identificação e quantificação de ácido hialurônico da matriz extracelular pela técnica...
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Identificação e quantificação de ácido hialurônico da matriz extracelular pela técnica fluorimétrica no tecido colorretal neoplásico e
não neoplásico
VIII CICI – CONGRESSO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA DO IAMSPE
Ac. Caio Dal Moro AlvesFMABC
Orientador: Prof. Dr. Jaques WaisbergFMABC
INTRODUÇÃO
* Estudo realizado na Disciplina de Biologia Molecular da Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), no Serviço de Gastroenterologia Cirúrgica do Hospital do Servidor Público Estadual de São Paulo (IAMSPE) e no Laboratório de Biologia Molecular da Faculdade de Medicina do ABC.
penetração de células neoplásicas na matriz extracelular aumento da expressão das proteases induzindo respostas
Ácido Hialuroniano (AH): polissacarídeo encontrado na superfície celular e matriz extracelular de quase todos os tecidos humanos um dos principais componentes que cercam as células
tumorais, incluindo as de carcinoma de colon
YURCHENCO, P.D., SCHITTNY, J.C. (1990) - Molecular architeture of basement membranes. FASEB J 4: 1577-1590.
LIOTTA, L.A. and WEWER, R C. (1986) - Biochemical interactions of tumor cells with the basement membranes. Annual Reviews of Biochemistry 55: 1037 - 1057
Concentrações elevadas de AH encontradas em:
Tecidos com alta proliferação
Tumores malignos como gástrico e colorretal
Em tecidos Neoplásicos, estimulam adesão e neovascularização
HERSZÉNYI, L.; PLEBANI, M.; CARRARO, P.; DE PAOLl, M.; ROVERONI, G.; CARDIN, R; FOSCHIA, F.; TULASSAY, Z.; NACCARATO, R and FARINATI, F. (2000) - Proteases in gastrointestinal neoplasic diseases. Cliniea Chimiea Aeta, 291: 197 187
DIETRICH, C.P. (1984) - A model for cell-cell recognition and control of cell growth mediated by sulfated glycosaminoglycans. Braz. J. Med. Bio!. Res. 17: 5 - 15
SAMPAIO, L.O. and DIETRICH, C.P. (1981) - Changes of sulfated mucopolysaccharides and mucopolysaccharidases during fetal development, The Journal of Biological Chemistry 256: 9205-9210
Verificar, por espectrometria de massa, a presença e a quantificação de glicosaminoglicanos no tecido colorretal neoplásico e não neoplásico.
MATERIAL E MÉTODOS
Esse estudo foi realizado de acordo com os padrões éticos aceitos pela Declaração de Helsinki da Associação Médica Mundial, adotado em 1964 e emendado em 1996. Este trabalho foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa do IAMSPE (Parecer nº 090/04).
Casuística
Critérios de Inclusão: doentes adultos, de ambos os sexos, com carcinoma do intestino grosso confirmado pelo estudo histopatológico da lesão
Critérios de Exclusão: presença de outra neoplasia maligna concomitante ou prévia em qualquer outra localização
Amostras de tecidos obtidas de 64 pacientes com carcinoma colorretal sem doença metastática e que foram operados de 2005 a 2006 no Departamento de Cirurgia do Hospital do Servidor Público Estadual
64 pacientes:37 mulheres (57,8%)27 homens (42,2%)
Idade Média: 68,5±7,3 anos (44 a 81 anos)
Localização do CA: 32 no Reto (50,0%)32 no Colon (50,0%) 17 Direito (26,6%)
15 Esquerdo (23,4%)
Duas amostras de cada paciente!
- Área macroscópica de tecido neoplásico
- Área de tecido não neoplásico (10cm acima da neoplasia)
Dosagem do AH Realizada por método fluorimétrico
Amostras de concentrações desconhecida de AH (proteólise)
Diluídas em tampão Tris-HCI 0,05M (pH 7,75, contendo 0,15M de NaCI e 1% de BSA)
ELISA (12h; 40º)
Incubação com sonda Biotinilada para AH
Análise Estatística
Utilizou-se software SPSS, versão 13.0 (SPSS Inc., lllinois, USA) Média aritmética Desvio Padrão Teste t student com medidas repetidas
Nível de significância fixado em 0,05
Expressão de AH foi menor no tecido neoplásico que na mucosa adjacente não neoplásica. (p=0,87)
Figura 1. Espectro de massa referente à degradação do tecido colorretal com hialuronidase (AH, do inglês, HA).
Análise da eletroforese em gel de tris-acetato para verificar o perfil do AH nos tecidos analisados encontrou-se a presença de AH de baixo peso.
Figura 2. Gel de tris-acetato com identificação de ácido hialurônico (AH, do inglês, HA) de baixo peso nas amostras de tecido colorretal.
O estroma da maioria dos tumores malignos, incluindo o câncer colorretal, tem mostrado conter mais AH do que o tecido correspondente do tecido normal
O AH tem diferentes papéis na neovascularização dependendo dos seus fragmentos de baixo peso molecular, os quais podem ser gerados pela atividade da hialuronidase a partir dos carcinomas de colon
Zaia, J. and Costello, C.E. (2001)- Tandem mass spectrometry of sulfated heparin-like glycosaminoglycan oligosaccharides. Anal Chem. 75(10):2445-55
SAMPAIO, L.O. and DIETRICH, C.P. (1981) - Changes of sulfated mucopolysaccharides and mucopolysaccharidases during fetal development, The Journal of Biological Chemistry 256: 9205-9210
Os picos encontrados no espectro de massa e no gel de eletroforese referem-se, ao menos em parte, ao AH de baixo peso.
Mudanças na superfície celular e composição extracelular influenciam a capacidade de células e tecidos para alterar dinamicamente as respostas para as moléculas de sinalização.
CONCLUSÕES
Enorme potencial do método para análise em estudos de interação de glicosaminoglicanos altamente heterogêneos;
O ácido hialurônico apresentou menor expressão no tecido tumoral em comparação ao tecido não neoplásico provavelmente influenciado pelo achado de ácido hialurônico de baixo peso molecular não biotinilado.