un llenador barato % así2
• 1l contenido de humedad es un (actor de calidad en la conservaciónde algunos productos% -a /ue a(ecta la estabilidad de2 (rutas -vegetales deshidratados% leches deshidratadas huevo en polvo% papasdeshidratadas - especias.
• La determinación de humedad se utili a como (actor de calidad de2 DIA=UAD1C
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deshidratados *&stos son mu- di(íciles de empacar si poseen un altocontenido de humedad
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MST = Pesocrisol conmuestra seca− Peso decrisol solo
g demuestra x 100
H = 100 − MST
)'TA8 Eeali ar la determinación por triplicado - la di(erencia no debeser superior al ! G del promedio.
ReferenciaInstituto :acional de :ormali ación% :Ch "58 o( >".7Xcial Methods o( Anal-sis. A.7.A.C. 8! th 1dition 8 #
0 Determinación de cenizasRomeo Ro as #olinaLaboratorio de Jecnología de Alimentos. Departamento de Investigación en Alimentos.
Facultad de Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo%Coahuila% M&'ico.
%ntroducción
La determinación de ceni as es tambi&n conocida como el an)lisis deresiduos inorg)nicos /ue /uedan despu&s de la ignición u o'idacióncompleta de la materia org)nica de un alimento. 1s esencial elconocimiento b)sico de las características de varios m&todos paraanali ar ceni as así como el e/uipo para llevarlo a cabo para garanti arresultados con ables. 9ara esto% e'isten tres tipos de an)lisis de ceni as2ceni as en seco para la ma-oría de las muestras de alimentos ceni ash+medas *por o'idación, para muestras con alto contenido de grasa*carnes - productos c)rnicos, como m&todo de preparación de lamuestra para an)lisis elemental - an)lisis simple de ceni as de plasmaen seco a ba
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:7JA$
• :o poner cinta a los crisoles para identi carlos. Usar el n+meroimpreso en el crisol por el (abricante.
• Una (orma r)pida de poner a peso constante los crisoles es
meterlos por 8! min a la muWa a una temperatura de !!#=0## ;C -en(riar en desecador por 8!= # min *no cerrar completamente eldesecador -a /ue el calor de los crisoles puede provocar /ue latapa se pro-ecte - se rompa,.
ReferenciaInstituto :acional de :ormali ación% :Ch "58 o( >".7Xcial Methods o( Anal-sis. A.7.A.C. 8! th 1dition 8 #A7AC. 8 "#. 7Xcial Methods o( Anal-sis. Association o( 7Xcial
Anal-tical Chemists. ashington% D.C.Eanganna% $. 8 >>. Manual o( Anal-sis o( Fruits and egetable 9roducts.
McHraR=6ill.
Determinación de l>pidos ,#étodo deSo Clet 2
%smael #enera LópezDepartamento de Investigación en Alimentos. Facultad de Ciencias Químicas. Universidad
Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila% M&'ico.
F+)DA#$)T'
La muestra seca se e'trae con alg+n disolvente *he'ano% &ter etílico% &ter depetróleo, posteriormente se determina el e'tracto seco por di(erencia de peso%del /ue se elimina el disolvente,.
#AT$R%AL & $M+%P'8. 1'tractor so'leth *si(ón% re(rigerante% manta de calentamiento,
. Cartucho poroso de celulosa o papel ltro4. 9arilla el&ctrica% o manta de calentamiento5. Eegulador de volta
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>. Disolvente
#$T'D'L'G A
Colocar de [ ! g en papel ltro de muestra o en un cartucho de celulosa de
poro mediano% el cual se coloca en el anterior del si(ón de un aparato dee'tracción $o'leth. $acar un matra redondo plano% boca esmerilada de laestu(a /ue este a peso constante% en(riar por 4# minutos - pesar% adicionar eldisolvente *&ter etílico% &ter de petróleo o he'ano, hasta la mitad del matra %acoplar el re(rigerante del depósito so'leth. 1'traer por un periodo de 5=!horas% al nali ar la e'tracción colocar a peso constante nuevamente elmatra bola (ondo plano en la estu(a a 8## [ 8#4;C por 5 horas% transcurridoel tiempo% sacar% en(riar - pesar.
C)lculos2
GH V m [ m8 ' 8## m
Donde2
GH V 9orcenta
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Determinación de =
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La bra tambi&n proporciona propiedades (ísicas a los alimentos% -generalmente ba
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>. Jranscurrido el tiempo sacar - ltrar a trav&s de lino - lavar con 4porciones de agua destilada caliente - hacer prueba de papel tornasolpara veri car si ha- presencia de reacción alcalina.
". 1scurrir el e'ceso de agua presionando la tela de lino.. $acar la tela del lino del embudo% e'tender - retirar la bra con una
esp)tula - depositarla en un crisol de porcelana% previamenteidenti cado.
8#.9oner a peso constante en la estu(a a 8##=8#4 ;C por 8 h.88.$acar de la estu(a% en(riar *a peso constante en desecador, - pesar.8 .9re=incinerar la muestra en parrilla - meter en la muWa a !!#=0## ;C por
=4 h.84.$acar% en(riar *a peso constante en desecador, - pesar85.Calcular.
C)lculos
%FC = peso crisolcon fi raseca− pe socrisol fi racenizas
g de muestra x100
ReferenciaInstituto :acional de :ormali ación% :Ch "58 o( >".7Xcial Methods o( Anal-sis. A.7.A.C. 8! th 1dition 8 #
E Determinación de nitró4eno por elmétodo Q eldaCl#i4uel Kn4el #edina #orales 1 5 Romeo Ro as #olina
Laboratorio de Microbiología 8. Laboratorio de Jecnología de Alimentos . Departamento deInvestigación en Alimentos. Facultad de Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de
Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila% M&'ico.
%ntroducción
1n esta t&cnica se digieren las proteínas - otros componentes org)nicosde los alimentos en una me cla con )cido sul(+rico en presencia decatali adores. 1l nitrógeno org)nico total es convertido en sul(ato deamonio. La me cla digerida se neutrali a con una base - se destilaposteriormente en una solución de )cido bórico. Los aniones del borato
00DIA=UAD1C
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así (ormado se titulan con 6Cl estandari ado% lo cual se convierte en elnitrógeno de la muestra. 1l resultado del an)lisis representa elcontenido de proteína cruda del alimento -a /ue el nitrógeno tambi&nproviene de componentes no prot&icos.
Fuentes de errorConstitu-en (uentes de error en este m&todo son2 la inclusión denitrógeno no prot&ico como parte de la proteína la p&rdida de nitrógenodurante la digestión% la digestión incompleta de la muestra.Las proporciones e'cesivas de sul(ato de sodio o potasio /ue se a3adenal )cido *para elevar el punto de ebullición, pueden resultar en una
descomposición por calor - la consecuente p&rdida de amoníaco.Heneralmente se recomiendan temperaturas de digestión de 4>#=58#;C.
Jambi&n puede ocurrir p&rdida de nitrógeno si se utili a demasiadoselenio o la temperatura de la digestión no se controla cuidadosamentelas condiciones son a+n m)s críticas /ue con el cobre o el mercuriocuando se usan como catali adores.
Reacciones llevadas a caDIA=UAD1C
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TITULACIÓN1l anión borato *proporcional a la cantidad de nitrógeno, es titulado con
6Cl estandari ado2
*5, 6 7 4=S 6 S 6 4 7 4
#AT$R%AL
• 8 matra de digestión @
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pentahidratado *proporcionada por la coordinación delaboratorios,.
# T'D'
$LA-'RA(%') D$ R$A(T% 'S
8.= Me cla Indicadora.= 9repare por separado los indicadores verde debromocresol al #.8G - el ro
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PR'($D%#%$)T'
Di4estión
8.= 9ese e'actamente #.8!g de harina de trigo en un matra de micro=@
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en donde2
:6Cl V :ormalidad del 6Cl en moles?8###ml.olumen del )cido corregido V *ml. del )cido estandari ado para la
muestra, = *ml. de )cido estandari ado para el blanco,.85 V 9eso atómico del nitrógeno.
$e utili a un (actor para convertir el porcenta4DIA=UAD1C
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/ $ tracción de AD) ,método de (TA-2#ariana Del4ado Garc>a
Laboratorio de iología Molecular. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad de
Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila%M&'ico.
La e'tracción de AD: por la t&cnica de CJA (ue propuesta por Do-le - Do-le*8 ">,. 1ste m&todo es apropiado para le e'tracción - puri cación del AD: deplantas% productos alimenticios% cepas (+ngicas% - es utili ado para laeliminación de polisac)ridos - componentes poli(enólicos% /ue a(ectan lapure a del AD:% por lo tanto la calidad de este.
La t&cnica consta de tres pasos. 1l primero consta de una lisis de la paredcelular. La muestra se trata con un buYer /ue contiene 1DJA% Jris?6Cl - CJA %de esta manera se eliminan los lípidos - las proteínas de la pared celular. 1lCJA tiene la (unción de capturar los lípidos - así% liberar el AD:. 1l 1DJA es uncomponente /uelante% /ue con otros metales se enla a al Mg el cual es unco(actor de las AD:asas% por lo /ue al unirse el Mg con el 1DJA se reduce laactividad de estas en imas. 1l Jris?6Cl da a la solución un p6 adecuado para elAD: no se da3e.La e'tracción total de AD:% se reali a utili ando una solución de cloro(ormo=
alcohol isoamílico el cual (acilita la eliminación de polisac)ridos%proteínas% etc.
$ tracción81n este paso% los polisac)ridos% compuestos (enólicos% proteínas - otros lisados
celulares son disueltos en una solución acuosa% separados del CJA -comple5DIA=UAD1C
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nucleicos en la (ase org)nica tienden a partirse si el p6 de la solución acuosano ha sido adecuadamente e/uilibrado de un valor de p6 de >."=".#% de sernecesaria la e'tracción con cloro(ormo se reali a dos o tres veces para así remover completamente las impure as de la capa acuosa.
La +ltima etapa /ue es la precipitación% se separan los )cidos nucleicos deldetergente% para lo cual la solución acuosa se trata primero con una soluciónde precipitación compuesta por una me cla de CJA - :aCl en concentraciónelevada. Una alta concentración salina es necesaria para /ue se (orme unprecipitado de )cidos nucleicos. 9uede ser pre(erible emplear acetato de sodioen lugar de :aCl por su capacidad tampón. 1n estas condiciones% eldetergente% /ue es m)s soluble en alcohol /ue en agua% puede eliminarse por
lavado% mientras /ue los )cidos nucleicos precipitan. 1l posterior tratamientocon etanol al ># G permite una ma-or puri cación o elución de los )cidosnucleicos de la sal residual.
Protocol o:
19 9esar #.8g de material a e'traer - se envuelve en papel aluminioeti/uetado previamente.
9 Colocar las muestra dentro del termo de nitrógeno lí/uido por 8# S?=
minutos.39 Inmediatamente despu&s macerar la muestra a polvo no con un
mortero esterili ado - congelado previamente.:7JA2 A partir de este momento se re/uiere utili ar guantes de l)te' - bata
de manga larga.;9 Jrans(erir el te!DIA=UAD1C
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sobrenadante - trans(erirlo a un tubo nuevo de 8.!ml previamenteesterili ado - eti/uetado.
9 Agregar el mismo volumen de cloro(ormo2 alcohol isoamílico * 528, altubo con el sobrenadante.
E9 Me clar por inversiones suaves durante 8= minutos. Centri(ugar en laultracentrí(uga por 8# minutos a 8 %###rpm.
*+A de manera opcional se puede obtener el lí/uido sobrenadante - volver ame clarse con un volumen e/uivalente de cloro(ormo2 alcohol isoamílico
528 para volverse a lavar. $eguir el paso " - continuar con el siguientepaso.
/9 Jrans(erir a otro tubo est&ril de 8.!ml la (ase acuosa *(ase superior de lasolución,. Agregar !# l de acetato de amonio >.!M m)s "## l de etanol
(río al 0G.179 Me clar por inversiones suaves. Colocar en un congelador por 0#
minutos.119 Centri(ugar a 8 %###rpm por ! minutos - descartar el
sobrenadante.1 9 Lavar la pastilla adherida al tubo */ue es el AD:, dos veces con
etanol al >#G *v?v, me clado cada ve por inversión suave. Colocar eltubo destapado en posición invertida hasta /ue el olor a etanol
desapare ca.139 Eesuspender el AD: con "# l de :a76 "mM. Ee(rigerar las
muestras.:7JA A partir de esta etapa las muestras deben permanecer re(rigeradas
Referencia9Do-le . % Do-le .L *8 ">, A rapid D:A isolation procedure (or small/uantities o( (resh lea( tissue. 9h-tochem ull 8 288=8!
>0DIA=UAD1C
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37 $nsa5o in vitro de actividad antif"n4ica#i4uel Kn4el De León *apata
Laboratorio de Fermentaciones. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad deCiencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila%M&'ico.
1l presente ensa-o es para determinar el porcenta
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potenciación de la capacidad anti(+ngica contra hongos topatógenos%/ue se calculó seg+n la ecuación 5.
P AF = AF F
AF &F
*5,
Donde 9AF V 9otenciación de la actividad anti(+ngica por la aplicacióndel proceso de (ermentación AF 1F V Inhibición del e'tracto (ermentado*G, - AF 1:F V Inhibición del e'tracto sin (ermentar *G,.
1l c)lculo de 9AF *potenciación de la actividad anti(+ngica por laaplicación del proceso de (ermentación,% se determina al considerar /ueel e(ecto de inhibición en el crecimiento (+ngico es similar con ambos om)s e'tractos% por lo /ue se procede a dividir el G de inhibición deambos e'tractos% dando un valor cercano a 8 o inclusive 8% lo /ue nosindica una perspectiva mu- general del e(ecto de potenciación de laactividad anti(+ngica durante el proceso de (ermentación del e'tracto.
Jomando el valor 8 como el valor central% a partir del cual se interpretala concentración en la /ue se obtiene el ma-or e(ecto potencial de laactividad inhibitoria en el crecimiento de hongos topatógenos.
1 1M9L7 D1 HEPFICA2
>DIA=UAD1C
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0 200 400 .00 00 1000 12000
0"2
0"4
0".
0"1
1"2
1"4
1".
1"
Concentracion (ppm)
PAF
1
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)eu