princípios do diagnóstico laboratorial das micoses

Alexandra Carvalho

George

Jéssica Moreira

Nara Leão

Mário Oliveira

Rosa Viana

ColetaTransporteRecebimento

ProcessamentoMicroscopia Culturas

Relato e Análises dos Resultados Interações com Epidemiologistas Manutenção de Amostras e Registros

SIDRIM & ROCHA, 2004

SIDRIM & ROCHA, 2004

Uso de antifúngicos

Amostras encaminhadas

Suspensão

Ficha padrão

Unhas

Pelos , Cabelos, barba e bigode

Líquidos corpóreos ou lavados

Órgãos

Pele e mucosas

4SIDRIM & ROCHA, 2004

ZAIZ et al., 2010; ANVISA, 2004; VERMELHO et al., 2006

Assepsia

Lâmina dermatológica/bisturisem fio de corte

Jarbas Porto

Debridação da lesão

ZAIZ et al., 2010

Região de alopécia

Auxílio pinça flambada

Lâmpada de Wood

Antibioticoterapia prévia

ZAIZ et al., 2010

Tesouras, limas, alicates de unhas e curetasdermatológicas

Região de progressão econfluência

Swabs ou pipeta Pasteur

Região mais adentro da matrizungueal

ZAIZ et al., 2010

Swab

Exame direto e cultura

Solução salina

Refrigerar

Boca

Ânus

Vagina

Biópsia ou raspagem

Coletar as escamasCuretagem ou biópsia

4 swabs

SIDRIM & ROCHA, 2004

Conjuntiva

Córnea

Tecidos e Órgãos

Raspagem ou debridação

Duas regiões bem demarcadas

Solução salina

Temperatura ambiente por até 24 horas

Punção lombar

3-5ml em tubo estéril

Temperatura ambiente

LCR

Sangue Assepsia

Anticoagulante

MINAMI, 2003

20-30ml do jato intermediário

Frasco estéril

Punção suprapúbica

Urina

Máximo de 2 horas para análise

Fezes

Swab retal

Máximo 2 horas

Cary-Blair

MINAMI, 2003

MINAMI, 2003

Punção

Antissepsia

Refrigeração

Pus e líquidos patológicos

Amostra expectorada naturalmente

Saneamento bucal

Frascos estéreis Escarro

Aspirados Processamento

MINAMI, 2003

Consistência

Coloração

Odor

Aspectos macroscópicos

Características da amostra analisada

Aspectos microscópicos

Detecção e Identificação dos Fungos de Importância Médica. Agência de Vigilância Sanitária. Módulo VII. 2004

Exame microscópico e cultura

Pelos, cabelos, escamas de unha e pele

Centrifugação

Líquor, secreções e fluídos corporais

Semeado por esgotamento

Urina

Digestão com enzimaExame microscópico e cultura

Escarro

Fragmentação → coloração/cultura

Tecidos

Centrifugação e cultura

Sangue

Pelos, pele, unha, escarro,exsudatos espessos eoutros materiais densos

É um reativo que clarifica e digere o material clínico

Fonte: MEDRANO, D. J. A. Perfil de sensibilidade de cepas de Coccidioides posadasii a associação de drogas antimicrobianas. Universidade

Federal do Ceará - Programa de Pós-graduação em Ciências Medicas (Tese). Fortaleza, 2010. 156 p.

Coccidioides sp.

Lactofenol Fluido de montagem

Azul de algodão Corante

Fonte: MEDRANO, Delia Jéssica Asteta. Perfil de sensibilidade de cepas de Coccidioides posadasii a associação de drogas antimicrobianas.

FORTALEZA. 2010. (Tese) Doutorado em Microbiologia Médica- Universidade Federal do Ceará. 2010.

Líquor, urina, secreções ou exsudatos

Fungos capsulados

Erro frequente:confundir linfócitoscom células deleveduras

Nanquim preto

Criptococccus

Criptococoma.Fonte: <http://anatpat.unicamp.br/nptcripto1c.html#esfregnanquim>.

Gram +Discrimina elementos fúngicos de artefatos existentes emurina, secreções e fezes

Exceção

Aspergillus flavus Cryptococcus neoformans

SIDRIM &ROCHA, 2004

Histoplasma capsulatum

Medula óssea, sangue, aspirados e secreção cutânea

O calcoflúor white (CFW) é um agente clareador – celulose e quitina

Utilizado em combinação com o KOH

DANIELLE L. H.; MARYAM Gerami-Nejad; CASSANDRA Kistler-Anderson; CHERYL A. Gale. Hyphal Guidance and Invasive Growth

in Candida albicans Require the Ras-Like GTPase Rsr1p and Its GTPase-Activating Protein Bud2p. American Society for Microbiology. 2005

Candida albicans

Tinha nigra. Disponível em:<http://anatpat.unicamp.br/lampele2a.html>.

Avaliação dos padrões de reações teciduais

Cora o tecido – ressalta a morfologia fúngica

Cromoblastomicose - Phialophora

Aspergilose. Fonte: http://anatpat.unicamp.br/biinflaspergilose1c.html

Impregnação pela prata Cortes de tecido e esfregaço

Aspergilus

Fungos que contêm cápsulamucopolissacarídica

Diferencia o Cryptococcus deoutros fungos similares emtamanho e forma

Núcleos – azul Mucinas - róseo para vermelho

Outros elementos – amarelo

Criptococoma. Fonte: <http://anatpat.unicamp.br/nptcripto1b.html#muci>.

Glicogênio, mucinas neutras,membranas basais e evidenciar amaior parte de fungos eparasitas em tecidos

Produz artefatos facilmenteconfundíveis com Histoplasma eEporothrix

Glicogênio, mucina, membranabasal, fungos - vermelho

Núcleos - azul

C. neoformans

FONTE: http://www.ijpmonline.org/viewimage.asp?img=IndianJPatholMicrobiol_2011_54_1_216_77417_u5.jpg

Evidencia a parede celularfúngica por reagir com pigmentosde melanina, bem como grânulosargentafins

Núcleos – rosa Grânulos argentafins – preto

C. neoformans

Pelos, unhas, escamas de pele Exame microscópico + KOH

LíquorExame microscópio + tintananquim, coloração de gram,coloração de Giemsa ou panótica

Fluidos ocularesExame microscópico com KOH oucom coloração de gram

Sangue ,medula óssea

ZAITS

1-Exame microscópico + KOH, 2 - Exame microscópio + tinta nanquim, 3 -Exame microscópio com coloraçãode gram, 4 - Exame microscópico com coloração de Giemsa ou panótica

Detecção e Identificação dos Fungos de Importância Médica. Agência de Vigilância Sanitária. Módulo VII. 2004

Aspectos micro e macromorfológicos

Isolamento

Manutenção Estocagem

Enriquecimento

Estruturas de ornamentação e

frutificaçãoCor verso/reverso

Para a cultura e isolamento primário de fungos, é necessário autilização de dois meios de cultura

A seleção do tipo de meio é feita de acordo com a experiênciaclínica do analista + dados clínicos repassados pela equipe médica

Amostra semeada na superfície dos meios de cultura

Inoculação – alça de níquel-cromo ou pipeta Pasteur

O material não deve ser colocado em profundidade no ágar

Temperatura de incubação para todas as amostras

Secreção respiratória

Líquor

Urina

Fluidos corporais

Swabs

Pele, pelos e escamas

Tecidos

Sangue

Fluidificação, centrifugação -sedimento

Centrifugação - sedimento

Centrifugação - sedimento

Centrifugação - sedimento

Centrifugação - sedimento

Nenhum

Fragmentação-maceração-imprint

Semeadura - esfregaço

Pus, secreções de abscesso Nenhum

Aspergillus glaucus

Cultivo primário de fungos

Dextrose Peptona

Leveduras

Infusão de coração,cérebro, peptona,sais, glicose, sanguee clorofenicol

Sporothrix schenckii

Isolamento de fungos patogênicos, não-patogênicos e dermatófitos

Blastomyces dermatitidisHistoplasma capsulatum

Gênero Microsporum

Estruturas de frutificação

M. Audoinii → Microsporum

Diferencia

Produção de clamidosporos

M. canis

Meio enriquecido

Estruturas de frutificação e ornamentaçãoMel de abelhasFarinha de trigoSolução de leite

M. canis

Estruturas de frutificação e ornamentação

Microcultivo

Candida albicans

Meio enriquecido

Seletivo

Antibióticos

Fungos inibidos clorofenicol:Cryptococcus neomorfans,Trichosporon beigelli, espécie deCandida e Aspergillus

Cloranfenicol Cicloeximida

Farinha de soja + glicose

Microsporum canis

Pigmento avermelhado

Estruturas de frutificação

Trichophyton rubrum – demais espécies

Diferencia

Fubá de milhodextrose

Trichophyton

Diferenciar

T. mentagrophytes T. rubrum

Hidrólise da ureia + Hidrólise da ureia -

Leveduras dos filos Ascomicotina e Basidiomicotina

Peptona, Glicose, NaCl,Fosfato de potássio,monobásico, Fenolvermelho, ureia

Promove o crescimento de fungos lipofílicosMalassezia furfur

ASDAntibióticosÓleo de oliva

Bili de boi

Malassezia sp

Identificação e diferenciação

Candida de interesse médico

PeptonaMistura

cromogênicaCloranfenicol

Cultivo em lâminaestudar aspectos microscópicoscaracterísticos

Micélio vegetativo e micélioreprodutivo ou de frutificação

SIDRIM & ROCHA, 2004

Tamanho

Bordas

Textura

Relevo

Pigmentação

SIDRIM & ROCHA, 2004

Hifa

Conidióforo

Conídeos

Clamidosporos

Outras características

Coccidioidis sp.

Algodonosa, branca ouacinzentada, reverso creme -amarronzado ao envelhecer

Hifa hialina, septado com artroconídios ede parede celular espessa

Trichophyton verrucosum

Glabrosa a velutosa, relevo rugoso, branco-amarelo ocre.

Presença de cadeias formadas por clamidoconídios grandes.

Epidermophyton floccosum

Algodonosas, com relevo umbilicado, pulverulenta

Macroconídeos em cacho

Paracoccidiodes brasiliensis

Endurecida,franjas nas bordas, decentro elevado, irregular e com asuperfície de cor branca

Célula com múltiplos brotamentos

Trichophyton mentagrophytes T. rubrum

Não perfuraPerfura o pelo radialmente

T. mentagrophytes

T. rubrum

Meio vermelho

Demonstração de elementosfúngicos em tecido

Diagnóstico de micosessubcutâneas e sistêmicas

Auxílio diagnóstico

Tinea capitis

Pitiríase versicolorEritrasma

Corynebacterium minutissimum Fluorescência vermelho-coral.

Trichophyton T1Ácido casamínico (sem vitaminas), Fosfatomonopotássico, Sulfato de magnésio,Dextrose

T2 T1+inositol Requerimento vitamínico

T6

T3

T4

T5

T7

T1+inositol+tiamida

T1+tiamida

T1+ácido nicotínico

T. verrucosum

T. tonsuras de T. violaceum

T. equinum

Nitrato de amônio, Fosfatomonopotássico, Sulfato demagnésio, Dextrose

Requerimento vitamínico

Trichophyton - T. megninni de T. rubrum

T6 + sol. de histidina

Meios sem inoculação

SIDRIM & ROCHA, 2004

SIDRIM & ROCHA, 2004

SIDRIM & ROCHA, 2004

Alçada de colônia isolada

Suspensão em 5 ml de soro ou plasma

Incubar a 37°C

Por 3h

Depositar uma gota da suspensãosobre lâmina e cobrir com lamínula

Examinar ao microscópio óptico A presença de tubo germinativo

Álcoois, proteínas e aminoácidos– fontes de nitrogênio - meioisento de nitrogênio

Levedura irá assimilar e crescerem volta de determinadasfontes

Pelo halo de turvação resultantedo crescimento

Maior sensibilidade

Reações sorológicas

Reações sorológicas

Epidemiologia e monitorização – Diagnóstico?

Eficiência relacionada à: sensibilidade, especificidade ereprodutibilidade

Antígenos – extratos brutos – conferem maior positividade – reatividade cruzada – componentes antigênicos comuns

glicoproteína de 43 kDa- Ag imunodominante

Positivo para 1/32

elevada sensibilidade e especificidade variável

Boa correlação com a clínica

Reatividade cruzada –histoplasmose, candidíase edoença de Jorge Lobo

Identificação de fungos a nível de espécie

Diagnóstico precoce de infecções fúngicas invasivas

Especificidade e sensibilidade, rapidez

Detecção e Identificação dos Fungos de Importância Médica.

Agência de Vigilância Sanitária. Módulo VII. 2004

SIDRIM, J. L. C.; ROCHA, M. F. O. Micologia Médica à luz de

autores contemporâneos. 2ª. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan,

2004

ZAITZ, C.; MARQUES, S. A., RUIZ, L. R. B.; FRAMIL, V. M. de

S. Compendio de Micologia Médica. 2ª ed. Guanabara Koogan. 2010

LACAZ