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Curso de

Interpretao de Exames Laboratoriais

MDULO IV

Ateno: O material deste mdulo est disponvel apenas como parmetro de estudos para este Programa de Educao Continuada, proibida qualquer forma de comercializao do mesmo. Os crditos do contedo aqui contido so dados aos seus respectivos autores descritos na Referncia Consultada.

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Este material deve ser utilizado apenas como parmetro de estudo deste Programa. Os crditos deste contedo so dados a seus respectivos autores

MDULO IV

Imunologia 1. Princpios

A Imunologia o ramo da biologia que estuda o sistema imunolgico, suas

caractersticas fsicas, qumicas e fisiolgicas, funes de seus componentes in vitro

e in vivo, etc. Estuda o funcionamento fisiopatolgico do sistema imune de um

indivduo no estado sadio e em casos de doenas, sejam elas imunolgicas ou no

(doenas autoimunes, hipersensitividade, deficincia imune rejeio ps-enxerto).

O conceito de Imunologia foi criado por Elie Metchnikoff em 1882. As

clulas responsveis pela imunidade so os linfcitos e os fagcitos (moncito e

macrfagos). Os linfcitos podem apresentar-se como linfcitos T ou linfcitos B

(estes so responsveis pela produo de anticorpos, denominados Plasmcitos),

os Linfcitos T Citotxicos, destroem clulas infectadas por vrus e os Linfcitos T

Auxiliares coordenam as respostas imunes. Alm das defesas internas existem

tambm defesas externas (Ex: pele como barreira fsica, cidos graxos e

microorganismos comensais). As defesas externas so a primeira barreira contra

muitos organismos agressores. No entanto, muitos conseguem penetrar, ativando

assim as defesas internas do organismo. O sistema imune pode sofrer um

desequilbrio que se apresenta como imunodeficincia, hipersensibilidade ou doena

auto-imune.

As respostas imunes podem ser adaptativas ou inatas: as respostas

adaptativas reagem melhor cada vez que encontram um determinado patgeno e a

resposta inata, ao contrrio da adaptativa, sempre d a mesma resposta mesmo

quando exposta vrias vezes ao patgeno. Os fagcitos coordenam as respostas

inatas e os linfcitos coordenam as respostas imunes adaptativas. Os principais

componentes do sistema imune so os Linfcitos T, Linfcitos B, Fagcitos

Mononucleares, Neutrfilos, Eosinfilos, Basfilos, Plaquetas e clulas teciduais.

Alm dos leuccitos, tambm fazem parte do sistema imune s clulas do

sistema mononuclear fagocitrio (SMF), tambm conhecido por sistema retculo-

endotelial e mastcitos. As primeiras so clulas especializadas em fagocitose e

apresentao do antgeno ao sistema imune. So elas: macrfagos alveolares (nos

pulmes), micrglia (no tecido nervoso), clulas de Kuppfer (no fgado) e

macrfagos em geral.

Os mastcitos

so clulas do tecido conjuntivo,

originadas a partir de clulas

mesenquimatosas (clulas de

grande potncia de diferenciao

que do origem s clulas do

tecido conjuntivo). Possuem

citoplasma rico em grnulos

basfilos (coram-se por corantes

bsicos). Sua principal funo

armazenar potentes mediadores

qumicos da inflamao, como a

histamina, heparina, ECF-A (fator

quimiotxico de atrao- dos

eosinfilos) e fatores

quimiotxicos (de atrao) dos

neutrfilos. Elas participam de

reaes alrgicas (de

hipersensibilidade), atraindo os

leuccitos at o local e

proporcionando uma

vasodilatao. O nosso

organismo possui mecanismos

Mastcitos Fonte: www.afh.bio.br

138 Este material deve ser utilizado apenas como parmetro de estudo deste Programa. Os crditos deste contedo so dados a seus respectivos

autores

de defesa que podem ser

diferenciados quanto a sua

especificidade, ou seja, existem

os especficos contra o antgeno

("corpo estranho") e os

inespecficos que protegem o

corpo de qualquer material ou

microorganismo estranho, sem

que este seja especfico. Plasmcitos Fonte: www.efoa.br

O organismo possui barreiras naturais que so obviamente inespecficas,

como a da pele (queratina, lipdios e cidos graxos), a saliva, o cido clordrico do

estmago, o pH da vagina, a cera do ouvido externo, muco presente nas mucosas e

no trato respiratrio, clios do epitlio respiratrio, peristaltismo, flora normal, entre

outros.

Se as

barreiras fsicas, qumicas e

biolgicas do corpo forem

vencidas, o combate ao

agente infeccioso entra em

outra fase. Nos tecidos,

existem clulas que liberam

substncias vasoativas,

capazes de provocar dilatao

das arterolas da regio, com

aumento da permeabilidade e

sada de lquido. Isso causa

vermelhido, inchao,

aumento da temperatura e

dor, conjunto de alteraes


autores

conhecidas como inflamao.

Essas substncias atraem

mais clulas de defesa, como

neutrfilos e macrfagos, para

a rea afetada.

A vasodilatao aumenta a temperatura no local inflamado, a elevao na

temperatura favorece as reaes qumicas e celulares, estimulando a migrao de

clulas de defesa. Algumas das substncias liberadas no local da inflamao

alcanam o centro termorregulador localizado no hipotlamo, originando a febre.

Apesar do mal-estar e

desconforto, a febre um importante fator no

combate s infeces, pois alm de ser

desfavorvel para a sobrevivncia dos

microorganismos invasores, tambm estimula

muitos dos mecanismos de defesa de nosso

corpo. Por diapedese, neutrfilos e moncitos

so atrados at o local da inflamao,

passando a englobar e destruir (fagocitose) os

agentes invasores. A diapedese e a

fagocitose fazem dos neutrfilos a linha de

frente no combate s infeces.

Esquema simplificado do processo febril

Fonte: www.afh.bio.br

Outras substncias liberadas no local da infeco chegam pelos vasos

sangneos at a medula ssea, estimulando a liberao de mais neutrfilos, que

ficam aumentados durante a fase aguda da infeco. No plasma tambm existem

protenas de ao bactericida que ajudam os neutrfilos no combate infeco.

A inflamao determina o acmulo de fibrina, que forma um envoltrio ao

redor do local, evitando a progresso da infeco.

Caso a resposta inflamatria no seja eficaz na conteno da infeco, o

sistema imune passa a depender de mecanismos mais especficos e sofisticados,


autores

dos quais tomam parte vrios tipos celulares, o que chamamos resposta imune

especfica.

Os linfcitos T e B so

responsveis pelo reconhecimento

especfico dos antgenos. Cada clula B

est geneticamente programada para

codificar um receptor de superfcie

especfico para um determinado

antgeno, os linfcitos T constituem

vrias subpopulaes diferentes com

uma variedade de funes. Em outras

palavras, os Linfcitos B so como

soldados pr-programados para

combater uma determinada doena,

existindo diversos batalhes, cada um

direcionado para um antgeno

especfico. Os linfcitos T so divididos

em duas classes, os Linfcitos T

Citotxico e os Linfcitos T Auxiliar: Os

Linfcitos T Auxiliares so como

comandantes que organizam as aes

e os Linfcitos T Citotxicos so como

agentes especializados em destruir as

clulas do prprio organismo infectadas

pelos agentes estranhos ou mutantes.

Foto em Microscopia Eletrnica de Varredura

Aumento: 20.000 vezes Linfcito T Citotxico (amarelo) atacando clula tumoral

(vermelho) Fonte: www.ciencianews.com.br

Linfcito B produzindo

Imunoglobulinas Fonte: Escola Paulista de

Medicina - UNIFESP

2. PRINCIPAIS CLULAS DO SISTEMA IMUNE (RESPOSTA CELULAR):


autores

2.1 LINFCITOS B:

Os linfcitos B so clulas que fazem parte de 5 a 15% dos linfcitos

circulantes, se originam na medula ssea e se desenvolvem nos rgos linfides. O

nome linfcito B devido a sua origem na cloaca das aves, na Bursa de Fabricius.

So clulas de ncleo grande e que possuem o retculo endoplasmtico rugoso e o

complexo de Golgi extremamente desenvolvidos em seu citoplasma, e especialistas

em sntese de anticorpos quando ativadas. Porm em repouso, estas organelas no

esto desenvolvidas. Os linfcitos B tm como funo prpria, a produo de

anticorpos contra um determinado agressor. Anticorpos so protenas denominadas

de imunoglobulinas que exercem vrias atividades de acordo com o seu isotipo (IgG,

IgM, IgA, etc.) Estes anticorpos realizam diversas funes como: opsoninas,

ativadores de complemento, neutralizadores de substncias txicas, aglutinao,

neutralizao de bactrias, etc.

Os linfcitos B possuem

como principal marcador de

superfcie a IgM monomrica, que

participa do complexo receptor de

antgenos. Esta imunoglobulina

entra em contato com o antgeno

quando lhe apresentado

diretamente ou indiretamente pelos

macrfagos. A IgM se ligando ao

eptopo (superfcie especfica de um

determinado agente estranho),

internaliza o complexo IgM-eptopo.

Este complexo realiza diversas

modificaes na clula, que tem a

finalidade de induzi-la a produo de

imunoglobulinas.

Linfcito B Fonte: Eye Of Science / Science

Photo Library


autores

Os linfcitos B em repouso no produzem imunoglobulinas, mas quando

estimulados por substncias qumicas como interleucinas (como a IL-4 e a IL-1) vo

sofrer expanso clonal e se transformar numa clula ativa denominada de

plasmcito. Os plasmcitos possuem na sua ultra-estrutura, o Retculo

Endoplasmtico Rugoso e o Complexo de Golgi desenvolvidos, e o ncleo com

aspecto de roda de carroa. Secretam ativamente anticorpos especficos na

resposta imune especfica.

2.2 LINFCITOS T: Os linfcitos T so clulas que tm diversas funes no organismo, e

todas so de extrema importncia para o sistema imune. O nome linfcito T devido

ao fato destas clulas se maturarem no Timo sendo, ento, o T de Timos-

dependentes.

Funcionalmente os linfcitos so separados em Linfcito T Auxiliar,

Linfcito T Citotxico, Linfcito T Supressor e Linfcito T de Memria. Cada um

deles possui receptores caractersticos, que so identificveis por tcnicas

imunolgicas e que tm funes especficas. Entretanto, todas as clulas T possuem

os receptores TCR (do ingls, T-Cell-Receptor) e o CD3 (do ingls Cluster os

Differentiation 3).

O linfcito T Auxiliar possui

receptor CD4 na superfcie, que

tem a funo de reconhecer

macrfagos ativados. o

principal alvo do vrus HIV. Esta

clula o mensageiro mais

importante do sistema imune. Ele

envia mensagens de ataque para

diversos leuccitos para realizar

a guerra imunolgica contra o

agente agressor. O linfcito T

Linfcito T Citotxico destruindo uma clula tumoral.


autores

144


Auxiliar a clula que interage

com os macrfagos,

reconhecendo o eptopo que lhe

apresentado. A interleucina-1

estimula a expanso clonal de

linfcitos T Auxiliares

monoclonais.

Fonte: ASM Microbelibrary (http://www.microbelibrary.org).

Eles vo secretar diversas interleucinas, sendo, portanto, dividido em

Linfcitos T Auxiliar (Helper) 1 e Linfcito T Auxiliar (Helper) 2. Esses subtipos de LT

Helper secretam interleucinas distintas, cada uma com uma funo especfica.

Algumas funes principais dos linfcitos T-Helper:

* Estimulao do crescimento e proliferao de linfcito T Citotxicos e

Supressores contra o antgeno;

* Estimulao do crescimento e diferenciao dos Linfcitos B em

plasmcitos para produzir anticorpos contra o antgeno;

* Ativao dos macrfagos;

* Auto estimulao (um linfcito T Helper pode estimular o crescimento da

populao de linfcito T Helpers).

Linfcitos T Supressores so linfcitos que tm a funo de modular a

resposta imune atravs da inibio da mesma. Ainda no se conhece muito a

respeito desta clula, mas sabe-se que ele age atravs da inativao dos linfcitos T

Citotxicos e Helpers, limitando a ao deles no organismo numa reao imune.

Sabe-se que o linfcito T Helper ativa o linfcito T Supressor que vai controlar a

atividade destes linfcitos Helpers, impedindo que eles exeram suas atividades

excessivamente. Os linfcitos T Supressores tambm participam da chamada

tolerncia imunolgica, que o mecanismo por qual o sistema imune usa para

impedir que os leuccitos ataquem as prprias clulas do organismo. Portanto, se

houver deficincia na produo ou ativao dos linfcitos T supressores, poder

haver um ataque auto-imune ao organismo.

O linfcito T Citotxico apresenta receptores TCR. Especializado para o

reconhecimento de antgenos na superfcie de outras clulas. Produz protenas que

matam clulas estranhas, clulas infectadas por vrus e algumas clulas cancerosas.

O linfcito T de memria apresenta receptores TCR, e uma clula preparada para

responder mais rapidamente e com maior intensidade, diante de nova exposio ao

mesmo antgeno.

2.3 CLULAS NATURAIS KILLER (NK): Os linfcitos NK (Natural Killer) so clulas matadoras naturais, ou clulas

assassinas e fazem parte de 10-15% dos linfcitos do sangue. Elas lisam (destroem)

a clulas tumorais (estranhas) ou infectadas por vrus sem que estas expressem

algum antgeno ativador da resposta imune especfica. Este tipo de resposta

chamado de resposta imune inespecfica, pois no h reconhecimento de eptopos e

nem formao de clulas monoclonais especficas ou qualquer memria imunolgica

(que sempre especfica).

Estas clulas costumam

expressar receptores CD de

superfcie, no existindo nenhum

marcador especfico para os NK. O

marcador mais encontrado e

usado atualmente para detect-los

o CD16 ou o CD56. As clulas

NK tambm lisam clulas cobertas

por IgG. Essa funo

denominada de citotoxidade

celular dependente de anticorpo.

Clula Natural Killer atacando uma clula tumoral Fonte: www.paginadigital.com.ar/

2.4 MACRFAGOS:

Os macrfagos so clulas de altssimo poder fagocitrio. O Interferon

Gama, substncia produzida por linfcitos T Helper estimula a fuso dos lisossomas

com o fagossoma para que haja a digesto intracelular. Estes fagcitos possuem


autores

146


diversas enzimas hidrolticas em seus lisossomas. No possuem a mieloperoxidase,

mas matam bactrias por liberao de radicais derivados do oxignio, como o

superxido, radical hidroxila e o perxido de hidrognio (H2O2). Estes vo oxidar a

membrana da clula da bactria e formar pontes dissulfeto entre os aminocidos

cistena de diversas protenas estruturais da bactria, o que leva a morte da mesma.

Possui funes de extrema importncia para o sistema imune:

* Apresentador de antgenos: Os macrfagos so clulas que vo fagocitar

a antgeno e digeri-lo no fagolisossoma. Porm, os seus eptopos so levados at a

superfcie da clula e apresentado ao linfcito T ou ao linfcito B, que

resumidamente ir estimular todo o sistema imune do organismo e "convocar" as

clulas para o ataque.

* Limpador: Os macrfagos so clulas que chegam para fazer a limpeza

de um tecido que necrosou, ou que inflamou. Eles fagocitam restos celulares, clulas

mortas, protenas estranhas, calo sseo que se formou numa fratura, tecido de

cicatrizao exuberante etc. Aps esta limpeza, os fibroblastos ativos (no caso de

uma necrose) vo ao local e preenchem o espao com colgeno.

* Produtor de interleucinas: O macrfago o principal produtor da

Interleucina I (IL-1). Ele produz a IL-1 quando fagocita organismos invasores

(micrbios), que d o alarme para o sistema imune. Esta citocina estimula linfcitos

T Helper at o local da infeco, onde sero apresentados aos eptopos nos

macrfagos. Alm disso, a IL-1 estimula a expanso clonal dos linfcitos T Helper e

dos linfcitos B especficos contra os eptopos (so molculas especficas dos

antgenos que capaz de criar uma populao de clulas especfica para combat-

lo). A IL-1 responsvel pela febre nas infeces e inflamaes que ocorrem no

corpo. Ela vai ao hipotlamo e estimula a produo de prostaglandinas, que ativam o

sistema de elevao da temperatura. A IL-1 tambm aumenta a produo de

prostaglandinas pelos leuccitos, que vai contribuir para a inflamao e dor. Alm

disso, a IL-1 estimula a sntese de protenas de adeso leucocitria nos endotlios e

facilita a adeso dos leuccitos para realizar a diapedese.

Os macrfagos so

responsveis pelo sistema monoctico

fagocitrio (SMF), pois vem da

maturao dos moncitos que chegam

pelo sangue. Existem clulas que so

morfologicamente diferentes dos

macrfagos, mas tem a mesma funo,

e provm dos moncitos da mesma

forma, sendo, ento parte do SMF. So

eles: Moncito sangneo (circulante

no sangue); Micrglia (SNC); Clulas

de Kuppfer (fgado); Macrfagos

alveolares (pulmo); Clulas

dendrticas (regio subcortical dos

linfonodos); Macrfagos sinusais do

bao (polpa vermelha do bao);

Macrfagos das serosas (peritnio,

pericrdio e pleura); Clulas de

Langerhans (pele).

Quatro macrfagos Fonte: www.aids-info.ch

Macrfago fagocitando bactrias Fonte: www.aids-info.ch

2.5 MASTCITOS: A principal funo dos mastcitos armazenar potentes mediadores

qumicos da inflamao, como a histamina, heparina, ECF-A (fator quimiotxico dos

eosinfilos), SRS-A, serotonina e fatores quimiotxicos dos neutrfilos. Esta clula

no tem significado no sangue, sendo uma clula prpria do tecido conjuntivo. Ela

participa de reaes alrgicas (de hipersensibilidade), na qual chama os leuccitos

at o local e cria uma vasodilatao.


autores

a principal clula

responsvel pelo choque anafiltico. O

processo de ativao da degranulao

(exocitose) se baseia na sensibilizao

destas clulas (mastcitos). Esta

sensibilizao ocorre da seguinte forma: o

primeiro contato com o alrgeno (substncia

irritante que causa a alergia) estimula a

produo de IgE especficas que se unem

aos receptores de superfcie dos mastcitos,

pois estes so rico em receptores de IgE. No

segundo contanto, as IgE ligadas ao

mastcito se ligam ao alrgeno e

desencadeia a liberao de todos os

mediadores inflamatrios.

Mastcito Fonte: Escola Paulista de

Medicina - UNIFESP

Com isso a histamina causa uma vasodilatao, a heparina

anticoagulante, o ECF-A chama os eosinfilos e a fator quimiotxico dos neutrfilos

chama os neutrfilos ao local. O SRS-A (slow reacting substance of anaphilaxis) tem

como efeito produzir contrao lenta da musculatura lisa. Esta contrao da

musculatura lisa importante quando essa reao anafiltica ocorre no pulmo e

leva a uma broncoconstrico (asma alrgica).

3. PRINCIPAIS MOLCULAS DO SISTEMA IMUNE (RESPOSTA HUMORAL):

As molculas envolvidas no desenvolvimento da resposta imune

compreendem os anticorpos e as citosinas, produzidas pelos linfcitos, e uma ampla

variedade de outras molculas conhecidas como protenas de fase aguda, porque as

suas concentraes sricas elevam-se rapidamente durante a infeco. As

molculas que promovem a fagocitose so conhecidas como opsoninas.


autores

149


O sistema complementar (complemento) um conjunto de

aproximadamente 20 protenas sricas cuja principal funo o controle do

processo inflamatrio. As protenas deste sistema promovem a fagocitose, controlam

a inflamao e interagem com os anticorpos na defesa imune.

As citosinas so molculas diversas que fornecem sinais para os linfcitos,

fagcitos e outras clulas do organismo. Todas as citosinas so protenas ou

pptidos, algumas contendo glicoprotenas. Os principais grupos de citosinas so:

Interferons (IFNs, que limitam a propagao de certas infeces virais), Interleucinas

(Ils, a maioria delas est envolvida na induo de diviso e diferenciao de outras

clulas), Fatores estimuladores de colnias (CSFs, diviso e diferenciao das

clulas tronco na medula ssea e dos precursores dos leuccitos sangneos),

Quimiocinas (direcciona a movimentao das clulas pelo organismo) e outras

citosinas (so particularmente importantes nas reaces inflamatrias e citotxicas).

3.1 ANTICORPOS: Sem dvida alguma os anticorpos so as molculas mais importantes de

todo o sistema imune. Alm disso, as pesquisas cientficas possibilitaram o

devenvolvimento em laboratrio de anticorpos especficos contra inmeras doenas,

o que possibilitou a utilizao destes em ensaios laboratoriais para diagnstico

dessas patologias. Todos os ensaios laboratoriais para deteco especfica de

doenas, os chamados marcadores, nada mais so que anticorpos produzidos pelo

organismo do paciente e estes sero detectados ou no no soro do paciente. O

inverso tambm realizado em alguns testes, ou seja, utilizamos como reagentes

anticorpos especficos contra uma determinada doena e ao reagir com o soro do

paciente pode-se detectar a presena ou no do antgeno no soro do paciente.

Os anticorpos so um grupo de protenas sricas produzidas pelos

linfcitos B. Eles so a forma solvel do receptor de antgenos. Os anticorpos ligam-

se especificamente aos antgenos e assim promovem efeitos secundrios. Enquanto

uma parte da molcula do anticorpo se liga ao antgeno, outras regies interagem

com outros elementos do sistema imune, como os fagcitos ou com uma das

molculas do complemento.

Antgenos so quaisquer molculas que possam ser reconhecidas pelo

sistema imune adaptativo. O reconhecimento do antgeno a base principal de

todas as respostas imunes adaptativas. O ponto essencial a ser considerado com

relao ao antgeno que a estrutura a fora iniciadora e condutora de todas as

respostas imunes. O sistema imune evoluiu com a finalidade de reconhecer os

antgenos e destruir e eliminar a sua fonte. Quando o antgeno eliminado, o

sistema imune desligado.

O princpio da vacinao est baseado em dois elementos fundamentais

da resposta imune adaptativa: memria e especificidade. O objectivo no

desenvolvimento da vacina alterar o patogene ou as suas toxinas de tal modo que

eles se tornem incuos sem perderem a antigenicidade.

Estrutura quaternria de uma Imunoglobulina G. Fonte: Genetics Home Reference http://ghr.nlm.nih.gov

Esquema de uma Imunoglobulina G Fonte: www.bmb.leeds.ac.uk

A Resposta Imune Humoral (RIH) mediada por anticorpos, que so

protenas gamaglobulinas sintetizadas por plasmcitos (linfcitos B diferenciado e


autores

151


capaz de secretar anticorpos ativamente). Os anticorpos so produzidos com a

funo principal de neutralizar e eliminar o antgeno que estimulou a sua produo.

Esse processo de eliminao feito de diversas formas e, na maioria das vezes, a

produo do anticorpo mantida por longos perodos, sendo responsvel pela

chamada imunidade. Anticorpos tambm podem ser chamados de gamaglobulinas

ou imunoglobulinas (Ig). Existem basicamente cinco classes de imunoglobulinas que

variam na forma e atividade, porm mais de uma classe produzida durante o

processo de infeco, ou seja, duas classes de imunoglobulinas podem ser

produzidas contra um mesmo antgeno. As classes de imunoglobulinas so A, M, G,

D e E, sendo chamadas Imunoglobulina A (IgA), Imunoglobulina M (IgM), etc.

Todo o desenvolvimento das atuais tcnicas imunolgicas aqui descritas

s foi possvel com o desenvolvimento da tcnica de obteno de anticorpos

monoclonais, uma vez que os anticorpos utilizados em ensaios laboratoriais para

deteco de marcadores devem ser especficos para a patologia que se est

pesquisando.

Os anticorpos so a chave para o diagnstico e teraputica de muitas

patologias responsveis por epidemias e por doenas como o cancro. A

biotecnologia um meio de obter e produzir esses anticorpos.

A ligao de antignios aos receptores membranares dos linfcitos que os

reconhecem, estimula a sua diviso, originando clones - seleo clonal.

Os anticorpos podem ser utilizados para reconhecer molculas especficas

com grande preciso e podem ser produzidos em laboratrio atravs da injeco de

antignios em animais. Aps a resposta imunitria efetuada pelos animais em

contato com o agente infeccioso, recolhem-se os anticorpos do seu plasma

sanguneo. Este processo tem como vantagem a obteno de uma elevada

quantidade de anticorpos. Contudo, nos animais e nos seres humanos, a resposta

imunitria , na maior parte das vezes, policlonal, isto , desenvolvem-se diferentes

populaes de linfcitos B perante o mesmo agente patognico. Este tipo de

resposta torna-se menos eficiente porque no canalizado o esforo para a

produo do anticorpo mais apropriado, produzido por um nico clone de linfcitos B

- monoclonal. Na produo deste tipo de anticorpos, um animal injetado com um

antgeno e, passado algum tempo, morto. Os linfcitos B so extrados do bao do

animal, incubados in vitro e feita a fuso com clulas de mieloma (um tipo de

clula tumoral), com o intuito de obter anticorpos monoclonais.

Procedimento laboratorial para a produo de anticorpos monoclonais. Fonte: http://pwp.netcabo.pt

Aps a obteno dos anticorpos monoclonais estes so utilizados nos

ensaios laboratorias de diversas formas que variam principalmente nas etapas do

processo e na forma de visualizao da reao. Basicamente as reaes

imunolgicas para deteco de anticorpos ou antgenos utlizando anticorpos

monoclonais so realizadas observando a alterao na colorao do meio de

reao, que ocorre devido agentes adicionados para tal. A colorao desenvolvida

medida por espectroscopia, porm a utilizao de radiao, turvao, aglutinao,

etc. Estas so outras formas de se detectar as reaes antgeno-anticorpo.


autores

A tcnica atualmente

mais utilizada para deteco de

marcadores de infeces o

ELISA (do ingls Enzyme Linked

Immuno Sorbent Assay) e suas

variaes. De maneira geral a

tcnica realizada de duas

maneiras: Pesquisa de antgenos e

anticorpos. Placa de ELISA

Fonte: www.virology-online.com

A pesquisa de anticorpos utiliza-se placas com antgenos adsorvidos nas

paredes dos poos de reao e, ao se pipetar o soro do paciente, caso este

apresente anticorpos anti-antgeno adsorvido na placa, estes ficaro fixos. Em

seguida realiza-se vrias lavagens para retirada de todo o material que no foi ligado

ao antgeno. Um nova etapa a dio de anticorpos anti-regio Fc de anticorpos.

Este reagente ligado a uma enzima em sua poro Fc e se liga na poro Fc do

anticorpo do paciente ligado ao antgeno da placa. Realiza-se novas lavagens e no

ltimo processo adicionado o substrato daquela enzima ligada na poro Fc e esta

ir reagir com o substrato, alterando a cor do meio, que ser analisada por

espectroscopia.


autores

Esquema de um ELISA para pesquisa de anticorpos

Na pesquisa de antgenos utiliza-se em cada poo da placa de reao,

anticorpos adsorvidos na parede contra o antgeno a ser pesquisado e em seguida

segue-se por duas maneiras diferentes (sanduche ou competio) no ELISA por

sanduche, ocorre a adio do soro do paciente contendo o antgeno, em seguida

adiciona-se um reagente contendo anticorpo monoclonal anti-antgeno. Lava-se as

placas. No prximo passo adicionado um reagente contendo anticorpos anti-regio

Fc de anticorpos e a partir da a tcnica segue como na pesquisa de anticorpos. No

ELISA por competio, existe tambm anticorpos adsorvidos na parede do poo

contra o antgeno a ser pesquisado porm, juntamente com a amostra de soro do


autores

paciente adicionado um reagente contendo agora o mesmo antgeno a ser

pesquisado, marcado com a mesma enzima. Haver uma competio para ligar-se

aos anticorpos adsorvidos na parede do poo, quanto mais antgeno estiver

presente no soro do paciente, menos antgeno do reagente ir se ligar. Percebe-se

que neste caso, a reao inversa, ou seja, quanto mais colorido for o meio, menos

antgeno estava presente no soro do paciente.

Esquema de um ELISA para pesquisa de antgenos.

Vale lembrar que na pesquisa de anticorpos pode-se pesquisar diferentes

classes de anticorpos presentes no soro do paciente e para tal deve-se utilizar

reagente contendo anticorpos anti-regio Fc para cada classe de imunoglobulina e

desta forma pode-se pesquisar especificamente a classe e contra qual antgeno o

anticorpo presente no soro do paciente est direcionado.


autores

Leitor de placas de ELISA

3.2 SISTEMA COMPLEMENTO: O sistema complemento (SC) o principal mediador humoral do processo

inflamatrio junto aos anticorpos. Est constitudo por um conjunto de 20 30

protenas, tanto solveis no plasma como expressas na membrana celular, e

ativado por diversos mecanismos por duas vias, a clssica e a alternativa.

O SC compreende apenas 2% das imunodeficincias primrias ou

genticas que de cerca de 1:10.000 crianas, excluindo-se a deficincia seletiva

assintomtica de IgA. A deficincia de uma ou mais protenas da cascata do SC,

contudo, poder ser responsvel pela suscetibilidade aumentada a vrias doenas.

As deficincias podem ser genticas, quando podero faltar componentes de

ativao, de regulao ou mesmo de receptores ou adquiridas.

As protenas do SC so sintetizadas principalmente nos hepatcitos e

macrfagos/moncitos, alm de outros tecidos. As protenas reguladoras ligadas

membrana celular so sintetizadas nas clulas sobre as quais esto expressas. O

SC constitui-se num dos principais efetores da imunidade humoral assim como da

inflamao. O SC participa dos seguintes processos biolgicos: fagocitose,

opsonizao, quimiotaxia de leuccitos, liberao de histamina dos mastcitos e


autores

157


basfilos e de espcies ativas de oxignio pelos leuccitos, vasoconstrio,

contrao da musculatura lisa, aumento da permeabilidade dos vasos, agregao

plaquetria e citlise.

O SC uma cascata protica com funo importante na defesa humoral

inespecfica. Para um funcionamento normal do mesmo, todos os componentes da

cascata devem estar presentes em nveis plasmticos normais e com uma funo

fisiolgica adequada. A ativao do SC ocorre por duas vias, o que permite a

resposta eficiente a diversos processos agressores. O dano provocado no tecido

autlogo controlado por mecanismos de regulao competentes.

Os componentes da via clssica, assim como da via terminal, so

designados com o smbolo "C" seguidos com o nmero correspondente (C1, C3,

etc.). J os componentes da via alternativa, exceto C3, so designados com nomes

convencionais ou smbolos diferentes (exemplo: fator D, fator B, properdina). A

designao dos componentes ativados feita por uma barra colocada sobre o

smbolo da protena ou do complexo protico correspondente (exemplo: C1-C4b2a,

fator B, etc.). Os produtos da clivagem enzimtica so designados por letras

minsculas que seguem o smbolo de determinado componente (exemplo: C5a,

C5b). Quando o componente ou fragmento inativado, adicionada a letra "i"

(exemplo: C3bi, Bbi).

As deficincias de protenas do SC so incomuns, mas no raras. Por

exemplo, a freqncia da deficincia heterozigtica de C2 de cerca de 1:100

nascidos vivos, enquanto que da homozigtica de cerca de 1:10.000. A deficincia

dos componentes iniciais da via clssica pode estar associada com sade normal,

doenas dos colgenos ou infeces. As deficincias de C3 ou de protenas

reguladoras de C3 freqentemente levam a infeces severas. As deficincias de

componentes da via alternativa ou da via efetora comum podem acarretar infeces,

particularmente por Neisseria spp. A deficincia de inibidor de C1 causa

angioedema. As deficincias congnitas (primrias) ou adquiridas (secundrias) de

protenas de ativao da cascata do SC predispem as doenas auto-imunes ou

infecciosas especficas, em sua maioria por bactrias piognicas de agressividade

considervel, como, por exemplo, o meningococo. As deficincias de protenas de

regulao esto implicadas tambm em doenas do tipo auto-imunes, como o

caso do angioedema e da hemoglobinria paroxstica noturna.

Noo Geral do Sistema Complemento Fonte: G.R. Iturry-Yamamoto, C.P. Portinho. Sistema Complemento: Ativao, Regulao e Deficincias Congnitas e

Adquiridas. 3.3 CITOCINAS: 3.3.1 INTERFERONS (IFN):

Os interferons so protenas sintetizadas por clulas em resposta a

estmulos especficos. So a primeira linha de defesa contra infeces virais. Trata-

se de uma reao no-especfica do Sistema Imune e induzido no primeiro estgio

das infeces virais antes da resposta imune especfica ser estimulada. A ao dos

Interferons na superfcie das clulas alvo induz a transcrio de aproximadamente

20-30 genes que iro conduzir uma srie de aes antivirais. Os interferons induzem

um estado de resistncia antiviral em clulas teciduais no infectadas. O vrus, ao


autores

replicar-se, vai ativar o gene codificante do interferon. Aps a sntese proteca, a

protena sai da clula e entra na corrente sangunea, at chegar s clulas vizinhas

que ainda no foram atacadas. A protena liga-se membrana celular dessas

clulas e ativa o gene codificante de protenas antivirais. Estas protenas virais, por

sua vez, vo impedir a replicao do vrus, quando este tentar replicar-se nessas

clulas. Os IFN so produzidos na fase inicial da infeco e constituem a primeira

linha de resistncia a muitas viroses. Existem trs tipos de Interferons:

* Interferons Alfa

(IFNa) produzido por por

leuccitos e outras clulas

infectadas por vrus. O Interferon

Alpha, sinttico, usado para o

combate de muitas doenas

virais, como Hepatite C e HIV,

porm tem alta toxicidade. A

malignidade dessas doenas,

faz com que os efeitos colaterais

sejam suportados.

* Interferon Beta

(IFNb) produzido por

fibroblastos e clulas epiteliais

infectados por vrus.

Produo de Interferons durante infeco viral aguda

* Interferon Gama (IFNg) produzido por alguns linfcitos T ativados e

Clulas NK em resposta a um determinado antgeno (incluindo antgenos virais) ou

por mitoses de linfcitos.

3.3.2 INTERLEUCINAS (IL):

As interleucinas compem um grande grupo de citocinas denominadas

por IL-1 a IL-15, produzidas principalmente por clulas T, embora algumas sejam

sintetizadas tambm por macrfagos e clulas teciduais. As interleucinas possuem


autores

160


uma variedade de funes, mas a maioria delas est envolvida na induo da

diviso de outras clulas. Cada interleucina atua sobre um grupo limitado e

especfico de clulas que expressam receptores adequados para cada interleucina.

importante destacar que a hematopoiese regulada por mais de uma interleucina.

As IL-1 e IL-6 esto envolvidas na ativao do ciclo celular das clulas-tronco em

repouso (ou auto-renovveis). A IL-3 est envolvida no crescimento dos precursores

das linhagens hemopoiticas da mesma forma que o fator estimulador de colnias

de granulcitos/macrfagos (GM CSF). Na medida em que as clulas se

diferenciam, citocinas especficas de linhagens apresentam atividades importantes; a

eritropoietina para os eritrcitos, o fator estimulador de colnias de macrfagos (M

CSF) para os macrfagos, o fator estimulador de colnias de granulcitos (G CSF)

para os granulcitos, entre outros.

Tabela de Interleucinas Fonte: Artigo Educacional: Avanos tecnolgicos em hematologia

laboratorial Paulo C. Naoum.

3.3.3 FATORES ESTIMULADORES DE COLNIA (CSF):

Os fatores estimuladores de colnias (CSF) esto diretamente

relacionados na diviso e diferenciao das clulas-tronco na medula ssea, bem

como dos precursores dos leuccitos sanguneos. A quantidade de diferentes CSF

parcialmente responsvel pelas propores dos diferentes tipos celulares que sero


autores

produzidos. Alguns CSF tambm promovem a diferenciao extramedular de

clulas.

Finalmente outras citocinas alm das acima citadas, como so os casos

do fator de necrose tumoral - TNFa e TNFb e do fator de transformao de

crescimento (TGF b) que, embora possuem vrias funes, so particularmente

importantes nas reaes inflamatrias e citotxicas. Nesse contexto especfico das

citocinas, o futuro da anlise laboratorial certamente dever estar direcionada na

monitorao quantitativa e na determinao qualitativa das diferentes interleucinas,

bem como nas respostas s reaes fisiopatolgicas causadas por processos

inflamatrios e citotxicos.

Aes das diversas citocinas na diferenciao e maturao celular

Fonte: Escola Paulista de Medicina - UNIFESP


autores

163


ENSAIOS IMUNOLGICOS: Os ensaios imunolgicos nada mais so que a deteco e

quantificao de determinados agentes patolgicos (antgenos) ou anticorpos

presentes no soro do paciente. De maneira geral os antgenos podem ser vrus,

bactrias, parasitas, ou mesmo protenas dos mesmos. Os anticorpos podem ser

contra agentes estranhos ou mesmo estruturas celulares normais onde presena

de anticorpos indica doena auto-imune.

Os ensaios imunohematolgicos utilizam anticorpos monoclonais ou

policlonais e hemcias. Desta forma a determinao do Grupo Sanguneo, os Testes

de Coombs Direto e Indireto so ensaios imunohematolgicos. A seguir sero

discutidos os ensaios imunolgicos de maior freqncia em laboratrios de anlises

clnicas e em seguida uma viso geral dos avanos na rea:

1. FATOR REUMATIDE:

O termo fator reumatide (FR) engloba um grupo de auto-anticorpos das

classes IgG, IgM e IgA que tm em comum a capacidade de reagir com diferentes

eptopos da poro Fc da molcula da imunoglobulina G humana.

O FR IgM pode servir como marcador precoce na Artrite Reumatide (AR),

apoiando-se em dados que demonstram que o risco de desenvolvimento da doena

aumenta de forma proporcional ao aumento da concentrao de FR em indivduos

normais. Os pacientes com artrite que cursam com FR positivo, principalmente

quando em concentraes elevadas, correm maiores riscos de apresentar

complicaes clnicas e uma menor resposta terapia.

O Fator Reumatide est presente em cerca de 50-90% dos casos de AR

clssicos, alguns meses aps o incio da doena. O FR est aumentado tambm em

15 a 35% dos casos de lpus eritematoso sistmico (LES). Sabe-se hoje que o FR

no produzido apenas sob condies patolgicas, e uma pequena parcela da

164


populao normal, especialmente os idosos, pode apresentar positividade para FR.

Esses percentuais de incidncia, tanto nas patologias como nos pacientes normais,

assim como a ocorrncia de falsos positivos, variam de acordo com a sensibilidade e

a especificidade do mtodo utilizado.

Os ensaios tradicionais para investigao do FR empregavam partculas

de ltex revestidas por imunoglobulina G humana (Prova do Ltex) ou, na

Hemaglutinao Indireta, hemcias de carneiro, revestidas por imunoglobulina de

coelho (Reao de Waller-Rose). A prova do ltex era considerada mais sensvel, e

a reao de Waller-Rose mais especfica. Realizadas em conjunto, fornecem dados

complementares.

Atualmente, o mtodo de referncia para a pesquisa do FR a

nefelometria, que fornece um resultado numrico em UI/mL, em vez dos resultados

em ttulos, resultantes de diluies fornecidas pelo mtodo anterior (ltex), o que

permite um melhor acompanhamento dos pacientes. Com a nefelometria, podem ser

identificadas as trs classes de auto-anticorpos, ou seja, o FR das classes IgG, IgM

e IgA.

A identificao e a quantificao da classe do FR que se encontra elevada

podem ser realizadas pelo mtodo de ensaio imunoenzimtico. A utilidade clnica

dessa individualizao e quantificao tem sido cada vez mais explorada. Por

exemplo, a presena de FR IgA nas manifestaes extra-articulares da AR com

ausncia de FR IgM ou IgG; a predominncia na AR de FR IgM, sendo que o FR IgG

e IgA esto geralmente presentes, mas em baixa freqncia e quantidade.

incomum a deteco concomitante do FR das trs classes em outra patologia que

no a artrite reumatide.

2. VDRL (LUES):

A prova do VDRL (Veneral Disease Research Laboratories test) um dos

testes no treponmicos utilizados rotineiramente no teste de triagem no

imunodiagnstico da sfilis. Devido ao baixo custo e praticidade quanto sua

realizao, vem sendo usado em larga escala na maioria dos laboratrios de

unidades de ateno primria de sade. Apresenta uma tcnica rpida de

microfloculao, na qual utiliza antgenos extrados de tecidos como a cardiolipina,

um lpide derivado do corao de bovinos. A cardiolipina, quando combinada com

lecitina e colesterol, forma sorologicamente um antgeno ativo, capaz de detectar

anticorpos humorais presentes no soro durante a infeco sifiltica, uma a quatro

semanas aps o aparecimento do cancro primrio. As dosagens quantitativas do

VDRL, expressas em ttulos, em geral se elevam at o estgio secundrio. A partir

do primeiro ano da doena, os ttulos tendem a diminuir, podendo a reatividade

desaparecer mesmo sem tratamento. Com a infeco corretamente tratada, o VDRL

tende a negativar-se entre 9-12 meses, embora a reatividade em baixos ttulos (<

1:8) possa perdurar por vrios anos ou at por toda a vida.

Os anticorpos esto presentes nas primeiras semanas da doena e,

quando em ttulos iguais ou maiores de 1/16, sugerem fortemente casos de sfilis;

ttulos inferiores, geralmente at 1/8, so encontrados em diferentes patologias,

especialmente no lpus eritematoso sistmico e como ttulos residuais (cicatriz

sorolgica) de sfilis anteriormente tratada.

A pesquisa de anticorpos

treponmicos, que so especficos

contra o Treponema pallidum,

indicada como testes confirmatrios

e pode ser realizada pela

imunofluorescncia indireta (FTA-

ABS) e pela hemaglutinao passiva

(TPHA).

Treponema pallidum visto em microscopia de Campo Escuro

O FTA-ABS (fluorescent treponemal antibody absorption) o mais

sensvel especfico para Sfilis e auxilia no diagnstico de diferentes estgios da

doena. Permite a pesquisa de anticorpos IgG e IgM, fundamental na investigao

diagnstica da sfilis congnita, assim como na avaliao do estgio da doena.

Quando positivos, permanecem por toda a vida como cicatriz sorolgica. Quando

negativos, afastam o diagnstico de sfilis. Apesar de sua alta especificidade,

existem relatos de reaes falso-positivas em 2% da populao normal em pacientes


autores

166


com lpus eritematoso sistmico, durante a gravidez, na lepra, mononucleose,

leptospirose, artrite reumatide, cirrose biliar primria e doenas associadas

produo de globulinas anormais.

A reao de hemaglutinao passiva (TPHA) , tambm, considerada

teste confirmatrio. Resultados falso-positivos so relatados em diferentes

patologias. Sua sensibilidade similar do FTA-ABS, com exceo da investigao

da fase primria, quando menos sensvel. Assim como no FTA-ABS, se positivos,

os anticorpos permanecem por toda a vida como cicatriz sorolgica. O diagnstico

da sfilis congnita baseia-se na presena de anticorpos IgM, sendo o mtodo de

escolha a pesquisa do FTA-ABS IgM. Entretanto, um resultado negativo no afasta a

possibilidade de infeco, j que a positividade s acontece em cerca de 80% dos

casos. A persistncia de reaes sorolgicas positivas, treponmicas e no-

treponmicas, por mais de seis meses aps o nascimento altamente indicativa de

sfilis congnita.

3. ASLO (ANTIESTREPTOLISINA O): Os Streptococcus beta-hemolticos do grupo A causam infeces clnicas

especialmente de orofaringe e pele, endocardites e quadros no-supurativos, como

febre reumtica e glomerulonefrite aguda. A estreptolisina O uma das toxinas

extracelulares liberadas pelo Streptococcus beta-hemoltico do grupo A. Ela capaz

de induzir a sntese de anticorpos especficos, os anticorpos antiestreptolisina O

(ASLO), em cerca de 80% das infeces.

O uso de antibiticos, corticides e drogas imunossupressoras podem

inibir a produo de ASLO. Os anticorpos elevam-se na primeira semana, atingindo

valores mximos em 2 a 4 semanas aps a infeco estreptoccica e retornando

aos valores normais aps 6 a 12 meses.

A manuteno de ttulos de

elevados ou a sua elevao em amostras

seguidas so indicativas de infeco

aguda, reinfeco ou leses ps-

estreptoccicas. Apesar de nveis

circulantes de ASLO serem encontrados

na maioria dos pacientes com febre

reumtica e glomerulonefrite ps-

estreptoccica, sua maior indicao no

seguimento de pacientes com febre

reumtica, j que nesses casos os ttulos

se correlacionam melhor com a atividade

da doena. Cerca de 80 a 85% dos casos

de febre reumtica cursam com altos

ttulos.

Streptococcus visualizados

em microscopia eletrnica

Streptococcus visualizados em microscopia ptica

4. BRUCELOSE: A brucelose uma zoonose, e a forma humana causada por uma das

quatro espcies: Brucella melitensis, a causa mais comum em todo o mundo,

adquirida pelo contato com cabras, carneiros e camelos; Brucella abortus, adquirida

por contato com bois; Brucella suis, com porcos; e Brucella canis, com ces. O

contgio se d pelo contato com a pele ou por ingesto de secrees contaminadas

por esses animais. Tais bactrias mantm-se viveis em solo seco por cerca de 40

dias, e no caso de solo mido esse prazo ainda maior. So destrudas pela

pasteurizao e fervura, mas resistem ao congelamento.


autores

A contaminao relacionada

ocupao profissional, como o caso de

fazendeiros, veterinrios, processadores

de carne, so a fonte mais freqente. Na

populao em geral, a fonte mais comum

de contaminao a ingesto de leite e

derivados no-pasteurizados e o

consumo de carne crua. Pode ser

transmitida de pessoa a pessoa, pela

placenta e durante a amamentao, e

so citados casos raros de contaminao

por atividade sexual.

Microscopia eletrnica

mostrando Brucella abortus

Fonte:

www.cienciahoje.uol.com.br

A infeco pode distribuir-se amplamente pelo organismo, causando

leses praticamente em qualquer rgo, com mais freqncia no corao, ossos e

articulaes, tratos respiratrio, gastrointestinal e geniturinrio, globo ocular, pele,

sistema nervoso central e sistema endcrino. O quadro clnico inicial comum a

outras doenas febris. O perodo de incubao dura em mdia de 1 a 3 semanas,

podendo, em alguns casos, durar vrios meses. A multiplicao intracelular do

microrganismo ocorre nos gnglios linfticos e sistema reticuloendotelial. A

gravidade do quadro varivel, podendo apresentar-se com comprometimento leve

a grave. O quadro apresenta sintomas comuns como febre, mialgia, cefalia,

anorexia, artralgia e lombalgia. O exame clnico pode ser pouco expressivo ou

apresentar linfadenopatia, hepatoesplenomegalia, dor palpao da coluna

vertebral, dor abdominal e outras manifestaes.

O diagnstico preciso feito mediante a associao de histria compatvel

com probabilidade de infeco, sinais clnicos e deteco de anticorpos por reaes

de aglutinao, visveis a olho nu. O diagnstico de grande importncia no perodo

pr-natal, pois pode levar morte fetal.

Os antgenos bacterianos tm a capacidade de induzir a formao de

anticorpos especficos, inicialmente da classe IgM e logo aps das classes IgG e IgA

. Esses anticorpos aparecem a partir da segunda semana da doena, com picos


autores

169


entre a terceira e sexta semanas. Ttulos maiores ou iguais a 1/160 so

considerados significativos quando encontrados em regio no-endmica. Em reas

endmicas e em profissionais de alto risco de contaminao, so considerados

significativos ttulos iguais ou acima de 1/320.

Altos ttulos de IgM indicam infeco aguda; altos ttulos de IgG, infeco

em atividade; quando mais baixos, podem significar infeco passada. Recomenda-

se a anlise pareada com intervalo de duas semanas na avaliao dos casos

duvidosos: variaes de quatro vezes o ttulo anterior so sugestivas de infeco

aguda. Reaes com ttulos baixos podem ser encontradas em pacientes vacinados

contra febre tifide. Podem ser encontradas reaes cruzadas por infeco por

outras bactrias e aps intradermorreao, com antgenos de Brucella.

5. DOENA DE CHAGAS: A tripanossomase americana ou doena de Chagas uma parasitose

endmica causada pelo Trypanosoma cruzi. Pode cursar com infeces agudas ou

crnicas. A forma aguda em geral uma doena febril discreta. Podem evoluir

especialmente em crianas, com um quadro mais exuberante, que se caracteriza por

febre, anorexia, edema da face e dos membros inferiores, linfadenopatia e

hepatoesplenomegalia discreta. Mais raramente ocorre miocardite. Aps a fase

aguda, o paciente, permanece infectado e passa para uma fase crnica

assintomtica. A doena crnica sintomtica ir se manifestar anos ou mesmo

dcadas aps a fase aguda. As clssicas manifestaes crnicas se relacionam com

distrbios de ritmo e conduo cardaca, tromboembolias, miocardiopatia chagsica,

megaesfago e megaclon.

Nas situaes de

imunossupresso, pode ocorrer a reativao

do quadro, que muitas vezes fatal. A

transmisso ocorre por vetores

hematfagos, mas pode se dar por via

congnita, transfusional e outras formas

menos freqentes, como a inoculao

involuntria em laboratrio.

Os mtodos sorolgicos para

diagnstico da doena de Chagas

apresentam sensibilidade e especificidade

elevadas, sendo teis para o diagnstico nas

fases aguda e crnica da doena.

Entretanto, possvel a reao positiva por

reatividade cruzada com as leishmanioses,

especialmente com a forma visceral e as

formas cutneo-mucosas da leishmaniose

tegumentar, e com outros antgenos em

comum.

Tripanosoma cruzi Agente causador da Doena de Chagas

Barbeiro Agente transmissor da doena de Chagas

Por isso, recomendvel a realizao de reaes por diferentes mtodos

como Hemaglutinao (Hemcias de carneiro com antgenos de Tripanosoma cruzi

adsorvido nas membranas e com a presena de anticorpos no soro do paciente

haver uma aglutinao visvel a olho nu), Imunofluorescncia (utilizao de placas

contendo antgenos de Tripanosoma cruzi e aps mistura com soro do paciente so

adicionados anticorpos marcados com reagentes fluorescentes que sero

posteriormente analisados em microscpios especiais), e Enzima Imunoensaio

(ELISA). Devem ser realizados no mnimo dois mtodos, para que se controlem

mutuamente, visto que, em cada mtodo, so utilizados diferentes antgenos e

formas do parasita, o que permite diminuir a possibilidade de resultados falso-

positivos. Resultados positivos devem ser encontrados nos dois mtodos utilizados

para confirmar o diagnstico. Nos casos de apenas um mtodo apresentar


autores

171


positividade, faz-se necessria a anlise clnica da histria epidemiolgica, achados

clnicos e outros exames diagnsticos complementares. Na fase aguda, anticorpos

das classes IgM e IgG so detectveis. Na fase crnica, so encontrados anticorpos

da classe IgG. Os nveis de reatividade diferem para cada mtodo e de acordo com

a finalidade do diagnstico. Os valores considerados para triagem de doadores de

sangue so sempre inferiores aos considerados para o diagnstico clnico.

6. PROTENA C REATIVA:

A Protena C Reativa (PCR) , por vezes, confundida com uma tcnica

laboratorial denominada PCR (Polimerase Chain Reaction), uma reao que

possibilita a amplificao de fragmentos de DNA e em seguida analis-los.

As reaes inflamatrias so respostas do organismo aos diferentes tipos

de agresso tecidual, como as infeces virais, bacterianas, parasitrias ou fngicas,

e s agresses fsicas, qumicas e imunolgicas.

Diante da reao inflamatria, os moncitos secretam substncias como

IL-6, IL-1 e TNF, que levam ao hepatcito a informao da necessidade de sntese

das denominadas protenas de fase aguda. A determinao da concentrao

plasmtica dessas protenas ajuda, clinicamente, a avaliar a presena, a extenso e

a atividade do processo inflamatrio e a monitorar a evoluo e a resposta

teraputica. A protena C reativa (PCR) uma das protenas plasmticas de fase

aguda. Foi identificada no soro de pacientes com pneumonia pneumoccica, em

reao de precipitao do polissacardeo C da parede do pneumococo (Gram-

positivo), agente etiolgico da patologia. usada rotineiramente para monitorar a

resposta de fase aguda, sendo considerada uma das mais sensveis, por apresentar

algumas caractersticas, como meia-vida curta (entre 8 a 12 horas) e valores

normais muito baixos (< 0,5 mg/dL), que, em resposta a estmulos inflamatrios,

podem atingir valores at 100 vezes o normal em menos de 24 horas. Alm de

elevar-se rapidamente aps o estmulo inflamatrio (4 a 6 horas), na ausncia de

estmulo crnico, normaliza-se em 3 a 4 dias.

172


A protena C reativa deve ser utilizada como auxiliar no diagnstico,

controle teraputico e acompanhamento de diversas patologias, uma vez que o

mais sensvel e precoce indicador de processos inflamatrios resultantes de

infeces, carcinomas, necrose tecidual e cirurgias. Depois de 24 horas, a

velocidade de hemossedimentao (VHS) complementar PCR.

Durante muitos anos, a PCR foi utilizada apenas no contexto de avaliao

de processos inflamatrios, mas, atualmente, vem assumindo outros papis

importantes na clnica devido ao desenvolvimento de tcnicas que possibilitam dosar

a quantidade desta protena em valores mnimos, e tal tcnica descrita como PCR

Ultra-sensvel. A dosagem quantitativa, pela tcnica de imunonefelometria, utilizando

anticorpos monoclonais antiPCR, ao contrrio dos mtodos tradicionais qualitativos,

permite a liberao de resultados quantitativos (mg/dL) que facilitam a interpretao

clnica e o acompanhamento laboratorial de cada caso.

Por exemplo, podemos citar que, como marcador de mortalidade nos

primeiros 24 meses aps infarto agudo do miocrdio (IAM), foi de maior valor que as

enzimas cardacas. Alm disso, altos nveis sricos de PCR puderam ser

considerados fatores preditivos de ruptura cardaca subaguda ps-IAM. Nove

pacientes apresentando esse tipo de complicao foram comparados ao grupo

controle de 28 pacientes infartados sem complicaes. No grupo com ruptura

cardaca, nveis elevados de PCR, superiores a 20 mg/dL, foram evidenciados no

segundo dia ps-IAM. Um marcador tradicional de leso muscular, a enzima CPK,

no mostrou diferena significativa entre os dois grupos. A sensibilidade diagnstica

de altos nveis sricos de PCR, predizendo uma possvel ruptura cardaca ps-IAM,

foi de 89%, garantindo o seu uso na prtica cardiolgica.

Com a recente descoberta de componentes inflamatrios na

arteriosclerose, a PCR foi proposta como indicador de risco para doena coronariana

e acidentes vasculares cerebrais. O risco, revelado pelos altos teores sricos de

PCR, independente de fatores ligados dislipidemia e pode ser reduzido pelo uso

de aspirina como tratamento profiltico. Essas novas hipteses de patogneses de

doenas arterioesclerticas associadas possibilidade de teraputica preventiva

abrem novas perspectivas, que devem ser consideradas. Da mesma forma, nveis

173


aumentados da PCR parecem estar relacionados a eventos coronarianos em

pacientes com angina estvel ou instvel.

Em outras reas da medicina, como a infectologia e a cirurgia, a

importncia da PCR tambm deve ser levada em conta. O uso da dosagem da PCR

foi avaliado num estudo envolvendo 193 casos de endocardite infecciosa. Nveis

elevados de PCR puderam ser evidenciados em casos que cursaram com

complicaes, levando concluso de que a PCR um bom marcador prognstico e

pode ser utilizada para monitorar a resposta terapia antimicrobiana em

endocardites infecciosas.

Na recuperao cirrgica, a PCR aumenta nas primeiras 4 a 6 horas,

revelando picos sricos por volta das 48 a 72 horas de ps-operatrio, em

concentraes de 2,5 a 3,5 mg/dL. Em cirurgias que cursam com evoluo favorvel,

os nveis de PCR normalizam-se por volta do stimo dia aps o procedimento

cirrgico. Na vigncia de complicaes, os valores da PCR permanecem elevados, e

podem atingir nveis superiores a 3,5 mg/dL.

Em estados inflamatrios crnicos, as concentraes de PCR podem

persistir altas indefinidamente. Em casos de LES e outras doenas do colgeno,

colites ulcerativas e leucemia, as concentraes so, geralmente, normais, porm

marcadamente mais altas nas infeces bacterianas do que nas virais, auxiliando no

diagnstico diferencial. Na febre reumtica, a PCR um bom parmetro de

reagudizao, pois persiste em concentraes elevadas (>4 mg/dL) quando a

doena est ativa, embora decaindo a nveis normais durante a remisso.

Encontram-se nveis elevados de PCR e de haptoglobina em pacientes

com espondilite anquilosante HLA-B27 clinicamente ativa; mas nem a PCR nem a

haptoglobulina esto elevadas nos casos ativos com HLA-B27, em que so

encontradas concentraes elevadas de IgA. Soros com altas concentraes de

PCR contm normalmente fator de necrose de tumor elevado (FNT). A relao de

FNT/PCR poderia ser til no acompanhamento de rejeio de transplantes renais. O

aumento da PCR urinria em associao com baixos nveis de beta-2-

macroglobulina em pacientes com transplante renal indicativo de infeco extra-

renal (sensibilidade 100%, especificidade 99%). A elevao de ambas as protenas

na urina uma forte indicao de infeco bacteriana ou de rejeio aguda.

Aproximadamente 60% de recm-nascidos saudveis podem apresentar,

normalmente, concentraes de PCR acima de 1 mg/dL durante os primeiros 20 dias

de vida. Conseqentemente, as faixas de referncia de adultos no so adequadas

para crianas.

7. MONONUCLEOSE INFECCIOSA: Doena infecciosa aguda causada pelo vrus Epstein-Barr (EBV),

apresenta uma maior incidncia em crianas, adolescentes e adultos jovens.

Durante o curso da doena, aparecem anticorpos heterfilos, capazes de aglutinar

hemcias de carneiro e de cavalo, que so uma caracterstica dessa infeco. So

anticorpos da classe IgM no-especficos para mononucleose, podendo estar

presentes em outras patologias. O diagnstico feito pelo conjunto dos sinais

clnicos associados positividade para anticorpos heterfilos. Diante de um quadro

sugestivo que apresente a pesquisa negativa para esses anticorpos, faz-se

necessria a pesquisa de anticorpos especficos para EBV, visto que mais de 70%

das crianas e cerca de 10% dos adultos no desenvolvem anticorpos heterfilos.

Os achados clnicos mais freqentes so: febre, adenomegalia, linfocitose com alto

grau de atipia linfocitria (mais de 50%, geralmente com presena de clulas de

Downey), esplenomegalia e hepatomegalia.

O monoteste, tambm conhecido

como reao de Hoff e Bauer, uma reao de

hemaglutinao que detecta a presena de

anticorpos heterfilos utilizando hemcias de

cavalo, sendo til como teste de triagem para

mononucleose. sensvel, positivando logo nas

primeiras semanas e mantendo-se positivo por

cerca de 12 semanas. O monoteste no um

exame especfico para EBV, no sendo til na

Vrus causador da mononucleose Fonte: www.spaceflight.esa.int


autores

175


avaliao da doena crnica.

A reao de Paul-Bunnell pesquisa a presena de anticorpos heterfilos

contra hemcias de carneiro. So considerados sugestivos de mononucleose ttulos

superiores a 1/56. Entretanto, esses anticorpos podem pertencer a outro grupo de

anticorpos heterfilos, como os encontrados na doena do soro e no soro normal

(anticorpos de Forssman). Como os anticorpos heterfilos que surgem na

mononucleose possuem a caracterstica de serem absorvidos pela hemcia de boi e

de no serem absorvidos pelo rim de cobaia, a reao de Paul-Bunnell-Davidsohn

explora essa caracterstica, permitindo a excluso de outros anticorpos heterfilos,

servindo dessa forma como teste confirmatrio. Um pequeno percentual de falso-

positivos foi descrito em linfomas, na leucemia linfoctica aguda, na hepatite

infecciosa, no carcinoma de pncreas, na infeco por citomegalovrus, na artrite

reumatide e na rubola.

A pesquisa de anticorpos para o vrus EBV se faz necessria para a

confirmao do diagnstico da mononucleose naqueles casos nos quais os

pacientes apresentam alteraes clnicas sugestivas, porm sem os achados

hematolgicos clssicos e os ttulos negativos para anticorpos heterfilos. So

anticorpos especficos que aparecem ao final do perodo de incubao, atingindo

ttulos mais baixos durante a fase de recuperao, que iro persistir por toda a vida

como indicadores de imunidade para essa doena.

Os anticorpos especficos para EBV devem ser pesquisados tambm para

o diagnstico diferencial das patologias que podem mimetizar um quadro de

mononucleose, como pode acontecer em quadros de hepatites virais agudas,

colagenoses, sndrome de soroconverso do HIV-1, infeco por citomegalovrus e

toxoplasmose.

8. EPSTEIN-BARR VRUS: O vrus Epstein-Barr (EBV) um herpesvrus humano conhecido por

causar a mononucleose infecciosa e tambm por sua provvel participao na

etiologia de alguns carcinomas (nasofarngeo), linfomas (linfoma de Burkitt) e

desordens linfoproliferativas em pacientes imunossuprimidos. Recentemente, foi

descrita a sndrome ativa crnica severa, na qual a linfoproliferao continua ativa.

J o papel etiolgico do EBV em outras patologias como artrites reumticas, doena

de Hodgkin e sndrome de fadiga crnica ainda no esto bem definidas.

Na fase aguda da mononucleose infecciosa, anticorpos IgM e IgG para

antgenos precoces do EBV (EA), antgenos do capsdeo viral (VCA) e antgenos

nucleares (EBNA) aparecem em seqncia. A pesquisa mais utilizada a de

anticorpos IgM contra VCA por enzima imunoensaio. A positividade indica infeco

aguda. Entretanto, a presena de anticorpos IgM para VCA ou IgM /IgG para EA,

com ausncia ou baixa concentrao de anticorpos contra EBNA, indica infeco

recente ou em curso.

A presena de anticorpos contra VCA e a relao IgG/IgM inferior a 1

podem auxiliar no diagnstico de casos difceis. A anlise da avidez de anticorpos

IgG contra VCA do EBV tambm til em casos de reativao ou infeco recente.

A persistncia de EA e/ou VCA IgG em ttulos altos indica infeco crnica pelo

EBV.

A pesquisa de anticorpos

especficos para EBV deve ser realizada

nos quadros de mononucleose para

confirmao do diagnstico ou nos

casos com suspeita clnica que cursa

com anticorpos heterfilos negativos,

no sendo diagnosticada pelos mtodos

tradicionais, e tambm para o

diagnstico diferencial das patologias

que podem mimetizar um quadro de

mononucleose (mononucleose-like),

como hepatites virais agudas,

colagenoses, sndrome de

soroconverso do HIV-1, citomegalia e

toxoplasmose.

Vrus Epstein-Barr

Fonte: www.sciencenews.org


autores

177


A comparao de mtodos de cultura de clulas e a amplificao

genmica por PCR indicam a maior sensibilidade da tcnica molecular (PCR) na

deteco de EBV. A infeco crnica por EBV pode ser detectada pela presena do

DNA-EBV em sangue perifrico por PCR. Em pacientes em tratamento profiltico

com imunoglobulinas, o diagnstico sorolgico pode acarretar problemas relativos a

reaes falso-positivas.

A tcnica de PCR usando clulas mononucleares de sangue perifrico

pode ser usada para o diagnstico preciso e precoce da infeco por EBV em

pacientes altamente vulnerveis, com doenas linfoproliferativas, nos quais a PCR

apresenta-se altamente sensvel, mesmo em amostras de saliva.

A PCR til em detectar o EBV em outras patologias tais como:

pneumonite intertiscial, pericardite e miocardites a partir da anlise de tecidos ou de

lquidos corpreos. Entretanto, deve-se ter o cuidado de proceder avaliao

qualitativa e quantitativa em amostras coletadas em diferentes datas, alm da

correlao clnica para a confirmao da relao entre os sintomas e a etiologia viral.

9. PPD (PROTENA PURIFICADA DERIVADA): O derivado protico purificado (PPD) um antgeno utilizado na realizao

do teste cutneo que pode ser usado na avaliao da imunidade celular como

auxiliar no diagnstico de infeco pelo Mycobacterium tuberculosis (MB) e na

avaliao aps vacinao especfica para MB. A avaliao da resposta considera a

presena ou no de halo de endurao, que resulta da induo de uma reao de

hipersensibilidade mediada por clulas (tipo IV), causada por linfcitos T

sensibilizados aps contato com o antgeno.

A formao de um halo

eritematoso pode acontecer logo aps a

aplicao intradrmica do antgeno. No

deve ser valorizada por se tratar de uma

reao inespecfica. A reao especfica

ocorre 24 a 72 h aps a aplicao na forma

de uma endurao medida e liberada em

milmetros. A leitura deve ser realizada 48

horas aps a aplicao.

A ausncia de endurao

significa um teste negativo, conforme

esperado em pacientes no-vacinados, que

nunca tiveram contato com o

microrganismo ou em situaes que levem

a alergia cutnea, como por exemplo:

sarampo, sarcoidose, uso de corticide ou

de drogas imunossupressoras, lepra

lepromatosa, entre outras. Reao de PPD positiva

A positividade encontrada em pacientes vacinados ou que j tiveram

contato prvio com o microrganismo normalmente entre 5 a 10 mm de endurao,

podendo ser encontradas reaes superiores geralmente associadas presena de

flictenas. Crianas imunizadas podem necessitar de dose de reforo para apresentar

uma reao cutnea positiva.

10. HIV: O vrus da imunodeficincia humana (HIV) isolado de casos de sndrome

de imunodeficincia adquirida (AIDS), doena que se caracteriza por uma

progressiva e fatal deteriorao do sistema imune. Associados infeco HIV

ocorrem doenas oportunistas (pneumocistose, toxoplasmose, candidase),

neoplasias (sarcoma de Kaposi, linfomas B) e complexo demencial. O vrus entra no

organismo na forma livre ou atravs de clulas infectadas; transmitido por via

sexual, produtos sangneos e aleitamento, dando incio ao processo patognico

que resultar em morte a longo prazo do indivduo. Na viremia inicial, poucas

semanas aps a infeco, h replicao de vrus com uma s especialidade, embora

a populao de vrus doador seja antigenicamente heterognea. Aparecem

mutantes e esta populao passa a dominar na fase tardia da infeco. A resposta


autores

de anticorpos ocorre quando a viremia inicial diminui e o quadro persiste at o

aparecimento da doena. Anticorpos so neutralizantes do agente infeccioso,

havendo forte correlao entre essa atividade e a habilidade de bloquear a interao

entre as glicoprotenas do vrus gp 120/160 e as molculas CD4 dos linfcitos.

O vrus pertence

ao gnero Lentivirus, da famlia

Retroviridae. Aps a penetrao

na clula por fuso com a

membrana, o core viral se

desintegra e o HIV transcreve o

seu RNA em DNA atravs da

transcriptase reversa. O DNA viral

pode permanecer no citoplasma

ou integrar-se ao genoma da

clula, sob forma de pr-vrus,

latente por tempo varivel,

replicando toda vez que a clula

entra em diviso. A acumulao

destas partculas no citoplasma

tem sido associada morte celular

isolada.

Partculas virais do HIV (azul) deixando um linfcito para infectar outra clula. Fonte: www.wellesley.edu

A unio das protenas virais e genoma para formao de virion se d no

citoplasma, liberando-se por brotamento atravs de fuso com a membrana celular.

Esse nvel de interao varia de pessoa para pessoa e pode ser preditivo de um

curso clnico de longa durao. Na fase clinicamente estvel, indivduos infectados

geralmente apresentam nveis de viremia baixos e persistentes e uma depleo

gradual de linfcitos T CD4(+) que pode levar a uma severa imunodeficincia, ao

aparecimento de mltiplas infeces oportunistas, a neoplasias e morte.

O diagnstico laboratorial pode ser feito pela pesquisa de anticorpos

contra o HIV-1 por tcnicas imunoenzimticas e Western-blot. Essas tcnicas,

embora precisas, apresentam limitaes em determinados casos, tais como:


autores

crianas em idade at 15 meses, nas quais a permanncia de anticorpos maternos,

adquiridos na fase gestacional atravs da placenta, no momento do parto ou na fase

ps-parto, atravs do colostro, pode determinar resultados falso-positivos; casos de

infeco recente, em perodos inferiores a 2 ou 3 meses, nos quais no houve,

ainda, a soroconverso, e casos que apresentam resultados indeterminados ou

duvidosos.

Sorologia: Os testes sorolgicos mais comuns so

os imunoenzimticos como

ELISA (Enzyme Linked

Immunosorbent Assay) e ELFA

(Enzyme Linked Fluorescent

Assay); esses testes que

pesquisam anticorpos

circulantes (anti-HIV) utilizam

antgenos, adsorvidos em fases

slidas, que podem ser de

origem sinttica, peptdeos

sintticos (geralmente gp41 e

p24 para o HIV-1 e gp36 para o

HIV-2) ou o prprio vrus

inativado.

Esquema de um vrus HIV Fonte: www.geocities.com/mpennafort/hiv_ciclo.html

O mtodo ELFA apresenta uma verso para a deteco simultnea de

anti-HIV e antgeno p24 (HIV-DUO), favorecendo o diagnstico precoce de infeco

por HIV, antecipando-o em at sete dias, quando comparado a mtodos que

detectam apenas anti-HIV.

Os mtodos enzimticos so, preferencialmente, utilizados para triagens

de diferentes populaes, em bancos de sangue e amostras sorolgicas de

indivduos com sintomatologia sugestiva ou mesmo assintomticos e com histria de

situao de risco.


autores

181


Os testes imunoenzimticos, licenciados e comercializados atualmente,

apresentam sensibilidade e especificidade que ultrapassam 98% a 99%.

Segundo recomendaes do Ministrio da Sade, a liberao de um teste

sorolgico anti-HIV positivo s pode ser concretizada se pelo menos dois testes

forem realizados em paralelo, com a mesma amostra, por metodologia de diferente

procedncia (outro fabricante, outro tipo de antgeno ou diferente princpio

metodolgico) Se os resultados forem positivos ou discordantes (+/ -), necessita-se

da realizao de um teste confirmatrio, sendo o Western-blot o utilizado na rotina

da maioria dos laboratrios privados. Caso aps estas duas etapas o resultado final

se caracterize como positivo, uma segunda amostra clnica deve ser solicitada para

a repetio do procedimento realizado na primeira amostra. Havendo discordncia

entre os resultados da 1 amostra com os obtidos na 2 amostra, solicita-se uma

nova coleta.

O testes confirmatrios da presena de anticorpos anti-HIV indicado em

crianas com at dois anos de idade a reao em cadeia da polimerase (PCR)

para a pesquisa do cDNA-HIV.

Em indivduos com alto risco de exposio ao HIV, uma reatividade

intensa pelo teste imunoenzimtico apresenta um valor preditivo de 99%. Podem

ocorrer reatividades falso-positivas em testes imunoenzimticos, principalmente em

pacientes com hepatite alcolica, outras patologias em que ocorram anormalidades

imunolgicas, neoplasias, mulheres multparas e indivduos politransfundidos, os

quais desenvolveram anticorpos contra antgenos HLA classe II, presentes em

linhagens de clulas onde h a replicao do HIV.

Os testes imunoenzimticos para HIV-1 detectam 40% a 90% de infeces

causadas por HIV-2, e testes de ELISA licenciados para HIV-2 divulgam a

sensibilidade de 99%. A opo mais utilizada atualmente so os testes

imunoenzimticos que detectam, simultaneamente, anticorpos contra HIV-1 e HIV-2.

A deteco de antgeno p24 do HIV-1 circulante por teste imunoenzimtico

particularmente til em determinadas situaes. Nas primeiras semanas aps a

infeco, o antgeno p24 est presente no soro, antes da deteco dos anticorpos.

Com o aparecimento desses, o antgeno p24 torna-se indetectvel, permanecendo

182


assim por meses ou anos. O reaparecimento da antigenemia durante o curso da

infeco geralmente est associado a um prognstico desfavorvel.

Mtodos para a deteco de antgeno p24, principalmente aqueles que

utilizam dissociao cida, tambm tm sido utilizados para acompanhar pacientes

em tratamento antiviral, conforme demonstrado durante ensaios clnicos. Sua

eficcia, porm comprometida em virtude da baixa sensibilidade dos mtodos

atualmente disponveis, sendo substitudos pela deteco da carga viral por

metodologias de biologia molecular.

Western-Blot: O mtodo de Western-Blot amplamente utilizado como teste confirmatrio dos resultados obtidos em testes imunoenzimticos. Outros

testes tambm so indicados, como imunofluorescncia em clulas fixadas e o teste

RIPA (Radio Immuno Precipitation Assay). O Western-Blot utiliza antgenos do HIV,

obtidos em cultura de linhagem celular, separados eletroforeticamente em bandas

distintas, posteriormente transferidas para membrana de nitrocelulose. A reao

ocorre entre os antgenos em contato com os anticorpos, presentes no soro ou no

plasma de indivduos infectados.

Padres especficos de reaes podem ser identificados, e, embora a

definio de testes positivos seja controvertida, a ausncia de reaes especficas

para os diferentes antgenos do HIV confirma a reao negativa.

gp160 Precursor do Envelope Viral (env)

gp120Protena do

Envelope Viral (env) Liga-se ao

CD4

p24 Protena do core viral (gag)

p31 Transcriptase Reversa (pol)

Tabela: Alguns antgenos utilizados na tcnica de Western Blot.

183


Padres de positividade (presena de anticorpos) podem ser definidos no

teste confirmatrio de Western-Blot, pela visualizao de bandas correspondentes

s trs principais protenas virais: a protena do ncleo, p24 ou p31 e duas protenas

do envoltrio, gp41 e gp120/gp160. Alternativamente, o Centers for Diseases Control

and Prevention-CDC recomenda que pelo menos uma das duas, p24 ou

gp120/gp160, seja identificada. Outras bandas de antgenos do HIV so p17, p31,

p51, p55, p66.

Padres definindo casos indeterminados, quando apenas uma das trs

principais bandas visualizada no teste de Western-Blot, podem ocorrer, causando

dvidas quanto a real interpretao. Indivduos infectados, em fase avanada da

AIDS, podem no apresentar reatividade para p24, sugerindo resultado

indeterminado. Alguns podem apresentar esse padro por longo perodo de tempo,

sem evidncias de infeco por HIV. As interpretaes mais corretas e apropriadas

para os resultados de testes de ELISA reativos e Western-blot indeterminados

envolvem avaliaes clnicas e acompanhamento laboratorial.

Conforme Portaria n 59 de 28/01/03 do Ministrio da Sade, devero

constar nos laudos as metodologias e antgenos virais usados em cada ensaio. O

diagnstico sorolgico somente poder ser confirmado aps anlise de no mnimo

02 (duas) amostras de sangue coletadas em momentos diferentes.

Procedncia dos kits e antgenos utilizados: BioRad - Protena

recombinante; Diasorin - Protena recombinante; Biochem - Peptdios sintticos

Linha 1: Soro HIV+ (Controle Positivo)

Linha 2: Soro HIV- (Controle Negativo)

Linha A: Paciente A - Ausncia de Bandas: Negativo

Linha B: Paciente B - Bandas presentes mas sem critrios: Indeterminado

Linha C: Paciente C - Bandas p31 OU p24 E bandas gp 160 OU gp120:

Positivo.

11. HTLV I/II:

O vrus linfotrpico de clulas T humanas tipo I (HTLV I) foi o primeiro

retrovrus humano a ser descoberto. Descrito inicialmente nos Estados Unidos por

Poiesz e cols. No ano de 1980, est atualmente classificado na famlia Retroviridae.

O primeiro relato de infeco pelo HTLV I no Brasil foi feito por Kitagawa et al., aps

estudo da soroprevalncia de anticorpos anti-HTLV I em imigrantes japoneses que

viviam no pas havia 50 anos. Atualmente, so descritos casos em todo o pas, tanto

em populaes urbanas quanto em comunidades isoladas. Esse tipo viral est

diretamente associado leucemia/linfoma de clulas T do adulto e a paraparesia

espstica tropical/mielopatia associada.


autores

As protenas do

HTLV encontram-se

codificadas nos genes gag

(grupo antgeno), pol.

(polimerase) e env (envelope),

flanqueados por seqncias

terminais longas repetidas

(LTR), que contm sinais

importantes para o controle da

expresso dos genes virais. A

regio gag inicialmente

traduzida em uma protena

precursora (p53) que clivada

em: protena da matriz (Ma)

ou p19, protena do capsdeo

(Ca) ou p24 e protena do

nucleocapsdeo.

Microscopia Eletrnica mostrando o vrus HTLV (verde) infectando um linfcito T (amarelo) Fonte: www.britannica.com

A protease codificada por uma seqncia de leitura aberta (open reading

frame - ORF), situada entre a parte 3' da regio gag e a parte 5' da regio pol. A

integrase e a transcriptase reversas so codificadas na regio pol. De forma distinta

dos outros retrovrus, esse possui uma regio particular com cerca de 2 Kb, situada

imediatamente acima da LTR 3', denominada inicialmente pX, em razo da sua

natureza desconhecida. Essa regio contm pelo menos 4 ORF que codificam as

protenas p40 tax, p27 Rex, p21 Rex, p12 I, p13 II, p30 II.

O diagnstico laboratorial da infeco por HTLV pode ser realizado por

tcnicas sorolgicas, tais como testes imunoenzimticos (ELISA), testes de

imunoblotting (Western-Blot) e imunofluorescncia indireta (IFI), que detectam

anticorpos para as protenas estruturais do vrus. Contudo, a tcnica de reao em

cadeia da polimerase (PCR) permite rpido acesso s seqncias de DNA e RNA,

celular e viral, possibilitando o diagnstico dos indivduos que, embora portadores do

vrus, ainda no produzem anticorpos em nveis detectveis. Essa tambm a

185 Este material deve ser utilizado apenas como parmetro de es

inter_exames_lab04.pdf

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