Avanços nos programas de

avaliação genética aplicados à

pecuária de corte

Fernando F. Cardoso, Méd. Vet., PhD Embrapa Pecuária Sul, Bagé/RS

VIII Jornada NESPRO

I Simpósio Internacional sobre Sistemas de Produção de Bovinos de Corte

24 a 26 de setembro de 2013, Porto Alegre/RS

Sumário

• Introdução

• Melhoramento genético

• Fatores determinantes de avanços

• Foco do melhoramento de bovinos de corte

• Objetivos de seleção

• Novos critérios potenciais

• Ferramentas Genômicas

• Conceitos básicos de genômica

• Seleção genômica para resistência ao carrapato

• Modelos de aplicação da genômica em gado de corte

• Considerações finais

Melhoramento genético

• Alvo aumentar a produção e rentabilidade da pecuária pelo uso de animais mais eficientes, adaptados ao ambiente e com melhor qualidade do produto

• Ferramentas e estratégias

• Seleção: escolha dos pais da próxima geração • Aquisição de animais “superiores”

• Programas de melhoramento genético

• Acasalamento: consiste na reprodução dirigida dos indivíduos selecionados

• Diferenças entre raças/linhagens/indivíduos

• Programas de cruzamento sistemático

• Raças compostas

Fatores determinantes para

avanços no melhoramento Ampliação do papel da pecuária de corte

Produção de carne -> geração de alimentos saudáveis e seguros

Diminuir o impacto ambiental

Gases de efeito estufa (principalmente o metano)

Bem-estar animal

Competição por terras com agricultura e geração energia

Eficiência da utilização de alimentos

Adaptação dos animais ao ambiente (menos favoráveis)

Resistência a doenças e parasitas

Revolução nos métodos genômicos

Sequenciamento de DNA e de genotipagem de marcadores moleculares

Avaliação genética que associa métodos quantitativos tradicionais com informações de dezenas de milhares de marcadores moleculares

Melhoramento genético clássico

Fenótipos +

Pedigree

• Medidas das características de interesse • Nos antepassados

• No indivíduo

• Nos descendentes

DEPs

• Estimativa do valor genético dos indivíduos da população, com base nas medidas e no parentesco (Avaliação genética)

Seleção

• Classificação e identificação dos indivíduos para acasalamento

• Comercialização de reprodutores com indicação de desempenho

Progresso genético

ΔG(ano)= ganho genético anual i = intensidade de seleção

r = acurácia

σA = variabilidade genética da característica

IG = Interval de gerações

A

ano

i rG

IG

Tendências genéticas – Hereford

-5,00

0,00

5,00

10,00

15,00

20,00

25,00

30,00

35,00

1970 1975 1980 1985 1990 1995 2000 2005 2010

Ano

DE

P M

éd

ia

Peso ao Nascer(kg) Peso desmama(kg) Peso Ano(kg) Indice CHB($)

Brasil

EUA

Tendências genéticas –

Nelore do IZ-Sertãozinho

Mercadante et al., 2004

Possíveis falhas na abordagem

adotada

• Decisões de seleção NÃO baseadas em valores genéticos

• Falta de objetivos claros para os programas de melhoramento

• Determinação de foco e das metas (o que realmente precisa ser melhorado)

• Características que afetam essas metas (o que dever ser medido)

• Seleção por peso vivo Aumento taxa de crescimento

Aumento peso ao nascer e adulto (necessidades de mantença das vacas)

Diminuição do desempenho reprodutivo

Planejando o melhoramento

efetivo

Objetivo de seleção

Critérios de seleção

Avaliação genética

Análise econômica

Coleta de dados

Seleção e multiplicação

Foco da mudança

o que mudar e ênfase

o que medir

quem/quando medir

DEPs, Sumários, indices

Valor da mudança

Quem são os bons e com quem se acasalam

(Adaptado de Garrick, 2008)

Identificação do foco

1. Definir o mercado futuro e as demandas desse mercado

2. Identificar as características de importância econômica

• Afetam receitas e despesas

• Sistema e ambiente de produção e o mercado futuro

3. Caracterizar o nível atual de produção do rebanho ou raça para essas características econômicas

Definição de objetivo de seleção

4. Identificar dentre as características de importância econômica, quais serão alvo de mudança e com que ênfase

• Formas de definição

• Empiricamente: comparando o nível atual com o desejado e demandas de mercado para as características econômicas

• Ponderadores econômicos: Modelo bioeconômico relacionando lucro do sistema de produção com características biológicas dos animais

Modelo bioeconômico para

sistema de cria no sul do Brasil Índices zootécnicos, desempenho do

rebanho e mercado

Número de vacas por rebanho un 163

Taxa de desmama (TD) % 70%

Idade ao primeiro parto meses 36

Peso vivo médio de venda dos bezerros

(PD) kg 180,0

Peso vivo médio de venda das bezerras

(PD) kg 170,0

Peso vivo médio da vaca adulta (PAV) kg 450,0

Idade de venda dos bezerros meses 6

Idade de venda das fêmeas meses 6

Taxa de reposição de vacas % 20%

Área destinada à pecuária ha 318

Taxa de lotação ua/ha 0,80

Preço de venda dos bezerros machos R$/kg 4,40

Preço de venda das bezerras R$/kg 4,20

Preço de venda das vacas de descarte R$/kg 2,80

Custo do arrendamento/ha/ano R$ 146,65

Custo veterinário anual por bezerro R$/UA 10,00

Custo veterinário anual por bezerra R$/UA 12,50

Custo veterinário anual por vaca adulta R$/UA 19,00

Custo do kg de matéria seca de

pastagem R$/kg 0,0446

Valores econômicos* para sistema

de cria no RS

Alteração da

característica

pela seleção

Lucro do

sistema

Valor

econômico

(V), R$

V x desvio

padrão

genético

Importância

relativa

Valor base R$ 47.962,43

+ 1% de Taxa

de desmama R$ 49.285,60 R$ 8,12 128,86 85,2%

+ 1 kg de Peso

adulto da vaca R$ 48.050,33 R$ 0,54 12,58 8,3%

+ 1 kg de Peso

à desmama R$ 48.335,39 R$ 2,29 9,85 6,5%

*Representam o incremento de valor agregado por vaca acasalada, ao se

aumentar uma unidade da característica mantendo as demais constantes

Costa et al., 2013

Novos critérios potenciais (1/2)

• Características Reprodutivas

• Maior valor econômico para rebanhos comerciais

• Idade ao primeiro parto, taxa de prenhez de novilhas, habilidade

de permanência, etc.

• Baixa herdabilidade, expressas tardiamente na vida do animal.

• Eficiência alimentar

• Alimentação pode representar até 65% dos custos

• Impacto econômico 7 a 8 vezes superior ao aumento no ganho

de peso

• Desafio medir consumo e conversão alimentar em larga escala

• "Programa nacional de melhoramento genético da eficiência

alimentar em bovinos de corte" nos EUA (www.beefefficiency.org)

Novos critérios potenciais (2/2)

• Sanidade

• Doenças ou defeitos genéticos recessivos monogênicos (p.ex.,

nanismo, hipotricose, osteopetrose, etc.)

• Testes genômicos podem ser usados para identificar e selecionar

animais resistentes às principais enfermidades de bovinos

• Qualidade da carne

• Difícil de ser melhorada geneticamente por métodos clássicos

(requer abate)

• Ultrassonografia (espessura de gordura, área de olho de lombo e

marmoreio)

• Fatores genéticos influenciam à composição mineral e de ácidos

graxos viabilizando a seleção para melhorar a qualidade

nutricional da carne bovina

O que é genômica e como pode

melhorar o ΔG? • Genômica é um ramo da genética que aplica o

conhecimento de milhares de marcadores ou sequencias completas de DNA e técnicas de bioinformática para estudar a estrutura e a função de genomas

• Ferramentas genômicas aplicadas em bovinos de corte podem proporcionar: • Maior acurácia de seleção

• Correção de pedigree

• Estimação da segregação mendeliana em animais jovens

• Reduzir o intervalo de gerações • Antecipação da seleção

• Manter a variabilidade genética • Controle de consanguinidade

• Pouco impacto na intensidade de seleção • Biotécnicas e características da reprodutivas da espécie

O que são os marcadores

moleculares? Segmentos do código genético (DNA) Com sequência e posição no genoma

conhecidas

Têm pelo menos duas formas (alelos) distintas (polimorfismo)

Ligados a genes funcionais

Resistência a doenças

Desempenho em características produtivas e de qualidade dos animais

SNP -Single Nucleotide Polymorphism

Mudança de uma única base na sequência genética de um indivíduo em comparação com um genoma de referência

Milhões na genoma

Menor custo e mão-de-obra (automação)

Seleção Assistida por Marcadores

(MAS) e Seleção Genômica (GS)

• Uso de marcadores genéticos na seleção

• Características de difícil mensuração ou que não podem ser medidas antes da seleção, limitadas a um sexo e baixa herdabilidade

• Redução do intervalo entre gerações

• Pré-seleção de touros jovens para testes de progênie

Diferença:

MAS = poucos marcadores

GS = milhares de marcadores, cobertura genômica

Pelos menos um marcador ligado a cada gene

que afeta a característica de interesse

Aplicação de Ferramentas

Genômicas no Melhoramento

A era pós sequenciamento

genômico (2008) :

Novas tecnologias de genotipagem

impactaram significativamente a

integração da genômica com o

melhoramento animal!

Genotipagem de SNPs com

Chips de DNA

1

G

i ij j i

j

y x g e

Seleção Genômica

Modelo conceitual: modelo infinitesimal (muitos genes de

efeitos pequenos)

1

ˆ ˆ

G

i ij j

j

u x gVG: valor genômico

Efeito do marcador em

estudos de associação

(GWAS)

DEPG=VG/2

• Estimar os efeitos de marcadores por todo o genoma e

utilizar essa informação para determinar o valor genético

genômico dos animais para a seleção

Σ= +10kg VG = soma das estimativas dos efeitos de

cada região do genoma

-50g

+75g

+5g

-100g

-5g

-50g

+100g

+100g

+100g

-50g

+75g

+5g

-100g

-5g

-50g +100g

+1000g

-50g

+75g

+5g

-5g

-50g

etc . . .

Exemplo do gado de leite -

ganhos em acurácia1

Trait HO JE BS

Mérito líquido 23 9 3

Leite 23 11 0

Gordura 33 15 5

Proteína 22 4 1

% Gordura 43 41 10

% Proteína 34 29 5

1Superioridade em relação à média dos pais ~35%

Produção e Mérito Líquido(NM$) de touros jovens

Gordon Conference on Quantitative Genetics, Feb. 2009 (27) Paul VanRaden 2009

Exemplo do gado de leite – Impacto da avaliação genômica

(Van Doormaal 2012. CDN article, July 2012)

Tendência genética- Tourinhos HO ofertados no Canada (índice GLPI)

Ganho: 445 pontos/ano

Ganho: 210 pontos/ano

Ganho: 109 pontos/ano

Semestre

GL

PI m

éd

io

USDA-ARS-AIPL: animais da raça

holandesa genotipados

John Cole, 2013

Data da avaliação (AAMM)

Genóti

pos

0

50000

100000

150000

200000

250000

1004 1008 1012 1104 1108 1112 1204 1208 1212

Bulls Cows

335,929 animais genotipados

30

Produtos no Mercado para MAS e

GS

• Algumas questões

• Quantos genes/marcadores?

• % explicado das diferenças genéticas?

• Acurácia das predições?

A implementação de SAM deve ser precedida pela

validação dos marcadores na população alvo, quanto a

fase de ligação e efeito

Constatação

Não existem painéis de marcadores

confiáveis disponíveis para seleção

assistida por marcadores ou seleção

genômica em bovinos de corte taurinos

no Brasil

Unindo forças...

Apoio: Fontes financiadoras:

EMBRAPA, CNPq e Conexão

Delta G

Objetivo geral:

Desenvolver estratégias combinando ferramentas de genética quantitativa e molecular para seleção genômica de animais mais resistentes à infestação natural por carrapatos

Obtenção qualificada de fenótipos

para resistência a carrapatos

Protocolo para contagem de carrapatos em nível de fazenda

Capacitação dos técnicos da Conexão Delta G

Obtenção e remessa de amostras de sangue em cartão FTA

4.348 animais avaliados entre 2010 and 2013 10,647 contagens (2 a 3/animal)

Genotipagem em larga escala

• Extração de DNA e genotipagem • 2160 animais Safra 2010 (50K) e 40 touros-

pais (777K)

• 1380 amostras para 50K e 84 para 777K adicionais (Safra 2011-13, touros-pais)

• Desenvolvimento do banco de genótipos

• Controle de qualidade dos genótipos • Restaram 2.131 (97%) amostras e 37.346

(68%) SNPs

Illumina

BovineSNP50

BeadChip

Desequilíbrio de ligação (DL)

• Desequilíbrio de ligação é a associação não aleatória de alelos em dois ou mais loci

• Haplótipo é um conjunto de alelos ligados em um cromossoma que tendem a ser herdados em conjunto

A C

Q

a C

q

Conhecimento do DL permite:

Estimar a acurácia para predizer o genótipo de um

lócus observando outro lócus

Delinear estudos de associação e esquemas de

seleção genômica mais efetivos

b

B

Conclusão: • Necessitamos milhares de

marcadores (35.000-45.000)

• Distância média (~60000bp)

LD(r2) x distância entre marcadores

Fase de ligação

População 1

População 2

• Note o DL e os genótipos são os mesmos nas

duas populações:

• Aa para os marcadores

• Qq para o gene

• A fase de ligação é oposta

• AQ e aq na População 1 (acoplamento)

• Aq e aQ na População 2 (repulsão)

• Apenas o genótipo do marcador será

conhecido através da genotipagem

• A persistência de fase entre populações

indica se um marcador descoberto em uma

população pode ser usado para seleção em

outra

A

q a

Q

A

Q a

q

Persistência de fase x distância

Conclusão: • Podemos utilizar os resultados

da raça Braford para selecionar

bovinos Hereford em distâncias

genômicas próximas

Considerações sobre a estimação

de valores genômicos (VG)

• Nem todos os animais são genotipados • Não é possível construir uma matriz de

parentesco genômico (G) com todos os animais

• Informação fenotípica histórica

• Informação de pedigree

• Metodologia usada nas avaliações genéticas de gado leiteiro envolve várias etapas

• Múltiplas estimativas dos valores genéticos combinadas por índices

• Desde 2009 implementado na avaliação genética oficial na América do Norte (EUA e Canadá)

Seleção Genômica em Uma

Etapa – ssGBLUP

Dados

ssGBLUP

DEP Genômica

Pedigree SNPs

Aguilar et al., 2010

X'X X'Z

Z'X Z'Z +a H -1

é

ëêê

ù

ûúú

b

u

é

ëêê

ù

ûúú

=X'y

Z'y

é

ë

êê

ù

û

úú

Implementação da seleção genômica

em uma única etapa

• Avaliação Tradicional BLUP

• Avaliação Genômica em Uma Etapa

• Parentesco baseado no pedigree (A) ajustado

pelos desvios devido a informação genômica

(AΔ) (Misztal et al. 2009)

X'X X'Z

Z'X Z'Z +a A-1

é

ëêê

ù

ûúú

b

u

é

ëêê

ù

ûúú

=X'y

Z'y

é

ë

êê

ù

û

úú

H = A+ A

Corrigindo pedigree com

marcadores

Conflito de genôtipo

com Touro 1

Touro 1 Vaca Touro 2

Touro 2 poderá ser

o pai correto

Estratégia:

Avaliar o percentual de conflitos (p.ex. < 0,2%) usando milhares de marcadores para corrigir pedigrees

Parentesco combinado pedigree

e marcadores

Nenhum alelo IBD

cov=0

Um alelo IBD

Cov=1/2V(u)

Ambos alelos IBD

Cov=V(u)

Touro Vaca

IBD=Idêntico

por descendência Steibel & Badke, 2011

Exemplo de pedigree Braford

?

Reprodutores

múltiplos Duque Big Brother

Formula-1 Portinari H458 H2388

Relações de parentesco

Pedigree (A)

Marcadores (G)

Pedigree correto!

Dados da Conexão Delta G:

66 conflitos detectados (pai correto identificado para 14 desses animais)

Pai correto identificado para 47 animais filhos de RM

Famílias de meio-irmãos reconstruídas para 1.617 animais de filhos de RM usando pais fictícios

Correlação (A,G) melhorou de 0,49 para 0,77

Duque Big Brother

Formula-1 Portinari H458

H2388 H458

Avaliação genômica de touros

Hereford e Braford Característica Média±dp1 Número de

registros2

Média±dp1

da DEPG

Contagem de

Carrapatos

36,3±45,2 8.004 0,00±1,00

Peso ao

Nascer (Kg)

32,8±5,3 109.566 0,32±1,11

Peso ao

Desmame (Kg)

178,3±33,5 112.832 1,61±3,38

Maternal

(Kg)

178,3±33,5 112.832 -0,39±2,10

PS

(Kg)

300,3±67,1 58.893 2,59±4,94

PE

(cm)

30,5±3,6 14.987 0,11±0,39

Touros Braford

Outras características a serem

avaliadas

• Crescimento

• Ganho de peso pré-

desmama

• Ganho de peso pós-

desmama

• Altura à desmama

• Altura ao sobreano

• Reprodutivas

• Facilidade de parto

• Idade ao primeiro parto

• Dias para parir

• Duração da gestação

• Qualidade de sêmen

• Escores visuais à desmama e ao sobreano • Conformação

• Precocidade

• Musculatura

• Tamanho

• Umbigo

• Pigmentação ocular

• Pelame

• Caracterização racial

• Carcaça por ultrassonografia • Área de olho de lombo

• Espessura de gordura subcutânea

SS-1 n=483 SS-3 n=564

SS-2 n=577 SS-4 n=589

Estudo de validação cruzada

1. População subdividida: ao acaso por GC (n~500) em 4

subconjuntos (1831 Braford e 262 Hereford)

2. Análises por ssGBLUP (4) excluindo fenótipos de um subcojunto: E.g. excluir 1, calibrar marcadores em 2,

3 e 4

3. Predição dos valores genômicos dos animais com dados eliminados Marcadores + pedigree

4. Acurácia de predição (Legarra et al.,2008)

Correlação entre os valores genômicos preditos e as contagens de carrapato

SC-1 n=483 SC-3 n=564

SC-2 n=577 SC-4 n=589

SC-1 n=483

ˆ ,k k kk red mar y hu x

Raça DEPG MP Ganho %

Braford 0.47±0.04 0.28±0.01 68%

Hereford 0.36±0.15 0.18±0.06 100%

Experimento de expressão gênica Infestação artificial de extremos de DEP

0

20

40

60

80

100

120

AI 1 AI 2 AI 3 AI 4

Artificial infestation

Tic

k c

ou

nt

Susceptible

Resistant

Correlação entre contagem média de carrapatos e DEPs = 0.97

Efeitos dos SNPs para resistência por

todo o genoma (ssGBLUP)

/ kG XX 1( ) g X XX u

Reis et al., 2013

Cenários simulados para seleção

considerando ou não resistência ao

carrapato

Cenários Características do índice de seleção

1 PD + PS + MUSC

2 PD + PS + MUSC + RES

3 PDg + PSg + MUSCg

4 PDg + PSg + MUSCg + RESg

PD- Peso a Desmamama

PS- Peso ao Sobreano

MUSC- Musculosidade

RES- Resistência ao carrapato

g- valor genético genômico

Reis et al., 2013

Resposta a seleção para

resistência ao carrapato (RES)

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

1

0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

RES

PO

STA

A S

ELEÇ

ÃO

EM

RES

ACURÁCIA PARA GEBV

MESMO PESO ECONÔMICO EM TODAS CARACTERÍSTICAS

Cenário 1

Cenário 2

Cenário 3

Cenário 4

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

1

0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

RES

PO

STA

A S

ELEÇ

ÃO

PA

RA

RES

ACURÁCIA PARA GEBV

PESO ECONÔMICO DE 100% PARA RES

Cenário 1

Cenário 2

Cenário 3

Cenário 4

Tamanho efetivo de população

0 10 20 30 40 50

010

02

00

30

040

05

00

Generation in the past, years

Ne

Braford

Hereford

Número de animais no conjunto

de calibração e precisão da GEBV

(Braford)

Acurácia Característica

Peso à

Desmama

Peso ao

Sobreano Musculatura

Resistência ao

Carrapato

0,1 87 65 50 77

0,2 360 270 208 318

0,3 855 641 493 754

0,4 1646 1235 950 1453

0,5 2881 2161 1662 2542

0,6 4862 3646 2805 4290

0,7 8304 6228 4791 7327

0,8 15366 11525 8865 13558

0,9 36848 27636 21259 32513

Herdabilidade: PD 0,15; PS 0,20; MUSC 0,26; RES 0,17

Reis et al., 2013

Número de animais no conjunto

de calibração e precisão da GEBV

(Hereford)

Acurácia Característica

Peso à

Desmama

Peso ao

Sobreano Musculatura

Resistência ao

Carrapato

0,1 63 47 36 55

0,2 260 195 150 229

0,3 616 462 356 544

0,4 1187 890 685 1048

0,5 2078 1558 1199 1833

0,6 3506 2630 2023 3094

0,7 5989 4492 3455 5284

0,8 11082 8311 6393 9778

0,9 26574 19931 15331 23448

Herdabilidade: PD 0,15; PS 0,20; MUSC 0,26; RES 0,17

Reis et al., 2013

Como podemos aplicar a SG hoje?

Coletar amostras

• Sangue, sêmen ou pêlos para extração de DNA genômico

Genoti-pagem

• Enviar para um laboratório que faça o serviço nos chips da alta densidade (Illumina® BovineSNP50 ou Bovine HD ou Affymetrix® HD Bovine)

DEPG

• Enviar genótipos e pedigree ao Laboratório de Bioinformática e Estatística Genômica da Embrapa Pecuária Sul para cálculo da DEPG

Seleção

• Utilizar DEPGs para identificar e selecionar animais Hereford e Braford mais resistentes ao carrapato

Modelo atual de seleção genômica

em gado de corte (Angus EUA)

Associação

Base dados: fenótipo (F)

+ pedigree (P)

AGI

F + P DEPgenômica

Criadores F + P

DEPgenômica

Pfizer/Igenity

Base dados: DNA +

genótipo + equação

predição

“DNA”

valor molecular

População de treinamento estática

Genótipos não são repassados aos produtores, somente valores moleculares

Animais selecionados não retroalimentam o sistema a medida que tem fenótipos

Acurácias vão decrescendo com o tempo Adaptado de Carvalheiro, 2012

Associação de

Criadores/Raça

Base dados: fenótipo (F)

+ pedigree (P) +

genótipo (G) + DNA

Empresa de

avaliação genética

F + P + G DEPgenômica

Criadores F + P + DNA

DEPgenômica

Empresa de

genotipagem DNA

genótipo (G)

Embrapa & Parceiros Pesquisa, Desenvolvimento

e Inovação Tecnologica

Modelo de seleção genômica

proposto para o Hereford e

Braford

Adaptado de Carvalheiro, 2012

Considerações finais (genômica)

• Medir características de alto valor econômico permanecerá indispensável

• Resistência a doenças

• Adaptação e eficiência

• Maciez e marmoreio da carne

• Vantagens potenciais para os produtores

• Aumento do ganho genético pela seleção combinando DEP tradicional e predições genômicas

• Formação de linhagens geneticamente diferenciadas

• Custo de genotipagem precisa cair

• Imputação 6K -> 50K -> 777K -> Sequência

• Modelos mais eficientes de negócios

• Populações dinâmicas de treinamento

Adoção da tecnologia

(ferramentas e capacitação)

Considerações finais (gerais)

• Antes de qualquer iniciativa no melhoramento genético é preciso ter foco e objetivos “criteriosamente” definidos

• Esses objetivos devem ser definidos no contexto de cada sistema de produção e mercado

• O melhoramento genético é uma estratégia de longo prazo, atue com determinação, consistência e persistência no alcance dos seus objetivos

Agradecimentos

Conexão Delta G/RS Alvorada

Caty

Guatambu

Pitangueira

São Bento

São Manuel

Silêncio

Gensys Fernanda V. Brito

Mario L. Piccoli

Vanerlei M. Roso

ABHB Thais B. P. Lopa

Ignacio Aguilar, INIA

Ignacy Misztal, UGA

Juan Steibel, MSU

Embrapa (Animal Genomics Network) Adriana Ibelli

Alexandre R. Caetano

Ândrea P. Reis

Claudia C. G. Gomes

Elizângela Guedes

Joaquim M. Silva

Luciana C. A. Regitano

Marcos V. B. Silva

Marcos J. I. Yokoo

Maurício M. Oliveira

Michel E. B. Yamagishi

Patricia Biegelmeyer

Poliana F. Giachetto

Roberto H. Higa

Rodrigo F. Costa

Samuel R. Paiva

Vitor Catoia

Muito obrigado!

fernando.cardoso@embrapa.br