protocolo de imobilização de células

Protocolo para a imobilizao de clulas de A. Succinogenes em Alginato de Sdio

- Para um frasco de 80 mL, com inculo a partir das placas.

1) Retirar os 80mL de meio de cultura que se encontre na parte final da fase exponencial e centrifugar durante 15 min a 1500 rpm.2) Retirar o sobrenadante e passar o pellet para um copo, onde se adicionam 36 mL de uma soluo de Alginato de Sdio a 2.8%, com uma velocidade de mistura suave, at se atingir uma soluo homogeneizada.3) Com uma seringa, deixar cair a soluo preparada em 2) sobre uma soluo em excesso (100 mL) de CaCl2 a 2,0% a partir de uma altura de 4-7 cm. Agitar suavemente durante 20 minutos.4) Decantar e filtrar a soluo, de modo a passar as beads para uma nova soluo de CaCl2 a 0,5%, repetindo-se o processo em 3) (Agitar suavemente durante 20 min.)5) Decantar a soluo e em seguida passar por um filtro, de modo a obter as clulas imobilizadas isoladas, de modo a ser possvel a sua inoculao.