informe final uso de elixir dragÓ (ed8) en deportistaselixirdrago.com/img/cms/estudio clinico...
TRANSCRIPT
INFORME FINAL USO DE ELIXIR DRAGÓ (ED8) EN
DEPORTISTAS ESTUDIO NUTRICIONAL EXPERIMENTAL PARA EVALUAR LA EFICACIA DE
ED8 COMO ANTIOXIDANTE Y ANTIINFLAMATORIO
RESUMEN
Titulo: Estudio nutricional experimental para evaluar la eficacia del producto ED8
como antioxidante y antiinflamatorio.
Centro: Universidad Católica de San Antonio Murcia (UCAM).
Objetivos: Demostrar la eficacia del producto ED8 como antioxidante,
antiinflamatorio y anti-fatiga tras la realización de actividad física de elevada
intensidad y elevada duración.
Metodología:
Diseño
Estudio nutricional experimental aleatorizado, cruzado, con dos grupos a estudio,
enmascarado doble ciego y controlado con placebo.
Sujetos participantes
Se han analizado a 35 sujetos varones que realizaban actividad física al menos una
vez a la semana.
Desarrollo del estudio
Se les realizó un test de esfuerzo para inducir estrés oxidativo, inflamación y fatiga
(test de 90 minutos de duración y de intensidad elevada).
Los sujetos fueron aleatorizados al grupo ED8 (producto en estudio) y placebo
Cada individuo realizó el test de esfuerzo en dos momentos distintos: 1.tras la ingesta
del producto en estudio y 2. Tras la ingesta del producto placebo.
Los sujetos tomaron el producto en estudio o el placebo, durante los 15 días
anteriores a la prueba y el día de la prueba.
Variables analizadas
Daño oxidativo: 8 oxo desoxiguanosina en orina de 24 horas, 8 isoprostano en orina
de 24 horas, grupos carbonilo séricos, malondialdehido sérico y LDL-oxidada sérica.
Defensas antioxidantes: capacidad antioxidante total del plasma y metabolismo del
glutatión
Variables antinflamatorias y de daño muscular en plasma: creatina quinasa,
proteína C reactiva, interleucina 1β, interleucina 6, interleucina 10 y factor de necrosis
tumoral α).
Variables de fatiga (test de sensación subjetiva al esfuerzo de Borg, glucemia,
lactacidemia, pH sanguíneo, bicarbonato sérico, natremia y potasemia).
Estos metabolitos se analizaron antes y después de cada una de los test de esfuerzo
realizados y se comparó la evolución de cada uno de ellos entre el grupo placebo y el
experimental.
Resultados:
Estudio antioxidante: se observan diferencias significativa entre el placebo y
el producto ED8 en los niveles de 8 oxodG (p<0,001), grupos carbonilo
(p<0,031), glutatión oxidado (p<0,001) y cociente glutatión reducido/oxidado
(p<0,048). Todas las diferencias indican que el producto ED8 disminuye el
daño oxidativo generado por la prueba de esfuerzo o mejora la acción de las
defensas antioxidantes. Cuando se comparan los niveles de capacidad
antioxidante total del plasma en condiciones basales (antes de realizar los test)
entre los dos grupos en estudio, se aprecia que el consumo del producto ED8
durante 15 días, incrementa la capacidad antioxidante total del plasma.
Estudio de antinflamación y daño muscular: se observan diferencias
significativa entre el placebo y el producto ED8 en los niveles de creatina
quinasa (p<0,036) e interleucina 6 (p<0,04). Las diferencias indican que el
producto ED8 disminuye el daño muscular generado por la prueba de esfuerzo.
Estudio de fatiga: se observan diferencias significativa entre el placebo y
producto ED8 en la puntuación de la escala de Borg en el minuto 90 (p<0,02) y
en los resultados de glucosa sérica (p<0,039) en los momentos
correspondientes al minuto 90 y al minuto 110. Las diferencias entre los grupos
indican que el producto contribuye a disminuir la fatiga generada por la prueba
de esfuerzo.
Conclusiones: El consumo durante 15 días de ED8 incrementa la capacidad
antioxidante total basal del plasma, disminuye el daño oxidativo al ADN y a las
proteínas generado por una prueba de esfuerzo de elevada intensidad y duración
prolongada, disminuye el daño muscular generado por dicha prueba y mejora la fatiga
del deportista durante la realización de esa misma prueba.
1. ÍNDICE
Contenido
1. ÍNDICE ..................................................................................................................... 3
2. INTRODUCCIÓN ...................................................................................................... 6
3. ÁREA EN INVESTIGACIÓN ..................................................................................... 8
4. ABREVIATURAS ...................................................................................................... 8
5. ANTECEDENTES BIBLIOGRÁFICOS ...................................................................... 8
6. TÍTULO ..................................................................................................................... 9
6.1. INVESTIGADORES............................................. ¡Error! Marcador no definido.
6.2. CENTRO ............................................................. ¡Error! Marcador no definido.
7. OBJETIVOS ............................................................................................................ 10
8. TIPO DE ESTUDIO ................................................................................................. 10
9. PRODUCTO A ESTUDIO ....................................................................................... 12
9.1. INGESTA DE ED8 O DE PLACEBO. ............................................................... 12
10. OBTENCIÓN DE MUESTRAS BIOLÓGICAS ....................................................... 14
11. POBLACION A ESTUDIO ..................................................................................... 17
12. METODO DE ALEATORIZACION Y ENMASCARAMIENTO ................................ 18
13. VARIABLES A ESTUDIO. ..................................................................................... 19
14. ÉTICA ................................................................................................................... 22
14.1. APROBACIÓN DEL COMITÉ DE ÉTICA ........................................................ 22
14.2. PROCEDIMIENTO ÉTICO DEL ESTUDIO ..................................................... 22
14.3 INFORMACIÓN PARA EL PACIENTE Y CONSENTIMIENTO INFORMADO. . 23
15. ANÁLISIS ESTADÍSTICO. .................................................................................... 23
16. RESULTADOS ..................................................................................................... 29
16.1. ESTUDIO ANTIOXIDANTE ............................................................................ 29
Análisis de las modificaciones del estado basal ................................................... 29
16.1.2. DAÑO OXIDATIVO A BIOMOLÉCULAS ..................................................... 31
16.1.2.1. Daño oxidativo al ADN. ............................................................................. 31
16.1.2.2. Daño oxidativo a las proteínas. ................................................................. 34
16.1.2.3. Daño oxidativo a lípidos. ........................................................................... 37
16.1.2.4. Daño oxidativo a lípidos. ........................................................................... 40
16.1.2.5. Análisis de la LDL-oxidada. ...................................................................... 43
16.1.2.6. Capacidad antioxidante total del plasma................................................... 45
16.1.3. DEFENSAS ANTIOXIDANTES. METABOLISMO DEL GLUTATION. .......... 48
16.1.3.1. Glutatión reducido sérico. ......................................................................... 48
16.1.3.2. Glutation oxidado sérico. .......................................................................... 51
16.1.3.3. Cociente del glutation (glutation reducido/glutation oxidado). .................. 54
16.2. ESTUDIO DE FATIGA .................................................................................... 58
16.2.1. Escala subjetiva de esfuerzo de Borg. ......................................................... 58
16.2.2. Glucosa sérica ............................................................................................. 60
16.2.3. Lactato sérico .............................................................................................. 62
16.2.4. pH sérico. .................................................................................................... 63
16.2.5. Bicarbonato sérico ....................................................................................... 65
16.2.6. Natremia. ..................................................................................................... 66
16.2.7. Potasemia. .................................................................................................. 68
16.3. DAÑO MUSCULAR E INFLAMACIÓN. ........................................................... 71
16.3.1. Daño muscular. Creatina quinasa sérica. .................................................... 71
16.3.2. Inflamación. Proteina C-reactiva sérica. ...................................................... 74
16.3.3. Inflamación. Interleucina 1 beta (IL 1β) ........................................................ 77
16.4.4. Inflamación. Interleucina 6 (IL 6) .................................................................. 79
16.3.5. Inflamación. Interleucina 10 (IL 10) .............................................................. 82
16.3.6. Inflamación. Factor de necrosis tumoral alfa (TNF α) .................................. 85
16.4. SEGURIDAD ................................................................................................. 88
16.5.1. Acontecimientos Adversos ...................................................................... 88
16.5.2. Análisis Bioquímico .................................................................................. 89
16.5.3. Conclusión ............................................................................................... 89
17. CONCLUSIONES ................................................................................................. 89
2. INTRODUCCIÓN
Los radicales libres son compuestos altamente reactivos que se producen como
resultado de la actividad metabólica de las células en los sistemas biológicos. Tanto el
ejercicio físico aeróbico, como anaeróbico, provocan un incremento en la producción
de diferentes radicales libres. Cierto nivel de estos compuestos oxidantes ejerce
efectos positivos sobre las funciones inmunitarias del organismo, sobre el recambio
tisular y la resistencia celular, e incluso sobre la propia contracción muscular y
adaptación al ejercicio sistemático. Sin embargo, el ejercicio físico, así como diferentes
factores asociados a su práctica, tal es el caso de las condiciones climáticas donde se
entrena y algunos hábitos dietéticos y de suplementación, pueden desencadenar un
desequilibrio entre la producción de los radicales libres y los mecanismos de defensa
antioxidante del organismo, provocando diferentes daños moleculares, evidentes a
través de diferentes marcadores biológicos de daño molecular sobre los lípidos,
proteínas y ADN.
La idea clásica que propone la hiperractividad mitocondrial como la principal fuente de
ROS durante el ejercicio, ha sido progresivamente sustituida en las últimas décadas
por una teoría más amplia, que considera la participación de diferentes fuentes
metabólicas de ROS. El hecho de que la producción de ROS no es estrictamente
proporcional al consumo de oxígeno durante el ejercicio, tal como fue descrito en
condiciones de reposo, evidencia la participación de otras fuentes de generación de
ROS, como los fenómenos de isquemia reperfusión, las reacciones enzimáticas e
inmunitarias, la autoxidación de catecolaminas, la producción de ácido láctico, etc.
Además, las características del propio ejercicio (por ejemplo la intensidad, la duración,
el tipo de contracción muscular), así como las condiciones ambientales en las que se
entrena (dieta, temperatura, presión de oxígeno, etc.) podrían potenciar la actividad de
estas fuentes de generación de ROS y determinar un fallo o insuficiencia de los
mecanismos capaces de contrarrestar su formación, conduciendo a un daño molecular
y estrés oxidativo.
La práctica regular de ejercicio físico y el cumplimiento de unas pautas alimentarias
saludables aportan indiscutibles beneficios para la salud de las poblaciones,
incluyendo el efecto preventivo sobre diferentes patologías crónicas como el cáncer, la
enfermedad cardiovascular y la diabetes. Paradójicamente, durante la última década,
tanto el ejercicio físico como determinados modelos dietéticos han sido ampliamente
estudiados como importantes inductores de estrés oxidativo.
La inducción de estrés oxidativo durante el ejercicio físico se ha propuesto como una
causa de daño a nivel de la membrana del miocito, lo que conduce a una exacerbada
respuesta inflamatoria, y por consiguiente al padecimiento de excesivo dolor y fatiga
muscular posterior al ejercicio. Además, otras variables asociadas al ejercicio, como la
dieta previa y las propias condiciones climáticas bajo las que se realiza, han sido poco
estudiadas en relación con su efecto sobre la producción de FR y podrían influir en el
desequilibrio que genera el daño oxidativo.
3. ÁREA EN INVESTIGACIÓN
Complementos alimenticios aplicados al ejercicio físico.
4. ABREVIATURAS
ICH: Conferencia Internacional de Armonización
BPC: Buena Práctica Clínica AA: Acontecimiento adverso
CRD: Cuadreno De recogida de datos
EDTA: ácido etilendiaminotetraacético
DNA/RNA: ácido desoxirribonucleico/ácido ribonucleico
EIA: Enzyme inmunoassay
MDA-oxLDL: malondialdehído-Lipoproteína de baja densidad oxidada
ELISA: Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay
GSSG: glutation oxidado
GSH: glutation reducido
TNF-: Factor de necrosis tumoral alfa.
CPK: Creatin-fosfoquinasa
8-oxodG: 8-oxo-2´-deoxi guanosina
WMA: web médica acreditada
DOMS: Delayed onset muscle soreness
RDA: Requerimiento diario aceptado
5. ANTECEDENTES BIBLIOGRÁFICOS
- Apor P, Radi A. Physical exercise, oxidative stress and damage. Orv Hetil.
2006;147(22):1025-31.
- Brigelius-Flohé R. Glutathione peroxidases and redox-regulated transcription
factors. Biol Chem. 2006;387(10-11):1329-35.
- Fridovich I. Superoxide anion radical (O2-.), superoxide dismutases, and
related matters. J Biol Chem. 1997;272(30):18515-7.
- Grune T, Klotz LO, Gieche J, Rudeck M, Sies H. Protein oxidation and
proteolysis by the nonradical oxidants singlet oxygen or peroxynitrite. Free
Radic Biol Med. 2001;30(11):1243-53.
- Halliwell B. Biochemistry of oxidative stress. Biochem Soc Trans. 2007;35 Pt
5:1147-50.
- Halliwell B. Free radicals and antioxidants: a personal view. Nutr Rev. 1994;52
8 Pt 1:253-65.
- Halliwell B. Free radicals, antioxidants, and human disease: curiosity, cause, or
consequence? Lancet. 1994;344(8924):721-4.
- Leeuwenburgh C, Hansen PA, Holloszy JO, Heinecke JW. Hydroxyl radical
generation during exercise increases mitochondrial protein oxidation and levels
of urinary dityrosine. Free Radic Biol Med. 1999;27(1-2):186-92.
- Leeuwenburgh C, Hollander J, Leichtweis S, Griffiths M, Gore M, Ji LL.
Adaptations of glutathione antioxidant system to endurance training are tissue
and muscle fiber specific. Am J Physiol. 1997;272 1 Pt 2:R363-9.
- Münzel T. Recent findings on nitrates: their action, bioactivation and
development of tolerance. Dtsch Med Wochenschr. 2008;133(44):2277-82.
- Pincemail J, Camus G, Roesgen A, Dreezen E, Bertrand Y, Lismonde M, et al.
Exercise induces pentane production and neutrophil activation in humans.
Effect of propranolol. Eur J Appl Physiol Occup Physiol. 1990;61(3-4):319-22.
- Salvemini D, Doyle TM, Cuzzocrea S. Superoxide, peroxynitrite and
oxidative/nitrative stress in inflammation. Biochem Soc Trans. 2006;34 Pt
5:965-70.
- Sen CK, Packer L.T. Thiol homeostasis and supplements in physical exercise.
Am J Clin Nutr. 2000;72 Suppl 2:653S-69S.
- Viña J, Gómez-Cabrera MC, Lloret A, Márquez R, Miñana JB, Pallardó FV, et
al. Free radicals in exhaustive physical exercise: mechanism of production, and
protection by antioxidants. IUBMB Life. 2000;50(4-5):271-7.
6. TÍTULO
Estudio experimental-nutricional para evaluar la eficacia de ED8 como antioxidante y
anti-inflamatorio.
7. OBJETIVOS
Valorar la capacidad antioxidante de ED8 en deportistas aficionados.
Valorar la eficacia antiinflamatoria de ED8 en deportistas aficionados.
Valorar la capacidad de ED8 para reducir la fatiga tras la realización de
una actividad física de alta intensidad y duración.
8. TIPO DE ESTUDIO
Estudio clínico nutricional aleatorizado, cruzado, doble ciego, controlado con placebo,
con dos ramas a estudio: producto ED8 y placebo.
Para poder demostrar los objetivos propuestos se sometió a los individuos a un
modelo de estrés oxidativo consistente en la realización de una actividad física de alta
intensidad y duración (90 minutos). De esta forma se incrementó el estrés oxidativo de
los individuos del estudio y se pudo observar la eficacia del producto frente a placebo,
en la mejora del estado oxidativo de los sujetos.
El modelo oxidativo propuesto consistió en una prueba preliminar y dos pruebas de
esfuerzo no maximales, que en adelante serán denominadas como test 1 y test 2. A
continuación pasamos a describir cada una de ellas.
Prueba preliminar: el objetivo de esta prueba fue poder calcular de manera
individualizada la intensidad a la cual los deportistas (ciclistas) debían realizar
la actividad física posterior, es decir los test 1 y 2. Durante el desarrollo de esta
prueba los sujetos no ingirieron ni ED8 ni placebo. Esta prueba se realizó en
un rodillo de bicicleta con resistencia electromagnética sobre el cual se coloca
la bicicleta con una carga de inicio que simula una velocidad de 12 km/h e
incrementos de carga de 2 Km/h cada minuto, manteniendo una pendiente
constante del 2%. Los ciclistas emplearon desarrollo libre. Para poder calcular
la intensidad de la actividad física posterior, se monitorizó
electrocardiográficamente a los ciclistas.
A continuación, y tras 7 días que se dejó de periodo de lavado para que el estrés
oxidativo generado en la prueba preliminar no tuviera ningún tipo de influencia, los
individuos comenzaron a ingerir los productos intervinientes en el estudio, es decir
ingerieron en primer lugar ED8 o placebo, según lo obtenido en el proceso de
aleatorización.
1ª prueba de actividad física (test 1): después del primer consumo de 15 días
los sujetos a estudio realizaron esta prueba, que consiste en una actividad física
de elevada intensidad por un tiempo de 90 minutos. El deportista realizó test de
esfuerzo rectangular en rodillo de bicicleta con resistencia electromagnética
sobre el cual se colocó la bicicleta del ciclista. La carga máxima mantenida
equivalía a una frecuencia cardiaca correspondiente al 75% de su consumo
máximo de oxígeno calculado en la prueba preliminar y se mantuvo una
pendiente constante del 2%. El objetivo de esta prueba es provocar en el sujeto
un estado inflamatorio y oxidante, y así poder evaluar el efecto antioxidante y
antiinflamatorio de ED8 y placebo. Durante la prueba, los individuos a estudio no
consumieron ni ED8 ni placebo, sólo agua ad libitum.
Cuando los sujetos realizaron el test 1 comenzó otro periodo de lavado, esta vez de 15
días, durante el cual no hubo ingesta de ninguno de los productos intervinientes en el
estudio.
Pasado el periodo de lavado de 15 días, los sujetos comenzaron a ingerir ED8 o
placebo, de modo inverso respecto al consumo precedente, es decir, los sujetos que
tomaron ED8 los 15 días previos al test 1, luego tomaron placebo, mientras que los
que ingirieron placebo el tiempo precedente al test 1 luego ingerirán ED8.
2ª prueba de actividad física (test 2): después del segundo consumo de 15
días, los sujetos a estudio realizaron esta prueba, que consistió en una actividad
física de elevada intensidad por un tiempo de 90 minutos. El deportista realizó el
test de esfuerzo rectangular en rodillo de bicicleta con resistencia
electromagnética sobre el cual se colocó la bicicleta del ciclista. La carga
máxima mantenida equivalía a una frecuencia cardiaca correspondiente al 75%
de su consumo máximo de oxígeno calculado en la prueba de esfuerzo anterior y
se mantuvo una pendiente constante del 2%. El objetivo de esta prueba fue
provocar en el sujeto un estado inflamatorio y oxidante, y así poder evaluar el
efecto antioxidante y antiinflamatorio de ED8/placebo. Durante esta prueba, los
individuos a estudio no consumieron ni ED8 ni placebo, sólo agua ad libitum.
9. PRODUCTO A ESTUDIO
Cada sujeto consumió 16 gramos de ED8 o 16 gramos placebo (Sacarosa). Las
8 cápsulas de ED8 se incluyeron en sobres saborizados de 16 gramos para
facilitar su ingesta.
9.1. INGESTA DE ED8 O DE PLACEBO.
Tipo de consumo.
Consumo crónico de ED8 o de placebo: se realizó durante los 15 días previos a
los test 1 y 2. Durante estos días los sujetos consumieron ED8 o placebo a
razón de 1 sobre cada 12 horas.
Consumo puntual de ED8 o de placebo: Este consumo puntual se realizó el
mismo día que se llevaron a cabo los test 1 y 2. Lo vamos a dividir para su
explicación en el consumo puntual realizado antes del test, y el consumo
puntual realizado después del test
o Consumo pre-test:
2 horas antes de la realización del test se consumió un sobre de
ED8 o de placebo, según el caso.
1 hora antes de la realización del test se consumió un sobre de
ED8 o de placebo, según el caso.
o Consumo post-test:
1 hora después de la realización del test se consumió un sobre
de ED8 o de placebo, según el caso.
5 horas después de la realización del test se consumió un sobre
de ED8 o de placebo, según el caso.
Tratamientos previos y concomitantes.
Cualquier tratamiento farmacológico que se realizó durante el periodo experimental
debió ser registrado en el Cuaderno de Recogida de datos (CRD). El investigador
principal del estudio juzgó la idoneidad de la continuidad del participante en el mismo
en función de dichos tratamientos.
En general, no se permitió el uso de cualquier otra medicación o suplemento
alimenticio que interfiriera con la formulación en estudio.
Medicación de rescate
Por las características de los productos del estudio no fue necesaria la mediación de
rescate.
Manejo y suministro de productos del estudio.
El promotor del estudio se responsabilizó del suministro de ambos productos, es decir
del producto a estudio ED8 y del placebo.
El promotor debió asegurar que los productos del estudio (incluyendo el placebo)
estaban fabricados de acuerdo con las Normas de Correcta Fabricación
El Promotor codificó y etiquetó los productos de manera que no se rompiese el
enmascaramiento.
Por parte de la unidad de investigación clínica, se tomaron las debidas precauciones
para que el almacenamiento de los citados productos fuese el correcto (se debió
proteger los envases de la luz solar, conservarlos en un lugar fresco, seco y apartarlos
de olores intensos y evitar su contacto directo con el suelo).
Los productos del estudio estuvieron sólo disponibles para este estudio y bajo la
responsabilidad del Investigador Principal, el cual debió asegurar y prevenir su robo o
distribución por canales inadecuados.
Evaluación del cumplimiento
Siguiendo el plan de aleatorización, el producto a estudio correspondiente se
proporcionó al participante en el estudio bajo la supervisión del investigador principal,
quien anotó en el apartado pertinente del CRD el código correspondiente.
Puesto que los productos del estudio los tomó el propio voluntario en su domicilio, el
control del cumplimiento se realizó mediante la devolución por parte del voluntario de
todos los envases llenos al investigador designado para tal fin. El cumplimiento en la
toma de los productos del estudio, fue verificado por el investigador principal mediante,
la contabilidad del producto en investigación sin usar que había sido devuelto.
Asimismo, se mantuvo un archivo con las fechas, cantidades, código de los productos
del estudio que fueron entregados y/o recogidos.
Los productos de investigación se utilizaron solo de acuerdo con este protocolo y bajo
de la supervisión del investigador principal.
10. OBTENCIÓN DE MUESTRAS BIOLÓGICAS
Los participantes se sometieron a la extracción de sangre y a una recolección de orina
de 24 h en los siguientes instantes:
Antes de realizar la prueba preliminar lo sujetos se sometieron a una
recolección de orina de 24 horas, y a una extracción sanguínea realizada1 hora
antes de la prueba preliminar.
Antes de realizar los test 1 y 2: los individuos se sometieron a la extracción de
sangre y a una recolección de orina de 24 horas. La toma de muestras de
sangre se llevó a cabo 2 horas antes de que los sujetos realizaran tanto el test
1 como el test 2.
Después de realizar los test 1 y 2: los participantes realizaron una recolección
de orina de 24 h. Además fueron sometidos a una extracción sanguínea 30
minutos después de terminar el test y 24h después de terminar el test. La toma
de muestras de sangre de 24 horas tras el test fue sólo para la determinación
del estado inflamatorio.
Durante la prueba: los individuos se sometieron a extracciones de 65
microlitros de sangre capilar del pulpejo del dedo, que se realizó 10 minutos
antes de la prueba, a los 10, 30, 50, 70 y 90 minutos durante la prueba, y 20
minutos después de terminar la prueba. Estas muestras de sangre se utilizaron
para analizar todas las variables del análisis de fatiga excepto la Escala de
Borg.
Procesamiento de muestras
Una hora antes de la prueba preliminar, dos horas antes, 30 minutos después y 24
horas después de los test 1 y 2 , se realizó una extracción sanguínea de la vena
antecubital del brazo. Se extrajeron 13,5 ml de sangre en cada una de ellas
distribuyéndose de la siguiente manera:
Tubo con EDTA tripotásico (VACUTEST), 3 ml distribuidos en un solo tubo:
para análisis hematológico. Tras la extracción sanguínea este tubo fue portado
al laboratorio para su análisis inmediato.
Tubos separadores de suero con acelerante y gel (VACUTEST), 10,5 ml
distribuidos en tres tubos que tras reposo de 30 minutos se centrifugaron (
Biofuge Stratos Heraeus) a 4000 rpm durante 15 minutos. El sobrenadante
obtenido se distribuyó de la siguiente manera:
Aproximadamente 3 ml se alicuotaron en tubos Eppendorf con
una cantidad de aproximadamente 500µl cada uno que se
congelaron a – 80º C para posterior análisis de la capacidad
antioxidante total y eficacia inflamatoria del suero.
Un tubo centrifugado se llevó a laboratorio para análisis
inmediato de variables bioquímicas de sangre venosa.
Durante la prueba, en los instantes -10, 10, 30, 50, 70 y 90 minutos durante la prueba,
y 20 minutos después de terminar, se realizó tomas de micromuestras de 65
microlitros de sangre capilar del pulpejo del dedo .La toma de muestras sanguíneas se
realizó siguiendo las directrices del National Committee for Clinical Laboratory
Standars, y se obtuvo la muestra sin hemolizar tras limpiar con algodón seco la zona
para no mezclar la muestra de sangre con sudor. Estas muestras se adquirieron
mediante punción con lanceta en el pulpejo de un dedo de la mano, después de
arterializar la zona mediante calentamiento local. Después de la punción, la sangre
capilar se utilizó para analizar todas las variables de fatiga excepto la Escala de Borg
en un Radiometer ABL90 FLEX.
Los deportistas realizaron recogida de orina de 24 horas en el día anterior a las
pruebas. Para obtener esta muestra, el deportista debió seguir el protocolo establecido
en las tablas VII y VIII. Si la muestra era incompleta (alguna micción no recolectada),
esta se desecha del estudio. Después de la contabilización del volumen total de orina
excretado durante las 24 horas se extrajo una muestra de 9 ml y se congeló a -80º C
en tres crioviales distintos hasta su análisis posterior.
También se realizó recogida de orina de la micción realizada 24 horas posteriores a
los test 1 y 2. Después de la contabilización del volumen total de orina excretado
durante las 24 horas se extrajo una muestra de 9 ml y se congeló a -80º C en tres
crioviales distintos hasta su análisis posterior.
Tabla 1. Protocolo de recogida de orina durante las 24 horas previas a las pruebas.
Tabla 2. Protocolo de recogida de orina durante las 24 horas posterior a las pruebas.
RECOGIDA DE ORINA DE 24 HORAS PREVIAS A LAS PRUEBAS
1. En los días anteriores a la prueba de esfuerzo se le suministrará al deportista dos frascos
de recogida de orina de 2 litros de capacidad.
2. El día ____________ , a las ___ : ___ horas, al levantarse por la mañana, orinará en el váter (anote la fecha y la hora).
3. Desde ese momento orinará siempre en un orinal o un recipiente limpio y seco (no lo limpie con lejía ni detergente). Echará después la orina en el frasco que le suministramos y lo guardará en la nevera, bien cerrado (dentro de una bolsa).
4. Al día siguiente y a la misma hora que el día anterior, orinará en el orinal o el recipiente y echará también la orina en el frasco.
5. Llevará el/los frascos al laboratorio donde realizará ese mismo día la prueba de esfuerzo.
RECOGIDA DE ORINA DE 24 HORAS POSTERIOR A LAS PRUEBAS
1. El día de la prueba de esfuerzo se le suministrará al deportista dos frascos de recogida de orina de 2 litros de capacidad.
2. El día ____________ , a las ___ : ___ horas, se realizará micción previa a la prueba de esfuerzo rectangular en el váter (anote la fecha y la hora).
3. Desde ese momento y por tanto desde el instante posterior a la prueba de esfuerzo rectangular, orinará siempre en un orinal o un recipiente limpio y seco (no lo limpie con lejía ni detergente). Echará después la orina en el frasco que le suministramos y lo guardará en la nevera, bien cerrado (dentro de una bolsa).
4. Al día siguiente y a la misma hora en la que el día anterior realizó micción previa a la prueba de esfuerzo, orinará en el orinal o el recipiente y echará también la orina en el frasco.
5. Llevará el/los frascos al laboratorio donde realizó el día anterior la prueba de esfuerzo.
11. POBLACION A ESTUDIO
Tamaño muestral:
El tamaño muestral fue de 30 individuos, incluyendo un 5% más en consideración por
las posibles pérdidas (abandonos, retiradas) pre y/o post-aleatorización.
Criterios de inclusión y exclusión:
Los sujetos a estudio cumplieron todos y cada uno de los criterios de inclusión y
ninguno de exclusión.
Criterios de inclusión
Para ser incluidos en el estudio, los sujetos tuvieron que cumplir con todos y cada uno
de los siguientes criterios:
• Edad: entre 30 y 50 años de edad, ambos inclusive.
• Sexo masculino, de raza caucásica, y seleccionados de la población general.
• Sujetos que hacen ejercicio más de una vez a la semana.
• Los voluntarios capaces de entender el estudio clínico, dispuestos a dar su
consentimiento informado por escrito y a cumplir con los procedimientos y las
condiciones del estudio.
Criterios de exclusión
El cumplimiento de al menos uno de los siguientes criterios de exclusión, fue motivo de
eliminación de dicho sujetos del estudio:
• Sujetos con antecedentes de cualquier enfermedad crónica.
• Sujetos diagnosticados con y / o en tratamiento para la hipertensión.
• Fumadores (> 5 cigarrillos al día).
• Individuos considerados deportistas profesionales.
• Sujetos que han recibido radiación accidental, diagnóstica o terapéutica
ionizante, durante la realización del estudio o en el mes anterior a la misma.
• Sujetos que se pasan una cantidad considerable de tiempo expuesto al sol, o
bien que hacen uso de camas solares.
• Los sujetos con un índice de masa corporal superior a 35 Kg/m2 (IMC > 30
Kg/m2)
• Los sujetos con un historial de abuso de drogas o alcohol, que podrían limitar
su capacidad de cooperar durante el estudio.
• Sujetos que toman medicamentos o suplementos alimenticios con
propiedades antioxidantes.
• Sujetos con una dieta particularmente rica en antioxidantes.
• Sujetos cuya condición no les hace elegibles para el estudio, según el
investigador.
Criterios de retirada y análisis de los mismos.
Dado el carácter voluntario de la participación en el estudio, los sujetos pudieron
abandonar el mismo sin que fuese necesario especificar las razones que tuviesen para
hacerlo y sin sufrir ninguna desventaja personal, tal y como se recoge en la “Hoja de
información al sujeto participante”. Así mismo, el investigador según su criterio (por ej.:
violación de los criterios de selección, etc.), pudo retirar a un sujeto del estudio, lo que
quedaría debidamente reflejado en el apartado correspondiente de su CRD y recogido
y analizado en el informe final.
12. METODO DE ALEATORIZACION Y ENMASCARAMIENTO
Aleatorización
La aleatorizacion fue realizada por el investigador principal utilizando un generador
informático de números aleatorios ( www.random.org ), de modo que a cada sujeto
que entró en el estudio le correspondió un número de participante que le hizo
pertenecer a uno de los dos grupos de estudio. Tanto los investigadores como el
propio participante desconocían el grupo asignado.
Enmascaramiento
Durante el tiempo de desarrollo de la fase experimental hasta después del tratamiento
estadístico, ni el investigador ni los sujetos a estudio fueron conscientes del grupo al
que pertenecían, de modo que estuvieron cegados en todo momento. Para ello se hizo
necesario que el producto ED8 y el placebo presentaran las mismas características
organolépticas, así como idéntico aspecto externo.
Dado que ambos productos intervinientes eran idénticos y que la asignación a los
grupos en estudio fue ciega no se tuvo en cuenta ningún otro método de
enmascaramiento.
En caso de un acontecimiento adverso, el promotor que mantuvo el listado de la
aleatorización con la correspondiente relación entre el tratamiento y el voluntario,
estuvo autorizado a romper el ciego.
13. VARIABLES A ESTUDIO.
Daño provocado por el estado oxidado del sujeto.
Los sujetos, tal y como hemos comentado, fueron sometidos a una fuente de estrés
oxidativo (test 1 y test 2) para poder evaluar el efecto antioxidante de ED8 frente a
placebo, es decir la capacidad de frenar el daño oxidativo provocado.
Daño oxidativo al ADN: Análisis de 8-oxo 2´-deoxiguanosina en orina de 24
horas mediante el uso de ADN/ARN Oxidative Damage EIA Kit (8-hydroxy-2-deoxy
Guanosine EIA Kit) Cayman Chemical Item Number 589320.
Daño oxidativo a proteínas: análisis de grupos carbonilo en suero mediante el
uso de Protein Carbonyl Colorimetric Assay Kit Cayman Chemical Item Number
10005020.
Daño oxidativo a lípidos: análisis de malondialdehido mediante el uso de MDA-
oxLDL ELISA (Biomedica) Enzyme Immunoassay (EIA) for the quantitative
determination of human MDA-oxLDL Cat.no: BI-20022 | 12 x 8 tests | conventional
96well ELISA format.
Daño oxidativo a lípidos. Determinación en orina de 8-isoprostano mediante el
uso de 8-Isoprostane EIA Kit Cayman Chemical Item Number 516351.
Análisis de LDL oxidada. Cuantificación en suero de LDL en su forma oxidada,
mediante el uso de MDA-oxLDL ELISA (Biomedica) Enzyme Immunoassay (EIA) for
the quantitative determination of human MDA-oxLDL Cat.no: BI-20022 | 12 x 8 tests |
conventional 96well ELISA format
Determinación del estado antioxidante total (TAS). Mediante el uso de
Antioxidant Assay Kit Cayman Chemical Item Number 709001.
Defensas antioxidantes
Los sujetos a estudio fueron sometidos a un modelo de estrés oxidativo para poder
evaluar el incremento en las defensas antioxidantes que provoca la ingesta de ED8
frente a placebo.
Metabolismo del glutatión: se evaluó la relación entre la concentración de glutatión
oxidado y reducido, existente en plasma, mediante el uso de Glutathione Assay Kit
Cayman Chemical Item Number 703002.Un sujeto con un mayor estado oxidativo
presentara una mayor concentración de glutatión oxidado (GSSG) frente a una
menor concentración de glutatión reducido (GSH), de modo que a mayor estado
oxidado que presente el individuo mayor será la relación glutatión oxidado/reducido.
Perfil inflamatorio.
Las variables analizadas con el fin de evaluar la capacidad antiinflamatoria de CH 127
frente a placebo, fueron las siguientes:
Proteína C reactiva: cuantificada en plasma mediante inmunoanálisis.
Interleuquina1: cuantificada mediante análisis multiplexado de citoquinas en un
LUMINEX 100IS utilizando un milliplex human cytokine/chemokine de millipore.
Interleuquina 6: cuantificada mediante análisis multiplexado de citoquinas en un
LUMINEX 100IS utilizando un milliplex human cytokine/chemokine de millipore.
Interleuquina 10. cuantificada mediante análisis multiplexado de citoquinas en un
LUMINEX 100IS utilizando un milliplex human cytokine/chemokine de millipore.
TNF-: cuantificada mediante análisis multiplexado de citoquinas en un LUMINEX
100IS utilizando un milliplex human cytokine/chemokine de millipore.
Creatin-fosfoquinasa (CPK): cuantificada mediante método cinético.
Variables para evaluar la fatiga tras la realización de la actividad física
prortocolizada (Test 1 y 2)
Test de percepción subjetiva de esfuerzo de Borg: escala visual analógica que se
llevó a cabo a los 10, 30, 50, 70 y 90 minutos durante la realización del test, y 15
minutos después de la finalización del mismo.
Evolución de la glucemia: permitiéndonos realizar la comparativa entre placebo y
ED8. Se determinó en el momento basal (10 minutos antes del comienzo del test),
en los minutos 10, 30, 50, 70 y 90 durante la realización del test, y a los 20 minutos
de haber cesado el mismo.
Evolución de los electrolitos: permitiéndonos realizar la comparativa entre placebo
y producto experimental. Se determinó en el momento basal (10 minutos antes del
comienzo del test), en los minutos 10, 30, 50, 70 y 90 durante la realización del
test, y a los 20 minutos de haber cesado el mismo.
Evolución del lactato durante la prueba: se determinó en el momento basal (10
minutos antes del comienzo del test), en los minutos 10, 30, 50, 70 y 90 durante la
realización del test, y a los 20 minutos de haber cesado el mismo.
Evolución del pH y del ion bicarbonato: se determinó en el momento basal (10
minutos antes del comienzo del test), en los minutos 10, 30, 50, 70 y 90 durante la
realización del test, y a los 20 minutos de haber cesado el mismo.
Evolución de la frecuencia cardiaca: se determinó en el momento basal (10
minutos antes del comienzo del test), en los minutos 10, 30, 50, 70 y 90 durante la
realización del test, y a los 20 minutos de haber cesado el mismo.
Variables sanguíneas de seguridad.
Estas variables se evaluaron con el fin de definir la seguridad del producto
experimental. Para conseguir esto, se analizó el perfil hematológico y bioquímico de
cada participante.
Análisis hematológico: recuento de células rojas, células blancas y plaquetas.
Bioquímica de la sangre general: glucemia y de suero (iones de sodio, potasio,
cloruro).
La seguridad también se evaluó mediante registro y evaluación de los acontecimientos
adversos acaecidos.
Variables clínicas-demográficas: sexo, edad e historia médica.
14. ÉTICA
14.1. APROBACIÓN DEL COMITÉ DE ÉTICA
El protocolo del estudio y la hoja de información al paciente (s) fueron revisados y
aprobados por el Comité de Ética de la Universidad Católica San Antonio de Murcia.
14.2. PROCEDIMIENTO ÉTICO DEL ESTUDIO
El estudio se realizó de acuerdo con la versión actual de la declaración de Helsinki (64
ª Asamblea General de la WMA, Fortaleza, Brasil, Octubre 2013). El estudio clínico se
realizó de acuerdo con la Conferencia Internacional de Armonización (ICH), la guía de
Buenas Prácticas Clínicas (BPC) y los requerimientos legales.
El cumplimiento de esta norma establece una garantía pública de que los derechos,
seguridad y bienestar de los sujetos del estudio están protegidos; en consonancia con
los principios que tienen su origen en la Declaración de Helsinki, y que los datos del
estudio clínico son creíbles.
14.3 INFORMACIÓN PARA EL PACIENTE Y CONSENTIMIENTO INFORMADO.
Todos los pacientes dieron su consentimiento informado por escrito para participar en
el estudio antes de ser seleccionados.
La hoja de información al paciente detalló los procedimientos contenidos en el estudio:
objetivos, metodología, todas las evaluaciones y determinaciones, el número de
visitas, los riesgos potenciales, los beneficios esperados, la confidencialidad y la
libertad de dejar de participar en el estudio clínico en caso de que el paciente no
quiera finalizar el estudio. El investigador explicó cada uno de estos procedimientos a
cada paciente.
El paciente firmó el consentimiento informado para indicar que la información había
sido explicada y entendida. El paciente tuvo tiempo para considerar la información
presentada antes de firmar y fechar el formulario de consentimiento informado,
indicando que entienden completamente la información, y voluntariamente se ofreció a
participar en el estudio.
Confidencialidad de los datos
Los investigadores garantizaron el mantenimiento del anonimato de los sujetos
incluidos en el estudio clínico. Ni en los cuadernos de recogida de datos (CRDs) u
otros documentos, los sujetos fueron identificados por sus nombres, sino por un código
de identificación. El investigador detalló un documento con la correspondencia entre
los códigos y nombres. Los documentos no se mostraron al promotor y se mantuvieron
bajo estricta confidencialidad por el investigador principal.
15. ANÁLISIS ESTADÍSTICO.
El análisis estadístico se ha realizado por protocolo.
Inicialmente se ha realizado análisis descriptivo de todas las variables en estudio,
tanto de las condiciones basales de cada una de ellas como de su evolución. Este
análisis se ha realizado para cada uno de los grupos.
Las variables cuantitativas se han presentado mediante la media, la desviación
estándar y el intervalo de confianza al 95%.
Las variables cualitativas se han presentado en forma de tabla incluyendo las
frecuencias relativas y absolutas, tanto para los dos grupos en estudio, como para la
muestra global.
Posteriormente se ha realizado un análisis comparativo entre los grupos en estudio
Estudio antioxidante. El análisis de las variables del estudio antioxidante se
ha realizado con el siguiente esquema:
1. Análisis de las modificaciones del estado basal. El objetivo de este
análisis es valorar la influencia que la ingesta del producto durante 15
días ha tenido sobre el metabolismo antioxidante de los sujetos: defensas
antioxidantes y estrés oxidativo. Para ello, se realizó una comparación de
los resultados obtenidos para cada variable antes de la realización de
cada test de esfuerzo entre los dos grupos en estudio:
Variables obtenidas antes de la realización del test
preliminar. Indican el estado del metabolismo antioxidante de
los sujetos antes de consumir cualquiera de los productos.
Variables obtenidas antes de la realización del test de estrés
placebo. Las variables son obtenidas tras el consumo
durante 15 días del producto placebo y antes de la
realización del test de estrés. Indican el estado del
metabolismo antioxidante de los sujetos después de
consumir el producto placebo durante 15 días.
Variables obtenidas antes de la realización del test de estrés
producto en experimentación. Las variables son obtenidas
tras el consumo durante 15 días del producto en
experimentación y antes de la realización del test de estrés.
Indican el estado del metabolismo antioxidante de los sujetos
después de consumir el producto en experimentación
durante 15 días.
Para ello se realizó un ANOVA para medidas repetidas con un factor
intrasujeto a estudio producto consumido (sin producto (test preliminar),
producto placebo (test placebo) y producto experimental (test producto
experimental)). La comparación por pares se realizó mediante test de
Bonferroni.
2. Análisis de eficacia. El objetivo de este análisis es valorar la eficacia
del producto para disminuir el estrés oxidativo generado por la
realización del ejercicio físico. Para esto, se realizó una prueba de
esfuerzo de elevada intensidad y duración (test de estrés) y se
analizaron las distintas variables del metabolismo antioxidante antes y
después de la prueba. Se realizaron las siguientes determinaciones:
Evolución temporal intragrupo. Se ha realizado análisis de la
evolución temporal de cada variable en cada grupo por separado
(placebo y experimental). Los instantes en los que se midieron las
variables fueron:
Pre-test: dos horas antes del test de estrés.
Post-test precoz: 30 minutos después del test de estrés.
Post-test tardío: 24 horas después del test de estrés.
Para este análisis se realizó ANOVA para medidas repetidas con
un factor intrasujeto a estudio (tiempo: pretest, postest precoz y
postest tardío) La comparación por pares se realizó mediante test
de Bonferroni.
TREADMIL
Min 0 Min 90
-2 h Min 30 24 h
STRESS TEST
Comparación intergrupo de la evolución temporal. Se realizó
una comparación de la evolución temporal de cada variable entre
ambos grupos (experimental y placebo). Esta es la evaluación que
nos indica con más claridad cuál es la eficacia del producto frente al
placebo, para minimizar el estrés oxidativo generado por la
realización de un ejercicio físico.
Para esta comparación se ha realizado ANOVA para medidas
repetidas con dos factores a estudio: un factor intersujeto (producto
consumido: experimental o placebo) y un factor intrasujeto (tiempo:
pretest, postest precoz y postest tardío). La comparación por pares
se realizó mediante test de Bonferroni.
Estudio de fatiga. El análisis de las variables del estudio de fatiga se ha
realizado con el siguiente esquema:
Análisis de eficacia. El objetivo de este análisis es valorar la eficacia del
producto para disminuir la fatiga generada por la realización del ejercicio físico.
Para ello se efectuó una comparación de la evolución temporal de cada
variable entre los grupos en estudio (análisis comparativo intergrupo de la
evolución temporal). En caso de obtener diferencias significativas en la
comparación entre ambos grupos para una variable, posteriormente se
realizaban comparaciones por pares (comparación entre ambos grupos para
cada instante) para establecer los instantes en los que existían diferencias
entre los dos grupos.
Los instantes en los que se midieron las variables fueron:
Pre-test: 10 minutos antes de la prueba de stress.
Durante el test: minutos 10, 30, 50, 70 y 90.
Post-test: 20 minutos después de la prueba de esfuerzo.
La variable puntuación del test de Borg solo se evaluó durante la prueba de
esfuerzo.
Para esta comparación se ha realizado un ANOVA para medidas repetidas con
dos factores a estudio: un factor intersujeto (producto consumido: experimental
o placebo) y un factor intrasujeto (tiempo: minutos -10, 10, 30, 50, 70, 90 y
110). La comparación por pares se realizó mediante test de Bonferroni.
Estudio de daño muscular e inflamación. El análisis de las variables del
estudio de daño muscular e inflamación se ha realizado con el siguiente
esquema:
1. Análisis de las modificaciones del estado basal. El objetivo de este
análisis es valorar la influencia que la ingesta del producto durante 15 días
ha tenido sobre los parámetros de inflamación basal de los sujetos. Para
ello, se realizó una comparación entre los resultados obtenidos para cada
variable antes de la realización de cada test de esfuerzo:
Variables obtenidas antes de la realización del test
preliminar. Indican los niveles de los parámetros
inflamatorios de los sujetos antes de consumir ninguno de
los productos.
Variables obtenidas antes de la realización del test de estrés
placebo. Las variables son obtenidas tras el consumo
durante 15 días del producto placebo y antes de la
realización del test de estrés. Indican los niveles de los
parámetros inflamatorios de los sujetos después de consumir
el producto placebo durante 15 días.
TREADMIL
Min 0 Min 90
Min -10 Min 10 Min 30 Min 50 Min 70 Min 90 Min 110
STRESS TEST
Variables obtenidas antes de la realización del test de estrés
producto en experimentación. Las variables son obtenidas
tras el consumo durante 15 días del producto en
experimentación y antes de la realización del test de estrés.
Indican los niveles de los parámetros inflamatorios de los
sujetos después de consumir el producto en experimentación
durante 15 días.
Para ello se realizó un ANOVA para medidas repetidas con un factor
intrasujeto a estudio (producto consumido durante 15 días: sin producto
(test preliminar), producto placebo (test placebo) y producto experimental
(test producto experimental)). La comparación por pares se realizó
mediante test de Bonferroni.
2. Análisis de eficacia. El objetivo de este análisis es valorar la eficacia del
producto para disminuir el daño muscular y la inflamación generada por la
realización del ejercicio físico. Para ello se realizaron los siguientes análisis:
a. Evolución temporal intragrupo. Se realizó análisis de la evolución
temporal de cada variable en cada grupo por separado (placebo y
experimental). Los instantes en los que se midieron las variables fueron:
Pre-test: dos horas antes del test de estrés.
Post-test precoz: 30 minutos después del test de estrés.
Post-test tardío: 24 horas después del test de estrés.
TREADMIL
Min 0 Min 90
-2 h Min 30 24 h
STRESS TEST
STRESS TEST
Para este análisis se realizó un ANOVA para medidas repetidas con un
factor intrasujeto a estudio (tiempo: pretest, postest precoz y postest
tardío). La comparación por pares se realizó mediante test de
Bonferroni.
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal. Se realizó
comparación de la evolución temporal de cada variable entre ambos
grupos.
Para esta comparación se ha realizado un ANOVA para medidas
repetidas con dos factores a estudio: un factor intersujeto (producto
consumido: experimental o placebo) y un factor intrasujeto (tiempo:
pretest, postest precoz y postest tardío). La comparación por pares se
realizó mediante test de Bonferroni.
En el conjunto de pruebas estadísticas el nivel de significación utilizado será de 0,05.
Los análisis estadísticos se realizarán con el programa SPSS v 21.0.
16. RESULTADOS
16.1. ESTUDIO ANTIOXIDANTE
Los resultados del estudio antioxidante se presentan a continuación de acuerdo con el
siguiente esquema:
Análisis de las modificaciones del estado basal.
El objetivo de este análisis es valorar la influencia que la ingesta del producto
durante 15 días ha tenido sobre el metabolismo antioxidante de los sujetos: defensas
antioxidantes y estrés oxidativo. Para ello, se realizó una comparación entre los
resultados obtenidos para cada variable antes de la realización de cada test de
esfuerzo:
o Variables obtenidas antes de la realización del test preliminar. Indican el
estado del metabolismo antioxidante de los sujetos antes de consumir
ninguno de los productos.
o Variables obtenidas antes de la realización del test de estrés placebo.
Las variables son obtenidas tras el consumo durante 15 días del
producto placebo y antes de la realización del test de estrés. Indican el
estado del metabolismo antioxidante de los sujetos después de
consumir el producto placebo durante 15 días.
o Variables obtenidas antes de la realización del test de estrés producto
en experimentación. Las variables son obtenidas tras el consumo
durante 15 días del producto en experimentación y antes de la
realización del test de estrés. Indican el estado del metabolismo
antioxidante de los sujetos después de consumir el producto en
experimentación durante 15 días.
Análisis de eficacia.
El objetivo de este análisis es valorar la eficacia del producto para disminuir el
estrés oxidativo generado por la realización del ejercicio físico. Para esto, se
realizó una prueba de esfuerzo de elevada intensidad y duración (test de estrés) y
se analizaron las distintas variables del metabolismo antioxidante antes y después
de la prueba. Se realizaron las siguientes determinaciones:
Evolución temporal intragrupo. Se realizó análisis de la evolución
temporal de cada variable en cada grupo por separado (placebo y
experimental). Los instantes en los que se midieron las variables fueron:
Pre-test: dos horas antes del test de estrés.
Post-test precoz: 30 minutos después del test de estrés.
Post-test tardío: 24 horas después del test de estrés.
Comparación intergrupo de la evolución temporal. Se realizó
comparación de la evolución temporal de cada variable entre ambos
grupos (experimental y placebo). Esta es la evaluación que nos indica
con más claridad cuál es la eficacia del producto frente al placebo, para
minimizar el estrés oxidativo generado por la realización de un ejercicio
físico.
16.1.2. DAÑO OXIDATIVO A BIOMOLÉCULAS
16.1.2.1. Daño oxidativo al ADN.
8-oxo-2´-deoxi guanosina en orina de 24 horas (8-oxodG).
Análisis de las modificaciones del estado basal (tabla 3 y figura 1).
No se observan diferencias significativas en los niveles de esta variable al
comparar los tres instantes analizados: antes del test preliminar, antes de la
prueba placebo y antes de la prueba producto experimental.
Por tanto, el consumo durante 15 días del producto en experimentación no ha
incrementado el daño oxidativo basal al ADN.
TREADMIL
Min 0 Min 90
-2 h Min 30 24 h
STRESS TEST
STRESS TEST
Tabla 3. Media y desviación estándar de los niveles de 8 oxodG (ng) obtenidas
antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental.
Figura 1. Media y desviación estándar de los niveles de 8 oxodG (ng)
obtenidas antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental. Barras de error +/- 1 ET.
Análisis de eficacia (tabla 4 y figura 2).
a. Evolución temporal intragrupo.
La realización del test de estrés incrementa de forma significativa los
niveles de 8 oxodG cuando los sujetos consumen el producto placebo
(p<0,001).
En cambio, cuando los sujetos consumen el producto en investigación,
los niveles de 8 oxodG disminuyen (p<0,04), también de forma
significativa.
Media Desviación estandar N
Test preliminar 135,5 86,4 32
Grupo placebo 125,7 98,5 32
Grupo experimental 154,8 88,6 32
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal.
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro
entre los dos grupos a estudio, se observa que existen diferencias
significativas (p<0,001).
El daño oxidativo al ADN generado por la prueba de estrés es distinto
en el grupo control con respecto al grupo placebo. Cuando el grupo
consume el placebo se observa que la prueba genera mayor daño que
cuando el grupo consume el producto en experimentación. Además, en
este último caso, el daño oxidativo disminuye tras el consumo de ED8 al
finalizar la prueba de esfuerzo dando resultados inferiores incluso a los
obtenidos antes de dicha prueba.
Por tanto, el consumo del producto ED8 disminuye el daño oxidativo al
ADN generado por la realización del ejercicio físico con respecto al
placebo.
Probablemente, las características de consumo del producto durante la
prueba y las horas posteriores a la prueba y las propiedades de la
determinación de 8 oxodG (orina recogida durante 24 horas) expliquen
este resultado.
Tabla 4. Media y desviación estándar de los niveles de 8 oxodG (ng) obtenidos en la orina
recogida 24 horas previas y 24 horas posteriores a cada una de los test de estrés (grupo placebo y grupo experimental).Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como **p<0,01 y *p<0,05.Valor-p TxP: Valor de p para la interacción intergrupo tiempoxproducto.
Media D.E. N Valor-p T x P
Placebo Pre-Test (24h-pre) 125,7 98,5 32
0,001 Post-Test (24h-post) 158,5** 86,9 32
Experimental Pre-Test (24h-pre) 154,8 88,5 32
Post-Test (24h-post) 124,3* 81,0 32
Figura 2. Media y desviación estándar de los niveles de 8 oxodG (ng) obtenidos en
la orina recogida 24 horas previas y 24 horas posteriores a cada una de los test de estrés (grupo placebo y grupo experimental). Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como **p<0,01 y *p<0,05.Diferencia significativa intergrupo tiempoxproducto marcada como
## p<0,001. Barras de error +/- 1 ET.
16.1.2.2. Daño oxidativo a las proteínas.
Grupos carbonilo séricos.
Análisis de las modificaciones del estado basal (tabla 5 y figura 3).
No se observan diferencias significativas en los niveles de esta variable al
comparar los tres instantes analizados: antes del test preliminar, antes de la
prueba placebo y antes de la prueba producto experimental.
Por tanto, el consumo durante 15 días del producto en experimentación no ha
incrementado el daño oxidativo basal a las proteínas.
Tabla 5. Media y desviación estándar de los niveles de grupos Carbonilo (nM/ml)
obtenidas antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental.
Media Desviación estándar N
Test preliminar 34,9 19,2 32
Grupo placebo 29,8 18,4 32
Grupo experimental 34,5 16,7 32
*
** ##
Figura 3. Media y desviación estándar de los niveles de grupos Carbonilo
(nM/ml) obtenidas antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental. Barras de error +/- 1 ET
Análisis de eficacia (tabla 6 y figura 4).
a. Evolución temporal intragrupo.
Cuando los sujetos consumen el producto placebo, la realización del
test de estrés incrementa de forma significativa los niveles de grupos
carbonilo séricos (comparación entre pretest y postest; p<0,001). A las
24 horas de la prueba, esta determinación presenta valores similares a
los obtenidos antes de la realización de la prueba de estrés.
En cambio, cuando los sujetos consumen el producto en investigación,
los niveles de este parámetro no se modifican de forma significativa
(p=0,06) durante la realización del test de estrés. A las 24 horas de la
prueba, esta determinación también presenta valores similares a los
obtenidos antes de la realización de la prueba de estrés.
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal.
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro
entre los dos grupos a estudio, se observa que existen diferencias
significativas (p<0,031).
Preliminary test Placebo group Experimental group
El daño oxidativo a las proteínas generado por la prueba de estrés es
distinto en el grupo control con respecto al grupo placebo. Cuando el
grupo consume el producto control se observa que la prueba genera
mayor daño que cuando en el grupo consume el producto en
experimentación.
Por tanto, el consumo del producto en experimentación disminuye el
daño oxidativo a proteínas generado por la realización del ejercicio
físico con respecto al placebo.
Tabla 6. Media (nM/ml) y desviación estándar (D.E) de los resultados de los niveles de grupos Carbonilo
antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental) Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como *p<0,05.Valor-p TxP: Valor de p para la interacción intergrupo tiempoxproducto.
Media D.E N Valor-p T x P
Placebo
Pre-test (-2h) 29,8 18,4 32
0,031
Post-test (Min 30) 42,5* 21,3 32
24 h 30,7 16,2 32
Experimental
Pre-test (-2h) 34,5 16,7 32
Post-test (Min 30) 36,9 18,6 32
24 h 31,9 16,0 32
Figura 4. Media (nM/ml) y desviación estándar de los resultados de los
niveles de grupos Carbonilo antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental) Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como *p<0,05. Diferencia significativa intergrupo tiempoxproducto marcada como
#p<0,05. Barras de error +/- 1 ET.
16.1.2.3. Daño oxidativo a lípidos.
Malondialdehido sérico.
Análisis de las modificaciones del estado basal (tabla 7 y figura 5).
No se observan diferencias significativas en los niveles de esta variable al
comparar los tres instantes analizados: antes del test preliminar, antes de la
prueba placebo y antes de la prueba producto experimental.
Por tanto, el consumo durante 15 días del producto en experimentación no ha
incrementado el daño oxidativo basal a los lípidos.
Tabla 7. Media y desviación estándar de los niveles de Malondialdehido (µM/l)
obtenidas antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental.
Media Desviación estándar N
Test preliminar 12,4 7,8 32
Grupo placebo 12,1 5,8 32
Grupo experimental 12,1 5,6 32
*
#
Figura 5. Media y desviación estándar de los niveles de Malondialdehido (µM/l) obtenidas
antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental. Barras de error +/- 1 ET.
Análisis de eficacia (tabla 8 y figura 6).
a. Evolución temporal intragrupo.
Cuando los sujetos consumen el producto placebo, la realización del
test de estrés incrementa de forma NO significativa los niveles de
malondialdehido sérico (incremento de 22,7% en la comparación entre
pretest y postest; p=0,401). A las 24 horas de la prueba, esta
determinación presenta valores similares a los obtenidos antes de la
realización de la prueba de estrés.
Cuando los sujetos consumen el producto en investigación, los niveles
de este parámetro se incrementan en menor medida y también de forma
NO significativa (incremento de 9,0% en la comparación entre pretest y
postest; p=1). A las 24 horas de la prueba, esta determinación también
presenta valores similares a los obtenidos antes de la realización de la
prueba de estrés.
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal.
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro
entre los dos grupos a estudio, se observa que no existen diferencias
significativas (p<0,640).
El daño oxidativo a los lípidos generado por la prueba de estrés no es
distinto en el grupo control con respecto al grupo placebo.
Por tanto, el consumo del producto en experimentación no modifica el
daño oxidativo a lípidos generado por la realización del ejercicio físico
con respecto al placebo.
Tabla 8. Media (µM/l) y desviación estándar de los resultados de malondialdehido (µM/l) antes y
después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental).
Media Desviación estándar N
Placebo
Pre-test (-2h) 12,1 5,8 32
Post-test (Min 30) 14,8 12,2 32
24 h 12,1 4,6 32
Experimental
Pre-test (-2h) 12,1 5,6 32
Post-test (Min 30) 13,2 5,6 32
24 h 12,2 6,4 32
Figura 6. Media (µM/l) y desviación estándar de los resultados de malondialdehido (µM/l)
antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental). Barras de error +/- 1 ET.
16.1.2.4. Daño oxidativo a lípidos.
8-Isoprostano en orina de 24 horas.
Análisis de las modificaciones del estado basal (tabla 9 y figura 7).
No se observan diferencias significativas en los niveles de esta variable al
comparar los tres instantes analizados: antes del test preliminar, antes de la
prueba placebo y antes de la prueba producto experimental.
Por tanto, el consumo durante 15 días del producto en experimentación no ha
incrementado el daño oxidativo basal a los lípidos.
Tabla 9. Media y desviación estándar de los niveles de 8-Isoprostano (ng) obtenidas
antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental.
Media Desviación estándar N
Test preliminar 1075,9 801,9 32
Grupo placebo 1351,1 1116,6 32
Grupo experimental 1409,0 1239,7 32
Figura 7. Media y desviación estándar de los niveles de 8-Isoprostano (ng) obtenidas antes
de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental. Barras de error +/- 1 ET.
Análisis de eficacia (tabla 10 y figura 4).
a. Evolución temporal intragrupo.
Cuando los sujetos consumen el producto placebo, la realización del
test de estrés no modifica los niveles de 8 isoprostano en orina de 24
horas (p=0,336).
Cuando los sujetos consumen el producto en investigación, los niveles
de este parámetro tampoco se modifican (p=0,994).
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal.
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro
entre los dos grupos a estudio, se observa que no existen diferencias
significativas (p=0,517).
El daño oxidativo a los lípidos generado por la prueba de estrés no es
distinto en el grupo control con respecto al grupo placebo.
Por tanto, el consumo del producto en experimentación no modifica el
daño oxidativo a los lípidos generado por la realización del ejercicio
físico con respecto al placebo.
Tabla 10. Media y desviación estándar de los niveles de 8-Isoprostano (ng) obtenidos en la orina recogida
24 horas previas y 24 horas posteriores a cada una de los test de estrés (grupo placebo y grupo experimental).
Media Desviación estándar N
Placebo Pre-Test (24h-pre) 1351,1 1116,6 32
Post-Test (24h-post) 1186,3 719,3 32
Experimental Pre-Test (24h-pre) 1409,0 1239,7 32
Post-Test (24h-post) 1407,4 1167,0 32
Figura 8. Media y desviación estándar de los niveles de 8-Isoprostano (ng) obtenidos en la
orina recogida 24 horas previas y 24 horas posteriores a cada una de los test de estrés (grupo placebo y grupo experimental). Barras de error +/- 1 ET.
16.1.2.5. Análisis de la LDL-oxidada.
Análisis de las modificaciones del estado basal (tabla 11 y figura 9).
No se observan diferencias significativas en los niveles de esta variable al
comparar los tres instantes analizados: antes del test preliminar, antes de la
prueba placebo y antes de la prueba producto experimental.
Por tanto, el consumo durante 15 días del producto en experimentación no ha
incrementado los niveles de LDL-oxidada basales.
Tabla 11. Media y desviación estándar de los niveles de LDL-oxidada (µg/ml)
obtenidas antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental.
Media Desviación estándar N
Test preliminar 1,9 2,4 32
Grupo placebo 1,6 1,9 32
Grupo experimental 1,7 2,0 32
Figura 9. Media y desviación estándar de los niveles de LDL-oxidada
(µg/ml) obtenidas antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental. Barras de error: +/- 1 ET.
Análisis de eficacia (tabla 12 y figura 10).
a. Evolución temporal intragrupo.
Cuando los sujetos consumen el producto placebo, la realización del
test de estrés no modifica los niveles de LDL oxidada (comparación
entre pretest y postest; p=0,115). A las 24 horas de realización de la
prueba, los niveles de este parámetro son similares a los obtenidos
antes de la realización del test.
Cuando los sujetos consumen el producto en investigación, los niveles
de este parámetro tampoco se modifican (comparación entre pretest y
postest; p=1). A las 24 horas de realización de la prueba, los niveles de
este parámetro también son similares a los obtenidos antes de la
realización del test.
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal.
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro
entre los dos grupos a estudio, se observa que no existen diferencias
significativas (p=0,426).
La realización de una prueba de esfuerzo no modifica los niveles de
LDL oxidada en ninguno de los dos grupos a estudio.
Tabla 12. Media y desviación estándar de los resultados de LDL-oxidada (µg/ml) antes y después del
test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental).
Media Desviación estándar N
Placebo
Pre-test (-2h) 1,6 1,9 32
Post-test (Min 30) 1,8 1,9 32
24 h 1,6 2,0 32
Experimental
Pre-test (-2h) 1,7 2,0 32
Post-test (Min 30) 1,5 1,9 32
24 h 1,3 1,2 32
Figura 10. Media (µg/l) y desviación estándar de los resultados de LDL-oxidada
(µg/ml) antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental).Barras de error +/- 1 ET.
16.1.2.6. Capacidad antioxidante total del plasma.
Análisis de las modificaciones del estado basal (tabla 13 y figura 11).
Al comparar los niveles de este parámetro obtenidos antes de la realización de
los test de esfuerzo (antes del test preliminar, antes de la prueba placebo y
antes de la prueba producto experimental), se observan diferencias
significativas (p<0,001); se aprecia un incremento de la capacidad antioxidante
total del plasma en los individuos cuando consumen el producto en
experimentación con respecto a las otras dos determinaciones (comparación
prueba preliminar – prueba experimental p<0,003; comparación prueba
placebo-prueba experimental p<0,001).
Por tanto, el consumo durante 15 días del producto en experimentación ha
incrementado la capacidad antioxidante total del plasma.
Tabla 13. Media y desviación estándar de los niveles de Capacidad antioxidante
total (mM/l) obtenidas antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental.
Media Desviación estándar N
Test preliminar 2,0 1,1 32
Grupo placebo 2,1 1,1 32
Grupo experimental 2,8 1,0 32
Figura 11. Media y desviación estándar de los niveles de Capacidad antioxidante
total (mM/l) obtenidas antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental. Diferencia significativa del test de estrés experimental con respecto al test preliminar marcada como **p<0,01. Diferencia significativa del test de estrés experimental con respecto al test de estrés placebo marcada como
## p<0,001. Barras de error +/- 1 ET.
Análisis de eficacia (tabla 14 y figura 12).
a. Evolución temporal intragrupo.
Cuando los sujetos consumen el producto placebo, la realización del
test de estrés no modifica la capacidad antioxidante total del plasma
(comparación entre pretest y postest; p=0,603). A las 24 horas de
realización de la prueba, los niveles de este parámetro son similares a
los obtenidos antes de la realización del test.
Cuando los sujetos consumen el producto en investigación, los niveles
## **
de este parámetro disminuyen ligeramente de forma no significativa
(comparación entre pretest y postest; p=0,068). A las 24 horas de
realización de la prueba, los niveles de este parámetro también son
similares a los obtenidos después de la realización del test.
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal.
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro
entre los dos grupos a estudio, se observa que existen diferencias
significativas (p<0,028).
Por tanto, la modificación que la capacidad antioxidante total del plasma
experimenta tras la realización de un test de estrés es distinta cuando el
individuo a consumido el placebo o el producto en experimentación.
Tabla 14. Media y desviación estándar de los niveles de capacidad antioxidante total (mM/l) obtenidos
antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental).Valor-p TxP: Valor de p para la interacción intergrupo tiempoxproducto
Media Desviación estándar N Valor-p T x P
Placebo
Pre-test (-2h) 2,1 1,1 32
0,028
Post-test (Min 30) 2,2 1,1 32
24 h 2,0 1,2 32
Experimental
Pre-test (-2h) 2,6 1,0 32
Post-test (Min 30) 2,1 1,3 32
24 h 2,3 1,3 32
Figura 12. Media y desviación estándar de los niveles de capacidad antioxidante
total (mM/l) obtenidos antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental).Diferencia significativa intergrupo tiempoxproducto marcada como
# p < 0,05. Barras de error +/- 1 ET.
16.1.3. DEFENSAS ANTIOXIDANTES. METABOLISMO DEL GLUTATION.
16.1.3.1. Glutatión reducido sérico.
Análisis de las modificaciones del estado basal (tabla 15 y figura 13).
No se observan diferencias significativas en los niveles de esta variable al
comparar los tres instantes analizados: antes del test preliminar, antes de la
prueba placebo y antes de la prueba producto experimental.
Por tanto, el consumo durante 15 días del producto en experimentación no ha
modificado los niveles de glutatión reducido sérico.
#
Tabla 15. Media y desviación estándar de los niveles de Glutation reducido sérico
(μg/ml) obtenidos antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental.
Media Desviación estándar N
Test preliminar 34,3 20,0 32
Grupo placebo 35,1 20,5 32
Grupo experimental 32,7 19,3 32
Figura 13. Media y desviación estándar de los niveles de Glutation
reducido sérico (μg/ml) obtenidos antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental. Barras de error +/- 1 ET.
Análisis de eficacia (tabla 16 y figura 14).
a. Evolución temporal intragrupo.
Cuando los sujetos consumen el producto placebo, la realización del
test de estrés disminuye de forma significativa los niveles de glutation
reducido sérico (comparación entre pretest y postest; p<0,042). A las 24
horas de la prueba, esta determinación presenta valores similares a los
obtenidos antes de la realización de la prueba de estrés.
En cambio, cuando los sujetos consumen el producto en investigación,
los niveles de este parámetro no se modifican de forma significativa
durante la realización del test de estrés (comparación entre pretest y
postest; p=1). A las 24 horas de la prueba, esta determinación también
presenta valores similares a los obtenidos antes de la realización de la
prueba de estrés.
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal.
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro
entre los dos grupos a estudio, se observa que no existen diferencias
significativas (p=0,197).
Por tanto, a pesar de las diferencias observadas en el análisis por
separados de los grupos, cuando comparamos la evolución de estos, no
se observan diferencias estadísticamente significativas. Es decir, las
modificaciones que produce la realización de un test de estrés en los
niveles de glutation reducido no son estadísticamente diferentes cuando
los sujetos consumen placebo que cuando consumen producto en
experimentación. Probablemente, se habrían obtenido resultados
estadísticamente significativos si el tamaño muestral hubiese sido
mayor.
Tabla 16. Media y desviación estándar de los resultados de los niveles de Glutation reducido sérico
(μg/ml) antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental) Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como *p<0,05.
Media Desviación estándar N
Placebo
Pre-test (-2h) 35,1 20,5 32
Post-test (Min 30) 28,4* 12,3 32
24 h 34,8 21,3 32
Experimental
Pre-test (-2h) 32,7 19,3 32
Post-test (Min 30) 32,4 17,9 32
24 h 32,7 18,3 32
Figura 14. Media y desviación estándar de los resultados de los niveles de
Glutation reducido sérico (μg/ml) antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental) Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como *p<0,05. Barras de error +/-1 ET.
16.1.3.2. Glutation oxidado sérico.
Análisis de las modificaciones del estado basal (tabla 17 y figura 15).
No se observan diferencias significativas en los niveles de esta variable al
comparar los tres instantes analizados: antes del test preliminar, antes de la
prueba placebo y antes de la prueba producto experimental.
Por tanto, el consumo durante 15 días del producto en experimentación no ha
modificado los niveles de glutation oxidado sérico.
Tabla 17. Media y desviación estándar de los niveles de Glutation oxidado sérico
(μg/ml) obtenidos antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental.
Media Desviación estándar N
Test preliminar 68,6 12,8 32
Grupo placebo 67,3 11,0 32
Grupo experimental 66,7 11,0 32
*
Figura 15. Media y desviación estándar de los niveles de Glutation oxidado sérico (μg/ml)
obtenidos antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental. Barras de error +/-1 ET.
Análisis de eficacia (tabla 18 y figura 16).
a. Evolución temporal intragrupo.
Cuando los sujetos consumen el producto placebo, la realización del
test de estrés incrementa de forma significativa los niveles de glutation
oxidado sérico (incremento de 32,1% en la comparación entre pretest y
postest; p<0,001). A las 24 horas de la prueba, esta determinación
todavía es mayor que la obtenida antes de la realización de la prueba
de estrés (p<0,001).
Cuando los sujetos consumen el producto en investigación, los niveles
de este parámetro también se incrementa de forma significativa durante
la realización del test de estrés (incremento de 8,2% en la comparación
entre pretest y postest; p<0,001). A las 24 horas de la prueba, esta
determinación también presenta valores distintos a los obtenidos antes
de la realización de la prueba de estrés (p<0,013).
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal.
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro
entre los dos grupos a estudio, se observa que existen diferencias
significativas (p<0,001).
Es decir, el incremento de glutatión oxidado sérico que se produce en el
grupo placebo durante la realización de una prueba de esfuerzo es
significativamente mayor que el observado en el grupo experimental.
Tabla 18. Media y desviación estándar (D.E) de los niveles de Glutation oxidado sérico (µg/ml) obtenidos
antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como **p<0,01.Valor-p TxP: Valor de p para la interacción intergrupo tiempoxproducto.
Media D.E N Valor-p T x P
Placebo
Pre-test (-2h) 67,3 11,0 32
0,001
Post-test (Min 30) 89,0** 12,8 32
24 h 77,0** 10,0 32
Experimental
Pre-test (-2h) 66,9 11,0 32
Post-test (Min 30) 72,1 7,1 32
24 h 73,3 10,1 32
Figura 16. Media y desviación estándar de los niveles de Glutation oxidado
sérico (µg/ml) obtenidos antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como *p<0,05 y**p<0,01. Diferencia significativa intergrupo tiempoxproducto marcada como
##p<0,01. Barras de error +/- 1 ET.
16.1.3.3. Cociente del glutation (glutation reducido/glutation oxidado).
Análisis de las modificaciones del estado basal (tabla 19 y figura 17).
No se observan diferencias significativas en los niveles de esta variable al
comparar los tres instantes analizados: antes del test preliminar, antes de la
prueba placebo y antes de la prueba producto experimental.
Por tanto, el consumo durante 15 días del producto en experimentación no ha
modificado los niveles del cociente del glutation.
Tabla 19. Media y desviación estándar del cociente del glutation obtenido antes de
la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental.
Media Desviación estándar N
Test preliminar ,52 ,33 32
Grupo placebo ,54 ,35 32
Grupo experimental ,53 ,39 32
**
**
** *
##
Figura 17. Media y desviación estándar del cociente del glutation obtenido antes de
la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental. Barras de error +/-1 ET.
Análisis de eficacia (tabla 20 y figura 18).
a. Evolución temporal intragrupo.
Cuando los sujetos consumen el producto placebo, la realización del
test de estrés disminuye de forma significativa el valor del cociente del
glutation (comparación entre pretest y postest; p<0,001). A las 24 horas
de la prueba, esta determinación presenta valores similares a los
obtenidos antes de la realización de la prueba de estrés (p=0,516).
Cuando los sujetos consumen el producto en investigación, los niveles
de este parámetro no se incrementan de forma significativa durante la
realización del test de estrés (comparación entre pretest y postest;
p=0,581). A las 24 horas de la prueba, esta determinación también
presenta valores similares a los obtenidos antes de la realización de la
prueba de estrés (p=0,639).
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal.
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro
entre los dos grupos a estudio, se observa que existen diferencias
significativas (p<0,048).
Es decir, el descenso de los valores del cociente del glutation sérico que
se produce en el grupo placebo durante la realización de la prueba de
esfuerzo es significativamente mayor que el observado en el grupo
experimental.
Tabla 20. Media y desviación estándar del cociente de glutation obtenido antes y después del test de estrés y
después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como **p<0,01.Valor-p TxP: Valor de p para la interacción intergrupo tiempoxproducto.
Media Desviación estándar N Valor-p T x P
Pre-test (-2h) ,54 ,35 32
0,048
Post-test (Min 30) ,32**
,15 32
24 h ,46 ,30 32
Pre-test (-2h) ,53 ,39 32
Post-test (Min 30) ,46 ,28 32
24 h ,46 ,28 32
Figura 18. Media y desviación estándar del cociente de glutation obtenido antes y
después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como **p<0,01.Valor-p tiempoxproducto: Diferencia significativa intergrupo tiempoxproducto marcada como
#p<0,05. Barras de error +/- 1 ET.
RESUMEN DEL ESTUDIO ANTIOXIDANTE
El consumo durante 15 días de ED8 incrementa la capacidad antioxidante total del
plasma basal de los sujetos y no incrementa el daño oxidativo basal a proteínas, ADN
ni lípidos (no se comporta como prooxidante).
El consumo de ED8 en la pauta administrada disminuye el daño oxidativo al ADN y
proteínas que genera una prueba de esfuerzo de elevada intensidad y prolongada
duración.
El consumo de ED8 en la pauta administrada es capaz inducir un menor consumo de
glutatión reducido durante la realización de un ejercicio de elevada intensidad y
prolongada duración. Por tanto, ayuda a las defensas antioxidantes a disminuir el daño
oxidativo generado por la realización de una prueba de esfuerzo.
Por tanto, podemos afirmar que el producto en experimentación es un antioxidante útil
para los deportistas que realizan ejercicios que desarrollan elevado estrés oxidativo.
**
#
Tabla 21. Tabla-resumen de la significación estadística de las variables antioxidantes para los grupos a
estudio (Placebo y experimental).
ANTIOXIDANTES
Variable
Grupo Valor p intragrupos Valor p intergrupos
8-oxodG Placebo p<0,001
p<0,001 Experimental p<0,04
Carbonilos Placebo p<0,001
p<0,031 Experimental p=0,06
Malondialdehído Placebo p=0,402
p<0,640 Experimental p=1
8-Isoprostano Placebo p=0,336
p=0,517 Experimental p=0,994
LDL-oxidada Placebo p=0,115
p=0,426 Experimental p=1
Glutation
reducido
Placebo p<0,042 p=0,197
Experimental p=1
Glutation
oxidado
Placebo p<0,001 p<0,001
Experimental p<0,001
Cociente
glutation
Placebo p<0,001
p<0,048 Experimental p=0,581
16.2. ESTUDIO DE FATIGA
Los resultados del estudio de fatiga se presentan a continuación de acuerdo con el
siguiente esquema:
Análisis de eficacia. Análisis comparativo intergrupo de la evolución temporal.
16.2.1. Escala subjetiva de esfuerzo de Borg.
Análisis de eficacia (tabla 22 y figura 19).
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro entre los
dos grupos a estudio, se observa que existen diferencias significativas (p<0,039).
Al realizar la comparación por pares para establecer los instantes en los que
existen diferencias significativas se obtiene: minuto 90 (p<0,032).
La realización de un test de esfuerzo de estas características genera una
sensación subjetiva al esfuerzo que se incrementa durante el desarrollo de la
prueba. Esta sensación subjetiva al esfuerzo disminuye cuando se consume el
producto en experimentación con respecto al placebo. La diferencia entre los dos
grupos aparece al final del test (minuto 90).
Tabla 22. Media y desviación estándar de los niveles de percepción subjetiva del esfuerzo mediante
escala de Borg, obtenidos en cada momento, en cada uno de los grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa intergrupo en ese instante, marcada como: *p<0,05. Valor-p TxP: diferencia significativa intergrupo tiempoxproducto.
Media Desviación estándar N Valor-p TxP
Placebo
Min 10 5,3 1,3 29
0,020
Min 30 5,0 1,0 29
Min 50 5,7 1,2 29
Min 70 6,1 1,4 29
Min 90 6,6 1,7 29
Experimental
Min 10 5,5 1,2 29
Min 30 5,2 1,1 29
Min 50 5,7 1,7 29
Min 70 5,7 1,6 29
Min 90 5,9* 1,8 29
Figura 19. Media y desviación estándar de los niveles de percepción subjetiva del
esfuerzo mediante escala de Borg, obtenidos en cada momento, en cada uno de los grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa intergrupo en ese instante, marcada como: *p<0,05. Diferencia significativa intergrupo tiempoxproducto marcada como
#p<0,05. Barras de error +/- 1 ET.
16.2.2. Glucosa sérica
16.3.2.1. Análisis de eficacia. (tabla 23 y figura 20).
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro entre los
dos grupos a estudio, se observa que existen diferencias significativas
(p<0,024).
Al realizar la comparación por pares para establecer los instantes en los que
existen diferencias significativas se obtiene: minuto 90 (p<0,026) y minuto 110
(p<0,046).
Por tanto, cuando los sujetos consumen el producto en investigación, los
niveles de glucemia al final de la prueba de esfuerzo son mayores. La mejoría
*
#
de los niveles de glucemia durante la realización de una prueba de esfuerzo
están relacionados directamente con la fatiga del deportista.
Tabla 23. Media y desviación estándar de los niveles séricos de glucosa (mg/dl) obtenidos en cada
momento, en cada uno de los grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa intergrupo en ese instante, marcada como: *p<0,05. Valor-p TxP: Diferencia significativa intergrupo tiempoxproducto.
Media D.E N Valor-p T x P
Placebo
Min -10 94,8 6,8 31
0,039
Min 10 86,1 10,9 31
Min 30 91,5 12,5 31
Min 50 90,8 12,8 31
Min 70 85,7 11,2 31
Min 90 81,5 11,4 31
Min 110 88,0 9,8 31
Experimental
Min -10 96,9 7,8 31
Min 10 84,3 11,0 31
Min 30 91,8 11,2 31
Min 50 89,7 10,4 31
Min 70 85,8 8,6 31
Min 90 85,8* 9,2 31
Min 110 91,4* 7,8 31
Figure 20. Media y desviación estándar de los niveles séricos de glucosa (mg/dl)
obtenidos en cada momento, en cada uno de los grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa intergrupo en ese instante, marcada como: *p<0,05. Diferencia significativa intergrupo tiempoxproducto marcada como
#p<0,05.
Barras de error +/- 1 ET.
16.2.3. Lactato sérico
16.3.3.1. Análisis de eficacia. (tabla 24 y figura 21).
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro entre los
dos grupos a estudio, no se observa que existan diferencias significativas
(p=0,607).
Por tanto, cuando los sujetos consumen el producto en investigación, la
evolución de los niveles de lactato durante la realización de la prueba de
esfuerzo, es similar a la evolución de este parámetro cuando los sujetos
consumen el placebo.
*
* Stress test
#
Tabla 24. Media y desviación estándar de los niveles séricos de lactato (mmol/l) obtenidos
en cada momento, en cada uno de los grupos a estudio (placebo y experimental)
Media Desviación estándar N
Placebo
Min -10 2,3 1,0 32
Min 10 5,2 2,2 32
Min 30 3,3 1,1 32
Min 50 2,7 1,2 32
Min 70 2,7 1,0 32
Min 90 2,5 1,1 32
Min 110 1,5 ,4 32
Experimental
Min -10 2,1 ,7 32
Min 10 4,8 1,6 32
Min 30 3,2 1,2 32
Min 50 2,7 1,1 32
Min 70 2,5 1,2 32
Min 90 2,4 ,7 32
Min 110 1,5 ,4 32
Figura 21. Media y desviación estándar de los niveles séricos de lactato (mmol/l) obtenidos en cada
momento, en cada uno de los grupos a estudio (placebo y experimental). Barras de error +/- 1 ET.
16.2.4. pH sérico.
Stress test
Análisis de eficacia. (tabla 25 y figura 22).
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro entre los
dos grupos a estudio, no se observa que existan diferencias significativas
(p=0,157).
Por tanto, cuando los sujetos consumen el producto en investigación, la
evolución del pH sérico durante la realización de la prueba de esfuerzo, es
similar a la evolución de este parámetro cuando los sujetos consumen el
placebo.
Tabla 25. Media y desviación estándar de los niveles séricos de pH obtenidos en cada momento, en cada
uno de los grupos a estudio (placebo y experimental).
Media Desviación estándar N
Placebo
Min -10 7,403 ,020 28
Min 10 7,390 ,024 28
Min 30 7,421 ,021 28
Min 50 7,428 ,024 28
Min 70 7,435 ,020 28
Min 90 7,431 ,021 28
Min 110 7,417 ,021 28
Experimental
Min -10 7,402 ,022 28
Min 10 7,386 ,029 28
Min 30 7,416 ,020 28
Min 50 7,423 ,029 28
Min 70 7,422 ,026 28
Min 90 7,433 ,022 28
Min 110 7,420 ,018 28
Figura 22. Media y desviación estándar de los niveles séricos de pH obtenidos en
cada momento, en cada uno de los grupos a estudio (placebo y experimental). Barras de error +/- 1 E
16.2.5. Bicarbonato sérico
Análisis de eficacia. (tabla 26 y figura 23).
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro entre los
dos grupos a estudio, no se observa que existan diferencias significativas
(p=0,166).
Por tanto, cuando los sujetos consumen el producto en investigación, la
evolución del bicarbonato sérico durante la realización de la prueba de esfuerzo,
es similar a la evolución de este parámetro cuando los sujetos consumen el
placebo.
Stress test
Tabla 26. Media y desviación estándar de los niveles séricos de bicarbonato (mmol/l) obtenidos en cada
momento, y en cada uno de los grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa intergrupo en ese instante, marcada como: *p<0,05.
Media Desviación estándar N
Placebo
Min -10 26,0 1,2 28
Min 10 22,4 2,1 28
Min 30 23,6 1,8 28
Min 50 23,7 1,8 28
Min 70 23,9 1,4 28
Min 90 24,3 1,4 28
Min 110 24,0 1,3 28
Experimental
Min -10 25,7 1,2 28
Min 10 21,6 2,3 28
Min 30 23,3 2,0 28
Min 50 23,7 1,8 28
Min 70 24,0 1,7 28
Min 90 24,1 1,6 28
Min 110 24,2 1,4 28
Figura 23. Media y desviación estándar de los niveles séricos de bicarbonato (mmol/l) obtenidos en
cada momento, y en cada uno de los grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa intergrupo en ese instante, marcada como: *p<0,05. Barras de error +/- 1 ET
16.2.6. Natremia.
Stress test
Análisis de eficacia. (tabla 27 y figura 24).
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro entre los
dos grupos a estudio, no se observa que existan diferencias significativas
(p=0,245).
Por tanto, cuando los sujetos consumen el producto en investigación, la
evolución de la natremia durante la realización de la prueba de esfuerzo, es
similar a la evolución de este parámetro cuando los sujetos consumen el
placebo.
Tabla 27. Media y desviación estándar de los niveles séricos de sodio (mmol/l) obtenidos en cada
momento, y en cada uno de los grupos a estudio (placebo y experimental).
Media Desviación estándar N
Placebo
Min -10 142,7 1,7 26
Min 10 144,5 2,5 26
Min 30 144,8 2,3 26
Min 50 145,2 2,0 26
Min 70 145,2 2,5 26
Min 90 145,0 2,2 26
Min 110 143, 2 2,1 26
Experimental
Min -10 143,0 2,2 26
Min 10 144,3 1,7 26
Min 30 144,4 2,0 26
Min 50 144,5 2,2 26
Min 70 144,3 2,5 26
Min 90 144,6 2,3 26
Min 110 142,3 1,8 26
Figura 24. Media y desviación estándar de los niveles séricos de sodio (mmol/l)
obtenidos en cada momento,y en cada uno de los grupos a estudio (placebo y experimental). Barras de error +/- 1 ET
16.2.7. Potasemia.
Análisis de eficacia. (tabla 28 y figura 25).
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro entre los
dos grupos a estudio, se observa que existen diferencias significativas
(p<0,006).
Al realizar la comparación por pares para establecer los instantes en los que
existen diferencias significativas se obtiene: minuto 30 (p<0,01), minuto 70
(p<0,005) y minuto 110 (p<0,004).
A pesar de que se observan algunas diferencias significativas en la evolución
de la potasemia al ingerir el placebo con respecto al producto experimental,
Stress test
estas diferencias no presentan continuidad sino que se producen de forma
esporádica por lo que no consideramos que la ingestión del producto
experimental modifique los niveles de potasemia durante la prueba de esfuerzo
con respecto al placebo.
Tabla 28. Media y desviación estándar de los niveles séricos de potasio (mmol/l) obtenidos en cada
momento,y en cada uno de los grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa intergrupo en ese instante, marcada como: **p<0,01. Valor-p TxP: Valor de p para la interacción intergrupo tiempoxproducto.
Media Desviación
estándar
N Valor-p T x P
Placebo
Min -10 5,1 ,5 28
P<0,006
Min 10 6,2 1,0 28
Min 30 5,8 ,6 28
Min 50 5,8 ,8 28
Min 70 6,0 1,0 28
Min 90 5,6 ,7 28
Min 110 4,8 ,4 28
Experimental
Min -10 5,7 1,0 28
Min 10 5,9 ,9 28
Min 30 5,5** ,6 28
Min 50 5,7 ,9 28
Min 70 5,4** ,6 28
Min 90 5,5 ,7 28
Min 110 4,6** ,3 28
Figura 25. Media y desviación estándar de los niveles séricos de potasio (mmol/l) obtenidos en cada
momento,y en cada uno de los grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa intergrupo en ese instante, marcada como: **p<0,01. Diferencia significativa intergrupo tiempoxproducto marcada como
##p<0,01. Barras de error +/- 1 ET
RESUMEN DEL ESTUDIO DE FATIGA
El consumo de ED8 en la pauta administrada disminuye la puntuación obtenida en el
test de sensación subjetiva al esfuerzo al final de un ejercicio de prolongada duración
y elevada intensidad; asimismo también mantiene mejores niveles de glucosa sérica al
final de la realización del ejercicio anterior.
Por tanto, el consumo del producto en experimentación contribuye a disminuir la fatiga
generada por un esfuerzo de elevada intensidad y prolongada duración.
Stress test
##
**
**
**
Tabla 29. Tabla-resumen de la significación estadística de las variables de fatiga para los grupos a
estudio (Placebo y experimental).
VARIABLES FATIGA
Variable Grupo Valor p intergrupos Instante significación
Escala de Borg Placebo
p<0,020 Min 90’ p<0,032 Experimental
Glucosa Placebo
p<0,039 Min 90’ p<0,026
Min 110’ p<0,046 Experimental
Lactato Placebo p=0,607
Experimental
pH Placebo p= 0,057
Experimental
Bicarbonato Placebo
p=0,114
Experimental
Natremia Placebo
p=0,245
Experimental
Potasemia
Placebo
p<0,006
Min 30 p<0,01
Min 70’ p<0,005
Min 110’ p<0,004 Experimental
16.3. DAÑO MUSCULAR E INFLAMACIÓN.
Los resultados del estudio antioxidante se presentan a continuación de acuerdo con el
siguiente esquema
1. Análisis de las modificaciones del estado basal.
2. Análisis de eficacia.
a. Evolución temporal intragrupo.
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal.
16.3.1. Daño muscular. Creatina quinasa sérica.
Análisis de las modificaciones del estado basal (tabla 30 y figura 26).
No se observan diferencias significativas en los niveles de esta variable al
comparar los tres instantes analizados: antes del test preliminar, antes de la
prueba placebo y antes de la prueba producto experimental.
Por tanto, el consumo durante 15 días del producto en experimentación no ha
modificado los niveles de creatina quinasa sérica.
Tabla 30. Media y desviación estándar de los niveles de creatina quinasa (UL/l) en
sangre obtenido antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental.
Media Desviación estándar N
Test preliminar 185,5 120,6 32
Grupo placebo 193,8 144,2 32
Grupo experimental 208,7 140,3 32
Figura 26. Media y desviación estándar de los niveles de creaina quinasa
(UL/l) en sangre obtenido antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental. Barras de error +/-1 ET.
Análisis de eficacia (tabla 31 y figura 27).
a. Evolución temporal intragrupo.
Cuando los sujetos consumen el producto placebo, la realización del
test de estrés incrementa los niveles de creatina quinasa sérica a los 30
minutos de finalización de la prueba (33,6%) y a las 24 horas (66,3%).
En cambio, cuando los sujetos consumen el producto en investigación,
los niveles de este parámetro se incrementan de forma más moderada
(14,8% en el minuto 30 postprueba y 11,45% a las 24 horas de
finalización de la prueba).
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal.
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro
entre los dos grupos a estudio, se observa que existen diferencias
significativas (p<0,036). El incremento de los niveles de creatina
quinasa al realizar el test de estrés es mayor en el grupo placebo que
en el grupo experimental.
Por tanto, el daño muscular generado por la realización de una prueba
de estrés es menor cuando el sujeto ha consumido el producto
experimental que cuando ha consumido el placebo.
Tabla 31. Media y desviación estándar de los niveles de creatina quinasa (UL/l) en sangre obtenidos
antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como **p<0,01.
Media Desviación estándar N
Placebo
Pre-test (-2h) 193,8 144,2 32
Post-test (Min 30) 258,5 303,2 32
24 h 321,1 408 32
Experimental
Pre-test (-2h) 208,7 140,3 32
Post-test (Min 30) 239,6** 148,8 32
24 h 232,6 130,9 32
Figura 27. Media y desviación estándar de los resultados de los niveles de
creatina quinasa (UL/l) en sangre antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental) Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como **p<0,01. Barras de error +/- 1 ET.
16.3.2. Inflamación. Proteina C-reactiva sérica.
Análisis de las modificaciones del estado basal (tabla 32 y figura 28).
Se observan diferencias significativas entre los grupos placebo y experimental
para los valores de esta variable al comparar los tres instantes analizados:
antes del test preliminar, antes de la prueba placebo y antes de la prueba
producto experimental (p<0,05).
Durante los 15 días anteriores a la prueba de estrés, los sujetos han ingerido
los productos en estudio (experimental o placebo). Por tanto, el consumo de
producto experimental durante los 15 días ha disminuido los niveles basales de
esta variable inflamatoria.
* *
Tabla 32. Media y desviación estándar de los niveles de proteína C-reactiva
(mg/l) en sangre obtenido antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental.
Media Desviación estándar N
Test preliminar 1,1 1,0 32
Grupo placebo 1,5 2,1 32
Grupo experimental ,7 ,8 32
Figura 28. Media y desviación estándar de los niveles de proteína C-
reactiva (mg/l) en sangre obtenido antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental. Diferencia significativa con respecto al test preliminar marcada como *p<0,05. Barras de error +/-1 ET.
Análisis de eficacia (tabla 33 y figura 29).
a. Evolución temporal intragrupo.
Cuando los sujetos consumen el producto placebo, la realización del
test de estrés no modifica significativamente los niveles de proteína C
reactiva ni a los 30 minutos ni a las 24 horas de finalización de la
prueba.
Cuando los sujetos consumen el producto en investigación, los niveles
de este parámetro tampoco se incrementan de forma significativa ni a
los 30 minutos ni a las 24 horas de finalización de la prueba.
*
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal.
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro
entre los dos grupos a estudio, no se observa que existan diferencias
significativas (p=0,475).
Por tanto, las modificaciones generadas por la realización de una
prueba de estrés son iguales cuando el sujeto ha consumido el
producto experimental que cuando ha consumido el placebo.
Tabla 33. Media y desviación estándar de los niveles de proteína C-reactiva (mg/l) en sangre
obtenidos antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental).
Media Desviación estándar N
Placebo Pre-test (-2h) 1,4 2,1 32
Post-test (Min 30) 1,4 1,9 32
24 h 1,8 2,3 32
Experimental Pre-test (-2h) ,7 ,8 32
Post-test (Min 30) ,7 ,4 32
24 h 1,5 2,0 32
Figura 29. Media y desviación estándar de los resultados de los niveles de
proteína C-reactiva (mg/l) antes y después del test de estrés y después de 24
horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental). Barras de error +/-
1 ET.
16.3.3. Inflamación. Interleucina 1 beta (IL 1β)
Análisis de las modificaciones del estado basal (tabla 34 y figura 30).
No se observan diferencias significativas en los niveles de esta variable al
comparar los tres instantes analizados: antes del test preliminar, antes de la
prueba placebo y antes de la prueba producto experimental.
Por tanto, el consumo durante 15 días del producto en experimentación no ha
modificado los niveles de interleucina 1 beta sérica.
Tabla 34. Media y desviación estándar de los niveles de Interleucina 1 beta en
sangre obtenido antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental.
Media Desviación estándar N
Test preliminar ,47 ,71 21
Grupo placebo ,27 ,24 21
Grupo experimental ,29 ,21 21
Figura x. Media y desviación estándar de los niveles de interleucina 1 beta
(pg/ml) en sangre, obtenido antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental. Barras de error +/-1 ET.
Análisis de eficacia (tabla 35 y figura 31).
a. Evolución temporal intragrupo.
Cuando los sujetos consumen el producto placebo, la realización del
test de estrés no modifica significativamente los niveles de IL 1β ni a los
30 minutos ni a las 24 horas de finalización de la prueba.
Cuando los sujetos consumen el producto en investigación, los niveles
de este parámetro tampoco se incrementan de forma significativa ni a
los 30 minutos ni a las 24 horas de finalización de la prueba.
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal.
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro
entre los dos grupos a estudio, no se observa que existan diferencias
significativas (p=0,475).
Por tanto, las modificaciones de esta variable generadas por la
realización de una prueba de estrés son iguales cuando el sujeto ha
consumido el producto experimental que cuando ha consumido el
placebo.
Tabla 35. Media y desviación estándar de los niveles de interleucina 1 beta (pg/ml) en sangre obtenidos
antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental).
Media Desviación estándar N
Placebo Pre-test (-2h) ,27 ,25 21
Post-test (Min 30) ,25 ,22 21
24 h ,27 ,26 21
Experimental Pre-test (-2h) ,29 ,21 21
Post-test (Min 30) ,28 ,26 21
24 h ,30 ,24 21
Figura 31. Media y desviación estándar de los resultados de interleucina 1 beta (pg/ml)
antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental) Barras de error +/- 1 ET.
16.4.4. Inflamación. Interleucina 6 (IL 6)
Análisis de las modificaciones del estado basal (tabla 36 y figura 32).
No se observan diferencias significativas en los niveles de esta variable al
comparar los tres instantes analizados: antes del test preliminar, antes de la
prueba placebo y antes de la prueba producto experimental.
Por tanto, el consumo durante 15 días del producto en experimentación no ha
modificado los niveles de interleucina 1 beta sérica.
Tabla 36. Media y desviación estándar de los niveles de interleucina 6 (pg/ml) en
sangre obtenido antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental.
Media Desviación estándar N
Test preliminar ,47 ,39 19
Grupo placebo ,45 ,51 19
Grupo experimental ,37 ,32 19
Figura 32. Media y desviación estándar de los niveles de interleucina 6 (pg/ml)
en sangre, obtenido antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental. Barras de error +/-1 ET.
Análisis de eficacia (tabla 37 y figura 33).
a. Evolución temporal intragrupo.
Cuando los sujetos consumen el producto placebo, la realización del
test de estrés incrementa significativamente los niveles de IL 6 a los
30 minutos de finalizar la prueba (p<0,001); a las 24 horas de
finalización de la prueba los niveles de este parámetro son similares a
los iniciales.
Cuando los sujetos consumen el producto en investigación, los niveles
de este parámetro también se incrementan de forma significativa a los
30 minutos de finalizar la prueba (p<0,01) y a las 24 horas los niveles
son similares a los iniciales.
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal.
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro
entre los dos grupos a estudio, se observa que existen diferencias
significativas (p>0,04).
Por tanto, las modificaciones de esta variable generadas por la
realización de una prueba de estrés son distintas cuando el sujeto ha
consumido el producto experimental que cuando ha consumido el
placebo.
Tabla 37. Media y desviación estándar de los niveles de interleucina 6 (pg/ml) en sangre
obtenidos antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como **p<0,01.
Media Desviación estándar N
Placebo Pre-test (-2h) ,44 ,47 23
Post-test (Min 30) 2,97** 1,46 23
24 h ,49 ,42 23
Experimental Pre-test (-2h) ,36 ,31 23
Post-test (Min 30) 2,55** 1,23 23
24 h ,51 ,43 23
Figura 33. Media y desviación estándar de los resultados de interleucina 6 (pg/ml) antes y
después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como **p<0,01. Barras de error +/- 1 ET.
* *
* *
16.3.5. Inflamación. Interleucina 10 (IL 10)
Análisis de las modificaciones del estado basal (tabla 38 y figura 34).
Se observan diferencias significativas entre los grupos placebo y experimental
para los valores de esta variable al comparar los tres instantes analizados:
antes del test preliminar, antes de la prueba placebo y antes de la prueba
producto experimental (p<0,006).
Durante los 15 días anteriores a la prueba de estrés, los sujetos han ingerido
los productos en estudio (experimental o placebo). Por tanto, el consumo de
producto experimental durante los 15 días ha disminuido los niveles basales de
esta variable inflamatoria.
Tabla 38. Media y desviación estándar de los niveles de interleucina 10 (pg/ml) en
sangre obtenido antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental.
Media Desviación estándar N
Test preliminar 2,74 1,92 30
Grupo placebo 2,86 1,87 30
Grupo experimental 2,13 1,12 30
Figura 34. Media y desviación estándar de los niveles de interleucina 10
(pg/ml) beta en sangre, obtenido antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental. Diferencia significativa del test de estrés experimental con respecto al test preliminar marcada como **p<0,01. Diferencia significativa del test de estrés experimental con respecto al test de estrés placebo marcada como
#p<0,05. Barras de error +/- 1 ET
Análisis de eficacia (tabla 39 y figura 35).
a. Evolución temporal intragrupo.
Cuando los sujetos consumen el producto placebo, la realización del test
de estrés incrementa significativamente los niveles de IL 10 a los 30
minutos de finalizar la prueba (p<0,001); a las 24 horas de finalización de
la prueba los niveles de este parámetro son similares a los iniciales.
Cuando los sujetos consumen el producto en investigación, los niveles de
este parámetro también se incrementan de forma significativa a los 30
minutos de finalizar la prueba (p<0,01) y a las 24 horas los niveles son
similares a los iniciales.
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal.
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro entre
los dos grupos a estudio, no se observa que existen diferencias
significativas.
# * *
Por tanto, las modificaciones de esta variable generadas por la realización
de una prueba de estrés son similares cuando el sujeto ha consumido el
producto experimental que cuando ha consumido el placebo.
Tabla 39. Media y desviación estándar de los niveles de interleucina 10 (pg/ml) en sangre
obtenidos antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como **p<0,01.
Media Desviación típica N
Placebo Pre-test (-2h) 2,86 1,87 30
Post-test (Min 30) 11,65** 9,04 30
24 h 2,92 1,55 30
Producto Pre-test (-2h) 2,13 1,12 30
Post-test (Min 30) 12,28** 9,61 30
24 h 4,34 8,33 30
Figura 35. Media y desviación estándar de los niveles de interleucina 10 (pg/ml) en sangre
obtenidos antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como **p<0,01. Barras de error +/-1 ET.
** **
16.3.6. Inflamación. Factor de necrosis tumoral alfa (TNF α)
Análisis de las modificaciones del estado basal (tabla 40 y figura 36).
Se observan diferencias significativas entre los grupos placebo y experimental
para los valores de esta variable al comparar los tres instantes analizados:
antes del test preliminar, antes de la prueba placebo y antes de la prueba
producto experimental (p<0,015).
Durante los 15 días anteriores a la prueba de estrés, los sujetos han ingerido
los productos en estudio (experimental o placebo). Por tanto, el consumo de
producto experimental durante los 15 días ha disminuido los niveles basales de
esta variable inflamatoria.
Tabla 40. Media y desviación estándar de los niveles de TNF α (pg/ml) en sangre
obtenido antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental
Media Desviación estándar N
Test preliminar 7,737 2,9048 29
Grupo placebo 7,646 2,9940 29
Grupo experimental 6,750 2,1279 29
Figura 36. Media y desviación estándar de los niveles de TNF α (pg/ml)
en sangre, obtenido antes de la realización de cada uno de los test: preliminar, test de estrés placebo y test de estrés experimental. Diferencia significativa del test de estrés experimental con respecto al test preliminar marcada como *p<0,05.Barras de error +/-1 ET.
Análisis de eficacia (tabla 41 y figura 37).
a. Evolución temporal intragrupo.
Cuando los sujetos consumen el producto placebo, la realización del test
de estrés no modifica significativamente los niveles TNF α ni a los 30
minutos ni a las 24 horas de finalización de la prueba.
Cuando los sujetos consumen el producto en investigación, los niveles de
este parámetro se incrementan de forma significativa a los 30 minutos de
finalizar la prueba (p<0,001) y a las 24 horas los niveles son similares a
los iniciales.
b. Comparación intergrupo de la evolución temporal.
Cuando se realiza la comparación de la evolución de este parámetro entre
los dos grupos a estudio, no se observa que existen diferencias
significativas (p=0,135).
Por tanto, las modificaciones de esta variable generadas por la realización
de una prueba de estrés son similares cuando el sujeto ha consumido el
producto experimental que cuando ha consumido el placebo.
*
Tabla 41. Media y desviación estándar de los niveles de niveles de TNF α (pg/ml) en sangre obtenidos
antes y después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como **p<0,01.
Media Desviación estándar N
Placebo
Pre-test (-2h) 7,65 2,99 29
Post-test (Min 30) 7,86 2,62 29
24 h 7,53 2,67 29
Producto
Pre-test (-2h) 6,75 2,13 29
Post-test (Min 30) 8,23** 2,90 29
24 h 7,68 3,73 29
Figura 37. Media y desviación estándar de los niveles de TNF α (pg/ml) obtenidos antes y
después del test de estrés y después de 24 horas para los dos grupos a estudio (placebo y experimental). Diferencia significativa con respecto al instante previo a la prueba marcada como **p<0,01. Barras de error +/-1 ET.
RESUMEN DEL ESTUDIO DAÑO MUSCULAR Y ANTINFLAMACIÓN
El consumo durante 15 días de ED8 en la pauta administrada disminuye el daño
muscular generado por un ejercicio de elevada intensidad y prolongada duración.
El consumo durante 15 días de ED8 en la pauta administrada disminuye los niveles
séricos basales de biomarcadores de inflamación (proteína C reactiva, interleucina 10
y factor de necrosis tumoral α).
**
No podemos afirmar que el consumo de este producto disminuya la inflamación
generada por un ejercicio de elevada intensidad y prolongada duración. Seguramente,
el tipo de ejercicio, que favorece la aparición de un elevado estrés oxidativo y una
elevada fatiga, no ha provocado un importante proceso inflamatorio.
Tabla 42. Tabla-resumen de la significación estadística de las variables de inflamación para los grupos
a estudio (Placebo y experimental).
INFLAMACIÓN
Variable Grupo Valor p Intragrupos Valor p intergrupos
Creatina quinasa Placebo p=0,159
0,036 Experimental p<0,001
Proteína C reactiva Placebo p=1
0,398 Experimental p=0,932
Interleucina 1 beta
(IL 1 β)
Placebo p=1 0,971
Experimental p=1
Interleucina 6 Placebo p<0,001
0,04 Experimental p<0,001
Interleucina 10 Placebo p<0,001
0,428 Experimental p<0,001
Interleucina TNF α Experimental p=1
0,114 Placebo p<0,001
16.4. SEGURIDAD
16.5.1. Acontecimientos Adversos
No se han observado acontecimientos adversos durante la realización de este
estudio de investigación en ninguno de los sujetos a estudio.
16.5.2. Análisis Bioquímico
No se han observado modificaciones bioquímicas séricas en los perfiles de
seguridad (hemograma, perfil hepático y perfil renal) durante la realización del
estudio de investigación en ninguno de los sujetos a estudio.
16.5.3. Conclusión
El consume de ED8 durante 15 días se considera seguro.
17. CONCLUSIONES
El consumo de ED8 durante 15 días incrementa la capacidad antioxidante total
del plasma de los sujetos.
La ingesta de ED8 durante 15 días disminuye el daño oxidativo al ADN
generado por una prueba de esfuerzo de esfuerzo de elevada intensidad y
duración.
La ingesta de ED8 durante 15 días disminuye el daño oxidativo a las proteínas
generado por una prueba de esfuerzo de elevada intensidad y duración.
El consumo de ED8 durante 15 días mejora los niveles de glutatión (defensas
antioxidantes) cuando los sujetos realizan un ejercicio físico que genera estrés
oxidativo.
El consumo de ED8 durante 15 días mejora los índices de fatiga (test de Borg y
evolución de los niveles de glucemia) durante la realización de un test de
esfuerzo de elevada intensidad y duración prolongada.
La ingesta de ED8 durante 15 días disminuye el daño muscular generado por
una prueba de esfuerzo de esfuerzo de elevada intensidad y duración.
El consume de ED8 durante 15 días disminuye los niveles basales de
metabolitos indicadores de proceso inflamatorio (proteína C reactiva, IL-10 y
factor de necrosis tumoral alfa).
No existen evidencias que garanticen que el consumo de producto ED8
durante 15 días disminuya el proceso inflamatorio generado después de la
realización de un ejercicio de duración prolongada y elevada intensidad.
Probablemente este tipo de ejercicio que favorece la aparición de daño
oxidativo y fatiga no sea el más idóneo para provocar proceso inflamatorio
postejercicio.
El consume de ED8 durante 15 días es seguro.