Aulo Terico-Prtica MBI 100

1- Demonstrao da Presena de Microrganismos no Ambiente

- Microrganismos so encontrados em qualquer ambiente.

- Meio aqutico foi provavelmente o ambiente original dos microrganismos, a partir do qual se especializaram e colonizaram o ambiente terrestre.

- A maioria dos microrganismos no incuos (no causam danos) ou benficos, havendo relativamente poucos que causam prejuzos (causam doenas ou deterioram os alimentos e o meio ambiente).

- Inoculao: Introduo ou adio do microrganismo ou de estruturas (esporos, miclio) em um meio de cultura ou hospedeiro.

- Bico de Bunsen: esteriliza a regio circundante, evitando eventuais contaminaes do material em estudo.

- Controle: tratamento para comprar (sem inoculao)

- Os micro inoculados crescem em placas estreis formando colnias em meio lquido (meio fica turvo) ou crescem em meio estreis.

- Porque utiliza-se meio estreis- Porque so meios que inicialmente no tem nenhuma presena de microrganismos, livre de contaminaes.

Sobre a presena dos microrganismos no ambiente incorreto afirmar que:

a- () Meio aqutico foi provavelmente o ambiente original dos microrganismos, a partir do qual se especializaram e colonizaram o ambiente terrestre

b- () Existe no ambiente microrganismos benficos e os que causam doenas em plantas e animais

c- () os microrganismos so encontrados em todos os tipos ambiente, exceto em regies vulcnicas ou nos oceanos mais profundos

d- () So: Causadores de doenas, produtores de antibiticos, simbioses, nutrio animal, reciclagem de nutrientes na biosfera, controle biolgico, produo de Alimentos, fermentao alcolica, ciclos biogeoqumicos, biorremediao.

Sobre o processo artificial de inoculao de microrganismos correto afirmar que:

I- Inoculao: Introduo ou adio do microrganismo ou de estruturas (esporos, miclio) em um meio de cultura ou hospedeiro.

II- Bico de Bunsen: esteriliza a regio circundante, evitando eventuais contaminaes do material em estudo.

III- Controle: tratamento sem inoculao

IV- Os micro inoculados em meio lquido crescem em colnias, formando estrias

V- Utiliza-se meio estril porque so meios que inicialmente no tem nenhuma presena de microrganismos, livre de contaminaes.

a- () I, II, III, IV esto corretas

b- () Todas esto corretas

c- () II, III, IV e V esto corretas

d- () I, II, III, V esto corretas

2- Preparaes Microscpicas a fresco

- Coloca-se uma gota de corante, e depois uma gota de suspenso de micro para evitar a contaminao do corante com o micro.

- Vantagens: Possibilidade de observar a motilidade de certos grupos de microrganismos, movimento de clios e flagelos

- Desvantagens: estruturas celulares no se mantero integras por maior perodo de tempo, estando metabolicamente ativas e sujeitas a morte celular.

-Azul de Metileno- Corante vital- entra em contato com a clula viva, o corante reduzido e se torna incolor. As clulas que permanecem coradas de azul so clulas mortas. Celulas incolores: clulas vivas. Clulas Azuis: Mortas

Em um laboratrio de microbiologia, um estudante utilizou-se de uma preparao microscpica a fresco para observao de um determinado tipo de micro.

Sobre esse tipo de procedimento, correto afirmar que:

I- Ao observar leveduras colocar antes sobre a lmina, uma gota de corante e depois uma gota de suspenso de leveduras.

II- Coloca-se uma lamnula sobre a lmina com cuidado para evitar a formao de bolhas de ar.

III- Para corrigir a focalizao com o microscpio travado, utiliza-se o Micromtrico e macromtrico.

IV- necessrio a utilizao de leo de imerso para as objetivas maiores de 10X.

V- O aumento final dado pelo aumento conferido pela objetiva utilizada multiplicando pelo aumento conferido pela ocular

a- () Apenas I e II esto corretas

b- () Todas esto corretas

c- () II, III, IV e V esto corretas

d- () I, II, V esto corretas

Sobre a preparao microscpica a fresco incorreto afirmar que:

a- () Uma desvantagem que no pode observar a motilidade de certos grupos de microrganismos, movimento de clios e flagelos

b- () Numa suspenso de clulas coradas com azul de metileno todas as clulas vivas ficam incolores

c- () Todas as clulas mortas permanecem azuis

d- () Nesse tipo de preparao as clulas no ficam aptas a observaes por um longo perodo

3- Preparaes Microscpicas fixadas: colorao simples

- Os corantes (sais) so utilizados para aumentar o contraste das clulas em relao ao meio em que se encontram.

- Cromforo- uns dos ons responsvel pela cor do composto

Corantes bsicos (cromforo com carga positiva) : corar bactrias pq os cidos nucleicos e componentes de parede celular apresentam carga liquida negativa. Azul de metileno, cristal violeta, fucsina e safranina.

-Colorao simples: clulas microbianas espalhadas como uma camada fina sobre a lmina formando o esfregao; o esfregao fixado a lamina por meio de uma exposio breve ao calor; em seguido corado com um nico corante.

-Tcnica til para visualizar a forma, arranjo e tamanho das clulas bact.

Finalidade de fixar o esfregao pelo calor: manter as estruturas celulares integras, matam as clulas e inativam as enzimas.

Preparaes a fresco: observa a motilidade dos micro, clulas no so fixadas nem coradas.

Preparaes fiadas: estruturas das clulas so mantidas intactas. No pode observar clulas vivas.

Prticas asspticas: Tcnicas utilizadas para evitar contaminaes por outros micro e dos operadores.

Os corantes so utilizados para aumentar o contraste das clulas em relao ao meio em que se encontram. Assinale a alternativa incorreta

a- () A maioria dos corantes so sais

b- () Cromforo responsavel pela cor do corante

c- () Corantes bsicosAzul de metileno, cristal violeta, fucsina e safranina.

d- () Corantes bsicos coram bactrias pq os cidos nucleicos e componentes de parede celular apresentam carga liquida positiva

Colorao simples: clulas microbianas espalhadas como uma camada fina sobre a lmina formando o esfregao. Assinale a alternativa correta a respeito desse mtodo de colorao.

a- () o esfregao fixado a lamina por meio de uma exposio longa ao calor

b- () Pode-se utilizar mais de um corante nessa tecnica

c- () Tcnica til para visualizar a forma, arranjo, mas no o tamanho das clulas bactrias.

d- () Finalidade de fixar o esfregao pelo calor: manter as estruturas celulares integras, matam as clulas e inativam as enzimas.

4- Preparaes Microscpicas fixadas: colorao de gram

Colorao de gram: colorao diferencial- distino em certos grupos bacterianos reter certos corantes.

Core o esfregao com cristal violeta p 1 min; lave com gua deslilada; cubra com lugol (funciona como mordente, aumentando a interao entre a clula e o cristal violeta formando um complexo insolvel cristal violeta-iodo) por 1 min; lave o excesso; lave rapidamente a preparao com etanol (atua como descolorante) 95%; lave o excesso; Cubra o esfregao com Fucsina ou safranina (corante de contraste) 30 s; lave excesso; deixe secar

Gram negativas- quando lavadas com lcool perdem rapidamente o complexo cristal violeta-iodo ficando incolores

Gram positivas- resistem a descolorao (maior camada de peptideoglicano, ac teicoico e lipoteicoico) permanecendo roxas.

Gram positiva- roxo(cristal de violeta) acido teicoico e lipoteicoico

Gram negativa- vermelho (safranina) exopolissacarideos

Assinale a alternativa incorreta

a- () bactrias gram negativas so clulas que se descoloram com o lcool e se coram com o corante fucsina ou safranina

b- () Gram positicas retem o cristal violeta no se descorando como alcool

c- () Fucsina e Safranina so corantes diferenciais

d- () cristal Violeta e o lugol so corantes primrios

Maria utilizou a colorao de Gram e identificou uma bactria sendo uma espcie de Bacillus, um grupo gram positivo. Assinale a alternativa correta sobre esse mtodo

a- () Com essa tcnica Maria observou a forma, mas no o arranjo predominante da espcie

b- () no final da colorao Maria observou clulas roxas, cor caracterstica do corante cristal violeta

c- () O complexo insolvel removido pelo alcool

d- () clulas gram positivas no absorvem o corante safranina

5- Preparo e Esterilizao de meios de cultura

Meios de cultura devem proporcionar todos os elementos que compe a clula (C N S P...).

Meios complexos- composio qumica no completamente conhecida. Ex: estrato de carne

Meios sintticos- componentes qumicos puros em quantidades e composies definidas

Meio mnimo: fornece somente os nutrientes essenciais ao desenvolvimento do micro. Ex: BDA

Meios diferenciais: permite diferenciar espcies bacterianas com base em somente caractersticas morfolgicas

Meio de enriquecimento: favorece o crescimento de uma determinada espcie microbiana em relao a outras espcies que possam estar presentes

Meio seletivo: inibe o crescimento de determinadas espcies, permitindo somente o crescimento da populao desejada.

Consistencia dos meios de cultura: Lquidos (estudos de crescimento, processos de fermentao e produo de biomassa); slidos (contagem, isolamento e manuteno de culturas); rsemi-slidos (placas de lise). Agente solidificante: Agar

Diferenciar os microrganismos autotrficos e heterotrficos

Fatores que interferem no crescimento nutricional: temperatura, ph, presena de O2 e salinidade

Esterilizao por calor seco- Atua sobre os microorganismos provocando aoxidaodos constituintes celulares orgnicos e a desnaturao ecoagulaodasprotenas. Penetra nas substncias de uma forma mais lenta que o calor mido e por isso exige temperaturas mais elevadas e tempos mais longos, para que haja uma eficaz esterilizao.

So utilizadas as estufas. Conforme o calor gerado recomenda-se um certo tempo: a 170 Graus Celsius, so necessrios 60 minutos. A 120 Graus so necessrios 12 horas.

Vantagens: no forma ferrugem, no danifica materiais de corte. o ideal para vidros, metais, algumas gorduras e substncias em p.

Desvantagens: O material deve ser resistente a variao da temperatura. No esteriliza lquidos.

Calor mido: Atua tambm desnaturando e coagulando as protenas dasclulasmicrobianas, mas a gua vai influenciar a destruio dasmembranaseenzimaspois pode induzir a destruio dasligaes de hidrognio, o que vai tornar estes processos mais eficazes e diminuir o tempo de exposio.

Substancias termolbeis- aumento da temperatura inativa a molcula. No pode utilizar esterilizao desses meios de cultura em autoclave. Utiliza filtrao.

Esterilizao: processo pelo qual se eliminam todas as formas de vivas presentes em um material ou ambiente

Sobre o processo gar incorreto afirmar que:

a- () o principal agente solidificante utilizado em Microbiologia

b- () um polissacardeo derivado de algas

c- () Apresenta capacidade de fundir a 96 C e solificar a 45C

d- () Um meio liquido sem gar suporta temperaturas mais elevadas que um meio slido

Sobre a composio ou funo dos meios de cultura certo afirmar que:

a- () No meio mnimo o microrganismo vai ter que sintetizar a maioria dos aminocidos necessrios para o seu crescimento

b- () Meios diferenciais permitem diferenciar espcies bacterianas com base em somente caractersticas morfolgicas e Meio seletivo favorece o crescimento de uma determinada espcie microbiana em relao a outras espcies que possam estar presentes

c- () Meio de enriquecimento: inibe o crescimento de determinadas espcies, permitindo somente o crescimento da populao desejada.

d- () Todas as alternativas acima esto corretas

Antnio seguiu os seguintes passos resumidamente para preparo de meio de cultura:

I- Pesou os componentes, misturou, completou com gua e ajustou o pH

II- Adicionou quantidade especfica de Agar

III- Utilizou a autoclave para esterilizar seguindo binmio tempo x temperatura necessrio.

IV- Verteu o meio contendo Agar em placas de petri estreis

incorreto afirmar que Antnio:

a- ( ) Obteve um meio de cultura muito utilizado para estudos de crescimento, processos de fermentao e produo de biomassa.

b- () Obteve no final do processo um meio estril

c- () Utilizou calor umido para esterilizao

d- () Obteve um meio slido

6- Isolamento e enumerao de micro em cultura pura

O estudo de caractersticas definidas de uma dada espcie s pode ser realizado com pop. Puras

Cultura pura- uma cultura de clulas gentica e morfologicamente idnticas. Meio slido. Quando uma colnia isolada transferida para um novo meio.

Colonia- Agregado de clulas idnticas

Estria simples e composta: Obteno de cultura pura pelo mtodo de esgotamento de inoculo em meio solido. No final das estrias possvel visualizar colnias puras isoladas e transferir para um meio estril.

Medida da densidade populacional em uma amostra de cultura pura- Contagem de colnias em placa pelo mtodos da placa derramada ou Pour Plate- Diluio do inoculo inicial para obteno de um nmero que permite fazer a contagem entre 25-300 UFC (nesse intervalo permite a contagem do numero de colnia e com o fator de diluio obtem a quantidade da densidade inicial.

Finalidade das diluies seriadas: diminuio do numero de colnias at um valor onde possivel fazer a contagem.

UFC- Unidade formadora de colonia

Meio solido: preferencial para isolamento de micro, pq possibilita selecionar uma colonia isolada, imobilizam as celulas

Sobre as tecnica de isolamento apresentadas em aula incorreto afimar que:

a- () Tecnica de estria simples e composta so tecnicas do esgotamento do inoculo

b- () O espectrofotmetro utilizado para determinao indireta da massa celular por densidade otica

c- () A tcnica de filtrao importante para concentrar a amostra

d- () Spread plate um mtodo de semeadura em profundidade e Pour plate um mtodo de semeadura por espalhamento

Srgio calculou a densidade populacional de uma amostra inicial, e para isso obteve a contagem de 190 colonias na diluio 10-4. Qual a quantidade aproximada da amostra inicial

a- () 1.900

b- () 190.000

c- () 19.000

d- () 1.900.000

Assinale a alternativa correta

a- () Cultura pura- uma cultura de clulas gentica e morfologicamente idnticas.

b- () Colonia- Agregado de clulas idnticas

c- () Finalidade das diluies seriadas: aumentar do numero de colnias at um valor onde possivel fazer a contagem.

d- () UFC- Unidade formadora de colonial

7- Identificao de Bacterias

Identificao de Bacterias- caractersticas morfolgicas (forma, arranjo das clulas), culturais (aparncia macroscpica em diferentes meio de cultura, ex: pseudomonas); fisiolgicas (metabolitos, enzimas); genticas (filogenia)

Enzimas intra e extracelulares (ligadas a parede exercem sua atividade cataltica fora da clula

Manual de Bergey- identificar bacterias

Provas bioqumicas

Testes IMViC ( Indol:hidrlise do triptofano com formao de uma colorao vermelha no meio, Vermelho de Metila, Voges Proskauer e Citrato)- importantes para diferenciar as bactrias entricas (intestinais) de natureza patognica ou no, que podem estar presentes como contaminantes da gua e dos alimentos

Fermentao de aucares- produo de CO2

Teste da catalase- Peroxido de hidrogenio adicionado a uma cultura catalase positiva, bolhas do gs O2 formam.

Hidrlise do amido- iodo reage com amido formando complexo azul. Amilases degradam formando zonas claras ao redor das colnias.

Assinale a alternativa correta:

a- () Existe Kits miniaturizados de identificao de microrganismos

b- () Os testes I M Vi C correspondem a (Indol, Vermelho de metila, Voges Proskauer, Catalase

c- () No teste de hidrlise de amido a formao do halo de hidrlise corresponde ao resultado negativo

d- () Todas as respostas acima esto corretas

Porque os testes bioqumicos so importantes na identificao de bactrias?

a- () Porque o metabolismo microbiano gera produtos que so excretados pelas bacterias no meio de cultura

b- () A avaliao da presena de um conjunto de enzimas pode ser caracterstica de um nico grupo.

c- () Os resultados podem ser comparados com o Manual de Bergey

d- () Todas as respostas acimas esto corretas

8- Anlise Bacteriologica da Agua

Determina a presena de micro de origem fecal (dejetos humanos e animais)

Bacterias Coliformes: Bastonetes, Gram negativos, no formardores de esporos, aerbios, ou anaerbios facultativos, com capacidade de fermentar a lactose com a produo de acido e gs em 48 horas a 35C Ex: escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter

Coliformes Termotolerantes (fecais) intestinos de animais homeotrmicos. Fermentam lactose com a produo de gs a 44,5graus por 24 horas. E. coli

Teste presuntivo: pesquisa de coliformes fecais, termotolerantes e E. coli

Usar pagina 52 apostila

Qual a principal diferena entre as bactrias coliformes e as coliformes termotolerantes

a- () As coliformes so gram negativas e as termotolerantes gram positivas

b- () Apenas as termotolerantes fermentam a lactose, exemplo da E. coli

c- () As termotolerantes possui habitat exclusivo de intestino de animais homeotermicos

d- () as coliformes fermentam a uma temperatura maior e com menor tempo do que as termotolerantes.

Sobre todo o processo de analise bacteriologia da gua correto afirmar que:

a- () Bacterias Coliformes so Bastonetes, Gram positivos, formardores de esporos, aerbios, ou anaerbios facultativos, com capacidade de fermentar. Ex: escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter

b- () Coliformes Termotolerantes (fecais) habitam intestinos de animais heterotrmicos. Fermentam lactose com a produo de gs a 44,5graus por 24 horas

c- () Teste presuntivo pesquisa coliformes fecais, termotolerantes e E. coli

d- () Todas as respostas esto corretas

Sobre todo o processo de analise bacteriologia da gua incorreto afirmar que:

a- () Utiliza o caldo lactosado como meio de incubao durante o teste presuntivo

b- () A tcnica de NMP vai indicar o possvel numero de bactrias do grupo coliforme e qual o numero mais provvel na amostra

c- () A tcnica NMP uma tcnica de anlise lenta, porm muito sensvel. Pode ser utilizada na analise de solos, alimentos, gua.

d- () Todas as respostas esto incorretas

9- Alteraes fenotpicas e genotpicas em Micro

Mutao e Recombinao gera variabilidade gentica. Alterao na sequencia de bases do DNA.

Mutao Induzida: Agentes fsicos Luz UV. Rompe as ligaes de hidrognio que unem a fita dupla de DNA e liga no lugar

Penicillium griseoroseum: luz UV causa mutao modificando a pigmentao dos condios ou na organizao dos conidiforos.

Os mutantes apresentam o gentipo diferente da linhagem parental.

As alteraes genotpicas so alteraes no DNA que podem ser transmitidas de uma gerao para outra.

Modificaes nas condies ambientais podem provocar alteraes fenotpicas que so reversveis.

As colnias no pigmentadas de Serratia marcescens no so consideradas mutantes pq essas colonias apresentam o mesmo gentipo que a linhagem parental, ou seja no houve mutao.

O tratamento com a luz UV reduz o numero de colonias de Penicillium pq a mutao atinge genes que codificam para processos vitais.

Sobre as alteraes fenotpicas e genotpicas nos microrganismo incorreto afirmar que

a- () Os mutantes apresentam o gentipo diferente da linhagem parental.

b- () As modificaes genotpicas so reversveis e as fenotpicas so irreversveis

c- () Modificaes nas condies ambientais podem provocar alteraes fenotpicas

d- () As alteraes genotpicas so alteraes no DNA que podem ser transmitidas de uma gerao para outra.

Assinale a errada:

a- () Mutao espontnea ocorre naturalmente sem adio de um agente mutagnico

b- () A mutao induzida resulta da exposio do microrganismo a um agente mutagnico (Que pode ser fsico , qumico ou biolgico

c- () Crescimento de Serratia marcescens em diferentes temperaturas um exemplo de uma alterao genotpica resultante de uma mudana ambiental.

d- () a luz UV reduz o numero de colonias de Penicillium pq a mutao atinge genes que codificam para processos vitais

Alteraes fenotpicas X Genotpicas, marque a opo correta

a- () fenotpica ocorre na maioria da populao enquanto a genotpica um evento raro

b- () Ambas alteraes so irrevers

c- () Resistencia a antibiticos um tipo de alterao fenotpica

d- () genes normais so herdados pelas geraes subsequentes enquanto genes alterados so expressos em resposta ao ambiente