image-pro ® plus – medições histólógicas mais comuns felipe welter langer – acadêmico de...
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Image-Pro® Plus – Medições Histólógicas mais
comuns
Felipe Welter Langer – Acadêmico de Medicina da Universidade Federal de Santa Maria
Santa Maria, 13 de dezembro de 2012
Aspectos gerais da medição histológica
• Parte importantíssima do processo de análise histológica• Hardware utilizado (mouse, notebook, precisão)• Pressa x qualidade de medição• Vários parâmetros passíveis de análise (área, comprimento, número de células, espessura epitelial, ...)•Inúmeros softwares disponíveis
Image-Pro® Plus
•Calibragem (4x, 10x, 40x)•Medição de área
•Medição de comprimento•Contagem celular manual•Exportação dos dados para
Excel
Princípios gerais de operação do software
•Comparação: todas as medidas são feitas com base em uma calibragem inicial, a qual existe para que o número de pixels que selecionarmos tenha uma correspondência morfométrica (milímetros, micrômetros, ...)
•Calibragem é feita usando-se fotografia de régua milimetrada (mostrada a seguir)
Princípios gerais de operação do software
* Essa será nossa imagem padrão para calibragem, utilizada em diferentes aumentos conforme a necessidade!
•Corresponde a uma fotografia de régua milimetrada
•1 mm = 1000 µm
1 mm
Calibragem no Image-Pro Plus•Uma calibragem necessária para cada aumento (4x, 10x, 40x)•Para cada aumento, uma imagem de régua a ser aberta (mesma imagem, diferentes aumentos)
4x 10x 40x
1 mm 0,9 mm 0,2 mm
Calibragem no Image-Pro Plus2º passo: abrir imagem da régua no aumento selecionado (no exemplo, 4x)File -> Open -> Selecionar imagem na pasta correspondente
Calibragem no Image-Pro Plus6º passo: Clicar em “Image” para selecionar o trecho da imagem a ser medido
Calibragem no Image-Pro Plus7º passo: Selecionar o trecho a ser medido e inserir a medida correspondente EM MICRÔMETROS* Para maior precisão, ampliar imagem da régua
Calibragem no Image-Pro Plus
•Para aumentos de 10x e 40x, o processo é o mesmo, só atentando para alterar valor de micrômetros na hora de salvar a calibragem!
•Uma vez feitas as calibragens, é possível iniciar as medidas.
Medidas no Image-Pro Plus1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)• Abrir a imagem a ser medida (File -> Open ou ctrl + O)
Medidas no Image-Pro Plus1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)* No ícone “Spatial Calibration”, selecionar aumento em que foto foi tirada (após
calibrado o programa)
Medidas no Image-Pro Plus1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)* Clicar em “Manual Measurements” e selecionar “Create click and drag feature”
Medidas no Image-Pro Plus1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)*Clicar na imagem e arrastar até atingir ponto desejado
Medidas no Image-Pro Plus1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)
• Processo se repete para as próximas medições, sendo que as novas medidas aparecerão abaixo da primeira (L1) na aba “Features”
• Para exportar dados, clicar na aba “Input/Output” (a ser abordado posteriormente)
Medidas no Image-Pro Plus2) Área (de glomérulo, ilhota, ...)• Mesmos procedimentos iniciais, modificando-se a opção selecionada da aba
“Features” (Create polygon feature)
Medidas no Image-Pro Plus2) Área (de glomérulo, ilhota, ...)
• Há dois modos de se medir área através da ferramenta selecionada:
a) Seleção com um único clique contínuo (arrastando-se o mouse sem soltá-lo)
b) Seleção clicando-se várias vezes em torno da imagem
• Em ambas, após o fim da seleção, clica-se com o botão direito do mouse para concluir a área a ser medida
Medidas no Image-Pro Plus3) Contagem celular
• Na maior parte das vezes, usa-se uma “Grid Mask” para realizar as medições, que é conjunto de linhas, pontos ou formas aplicado sobre a imagem original
• Diferentes Grid Masks podem ser utilizadas, a critério da preferência do pesquisador
• Objetivo do uso de Grid Masks: definir, de forma aleatória, áreas cujos núcleos serão contados
Medidas no Image-Pro Plus3) Contagem celular• Exemplo de Grid Mask para contagem de núcleos: distribuição de
retângulos em 4x4• Após abrir janela de Grid Mask, selecionar “CircConc.grd” e definir
tamanho adequado em “Spacing” na aba Grid
Medidas no Image-Pro Plus3) Contagem celular• Clicar em Apply e não fechar a janela (caso contrário, grid
desaparecerá)
Medidas no Image-Pro Plus3) Contagem celular• Para não “se perder” na contagem: usar a “Create polygon feature”
(mesma da medição de área) e clicar sobre cada núcleo contado
Medidas no Image-Pro PlusExportando os dados
• Manual measurements -> aba “Input/Output” -> Selecionar “Data to ouput: Features” e “Output data to: File...” e clicar em “Export now”
Medidas no Image-Pro PlusExportando os dados
• Após selecionar a pasta de destino e salvar, o arquivo aparecerá da seguinte maneira:
Medidas no Image-Pro PlusExportando os dados
• Como se vê, os dados estão desalinhados, e somente um deles nos interessa, a área
• Logo, copiaremos somente o valor da área e colaremos em uma tabela do Excel
• O processo se repete para cada medição feita
• DETALHE IMPORTANTE: os pontos dos números precisam ser trocados para vírgulas!
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