Cultura de células de

Theobroma cacao

Cultura de Células

Planta Matriz

Meio de cultura adequado

Formação de calos

Cultura de células vegetais

Células vegetais podem se desenvolver in vitro com as condições adequadas: Sais Vitaminas pH/Temperatura/Luminosidade Hormônios, Auxinas/Citocininas

As células dos calos apresentam uma série de peculiaridades: Não possuem cloroplastos e elementos da via da

fotossíntese Vacúolo muito reduzido Parede celular delgada Poucos metabólitos secundários Se assemelham com as células meristemáticas

Cultura de células vegetais

Embriogênese Somática

Flor

CalosEmbrião somático

Plântula

Porque usar cultura de células? Modelo para os tecidos in

vivo Pode-se produzir em

grande quantidade Manipulação genética Geração de vários

indivíduos isogênicos

Cultura de células e M. perniciosa

Muse, R. B. et al. (1996) Effects of the fungus Crinipellis perniciosa, casual agent of witches’ broom disease, on cell and tissue culture of cocoa (Theobroma cacao L.) Plant Pathology 45, 145-154

Objetivos

Estabelecer um protocolo confiável de cultura de células de Theobroma cacao.

Material e Métodos

Meio de cultura Sais MS Vitaminas MS:

Ác. Nicotínico, Tiamina, mio-inusitol, pirodoxina, glicina Sacarose pH 5,8 Hormônios

Meios de cultura

Hormônio HC JC ARG PCG

2,4 D 2,0 2,0

IAA 2,0

IBA 2,0 1,0

Zeatina 0,05

Cinetina 0,1 0,25

Concentração em mg/L

Meios de cultura

Hormônio HC JC ARG PCG

2,4 D 2,0 2,0

IAA 2,0

IBA 2,0 1,0

Zeatina

Cinetina 0,1 0,05 0,25

Concentração em mg/L

Resultados

Material vegetal utilizado: Folhas jovens de variedade resistente e normal

Hormônios:

Resultado: MS1 Eficiente na indução de calos MS2 Não formou calos Variedade normal não formou calos

Meio 2,4 D IAA Cinetina

MS1 2,0 0,25

MS2 2,0 0,1

Resultados Material vegetal utilizado: Cotilédones das duas

variedades e os calos formados anteriormente Hormônios:

Meio 2,4 D Cinetina

MS1a 2,0 0,25

MS1b 2,0 0,0

MS1c 1,5 0,25

MS1d 2,5 0,25Concentração em mg/L

Resultados

MS1a: Pouco eficiente na indução de calos em cotilédones

MS1b: Muito eficiente, mas induziu a formação de muitas raizes e apresentou alto nível de oxidação

MS1c: Induziu a formação de calos, mais discreta que MS1d: Quase não formou calos Não foi possível identificar diferenças entre os meios

dos calos já formados com folhas

Resultados

Resultados

Resultados

Resultados

Resultados

Resultados

Próximos testes

Meios usados para cotilédones:

Utilizar caule para a indução de calos

Meio 2,4 D Cinetina

MS1c 1,5 0,25

MS1e 1,5 0,0

MS1f 1,5 0,15

Concentração em mg/L

Perspectivas

Com o protocolo de cultura de células estabelecido: Transformação de calos Produção de protoplastos