interaÇÕes antÍgeno-anticorpo detecção, quantificação e caracterização dos anticorpos e seu...
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INTERAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO
Detecção, quantificação e caracterização dos
anticorpos e seu uso como ferramenta para pesquisa e
diagnóstico
INTERAÇÕES Reações reversíveisReações reversíveis.
Ligações não covalentes:Ligações não covalentes:-Pontes de hidrogênio-Interações hidrofóbicas-Interações de Van der Waals-Ligações iônicas
MÉTODOS
1) Reagentes não marcados• Reação de precipitação• Reação de aglutinação
2) Reagentes marcados• RIA• ELISA • Imunofluorescência• Western Blotting
MÉTODOS
PRECIPITAÇÃOPRECIPITAÇÃO- Imunodifusão AGLUTINAÇÃOAGLUTINAÇÃO- Aglutinação direta e indireta- Inibição da aglutinação- Teste de Coombs IMUNOENSAIOSIMUNOENSAIOS- RIA- ELISA - Imunofluorescência e Citometria de Fluxo- Western Blotting
APLICAÇÕESAPLICAÇÕES
- - Pesquisa - Diagnóstico- Soroepidemiologia
PRECIPITAÇÃO X AGLUTINAÇÃO
Precipitação:Precipitação:Formação de complexos Ag/Ac.
Aglutinação:Aglutinação:É o agrupamento de partículas, usualmente por moléculas de Ac que se ligam a Ag na superfície de partículas adjacentes.
As reações de precipitação e de aglutinação decorrem, respectivamente da ligação entre o Ac e Ag solúvel e particulado.
Ac + Ag multivalente particulado Título: maior diluição que ainda causa aglutinação
(semi-quantitativo) Agregação visível de partículas = Eritrócitos, bactérias, fungos e látex
REAÇÕES DE AGLUTINAÇÃO
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2) Reagente (anticorpo anti A, B):
AGLUTINAÇÃO DIRETA
1) Amostra de sangue na placa teste:
Exemplo: tipagem sanguínea em lâminas (sistema ABO)
Células ou partículas insolúveis + Ac = Aglutinação
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3) Controle negativo:
4) Mistura-se:
AGLUTINAÇÃO DIRETA
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5) Leitura do resultado:
Um resultado positivo é indicado por uma aglutinação visível (aglomeração dos eritrócitos na placa teste), como ilustrado acima.
negativo positivo
AGLUTINAÇÃO DIRETA
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Exemplo: presença de hCG na urina (gravidez)
INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO
+Soro anti - hCGUrina
São incubados e colocados numa placa
Adicionam-se Partículas revestidas com hCG
Resultado positivo: (presença de hCG na urina): não ocorre aglutinação.
Ac se ligaram no hCG da urina, (ficando bloqueados), na incubação inicial
Resultado negativo:(ausência de hCG na urina). Ocorre aglutinação, pois os anticorpos anti-hCG não são bloqueados na incubação inicial, porque não havia o hormônio na urina. Livres, podem aglutinar as partículas revestidas de hCG.
TESTE DE COOMBS Ac antiimunoglobulinas (Robert
Coombs); DHRN – mãe produz IgG anti-Rh; Não aglutinam os eritrócitos; Direto: Ac ligados aos
eritrócitos fetais; Indireto: Ac anti-Rh não
aglutinantes no soro materno. Permite detectar
incompatibilidades Rh, prevenindo contra DHRN.
Reagentes marcados (enzimas, fluorocromos, isótopos)
Tipos:- RIA- ELISA- IFA / CITOMETRIA DE FLUXO- WESTERN BLOTTING
IMUNOENSAIOS
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