indicador biológico: conflito de geração x método de...
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Indicador biológico: conflito de geração x método de esterilização”.
Palestrante: Ana Tércia Barijan
Moderadora: Alexandra do Rosário Toniolo
Declaração conflito de interesse
• Especialista de Assuntos Técnicos e Educacionais• Divisão de soluções médicas, da 3M do Brasil.
Objetivos
- conceitos de esterilização;- Nível de segurança de esterilização x Indicadores biológicos;- Indicadores biológicos:
- história;- microbiologia;- microrganismos de referência;- normas, IFU e certificados de qualidade;- utilização de IB no Brasil;- dispositivos de desafio do processo;- ampola controle e calibração incubadoras;- tipos de IB: gerações x leituras:
- turbidez, pH e fluorescência;- Tempo de redução de incubação;
- Reflexões.
Conceito da esterilização por qualquer método
ISO/TS 11139
Consideramos um artigo estéril quando a probabilidade de sobrevivência dos microorganismos é menor que 1:1.000.000.
Não conseguimos ver esterilidade
Qual o objetivo da esterilização terminal - SAL
10-2
10-4
10-3
10-6
Tempo de exposição
100
Log 1
0B
.I. p
opula
tion
10-1
10-5
105
103
104
101
106
102
Sobremorte
SALProbabilidade:Reduçãode 12 log ou10-6
Margem de Segurança
1.000.000
100.000
10.000
1.000
100
10
1
0,1
0,01
0,001
0,0001
0,00001
0,000001
Valor D
Morte
Definição de Indicadores biológicos (IB)
Sistema teste contendo microrganismos viáveis
com uma resistência definida
ao processo de esterilização específico.
ISO/TS 11139ABNT NBR ISO 11138
História do IB
• 1906 Indústria de conservantes.
• Surto de botulismo.
• Iniciou a análise da cultura microbiana, mas perdiam as amostras.
• Pensaram em MO que simulavam, mais resistentes.
• Desenvolvendo os conceitos de população, valor D, redução linear, SAL.
• ... E as gerações didaticamente propostas por Rutala (1996).
Microbiologia dos IB
Bactérias Gran positivas formam esporos para se protegerem de ambientes hostis…
• Exemplos: Bacillus sp., Clostridium sp.
Muito resistente e difícil de morrer!
Muito pequenos: 1-2 micrometros
Ativação e germinação dos IB
Célulavegetativa
Esporo
Passos de transformação
físicos e bioquímicos
Crescimento
Microorganismos de referência para cada método
• Vapor
• Peróxido de hidrogênio vaporizado
• Vapor de formaldeído
• Óxido de etileno
• Calor seco
Geobacillus stearothermophilus Bacillus atrophaeus
Cepas ATCC 7953 Cepas ATCC 9372
U.S. FDA
Normas dos Indicadores Biológicos
Requisitos gerais de produção, rotulagem e performance para a
fabricação.
ISO 11 138 – 6: Peróxido de Hidrogênio VaporizadoEsta em discussão no GT 4 (ISO e ABNT).
ISO 11 138 – 7: Escolha, uso e interpretação – em finalizaçãoeditorial, +- 6 meses.. Tradução para PTG.
ISO 11 138 – 8: RIT – será discutido em Londres 09/18.
ABNT NBR ISO 11 138 – 1: requisitos geraisABNT NBR ISO 11 138 – 2: Óxido de EtilenoABNT NBR ISO 11 138 – 3: VaporABNT NBR ISO 11 138 – 4: Calor secoISO 11 138 - 5: Vapor de formaldeído à baixa temperatura.
ABNT NBR ISO
Indicadores biológicos - fabricação
1.000.000
100.000
10.000
1.000
100
10
1
0,1
0,01
0,001
0,0001
0,00001
0,000001
Valor DD-value
Resistência – quão difícil
Indicadores biológicos no monitoramento do processo
10-2
10-4
10-3
10-6
100
Log 1
0B
.I. p
opula
tion
10-1
10-5
105
103
104
101
106
102
Margem de Segurança
1.000.000
100.000
10.000
1.000
100
10
1
0,1
0,01
0,001
0,0001
0,00001
0,000001
Valor D
Tempo de exposição
Real evidência da morte
IBs são os únicos que monitoram diretamente a letalidade de um
processo de esterilização (AAMI, 2017 ).
Certificados de qualidade e instruções de uso
Variáveis críticas de cada método
ISO 11140-1:2014
Vapor
Tempo,Temperatura,Umidade.
Óxido de Etileno
Tempo,Temperatura,Umidade relativaConcentração do ETO
Peróxido de Hidrogênio Vaporizado
Tempo,Temperatura,Concentração do H2O2
Título de 97%(3% de umidade)
Energia de calor latente!
VaporMecanismo de
inativação: termocoagulação
A pressão é a soma de tudo o que contêm…
inclusive o ar.
Desvio (erro)
Temp ºC Letalidade
1,0 26%
0,5 12%
0,3 7%
Tabela cedida: Paulo Laranjeira
Peróxido de HidrogênioVaporizado
Mecanismo de inativação: Oxidação
ATÓMO
BACTÉRIA
PAREDE CELULAR
Poderoso oxidante: destrói
moléculas essenciais da
célula.
ELÉTRONS
Óxido de EtilenoMecanismo de inativação:
Alquilação
Quebra ou desemparelhamento do DNA
Imagem cedida por Daniela Schneider
Panorama de utilização do Brasil em serviços de saúde
RDC 15 de Março de 2012
Art. 99 O monitoramento do processo de esterilização com indicadorbiológico deve ser feito diariamente, em pacote desafio disponívelcomercialmente ou construído pelo CME ou pela empresa processadora,que deve ser posicionado no ponto de maior desafio ao processo deesterilização, definido durante os estudos térmicos na qualificação dedesempenho do equipamento de esterilização.
Peróxido –siga a IFU do fabricante do esterilizador.
Sempre na horizontal!
Panorama de utilização do Brasil em serviços de saúde
“A segurança do paciente pode ser prejudicada pelo implante de um dispositivo não esterilizado. Aesterilização de implantáveis deve ser rigidamente monitorada e toda carga contendo implantes deveser colocada em quarentena até que se comprove que o teste do IB apresente resultados negativos”.
Art. 98 No monitoramento do processo de esterilização dos produtos para saúdeimplantáveis deve ser adicionado um indicador biológico, a cada carga.
Parágrafo único. A carga só deve ser liberada para utilização após leitura negativado indicador biológico.
Evidência da eficiência na coagulação de esporos.
AAMI ST79:2017
RDC 15 de Março de 2012
Dispositivos de desafio – vapor saturado
Como fazer: ANSI/AAMI ST79: 2017Outras referências: EN 285, ISO ABNT NBR 17665
ABNT NBR ISO 17665-1:2010Dispositivo de desafio do processo PCD (Process challenge device)� item designado para constituir uma resistência definida a um processo de esterilização e usado para
avaliar o desempenho do processo
Pacotes desafio –
óxido de etileno e peróxido de hidrogênio vaporizado
Referência: ISO 11 135 – em breve será publicada ABNT NBR.
Imagem: Kanemitsu, 2005
O dispositivo não apresentou resultados reprodutíveis consistentes para o método em baixa temperatura
de peróxido de hidrogênio.
Tipos de IB para o monitoramento desses processos
Em tiras
Carreador para inoculação Em Suspensão
Meio de cultura
Umidade, nutrientes, temperatura e tempo..
Tipos de Indicadores biológicos1ª geração - Leitura por turbidez
Meio de cultura
Auto-contidosMeio de cultura: açúcar e outros
nutrientes
Tira de esporos
Tipos de Indicadores biológicos
Tipos de Indicadores biológicos2ª geração - Leitura por pH
Gera reações metabólicas que acidificam o meio (mudando de pH) sendo detectada por um reagente
que muda de cor (bromocresol violeta).
Tipos de Indicadores biológicos2ª geração - Leitura por pH
Tipos de Indicadores biológicos3ª geração - Leitura por fluorescência
Tipos de Indicadores biológicosLeitura por fluorescência
Biológico?
“Algumas enzimas fazem parte da estrutura do esporo, eestão envolvidas no processo de ativação, germinação ecrescimento do microorganismo”.
(H. Albert et al, 1998)
Enzima α-glucosidase Geobacillus stearothermophilus
Método: vapor e peróxido de hidrogênio.beta-glucosidase
Bacillus atropheus.Método: Óxido de Etileno.
Tipos de Indicadores biológicosLeitura por fluorescência
Essa leitura é reconhecida por evidências científicas pela segurança superior de sensibilidade da leitura, quando comparado ao crescimento
microbiano (Alfa, et al., 2002; McCormick, 2003).
Leitura fluorescência
Tempo de incubação
Sintetização da α-glucosidase durante a germinação.
Tipos de Indicadores biológicos
Tempos de leitura cada vez mais rápidos
Meio de cultura:otimizando a geração do sinal fluorescente.
Projeto da ampola: otimizando a detecção do sinal fluorescente.
Leitores avançados e software para detecção do sinal.
Tempos de incubação
ABNT NBR ISO 11 138 – 1: requisitos gerais
Tempos REDUÇÃO de incubação (RIT = reduction incubation time)
• Exemplos: 48 horas, 24 horas, 3 horas, 1 hora, 24 min, 20 min..
Um período de incubação é geralmente reconhecido como sendo de 7 dias para processos de esterilização estabelecidos.
Norma?
Norma? NÃOISO 11138 – 8: será discutido
reunião ISO em Londres: set/2018
Tempos de Redução de Incubação
7 dias48 horas24 minExemplo:
Ampola controle e calibração das leitoras
Incubadoras leitoras dos IB devem ser calibradas, no mínimo, anualmente
(Brasil, 2012)
Assistência técnica autorizada.Grandezas avaliadas: temperatura e
leitor de fluorescência.
Cada dia que testar Indicadores Biológicos, pelo menos, um IB, do mesmo lote e que não foi
exposto ao agente esterilizante deve ser incubado como controle em cada incubadora para:
- verificar a viabilidade dos esporos, - a capacidade do meio para promover o
crescimento de esporos, - e a temperatura de incubação adequada.
(ST 79, 2017)
Gerações
1ª geraçãoAntes déc 70
2ª geração +- 42 anos
3ª geração27 anos
Gerações?
Para onde vamos?
Real evidência da morte
São biológicos?
Só leem 6 log..
Para peróxido não tem parte especifica..
RIT? Normativo? FDA?Implante:
precisa de IB?
