Diagnóstico prenatal no invasivo de aneuploidias mediante ADN libre fetal

en sangre materna

Dr. Waldo Leiva L.

Screening prenatal

Screening combinado 1er

trimestre

Screening prenatal

Diagnóstico prenatal no invasivo

• Enfoque clínico actual: Cribado aneuploidias (PAPA-A, fBHCG, TRN) CRL 45-84 mm. . TD: 90% TFP: 5%.

• Se debe hacer en TODA LA POBLACIÓN, bajo y alto riesgo

• Si se agrega HN, DV, RT, TD: 93-96% TFP 2,5%

• Si el riesgo ajustado es >1/100 se debe realizar procedimiento invasivo Dg (CVS o AMCT)

Prenat Diagn 2011; 31: 7–15.

Obstet Gynecol. 2007 Dec;110(6):1459-67.

Edad T21 Otras

Screening prenatal

American Journal of Obstetrics and Gynecology (2004) 191, 45e67

Prenat Diagn 2011; 31: 7–15.

Diagnóstico prenatal no invasivo

cfDNA el diagnóstico de aneuploidias

cfDNA en sangre materna• ADN libre fetal (cfDNA) constituye el 10-15% del

total en sangre materna (feto+madre).• Se detecta desde la 4ª semana de embarazo.• cfDNA tiene una vida media corta, indetectable

post parto.• El tamaño de cfDNA es de 150 pares de base.• Se origina de la apoptósis de celulas

trofoblásticas.• Su concentración aumenta con Edad gestacional

y es inversamente proporcional peso materno.

Hum Reprod. 2003;18(8):1733.Ultrasound Obstet Gynecol 2013; 42: 15–33

¿A quienes ofrecer?

¿Qué existe en el mercado?

NIPT�metodos�DNA�libre�fetal:�

7�

Sequenciacion�masiva�(MPSS)�

Sequenciacion�dirigida�(DANSR)�

Sequenom�MaterniT21�

Verinata�Verifi�

Ariosa�Harmony�

Sequenciacion�dirigida�

Natera�Panorama�

Recuento�de�secuencias�especifica s�a�cromosomas�

SNPs�Polimorfism o s�de�nucleo dos�

cfDNA el diagnóstico de aneuploidias

(1) Zimmermann et al. Prenat Diag 2012, (2) Natera, internal data, (3) Rabinowitz et al. Presented at ASHG 2012, (4) Zimmermann et al. Presented at SMFM 2013.

Métodos cuantitativos

(Verifi test)

MPS

Obstet Gynecol 2012;119:890–901

Chrom 3Chrom 21Recuento

Chrom 3Chrom 21

Cantidad esperada: 20% 80%

Recuento

18

Cantidad obtenida: 25% 75%

Secuenciación dirigida

Harmony test

Metodología SNP

• SNP = Single Nucleotide Polymorphism

• Estudia simultaneamente 19.500 SNPs

21

Sangre materna

Buffy coat = DNA Materno

Plasma = DNA Materno +

DNA fetal

SNPSequencing

SNPSequencing

Materno Genotype

Materno + Fetal Genotype

Fetal Genotype

22

Metodología SNP

Metodología SNP

cfDNA el diagnóstico de aneuploidias

Prenatal Diagnosis 2013, 33, 514–520

cfDNA el diagnóstico de aneuploidias

Prenatal Diagnosis 2013, 33, 514–520

Resultados

SequenomMaterniT21 

Plus

VerinataVerifi

AriosaHarmony

NateraPanorama

Tipo de informe

PositiveNegative

DetectedNot 

DetectedSuspected

Risk score(mat age, fetal 

fraction, 1 metric)

Risk Score(mat age, fetal 

fraction, multiple metrics)

Resultados

Harmony test

Natera-Panorama test

Natera-Panorama test

cfDNA el diagnóstico de aneuploidias

Ultrasound Obstet Gynecol 2013; 42: 15–33.

cfDNA el diagnóstico de aneuploidias

Ultrasound Obstet Gynecol 2013; 42: 15–33.

• Tasa de falsos positivos aumenta:

> peso materno.Mosaicismo confinado placentaGemelo evanescente.Fracción fetal cfDNA < de 4%

cfDNA el diagnóstico de aneuploidias

Futuro screening 1er trimestre propuesto

Ultrasound Obstet Gynecol 2013; 42: 34–40

10 sem: Marcadores Bioquímicos + cfDNA12 sem: TN, DV, RT, HN

Otras aplicaciones

Otras aplicaciones• Determinación sexo fetal:

– Enfermedades ligadas cromosoma X.– Hiperplasia suprarrenal congénita.

• Determinación status RhD del feto en madres RhD (-).

• Defectos monogénicos.– Sd Marfan – Acondroplasia.– Riñón poliquístico, etc

• Preeclampsia - RCIU

¿Que costo tiene?

Prenatal Diagnosis 2013, 33, 521–531

Consecuencias clínicas y económicas del uso cfDNA

• Se usaron datos obtenidos del estudio MELISA.

• Se evaluó el impacto de incorporar cfDNA en los exámenes de rutina de control prenatal:– En mujeres catalogadas de alto riesgo.– Como test de screening 2ario.

• 66% de reducción en procedimientos invasivos (riesgo de aborto).

• 38% aumento en diagnóstico de T21.• Los costos totales de screening y test

diagnósticos disminuyó 1% anualmente.Garfield, Journal of Managed Care Medicine | Vol. 15, No. 2 | www.namcp.org

En Chile?• 1 Laboratorio privado• Verifi y Harmony test• Costo aproximado 500.000 a 600.000

pesos.• Muestra es enviada a EEUU para análisis.• Requiere orden médica.• La muestra se toma en domicilio de la

paciente.• El resultado demora 15 días aprox.

Conclusiones• cfDNA en sangre materna es un examen

promisorio dado su alta TD y baja TSF en dg aneuploidias en mujeres mujeres de alto riesgo.

• De utilidad en múltiples patologías.• Utilidad como test de screening avanzado

en conjunto con screening combinado en población de alto riesgo.

• No reemplaza a test Dg como CVS o AMCT.

• Limitado por su alto costo actual.

Gracias