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Citogenética

Erlane Ribeiro - FMJ

Citogenética tradicional

• Sangue• Líquido amniótico• Vilosidade coriônica• Pele• Restos ovulares• S. X-frágil• Síndrome com instabilidade cromossômica

(anemia de Fanconi, S. Bloom, S. Robert)


Indicações para estudo cromossômico

• Suspeita de doença cromossômica• Genitália ambígua• Natimorto sem causa explicável • Mulheres de baixa estatura e amenorréia

primária• MFC no pré-natal• Homens com ginecomastia / microrquidia• Retardo mental não explicável• Estudo do câncer


População Freqüência (%)

Zigotos 10-30

Embriões pré-implantados 20-25

Natimortos (>28 semanas) 5-6

Nativivos 0,5-1

Mortes infantis 5-7

Malformação congênita 4-8

Cardiopatia 13

Retardo mental, exceto X frágil 3-35

Infertilidade masculina 2-15

Aborto de repetição (>3) 2-5

Modificado de Mange & Mange, 1999.


ABREVIATURA SIGNIFICADO EXEMPLO

del deleção 46 XX del (5p)

+ ganhp 47 XY +21

- perda 45 XX, -14, -21, +t(14q21q)

t translocação 46 XX t(2,8)(q21;p13)

r anel 46 X, r(X)

mar marcador 46 XX +mar

der cromossomo derivado Der (1)

dic dicêntrico Dic (X;Y)

i isocromossomo 46 X, i(Xq)

mat origem materna 47 XY, +der (15) mat

pat origem paterna 47 XY, +der (4) pat

inv inversão Inv (5)(p15q21)

fra sítio frágil 46 Y, fra (X)(q27.3)


Translocações robertsonianas


Translocações recíprocas


Deleções


Duplicações


Inversões


Inserções


Isocromossomos


Cromossomos dicêntricos


Cromossomo em anel


cromátides

metacêntrico submetacêntrico

telômero

satélitepedículo

p

q

centrômero


Exames invasivos

• Punção de VC– 11-13 sem

• Amniocentese precoce– 12-14 sem

• Amniocentese tradicional– 15-18 sem

• Cordocentese– > 18 sem


Dificuldades

• Artesanal

• Treinamento de pessoal

• Estudo de células vivas

• Qualidade da coleta


Insucesso de culturas

• Coleta inadequada– Quantidade insuficiente– Contaminação

• Células inviáveis• Variação na estufa (temperatura ou

CO2)• Reagentes/tóxicos


Coleta de material

• LA– 2 seringas estéreis e

descartáveis– Mínimo 20 ml– Deixar o material na

seringa– Não usar seringa BD– Consentimento

informado

• PVC– 10 mg de vilo aspirado

em seringa com meio de cultura e heparina

– Consentimento informado


Coleta de material

• Sangue de cordão– 5 ml em seringa

heparinizada– Manter na seringa– Consentimento

informado

• Restos fetais (aborto)– Coleta de forma

asséptica– Manter em SF estéril

ou meio de cultura– Rotina


Punção de Vilosidade Coriônica

• Após 20 anos – redução dos problemas

• Menor risco de perda gestacional

• Menor risco de anomalias por disrupção

• Menor contaminação

• Maior confiabilidade

• Melhor qualidade do exame


Coleta de Líquido Amniótico

• Menor risco de perda fetal

• Melhor qualidade de bandas

• Menor risco de contaminação materna

• Menor risco de pseudomosaicismo

• Maior volume de LA

• Crescimento celular mais rápido

• Sobrenadante utilizado em vários estudos


FISH

• Alagille• Angelman• CMT I• Cri Du Chat• DiGeorge• HCSR• Ictiose ligada ao X (def.

esteróide sulfatase)• Kallman• Langer-Giedion• Lisencefalia isolada• S Miller-Dieker

• P. Willi• Retinoblastoma• Rubinstein – Taybi• Smith – Magenis• Velocardiofacial• Williams• Wolf-Hirschhorn


FISH

• Resultado com 24-48 horas

• Identifica 90% das anomalias cromossômicas no pré-natal– 13, 18, 21, X, Y

• Não detecta mosaicismos, translocações


Citogenética especial

• Análise subtelomérica para regiões associadas ao retardo mental

• Análise centromérica


Hibridização genômica comparativa (HGC)

• Técnica de citogenética molecular desenvolvida para rastrear ganho ou perda cromossômica em tumores

• DNA teste (verde) hibridiza com DNA referência (vermelho). As imagens dos sinais fluorescentes são capturadas. A razão verde/vermelho é quantificada


HGC

• Vantagens– Análise de todo genoma em um só teste– Rapidez (até 72 horas)

• Desvantagens– Alto custo– Não detecta mosaicismos, translocações

balanceadas


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