Tcnicas e mtodos utilizados

- Tcnica do DNA recombinante: A tecnologia do DNA Recombinante foi

desenvolvida em 1973 e permite a transferncia do material gentico de um organismo

para o outro de forma efetiva e eficiente. Consiste em induzir um organismo e

amplificar a sequencia de DNA de interesse, em sistemas que permitem uma fcil

purificao e recuperao do referido fragmento de DNA. Para isso, so utilizados

vetores de clonagem (plasmdeos ou vrus) nos quais a sequncia de DNA de interesse

inserida, utilizando a enzima DNA ligase. Quando necessrio, o fragmento de DNA de

interesse pode ser libertado do vetor por meio de enzimas de restrio. Uma vez isolado

o gene de interesse, estes fragmentos de DNA (genes) so incorporados (por meio das

tcnicas de Engenharia Gentica) no Genoma do organismo alvo, resultando da um

OGM, cuja caracterstica adquirida passa a ser hereditria.

- Mtodo de bombardeamento: micropartculas de um metal (tungstnio ou ouro) so

revestidas por fragmentos de DNA contendo os genes selecionados. Atravs de um

aparelho ("canho de genes"), as partculas so aceleradas a altas velocidades e

bombardeiam o tecido vegetal que vai sofrer a transformao. As partculas penetram

nas clulas e libertam os fragmentos de DNA. As clulas da planta assimilam os genes e

alguns passam a integrar o genoma.

- Mtodo de infeco por bactrias: O mtodo de infeco por bactrias, em vez do

bombardeamento de genes, usa bactrias para infectar a planta a ser modificada e

transportar os novos genes para o seu genoma. O que os cientistas fazem substituir os

genes infectados, que ficam no plasmdeo Ti (T-DNA) da bactria, pelos genes

selecionados. Clulas de embries da planta que se quer modificar so colocadas em

contato com uma suspenso contendo as agrobactrias (so bactrias do solo com

capacidade de se associarem espontaneamente a algumas plantas e transferir

naturalmente alguns dos seus genes para elas). Ao infectar os embries, elas transferem

para o genoma da nova planta os genes com as instrues para dar as caractersticas

desejadas.

- Eletroporao de protoplastos e clulas vegetais: Protoplastos so clulas vegetais,

desprovidas de parede celular. Para a transformao, so incubados em solues que

contm os genes a serem transferidos e, em seguida, um choque elctrico de alta

voltagem aplicado por curtssimo tempo. O choque causa uma alterao da membrana

celular, o que permite a penetrao e eventual integrao dos genes no genoma.

- Biobalstica: Tcnica introduzida no incio da dcada de oitenta. Baseia-se na

utilizao de microprojteis de ouro ou tungstnio cobertos com os genes de interesse.

Os microprojteis so acelerados com plvora ou gs em direo aos alvos que, neste

caso, so os tecidos vegetais. Os genes e o projtil entram nas clulas juntos de maneira

no-letal, localizando-se aleatoriamente nas organelas celulares. Em seguida, o DNA

dissociado das micropartculas pela ao do lquido celular, ocorrendo o processo de

integrao do gene exgeno no genoma do organismo a ser modificado. A velocidade

alcanada pelos microprojteis atinge cerca de 1500.