avaliação da resposta imune humoral considerações gerais quem representa a imunidade humoral? o...
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Avaliação da Resposta Imune Humoral
Considerações gerais
Quem representa a Imunidade Humoral?
O que deve enfocar a avaliação da Imunidade Humoral?
Concentração de Ig séricaNíveis séricos das sub-classesProdução do anticorpoQuantificação de LB
Desenvolvimento Imunológico da Criança
IMUNOGLOBULINAS
0 sem.10 20 30
Nasc.3 6 9
1 ano3 6 9 12
0
20
4060
80
100120
Níveis deimunoglobulinas
em adultos normais
IgGmaterna
IgGfetal
IgM
IgA
Figura cedida pelo Laboratório de Investigação Médica da LIM 56-Faculdade de Medicina da USP
Cinética da Resposta de Anticorpo
T-dependent Ag; Resposta Secundária
* Specificity
• Lag phase• Log phase• Plateau phase• Decline phase
1o Ag 2o Ag
D a y s A f t e r I m m u n i z a t i o n
A b
T i
t e r
Mudanças qualitativa da Resposta 1o and 2o
• Class variation– 1o - IgM
– 2o - IgG, IgA or IgE 1o Ag 2o Ag
Total Ab
IgM Ab
IgG Ab
D a y s A f t e r I m m u n i z a t i o n
A b
T i
t e r
Mudanças qualitativa da Resposta 1o and 2o Responses
• Class variation• Affinity
– Affinity Maturation
1o Ag
D a y s A f t e r I m m u n i z a t i o n
A f
f I n
I t y
2o Ag
IgG AbIgM Ab
High Dose
Low Dose
Eventos Celulares na Resposta 1a. T-dependent Ags
Lag Clonal selection
Log IgM Class switching
Stationary Decline Memory Cell
Pool
IgM
Memory Cells
IgG
1o Ag
Eventos Celulares na Resposta 2a. T-dependent Ags
Lag phase Virgin cells Memory cells
Log phase Pool size IgG, IgA or IgE
Stationary Decline
Sustained production
IgM
Memory Cells
IgG
IgG
Memory Cells
Memory Pool
Virgin B cell
Cinética da Resposta de Anticorpo T-independent Ags
4 Phases IgM
antibody No
secondary response
1o Ag 2o Ag
D a y s A f t e r I m m u n i z a t i o n
A b
T i
t e r
IgM Ab
Concentração de Ig sérica
Quais Imunoglobulina são pesquisadas? Quais métodos são utilizados?
Imunodifusão radial simplesNefelometriaELISAImunoeletroforese
Imunidade HumoralEletroforese de Proteínas
Figura cedida pelo Laboratório de Investigação Médica da LIM 56-Faculdade de Medicina da USP
Imunidade HumoralELISA
Figura cedida pelo Laboratório de Investigação Médica da LIM 56-Faculdade de Medicina da USP
Dosagem das sub-classes de IgG
Porque pesquisar?
Quais as proporções normais? IgG1(70%), IgG2 (20%), IgG3 (7%), IgG4 (3%)
Quais os métodos utilizados? ELISA RIA
Subclasses de IgG
0 6m 1 1 4 6 8 100
20
40
60
80
100
% a
dulto
idade (anos)
IgG1IgG2IgG3IgG4
Oxelius VA, 1974
Avaliação da produção de anticorpos
Objetivo Verificar a funcionabilidade dos
anticorpos produzidos Métodos
Títulos de iso-hemaglutininas Titulação de anticorpos para recall
antigens -adultos Titulação de anticorpos para antígenos
de desafio -crianças
Avaliação da produção de anticorpos
Antígenos empregados no desafio:
Polissacarídeo de S. pneumoniae Polissacarídeo de H. influenzae Vacina SALK Vacina tetânica Obs: soro coletado antes e depois do
desafio
Imunoglobulinas policlonais
Relacionado com os estados das doenças O aumento no soro pode resultar do
decréscimo do catabolismo e aumento da síntese.
Ensaios: Eletroforese da proteína do soro Imunoeletroforese Determinação das imunoglobulinas individuais
ou das cadeias leves das imunoglobulinas
O aumento de IgG tende a predominar nas respostas crônicas e nas doenças hepáticas;
Aumentos de IgA tendem a predominar nas infecções de peles, aparelhos respiratório, intestinal e renal.
A IgM está relacionada às fases agudas das infecções primárias e às infecções intra-uterinas. Na cirrose biliar primária, a IgM está marcadamente elevada, e algumas vezes de forma conjunta com a IgG.
A IgE normalmente encontra-se elevada na asma e em outros quadros alérgicos, especialmente nas crianças.
As infecções bacterianas crônicas cursam com o aumento de todas as imunoglobulinas.
Imunoglobulinas Monoclonais
produto de um único clone de células plasmáticas, produzindo imunoglobulinas de estrutura idêntica.
são chamadas de paraproteínas e podem ser polímeros, monômeros ou fragmentos da molécula de imunoglobulina.
Mieloma múltiplo (neoplasia dos plasmócitos).
Quantificação dos LB
CD19
CD20
CD21
TECNOLOGIA QUE MEDE MÚLTIPLAS CARACTERÍSTICAS EM UMA CÉLULA QUE MIGRA EM FLUXO.
TAMANHO COMPLEXIDADE OU GRANULOSIDADE FLUORESCÊNCIAS
CITOMETRIA DE FLUXO
Forward Angle Light Scatter
FALS Sensor
Laser
90 Degree Light Scatter
FALS Sensor
90LS Sensor
Laser
Laser
Fluorescence Detectors
Freq
Fluorescence
FALS Sensor
Fluorescence detector(PMT3, PMT4 etc.)
CD3+CD8+CD3+CD8-
CD3-CD8+
Ensaios de linfoproliferação com: IL-4 IL-2 POKEWEED PROTEÍNA ESTAFILOCÓCICA
Outros Ensaios
QUANTIFICAÇÃO DAS IMUNOGLOBULINAS
RESPOSTA Ag ESPECÍFICA
QUANTIFICAÇÃO DAS SUBCLASSES DE IgG
RESPOSTA ANTI-PROTEÍNAS: DIFTERIA, TÉTANO
RESPOSTA ANTI-CARBOHIDRATOS: PNEUMOCOCOS, ISOHEMAGLUTININAS
RESPOSTA CONTRA NEOANTÍGENOS
Resumindo..........