Disciplina: Preparação Citológica e Análise Citogenética

Docente: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira

Discente: Julia Musolino Montineri

Talassemias

• Alterações genéticas monogênicas mais comuns no mundo.

• Alteração na síntese de uma ou mais cadeias polipeptídicas da hemoglobina (Hb)

• Desequilíbrio entre essas subunidades

• Dificulta o processo de eritropoese

Introdução

Talassemia alfa

• 10% da população do sudoeste do estado de São Paulo

• 20% em outras regiões

• Diferenças composição étnica grande miscigenação ocorrida ao longo da história

Introdução

Alfa Talassemia

• Resultante de mutações nos genes alfa

• Braço curto do cromossomo 16 na região 16p.13.3

• 4 genes α (αα/αα)

• α1 e α2 iguais divergem apenas 17%

• α2 expressa de duas a três vezes mais que α1

Introdução

> Consequência no quadro clínico

• Síntese deficiente de cadeias globínicas alfa

• Modifica a composição da molécula de hemoglobina

Introdução

Altera a fisiologia e morfologia do eritrócito

Excesso de cadeias despareadas pode se ligar para formar tetrâmeros de caráter instável • Hb H (adulto)• Hb Bart's (fetal)

Hb H• 10x mais afinidade com oxigênio que a Hb A

• Prejudicam a interação heme-heme

• Liberam quantidades insuficientes de oxigênio para os tecidos

• Alterações fisiológicas e morfológicas dos eritrócitos

• Microcitose e hipocromia em diferentes graus

Introdução

Quando oxidada precipitados intra-eritrocitários quando presentes no eritroblastos destruição intramedular dos precursores eritróides

eritropoese ineficiente.

Acumula na membrana eritrocitária diminui vida útil da célula

Sintomas

• Apresentam anemia com graus variáveis

• Hipocromia

• Microcitose

• Poiquilocitose

• Diminuição da fragilidade osmótica

• Presença de Hb H em eletroforese

• Corpos de inclusão com coloração vital (azul cresil brilhante)

Introdução

O objetivo

• Avaliar o perfil hematológico, por meio dos valores de hemograma (RBC, HGB, HCT, VCM, HCM e CHCM) de indivíduos identificados como portadores de talassemia alfa por métodos de rotina diagnóstica, das regiões Sudeste e Nordeste do Brasil.

Material e Métodos

Casuística• 1.010 amostras de sangue periférico

• Idades variando de 1 a 90 anos

• Sem distinção de sexo

• Sem distinção de etnia

• Região Sudeste e Nordeste do Brasil

Material e métodos

Métodos

• Análise dos índices eritrocitários• Resistência globular osmótica em solução de cloreto de sódio a 0,36%

• Análise da morfologia eritrocitária

• Eletroforese em acetato de celulose em pH alcalino

• Eletroforese em acetato de celulose em pH neutro

• Pesquisa de corpos de inclusão de Hb H com coloração de azul cresil brilhante

• Contagem de reticulócitos

• Dosagem de Hb A2 por HPLC

Material e métodos

PESQUISA DE CORPÚSCULOS DE HEINZ E AGREGADOS DE HEMOGLOBINA H

Princípio:

Os corpúsculos de inclusão de hemoglobina H são formados por cadeias beta oriundas da desnaturação do tetrâmero. Após coloração esses corpúsculos apresentam-se dispostos homogeneamente no interior dos eritrócitos como pequenos pontos azulados.

Reagentes:

Solução salina:• Cloreto de sódio 0,9 g• Água destilada q.s.p. 100 mL

Solução de Azul Cresil Brilhante:Azul Cresil brilhante 1,0 g• Solução salina 100 mL• Solução citrato 25 mL

Solução citrato:• Citrato de sódio 2,2 g• Água destilada q.s.p. 100 mL

Corpos de Hb H

Procedimento:

- Colocar 50 ml de sangue total em tubo de ensaio pequeno e adicionar 50 ml de solução de azul Cresil brilhante. Agitar o tubo suavemente.- Incubar o material a 37ºC por 30 e 60 minutos- Fazer esfregaços finos e examinar ao microscópio em objetiva de imersão.

Interpretação:

A presença de Hb H nos eritrócitos aparece como fina granulação distribuídahomogeneamente, caracterizando um portador de alfa talassemia.

Material e métodos

Resultados e discussão• 82,28% provenientes da região Sudeste

• 71,60% do sexo feminino

• Todos possíveis portadores de talassemia alfa

RBC contagem de glóbulos vermelhos

HGB dosagem de hemoglobina

HCT o hematócrito

VCM volume corpuscular médio

HCM hemoglobina corpuscular média

CHCM concentração de hemoglobina corpuscular média

Material e métodos

Valores de Referência:

• RBC (103/mm3) 5,4 a 8,0

• HGB (g/dl) 14 ± 2 g/dl

• HCT (%) 47 ± 5%

• VCM (μ3) 87 ± 53

• HCM (pg) 29 ± 2 pg

• CHCM (%) 34 ± 2%

Resultados e discussão

Considerações dos índices

• Variações de idade (níveis de Hb)

• Sexo

• Etnias

• Interferentes ambientais (altitude, tabagismo)

• Os valores de VCM baixo é sugestivos de defeito na síntese de hemoglobina

• Os valores de HGB foram relativamente baixas (mostrando uma provável deficiência na síntese de hemoglobina)

Resultados e discussão

• Os valores de HCT estavam baixos, podendo levar a má oxigenação tecidual

• Os valores baixos de VCM presença de microcitose

• Os valores de HCM baixos hipocromia dos eritrócitos

• Alterações no CHCM não foram significativas

• As mulheres foram as mais afetadas em todos os parâmetros em ambas as regiões

• Os dois índices mais afetados foram os níveis de HGB e o HCT

Resultados e discussão

O perfil das duas regiões são discretamente diferentes

• devido à composição étnica destas regiões

• fatores nutricionais

Os índices eritrocitários complementam os testes de triagem de hemoglobinopatias

Os resultados contribuíram para caracterizar o perfil dos portadores de talassemia alfa na população brasileira, visando uma melhora na qualidade de vida desses pacientes

Aconselhável a análise molecular das principais alterações genéticas do gene alfa globina