Ao de la Industria Responsable y del Compromiso ClimticoUNIVERSIDAD NORBERT WIENER

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICAEPEX

Practica N 13: Identificacin deLactonas en las Hojas de Matricaria Chamomilla L.por Mtodos CromatogrficosDOCENTE:Flix Veliz, Luis MiguelALUMNOS: GUTIERREZ CACHIQUE, PierinaROJAS CAPCHA, KatherineROMAN CARBAJAL, JorgeRUMICHE PINGO, LesliSALAZAR BARRIOS, EvelinSERVAN MELENDEZ, Janet

CURSO:Qumica Orgnica IICICLO:FBX4N12 0 1 4

I. INTRODUCCION

En el presente informe se realiza la Identificacin deLactonas por Mtodos Cromatogrficos las cuales pueden separarse y analizarse bien sea por cromatografa en columna o cromatografa en capa fina.

Asimismo conforme se revise este informe se reconocern algunas caractersticas sobre la coloracin, la fluorescencia, el cambio de color, por medio de los mtodos cromatogrficos aplicados en el laboratorio, adems de otras tcnicas para reconocer esteroides y flavonoides tanto en las hojas de manzanilla como en nuestra planta de investigacin, que es la Mua.

A continuacin se explica y conoce las tcnicas por cromatografa en capa fina para la identificacin de lactonas en las Hojas de Matricaria Chamomilla L.(Manzanilla) por mtodos cromatogrficos; esto debido a que en la prctica anterior de las hojas y flores de manzanilla, solo las hojas dieron positivo (aunque o se observo el espejo de plata, si se formo un precipitado negro) con el reactivo de Tollens en las Pruebas generales para lactonas sesquiterpnicas y a esteroides con el Reactivo de Liberman-Bouchardt.

II. MARCO TEORICO:

Una lactona es un compuesto orgnico del tipo ster cclico. Se forma como producto de la condensacin de un grupo alcohol con un grupo cido carboxlico en una misma molcula. Las estructuras ms estables de las lactonas son los miembros con 5 anillos (gama-lactonas) y los de 6 anillos (los delta-lactonas), por razn de la menor tensin en los ngulos del compuesto. Las gama-lactonas son tan estables que en la presencia de cidos diluidos a temperatura ambiente, stos de inmediato sufren esterificacin espontnea y ciclizacin sobre la lactona. Las beta-lactonas existen en la qumica orgnica, pero tienen que ser preparados por mtodos especiales.

Las lactonas se pueden considerar como esteres internos de los cidos hidroxicarboxilicos y se distingue entre lactonas alfa, beta, gama y delta de anillos mayores. Las lactonas derivados de los cidos carboxlicos alifticos se nombran aadiendo el sufijo lido al nombre del hidrocarburo no hidroxilado del mismo nmero de tomos de carbonos.

Nomenclatura:

Se nombran agregando el sufijo lactona al hidrocarburo del cual proviene el cido carboxlico.

El tamao del ciclo suele indicarse con una letra griega (-, -, -, -lactonas) que le corresponde en la nomenclatura de la Mientras que, en general, las -lactonas solo se pueden detectar en disolucin y las -lactonas solo se pueden obtener por medio de procesos especiales, y -lactonas se obtienen fcilmente a partir de los correspondientes hidroxicidos. Los representantes ms importantes son la -butilactona y las y -valerolactona.

Sntesis de Lactonas:

Obtencin; adems de por los mtodos generales, algunas lactonas se obtienen industrialmente como sigue:

1. La beta-propiolactona se obtiene por cicloadicin de ceteno y formaldehido en medio anhidro y en presencia de cloruro de cinc (rendimiento 90%)

2. La gama butirolactona resulta por dehidrogenacion del 1,4-butanodiol a 200C, en presencia de cobre.

Adems las lactonas por ser steres cclicos se pueden obtener mediante esterificacin intramolecular a partir de molculas que contienen grupos cido y alcohol. Esta ciclacin forma ciclos de 5 o 6 miembros.

El mecanismo de esta reaccin transcurre en los siguientes pasos: Etapa 1. Protonacin del grupo carboxlico Etapa 2. Adicin nuclefila del alcohol al grupo carboxlico (etapa de ciclacin) Etapa 3. Equilibrio cido-base Etapa 4. Eliminacin de aguaEs extraordinariamente reactiva y se utiliza ampliamente en sntesis. Es un potente cancergeno. La reactividad de las lactonas se limita especialmente al grupo lactona.

En la reduccin con amalgama de sodio en medio acido resulta el correspondiente acido carboxlico.

Por lo contrario, la misma reaccin de las polihidroxilactonas, en medio acido dbil, conduce a las aldosas.

Una ruptura del enlace de lactona, con formacin del correspondiente acido carboxlico sustituido, se produce con cidos halogenados concentrados, cianuros alcalinos o hidrogenosulfito de sodio; con amoniaco resulta las hidroxiamidas, que se transforman fcilmente en lactamas por prdida del agua; por ejemplo: Lactonizaciones promovidas por el mtodo de Keck y col.4 consiguen la lactonizacin de hidroxicidos por activacin con diciclohexilcarbodiimida y N,N-dimetilaminopiridina, obtenindose buenos resultados en el caso de macrolactonas de 16 y 17 miembros. Sin embargo, el rendimiento disminuye en el caso de las de 14 y 15 miembros.

En el transcurso de la reaccin se forma tambin urea, la cual es fcilmente separable por mtodos convencionales, como cristalizacin y separacin cromatogrfica.

Las lactonas de anillos superiores son accesibles por oxidacin de cetonas cclicas con cido persulfurico, H2SO5, (Ruzicka).Reaccin de Mitsunobu. El hidroxicido se hace reaccionar con una combinacin de azodicarboxilato de dietilo y trifenilfosfina en medio neutro, obtenindose la lactona con rendimientos variables dependiendo del disolvente empleado y, principalmente, del tamao del anillo requerido.5 La reaccin puede explicarse admitiendo un intermedio dipolar, un carboxilato alcoxi-fosfonio, segn se observa en el esquema, que favorecera el acercamiento y ciclacin.

Las lactonas sesquiterpnicas pueden separarse y analizarse bien sea por cromatografa en columna o cromatografa en capa fina, utilizado Silicagel y eluyentes como: CHCl3:MeOH(9:1), : CHCl3: MeOH(19:1), CHCl3: Et2O (4:1), CHCl3: Et2O (5:1), Bz: Me2CO (4:1), Bz:EtOAc (5:5).Como agentes reveladores para los anlisis por cromatografa en capa fina, pueden utilizarse: cido sulfrico concentrado y calentamiento, vapores de yodo, luz ultravioleta 254 nm o permanganato de potasio al 1%. Se han reportado un revelador para lactonas sesquiterpnicas (p dimetilamino benzaldehdo).

III. RESULTADOS

Con la ayuda de una bagueta se extrae una pequea porcin del extracto seco de las Hojas de Manzanilla y se prepara una solucin sobresaturada con el etanol.

Disolver el extracto de manzanilla en 0.5 ml de etanolPara obtener una buena muestra, el extracto tiene que estar muy concentrado.Hacer la solucin sobresaturada

Sacar piscas del extracto de manzanilla

Hacer 15 veces el sembrado de las hojas de la manzanilla (+ a Lactonas: prctica anterior) y 15 veces de la M.P: Mua

Preparar los capilares para el sembradoExtracto de hojas de manzanillaM.P: Mua

En la cuba cromatografica con la fase mvil se espera que se realice el recorrido dejando un espacio de 1cm en la parte superior de la placa. Poner en la estufa para el secado y poder realizar el revelado.

Preparar en la cuba cromatografica con cloroformo y acetona (9:1)Observamos el recorrido de la placa en forma regular

Despus del secado de la placa ponemos a la luz UV encontramos manchas fosforescente que no podemos reconocer que molcula puede ser, as como tambin observamos manchas oscuras que pueden ser flavonoide en la muaLuego volvemos a poner a la UV, pasamos con vapores de amoniaco lo utilizamos para confirmar si hay presencia de flavonoides

Debido a que la MP no dio (+) en la prctica anterior en alcaloides, todo se hace revelar con H2SO4 al 50 % (debido a que concentrado no asperja, por eso se baja) para ayudar a encontrar molculas esteroidales.

Luego preparamos el revelador de H2SO4 10ml y agua homogenizamos Revelamos toda la placa con el revelador de H2SO4 para ayudar a confirmar si hay presencia de esteroides

Llevamos de nuevo a la luz UV y observamos que aparece otra mancha fosforescente arriba, posiblemente sean molculas esteroidales.

Llevamos a secar la placa a la estufa para volver a poner en la luz UV

Flavonoides : 2 manchas marrones oscuras.

Manchita roja fosforescente: clorofila o lactona Hojas de manzanillaM.P: MuaPosiblemente sean molculas esteroidales

RESULTADO FINAL:Se observ por medio de la cromatografa en capa fina las manchas caractersticas de las lactonas en la hoja de manzanilla y tambin 2 manchas que posiblemente sean molculas esteroidales. Asimismo la presencia de 2 flavonoides en la mua cuando se revel con H2SO4 al 50%.

IV. DISCUSIONES

Una lactona es un compuesto orgnico del tipo ster cclico. Se forma como producto de la condensacin de un grupo alcohol con un grupo cido carboxlico. Las estructuras ms estables de las lactonas son los miembros con 5 anillos (gama-lactonas) y los de 6 anillos (los delta-lactonas). Las gama-lactonas son tan estables que en la presencia de cidos diluidos a temperatura ambiente stos de inmediato sufrenesterificacinespontnea yciclizacin sobre la lactona

Las lactonas sesquiterpenicas, como su nombre lo indica, son terpenos, que tienen adems en su estructura una lactona. Para identificar estos compuestos se realizo la CCF) eludas con una fase mvil compuesta por cloroformo y acetona.

Mediante la CCF realizada se observa 01 pequea fluorescencia roja, en la parte central de la placa la cual coincide tambin con lactonas, sin embargo al tratarse de hojas de manzanilla y debido a que contienen clorofila, esto puede causar confusin ya que de no estar bien separada la muestra y observarse claramente la mancha, se puede reportar un falso positivo para sesquiterpenlactonas, ya que la clorofila es un interferente en esta prueba.

En cuanto a la pruebas para esteroides con el revelador de H2SO4 se evidencia la presencia de esteroides por cromatografa, los cuales no fueron del todo especficos ya que las manchas solo nos indica presencia o no de estas molculas pero no de qu tipo de esteroide es.

No se llego a realizar el Rf debido a que no se tena una muestra patrn, pero si se puede apreciar que entre la Manzanilla y la Mua; la muestra que recorri mas ha sido el de las Hojas de Manzanilla que puede ser debido a que el solvente es semipolar.

El contenido de flavonoides en el extracto hidroalcohlico de flor de manzanilla es el factor de calidad, y la apigenina es un constituyente mayoritario de este extracto; adems en las preparaciones comerciales de flor de manzanilla se encuentra un espectro heterogneo de contenido de este tipo de flavonoide. Considerando lo anterior, es necesario buscar mtodos analticos simples, rpidos y sensibles para cuantificar los flavonoides en la flor de manzanilla que validen su calidad.

Los flavonoides por lo que hemos podido buscar informacin se encuentran en la mayor parte en la flor de la manzanilla y nuestra muestra trabajada fue en las hojas de dicha planta.

Entre los principios activos de la manzanilla: ms importantes encontramos : aceite esencial (0,2-1,8%): camazuleno, alfa-bisabolol,. Flavonoides: luteolol, apigenol, quercetol. Cumarinas: umbeliferona, herniarina. Muclagos urnicos (10%). Lactonas sesquiterpnicas (principios amargos): matricina, matricarina, precursoras del camazuleno. Sales minerales (8 al 10%).

V. CONCLUSIONES

Al trmino de la prctica realizada con las hojas de manzanilla (Matricaria chamomilla L.) en la CCF, pudimos encontrar la presencia de lactonas o clorofila (por las manchas rojo fosforescente) y posiblemente la presencia de molculas esteroidales (2 manchas amarillo fosforescentes); asimismo tambin la presencia de 2 flavonoides (manchas marrones oscuras) en la CCF de la Mua.

Se concluye que en la prctica realizada, cuando se revela con acido sulfrico se observa la presencia de molculas esteroidales y flavonoides, en las hojas de manzanilla y en la M.P. de la Mua, respectivamente

VI. CUESTIONARIO

6.1. INDIQUE OTROS AGENTES CROMOGNICOS PARA LA IDENTIFICACIN DE LACTONAS.Uno de los principales agentes cromognicos es la luz ultravioleta utilizada generalmente para este tipo de pruebas, dentro de otros agentes encontramos los siguientes: Solucin de cloruro de cobalto al 2%en una solucin acuosa de cido sulfrico al 19%.

Vapores de yodo.

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Consulta Lactonas http://quimicaorganica.webcindario.com/lactonas.htm.

Alejandro Martnez Martnez SESQUITERPENLACTONAS Facultad de Qumica Farmacutica Medelln, Agosto de 2001.

Jos C. MenesesReyes, Ramn M. SotoHernndez, Teodoro EspinosaSolaresy Martha E. RamrezGuzmn, Optimizacin del proceso de extraccin de flavonoides de flor de manzanilla, disponible en la siguiente pgina: http://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S140531952008000400005&script=sci_arttext.

Bela, Alberto J. Dudik , Nestor H., Control de calidad de materias primas vegetales para fines farmacuticos Carrera de Farmacia - Argentina disponible en: http://www.unne.edu.ar/unnevieja/Web/cyt/cyt/2002/08-Exactas/E-023.pdf.

Vernica Geovana, Montesdeoca Rodriguez, Tesis de Grado Elaboracion y control de calidad de comprimidos fitofarmaceuticos, Facultad de Farmacia y Bioqumica, Escuela Superior Biotecnica Ecuador 2010.