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Ministério da Agricultura,Pecuária e Abastecimento Comunicado 302

Técnico ISSN 0100-8862Agosto, 2002Concórdia, SC

Execução e interpretação da provatuberculínica pareada em suínos,com tuberculina aviária e bovina

Nelson Morés1

Armando Lopes do Amaral2

Lauren Ventura3

Roberto Aguilar Machado da Silva4

Virgínia Santiago da Silva5

Waldomiro Barioni Junior6

Introdução

A linfadenite granulomatosa dos suínos, causadapor micobactérias atípicas, não provoca qualquer sin-toma no animal e nem afeta o seu desenvolvimento.Os prejuízos que a doença causa aos produtores eagroindústrias são basicamente aqueles decorrentesdo destino dado à carcaça dos animais afetados porocasião do abate. Tomando-se por base o ano de1999, na região sul do Brasil, a freqüência de suínoscom lesões de linfadenite no abate foi de cerca de0,9%. Considerando um abate inspecionado de suínosnesta região em 1999 de 12,6 milhões de cabeças, oprejuízo total aos produtores, causado pela linfadenite,foi estimado em 6,9 milhões de reais.

O diagnóstico da infecção por micobactérias emsuínos apresenta dificuldades, não existindo ainda umteste prático e eficiente para dar suporte aos estudosepidemiológicos e às estratégias de controle. Ascaracterísticas das lesões macro e microscópicas nãosão suficientes para diferenciar a infecção causada,por agentes do Complexo M. avium (MAC) daquelapor M. bovis. O isolamento das micobactérias a partirde linfonodos com lesões é extremamente trabalhoso,lento e caro. Apresenta ainda baixa sensibilidade,

devido aos procedimentos de descontaminação dostecidos.

Nos suínos vivos, para diagnóstico, tradicionalmen-te, utiliza-se o teste de tuberculinização, com tubercu-lina aviária e/ou bovina. Este teste, porém, apresentasensibilidade e especificidade baixas para identificaranimais infectados, dificultando a interpretação dosresultados obtidos. A relação entre a reação ao testede tuberculina e a observação de lesões no abatedourodepende de alguns fatores, principalmente do períododecorrido entre a infecção e a realização do examemacroscópico. As lesões macroscópicas podem levarmais de 90 dias para aparecerem, enquanto que areação à tuberculina pode ocorrer a partir de 24 diasapós a infecção com o MAC.

De modo geral, um resultado positivo no testede tuberculina é um bom auxílio ao diagnóstico paraidentificar rebanhos infectados. Dúvidas persistemsobre quais critérios usar para definir uma reação comopositiva. Em função dessas dificuldades na inter-pretação das reações ao teste de tuberculina, foramdesenvolvidas pesquisas com o objetivo de responderaos seguintes questionamentos:

1. A tuberculinização é um bom teste para identificarrebanhos suínos infectados por MAC?

1Méd. Vet., M.Sc. Embrapa Suínos e Aves.2Biólogo, M.Sc., Embrapa Suínos e Aves.3Méd. Vet., B.Sc., Convênio ACCS, AINCADESC e Embrapa Suínos e Aves.4Méd. Vet., M.Sc., Embrapa Suínos e Aves.5Méd. Vet., M.Sc., Dep. Med. Vet. Prev. e Saúde Animal, FMVZ-USP.6Estatístico, M.Sc. Embrapa Suínos e Aves

2 Execução e interpretação da prova tuberculínica pareada em suínos, com tuberculina aviária e bovina

2. Pode-se usar a tuberculinização pareada comPPD aviária e bovina para diferenciar rebanhos infec-tados com MAC daqueles com o M. bovis?

3. Qual o melhor método de medição da reação: oaumento da espessura da dobra da pele ou diâmetro dareação?

Trabalhos executados pela EmbrapaSuínos e Aves

Foram realizados três experimentos:O experimento 1 foi realizado em seis rebanhos

suínos comerciais infectados com MAC. O teste de tu-berculina foi realizado em lotes de suínos com peso deabate entre 100 e 120 kg. Os suínos que apresentavamqualquer reação às tuberculinas, e alguns sem reaçãoalguma, foram abatidos em menos de sete dias apósa aplicação, para avaliação de lesões nos linfonodos ecolheita de amostras para exames laboratoriais.

O experimento 2 foi realizado no isolamento doLaboratório de Sanidade da Embrapa Suínos e Aves,com suínos livres de infecção por micobactérias, inocu-lados experimentalmente com uma amostra patogênicade MAC, entre 30 a 40 dias de idade. O teste detuberculina foi realizado com aproximadamente 160dias de idade, sendo que em seguida os animais foramabatidos para avaliação de lesões nos linfonodos ecolheita de amostras para exames laboratoriais.

O experimento 3 foi realizado da mesma forma queo experimento 2, mas utilizando-se como inóculo umaamostra de M. bovis. Nestes suínos a tuberculinizaçãoe o abate foram realizados com 40 dias pós inoculação.

Aplicação das tuberculinas: cada suíno dos trêsexperimentos recebeu por via intra-dérmica 0,1ml detuberculina aviária (0,05mg de PPD - TECPAR) na facedorsal de uma orelha e 0,1 ml de tuberculina bovina(0,05mg de PPD - TECPAR) na face dorsal da outraorelha. Para aplicação das tuberculinas utilizou-seseringas e agulhas de insulina (Figura 1).

Leitura das reações às tuberculinas: a leitura foirealizada cerca de 48 horas após a aplicação. Doismétodos foram usados:

a) medição do diâmetro maior da reação, utilizando-se uma régua milimétrica (Figura 2);

b) aumento da espessura da dobra da pele, rea-lizada com cutímetro, representada pela diferença entrea medida da espessura da dobra da pele no localda aplicação antes e 48 horas após a aplicação dastuberculinas.

Exames laboratoriais: No abate, os suínos foramavaliados macroscopicamente quanto à presença delesões granulomatosas (Figura 3). Amostras de lin-fonodos da cabeça e do mesentério foram colhidaspara exames histopatológico e de imunoperoxidase(experimentos 1 e 2). No teste de imunoperoxidaseutilizou-se anticorpo monoclonal produzido com extratocelular de M. avium (QED Bioscience Inc., Cat. 18104),

para confirmação da infecção por agentes do complexoM. avium (Figura 4).

Resultados e comentários

Para fins de análises estatísticas, no cálculo damédia das reações por granja, foram consideradostodos os suínos que apresentaram reação igual oumaior que 0,50 cm de diâmetro para qualquer umadas tuberculinas (Figura 5). Os valores médios dasreações por granja, obtidos no experimento 1, com osdois método avaliados, estão na Tabela 1. Nos seisrebanhos avaliados, as médias das reações obtidascom a tuberculina aviária, tanto com o método dodiâmetro maior como com o aumento da espessurada dobra da pele, foram maiores que as médias dasreações à tuberculina bovina. Isto pode ser visualizadonos gráficos 1 (diâmetro maior) e 2 (aumento daespessura da pele).

0,00

0,50

1,00

1,50

2,00

2,50

3,00

3,50

1 2 3 4 5 6

Granjas

Rea

ção,

Cm

Tbc. Aviária Tbc. Bovina

Gráfico 1 - Valores médios por granja do diâmetromaior da reação às tuberculinas aviária e bovina emsuínos (somente os reagentes) de rebanhos infectadosnaturalmente por MAC.

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1,6

1,8

2

2 3 4 5 6Granjas

Rea

ção,

cm

Tbc. Aviária Tbc. Bovina

Gráfico 2 - Valores médios por granja do aumento naespessura da pele (medição com cutímetro) na reaçãoàs tuberculinas aviária e bovina em suínos (somente

Execução e interpretação da prova tuberculínica pareada em suínos, com tuberculina aviária e bovina 3

os reagentes) de rebanhos infectados naturalmente porMAC.

As médias das reações, pelos dois métodos ava-liados, foram maiores (P< 0,05) para a tuberculinaaviária, comparativamente à tuberculina bovina, tantonos suínos das granjas infectadas naturalmente (Ta-bela 2) como naqueles inoculados experimentalmentecom MAC (Tabela 3).

Os suínos inoculados com M. bovis (experimento 3)reagiram às duas tuberculinas aplicadas, mas asreações foram sempre maiores à tuberculina bovina,tanto na medida do diâmetro maior (Figura 6), comono aumento da espessura da pele (Tabela 3). Dossete suínos inoculados, seis apresentaram lesões tu-berculosas nos pulmões (Figura 7), uma característicanão verificada nos suínos infectados naturalmente(experimento 1) ou experimentalmente (experimento 2)com MAC.

Com o objetivo de obter uma indicação sobre oponto de corte das reações à tuberculina aviária, nainterpretação individual das reações, os dados dos doismétodos testados foram divididos em três categoriase comparados, através de teste de concordância, comos resultados macro e/ou microscópicos de linfadenitegranulomatosa. Isto foi realizado tanto com o métodode medição do diâmetro maior, com os suínos infec-tados naturalmente (Tabelas 4) e experimentalmente(Tabela 5), como com o método de medição doaumento na espessura da pele, também com os suínosinfectados naturalmente (Tabela 6) e experimentalmen-te (Tabela 7). Nos suínos infectados naturalmente, namedição do diâmetro maior, a concordância observadacom o exame patológico foi praticamente a mesma,quando considerou-se como positivos os animais comreação superior a 0,5 cm (concordância de 79,7%) ou1,0 cm (concordância de 78,7%). Entretanto, com ossuínos inoculados experimentalmente a concordânciafoi um pouco maior (86,4%), quando considerou-secomo positiva a reação superior a 1,0 cm de diâmetro.

Com relação ao método de medição do aumentoda espessura da dobra da pele em suínos infectadosnaturalmente, a concordância observada foi de 76,2%,quando considerou-se como positivos valores maioresde 0,20 cm e de 75,0%, quando acima de 0,30 cm(Tabela 6). Porém, a concordância observada foibem maior (95,0% para reação maior de 0,20 cm e85,0% para a reação maior que 0,30 cm) nos suínosinoculados experimentalmente (Tabela 7). Os melhoresresultados de concordância observada, obtidos comos suínos inoculados em relação àqueles infectadosnaturalmente, com dois métodos de medição avaliados,provavelmente, deve-se ao fato de que em condiçõesnaturais não se conhece a dose infectante e nem o tem-po decorrido após a infecção. As lesões macroscópicaspodem levar mais de 90 dias para aparecer, enquantoque a reação à tuberculina pode ocorrer a partir de24 dias após a infecção com o MAC. Também, suínosinfectados com doses baixas de MAC produzem reação

mínima e, geralmente, não são capazes de produzirlesões progressiva.

Um problema que pode ocorrer quando o testede tuberculina pareado for aplicada em um rebanhoinfectado por MAC, é que, eventualmente, em algunsanimais de uma amostragem a reação à tuberculinabovina pode ser maior do que a reação à tuberculinaaviária. Este fato ocorreu nos seis rebanhos em queo experimento 1 foi realizado. As possíveis causasenvolvidas nesta aparente "incoerência" de resultadosão:

a) Local incorreto da aplicação da tuberculina (forada derme).

c) Quantidade de tuberculina aplicada (problema derefluxo ou dose incorreta).

d) Falta de atenção na aplicação das tuberculinas,com troca involuntária de orelha.

O mesmo não ocorreu com os suínos infectadoscom M. bovis em que as reações à tuberculina bovinasempre foram maiores que as reações à tuberculinaaviária (Tabela 3).

Para fins de interpretação individual dos testes detuberculina sugere-se usar os critérios que constamnas tabelas 8 (pelo método da medição do diâmetromaior) e 9 (para o método de medição do aumento daespessura da dobra da pele).

Conclusões e recomendações

1. É possível, através do teste de tuberculinizaçãopareada com PPD aviária e bovina, diferenciar re-banhos suínos infectados com MAC daqueles com M.bovis.

2. Os dois métodos de medição da reação àstuberculinas testados, o diâmetro maior e o aumentoda espessura da pele, foram eficientes no diagnósticoda infecção por micobactérias, mas por razões práticase econômicas é recomendável a utilização do métododa medição do diâmetro maior da reação.

3.Toda medida acima de 0,5 cm no diâmetro maiorda reação deve ser considerada como positiva nocálculo da média para um determinado rebanho.

4. Quando a média do diâmetro maior dos reagen-tes no rebanho for maior à PPD aviária, trata-se deinfecção por MAC.

5. Quando a média do diâmetro maior dos reagen-tes no rebanho for maior à PPD bovina, trata-se deinfecção por M. bovis.


Tabela 1 – Diâmetro maior e aumento da espessura na dobra da pele das reaçõesas tuberculinas aviária e bovina em suínos (somente os reagentes) degranjas infectadas naturalmente com MAC - experimento 1.

Número de Diâmetro maior* Aumento da espessura**Granja animais PPD aviária PPD bovina PPD aviária PPD bovina

reagentes Média, cm Média, cm Média, cm Média, cm1 35 3,25 2,40 NR NR2 8 2,09 1,51 0,48 0,343 10 1,85 1,19 1,43 0,684 30 2,39 1,46 1,14 0,595 37 1,68 1,22 1,44 0,976 2 2,20 0,83 1,73 0,26*Medição feita com régua milimétrica, 48 horas após a aplicação das tuberculinas.**Medição pelo cutímetro, 48 horas após a aplicação das tuberculinas; NR: não realizado.

Tabela 2 – Valores médios da reações às tuberculinas aviária e bovina,48 horas após a aplicação, em suínos (somente os reagentes)de rebanhos infectados naturalmente ou experimentalmentecom MAC.

Medida da reação

Experimento Tuberculina Diâmetro maior*Aumento na

espessura da pele**N Média, cm N Média, cm

1. infecção Aviária 122 2,35a 88 1,26a

natural Bovina 119 1,61b 88 0,73b

2. Infecção Aviária 38 2,48a 19 0,42a

experimental Bovina 38 1,93b 19 0,29b

* Medição feita com régua no diâmetro maior da reação.**Diferença entre as medidas (posterior-anterior) feita com cutímetro dobrando-se a peleno centro da reação.Médias na mesma coluna com letras diferentes diferem entre si (P<0,05) pelo teste Tukey.


Tabela 3 – Resultados individuais das reação às tuberculinas aviária e bovina e lesõesmacroscópicas, em suínos inoculados com M. bovis (40 dias pós-inoculação)

Tratamentos SuínoDiâmetro dareação, cm*

Aumento daespessura pele, cm**

Lesões macro

aviária bovina aviária bovina pulmão linfonodo463 3,0 4,0 3,2 10,1 + BR464 3,0 7,0 2,2 8,0 + BR465 5,0 7,0 4,7 11,0 + BR

Inoculados 466 3,0 7,0 2,7 5,4 + BR467 2,5 4,0 2,5 11,5 + BR468 3,0 6,5 1,7 13,8 - MD469 3,5 5,0 3,8 4,7 + BR

Médias 3,28 a 5,78b 2,97a 9,21b

443 0,0 0,0 0,0 0,0 - -445 0,0 0,0 0,0 0,0 - -

Controles 449 0,0 0,0 0,0 0,0 - -450 0,0 0,0 0,0 0,0 - -

* Medição feita com régua no diâmetro maior da reação.**Diferença entre as medidas (posterior-anterior) feita com cutímetro dobrando-se a pele no centro da reação.Médias na mesma linha, com letras diferentes, diferem entre si (P<0,05) pelo teste Tukey.MD= linfonodos mediastínicos; BR= linfonodos bronquiais.

Tabela 4 – Teste de concordância entre o teste com PPD aviária, pela medição dodiâmetro maior (com régua), com diferentes pontos de corte e o examepatológico (macro e/ou micro), em suínos infectados naturalmente comMAC.

TesteCritério usado

(ponto de corte)Exames macro e/

ou microTotais

Concordânciaobservada, %

Pos. Neg.

Reação à Pos.: > 2,0cm 53 3 56PPD aviária Neg.: <= 2,0cm 73 68 141 61,4

Totais 126 71 197


Totais 126 71 197

Reação à Pos.:> 0,5cm 109 23 132PPD aviária Neg.: <= 0,5cm 17 48 65 79,7

Totais 126 71 197


Tabela 5 – Teste de concordância entre o teste com PPD aviária, pela medição dodiâmetro maior (com régua), com diferentes pontos de corte e o examepatológico (macro e/ou micro), em suínos infectados naturalmente comMAC.



ou microTotais


Pos. Neg.


Totais 32 12 44


Totais 32 12 44


Totais 32 12 44

Tabela 6 – Teste de concordância entre o teste com PPD aviária, pela medição doaumento na espessura da pele (com cutímetro), com diferentes pontosde corte e o exame patológico (macro e/ou micro), em suínos infectadosnaturalmente com MAC.



ou microTotais


Pos. Neg.


Totais 91 73 164


Totais 91 73 164


Totais 91 73 164


Tabela 7 – Teste de concordância entre o teste com PPD aviária, pela medição doaumento na espessura da pele (com cutímetro), da reação com diferentespontos de corte e o exame patológico (macro e/ou micro) em suínosinfectados experimentalmente com MAC.

Teste Critério usadoExames macro e/

ou microTotais


Pos. Neg.

Reação à Pos.: > 0,50cm 5 0 5PPD aviária Neg.: <= 0,50cm 12 3 15 40

Totais 17 3 20


Totais 17 3 20


Totais 17 3 20

Tabela 8 – Interpretação do teste de tuberculinização pareada em suínos com PPDaviária (TA) e PPD bovina (TB), através da medição do diâmetro maior dareação feita com régua milimétrica.

Testecomparativo

Diâmetro maiorda reação*

Outras lesões Interpretação

TA < TB Maior que 2,0cmEdema,

hiperemia/hemorragia enecrose

Positivo paraM. bovis ou

Menor de 0,50cm Nenhum NegativoTA > TB De 0,51 a 1,0cm Edema e/ou hiperemia Suspeito

Maior de 1,0cmEdema, hiperemiahemorragia e/ou

necrose

Positivo para ocomplexo M. avium

*Leitura feita 48 horas após a aplicação da tuberculina.** Média dos animais reagentes com mais de 0,50cm no diâmetro maior da reação.

Tabela 9 – Interpretação do teste de tuberculinização pareada em suínos com PPDaviária (TA) e PPD bovina (TB), através da medição do aumento daespessura da dobra da pele, feita com cutímetro.

Testecomparativo

Aumento daespessura da

pele*Outras lesões Interpretação

TA < TB Maior que 0,30cmEdema,

hiperemia/hemorragia enecrose

Positivo paraM. bovis ou

TA > TB Menor de 0,20cm Nenhum NegativoDe 0,21 a 0,30cm Edema e/ou hiperemia Suspeito

Maior de 0,30cmEdema, hiperemiahemorragia e/ou

necrose

Positivo para ocomplexoM. avium

*Leitura feita 48 horas após a aplicação da tuberculina.** Média dos animais reagentes, com aumento da espessura da dobra da pele (medida posterior menosmedida anterior).


Figura 1 – Aplicação intra-dérmica da tuberculina (for-mação de lentilha) em suíno, usan-do agulha e seringa de insulina.

Figura 2 – Suíno com reação à tuberculina aviária -medida da reação com régua, 48 horasapós à aplicação.

Figura 3 – Linfonodos mesentéricos de suíno abatidoapresentando lesões granulomatosas delinfadenite.

Figura 4 – Reação positiva (grumos de cor marrom) aoteste de imunoperoxidase em linfonodo desuíno com linfadenite.

Figura 5 – Suíno infectado com MAC. Reação positivaàs tuberculina aviária (orelha direita) e bo-vina (orelha esquerda). Note que a reaçãoà tuberculina aviária é maior e mais grave(necrose).


Figura 6 – Suíno infectado com M. bovis. Reaçãopositiva às tuberculina aviária (orelha es-querda) e bovina (orelha direita). Note quea reação à tuberculina bovina é maior emais grave (necrose).

Figura 7 – Suíno infectado com M. bovis. Lesõestuberculosas no parênquima pulmonar.

ComunicadoTécnico, 302

MINISTÉRIO DA AGRICULTURA,PECUÁRIA E ABASTECIMENTO

Exemplares desta edição podem ser adquiridos na:Embrapa Suínos e AvesEndereço: Caixa Postal 21, 89700-000,Concórdia, SCFone: (49) 442-8555Fax: (49) 442-8559Email: [email protected]

1a edição1a impressão (2002) tiragem: 100

Comitê dePublicações

Presidente: Paulo Roberto Souza da SilveiraMembros: Paulo Antônio Rabenschlag de Brum,Jean Carlos Porto Vilas Bôas Souza, Janice ReisCiacci Zanella, Claudio Bellaver, Júlio Cesar P.Palhares.

RevisoresTécnicos

Jalusa D. KichCícero Juliano Monticelli.

Expediente Supervisão editorial: Tânia Maria Biavatti Celant.Revisão de texto: Jean Carlos Souza.Tratamento das Ilustrações: Simone Colombo.Editoração eletrônica: Simone Colombo.

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