Ana Patrícia Coimbra e David Cunha

1. Efeito Neuroprotetor do NPY – Ana Carvalho

2. Efeitos de diferentes anti-epiléticos em

murganhos – Inês Morte

3. Papel Neuroprotetor da Adenosina na

Retinopatia Diabética – Joana Vindeirinho

4. Técnicas de imunohistoquímica em

retinas de ratos diabéticos – Gabriel Costa

Efeito Neuroprotetor do NPY

Objetivo: Investigar se o NPY tem um

efeito neuroprotetor contra a

excitotoxicidade do glutamato em células

de retina de rato.

Métodos:

• Isolamento de células de retina de rato;

• Estudo de morte celular

Incorporação de iodeto de propídeo;

Imunocitoquímica.

O que é o NPY?

• Neurotransmissor;

• Péptido constituído por 36 aminoácidos;

• Encontra-se no cérebro e no sistema nervoso autónomo;

• Regula o uso de energia e está envolvido na aprendizagem,

no processamento de memória e na epilepsia;

• Segregado pelo hipotálamo;

• Aumenta a proporção de energia acumulada como gordura e

bloqueia sinais nociceptivos (de perceção de dor) que se

dirigem para o cérebro;

• Diminui os efeitos do glutamato.

O que é o glutamato?

• Neurotransmissor do sistema nervoso, envolvido

na aprendizagem e a memória;

• A sua acumulação pode causar morte celular

(excitotoxicidade);

• Esta excitotoxicidade ocorre, muitas vezes em episódios

de isquemia cerebral e está associada a doenças como esclerose

lateral e doença de Alzheimer.

Isolamento de células de retina

de rato – 9 e 10 de Julho

1. Preparação de meio

Mínimo Essencial Eagle

(MEM);

2. Extração dos olhos dos

ratos Wistar com 6 dias;

3. Dissecação das retinas;

4. Digestão das retinas em

tripsina;

5. Preparação de suspensão

de células;

Isolamento de células de retina

de rato – 9 e 10 de Julho

6. Contagem de células viáveis

com TrypanBlue para cálculo

do número de células na

suspensão celular ;

7. Cálculo do número de poços

necessários para crescer as

células (caixas multiwell de 12

com lamelas);

8. Incubação da cultura durante 8

dias (37ºC e 5% CO2).

Glutamato + NPY

Incubação das células de retina

- Adição de glutamato e NPY às culturas – 16

e 17 de Julho

Concentrações:

NPY- 100 uM

Glutamato- 500 uM

Quantidade adicionada:

NPY- 5uL

Glutamato- 2,5 uL

Incorporação de iodeto de

propídeo

Controlo ~ NPY Glutamato Glutamato + NPY

Imunocitoquímica – 17 de Julho

Controlo ~ NPY Glutamato

Glutamato + NPY

1. Marcadores ‘Hoechst’ e ‘TUJ1’

2. Marcadores ‘Hoechst’ e ‘GFAP’

Controlo Glutamato

3. Marcadores ‘Hoechst’ e ‘ED1’

Efeitos de diferentes anti-epiléticos

em murganhos Objetivo: Determinar os efeitos da

exposição “in uteru” de fármacos

antiepiléticos no desenvolvimento do

cérebro, usando como modelo animal

murganhos CD1.

Método:

• Coloração de corpos de Nissl em fatias de

cérebro de murganho com violeta de

cresil.

Coloração de corpos de Nissl com

violeta de cresil – 11 de Julho

Papel Neuroprotetor da Adenosina

na Retinopatia Diabética: Alterações no Sistema Adenosinérgico

Objetivo: Mostrar se o sistema adenosinérgico

na retina é afetado pela diabetes.

Métodos:

• Extratos proteicos.

O que é a Retinopatia Diabética?

Olho normal Olho com retinopatia

diabética

Retinopatia

Diabética Aumento da

inflamação

Ativação das

microglias

Libertação de

fatores pró-

inflamatórios

Adenosina Inflamação

Adenosina

diminuição

Técnicas de imunohistoquímica em

retinas de ratos diabéticos

Objetivo: Identificar alterações em retinas de

animais diabéticos e o papel do fator de

necrose tumoral.

Métodos:

• Coloração de corpos de Nissl de retinas com

violeta de cresil;

• Imunohistoquímica de cortes de retina de

ratos.

Imunohistoquímica Violeta de Cresil

Cortes da retina de rato

Constituição da retina

1

2

3

4

5

6

7

1. Retina não neural

2. Fotorrecetores

3. Camada Nuclear Externa

(núcleos dos fotorrecetores)

4. Camada plexiforma externa

(sinapses entre bipolares e

ganglionares)

5. Camada nuclear interna

(células bipolares)

6. Camada plexiforme interna

(sinapses entre bipolares e

ganglionares)

7. Células ganglionares

Agradecimentos

• Grupo de Neuroendrocrinologia e

neurogénese do CNC, em especial:

Gabriel Costa

Inês Morte

Joana Vindeirinho

Ana Carvalho

Célia Aveleira

Magda

• Dra. Teresa Girão

Fontes • http://www.flickr.com/photos/mikeblogs/3101400087/ (consultado a 15/07/2012)

• http://143.107.180.237/cbme/index.php/news_site/imagens/biologia__1/ciencias_bio

moleculares__1/glutamato (consultado a 19/07/2012);

• http://pt.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_glut%C3%A2mico(consultado a

19/07/2012);

• http://en.wikipedia.org/wiki/Adenosine (consultado a 19/07/2012);

• Vindeirinho, Joana (2012). “Uncovering the Neuroprotective Role of adenosine in

Diabetic Retinopathy: alterations in the adenosinergic system”(Tese de Mestrado). pp

3 e 4.;