diagnóstico microbiológico

Coleta de material clínico para Coleta de material clínico para diagnóstico microbiológicodiagnóstico microbiológico

Profa. Camila CoelhoProfa. Camila Coelho

Universidade Federal do CearáUniversidade Federal do CearáFaculdade de Medicina de SobralFaculdade de Medicina de SobralMicrobiologia MédicaMicrobiologia Médica

Coleta de material clínico

• O material colhido deve ser representativo do

processo infeccioso investigado

• Melhor sítio da lesão

• Evitar contaminação com as áreas adjacentes

Coleta de material clínico

• Coleta ou transporte inadequados:

- Falhas no isolamento do agente etiológico

- Favorecer o desenvolvimento da microbiota

contaminante

• Tratamento inapropriado

Recomendações para a coletaRecomendações para a coleta• Colher antes da antibioticoterapia, sempre que possível;

• Instruir claramente o paciente sobre o procedimento;

• Observar a anti-sepsia na coleta de todos os materiais clínicos;

• Colher do local onde o microrganismo suspeito tenha maior probabilidade de

ser isolado;

Recomendações para a coleta

• Considerar o estágio da doença na escolha do

material.

Ex: patógenos entéricos, causadores de diarréia,

estão presentes em maior quantidade e são mais

facilmente isolados durante a fase aguda ou

diarréica do processo infeccioso intestinal.

Recomendações para a coletaRecomendações para a coleta

• Quantidade suficiente de material deve ser coletado

para permitir uma completa análise microbiológica.

Caso a quantidade seja pequena, priorize os exames;

• O pedido do exame deve conter dados como idade,

doença de base e indicação do uso de antibióticos.

Biossegurança

• Equipamentos de proteção individual (EPIs) e coletiva (EPCs)

Biossegurança

• Frascos de coleta

Estéreis!Estéreis!

Identificação amostra / pacienteIdentificação amostra / paciente

• Especificar o que se pretende isolar: aeróbia, anaeróbia, fungos, micobactérias...

• Relatar pesquisa de microrganismos não usuais

• Nome e idade do paciente;• Hora e local da coleta;• Anotar uso de antibióticos;• Possível suspeita clínica

Transporte das amostrasTransporte das amostras• Meios para transporte

• Exemplos:

Transporte de amostras

clínicas para o laboratório

Meios inertes:

Preservam viabilidade

Evitam proliferação

Meio Stuart ou Amies:Meio Stuart ou Amies: bactérias bactérias aeróbias ou anaeróbias facultativas aeróbias ou anaeróbias facultativas

((Neisseria, Streptococcus, Neisseria, Streptococcus, enterobactérias)enterobactérias)

Meio de Cary-blair: Meio de Cary-blair: enteropatógenos enteropatógenos fezes (fezes (Campylobacter, Yersinia, Vibrio Campylobacter, Yersinia, Vibrio

choleraecholerae) e anaeróbios) e anaeróbios

Coleta microbiológica: Material ClínicoColeta microbiológica: Material Clínico

• Quais tipos?Não estéreis – Amostras do trato respiratório superior – Amostras de fezes– Amostras de urina– Secreções genitais– Feridas e abscessos– Pele, pêlos e unha– Secreção de ouvido– Secreção ocular

• Quais tipos?Estéreis– Líquidos orgânicos

• Pleural• Peritoneal• Pericárdico• Medula óssea• Cefalorraquidiano (líquor)• Sangue

Coleta microbiológica: Material ClínicoColeta microbiológica: Material Clínico

Coleta de amostras do trato respiratório Coleta de amostras do trato respiratório superiorsuperior

• SECREÇÃO DE OROFARINGE

TRANSPORTEColocar swab em meio

Stuart ou AmiesAcondicionar Tº ambiente

até 6hColetar outro swab p/ confecção esfregaço

MICRORGANISMOS ENVOLVIDOSStreptococcus pyogenes,

Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Staphylococcus aureus,

enterobactérias e BGNNF.

• ASPIRAÇÃO DO SEIO MAXILAR

Coleta de amostras do trato respiratório Coleta de amostras do trato respiratório superiorsuperior

• AMOSTRA DE ESCARRO

• ASPIRADO TRAQUEAL– Obtido de pacientes UTI com uso de aparelhos de respiração mecânica– Seguir técnica de aspiração asséptica com sonda de aspiração

• Amostras questionáveis: dificuldade de avaliação do patógeno principal!

Coleta de amostras do trato respiratório Coleta de amostras do trato respiratório inferiorinferior

MICRORGANISMOS ENVOLVIDOS

Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, S.

aureus, enterobactérias, BGNNF, Mycoplasma

pneumoniae, Chlamydia spp., Mycobacterium tuberculosis

• LAVADO BRONCOALVEOLAR

• Transporte e acondicionamento• Temperatura ambiente (25-28ºC) dentro de 2h após a coleta• Refrigerar (2-8ºC) até 12h

Coleta de amostras do trato respiratório Coleta de amostras do trato respiratório inferiorinferior

Injeção de 100ml de solução fisiológica estéril utilizando o canal do broncoscópioApós 3 a 5 minutos, recuperar por aspiração

um volume de no mínimo 40%

• Material clínico– Secreção ocular– lentes de contato– solução de limpeza

• Coleta e transporte

Coleta de secreção ocularColeta de secreção ocularMICRORGANISMOS ENVOLVIDOS

Conjuntivites bacterianas mucopurulentas: Pseudomonas

aeruginosa, Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae, Neissseria

gonorroheae e Chlamydia trachomatis.

Ceratite: Fusarium solani

• SECREÇÃO DE OUVIDO EXTERNO/MÉDIO– Anti-sepsia ouvido externo anti-séptico/solução fisiológica estéril– Aspiração / swab

• TRANSPORTE– Aspiração: 25-28°C por até 2h– Swab meio Amies: 25-28°C até 6h

Coleta de secreção do ouvidoColeta de secreção do ouvido

MICRORGANISMOS ENVOLVIDOSOtite média :Streptococcus

pneumoniae, Haemophilus influenzae / Staphylococcus aureus e

enterobactérias. Otite externa: Pseudomonas aeruginosa

Coleta de fezes (coprocultura)Coleta de fezes (coprocultura)• Coleta

• Principais conservantes– Glicerina tamponada: Salmonella spp. e Shigella spp.– Cary-Blair:

MICRORGANISMOS ENVOLVIDOSAgentes de gastroenterites:

Salmonella spp., Shigella spp., alguns sorotipos de Escherichia

coli e Campylobacter

1 a 2ml fase diarréica

• Transporte e acondicionamento– Fezes sem conservante temperatura 25-28°C / 1h– Fezes com conservante refrigeradas 2-8°C / 12h

• Atenção!!!: amostras não aceitáveis– Amostras sem conservantes obtidas há mais de três horas– Mistura de várias amostras colhidas no mesmo dia– Fezes líquidas colhidas ou enviadas em fraldas– Amostras de fezes contaminadas com urina

Coleta de fezes (coprocultura)Coleta de fezes (coprocultura)

Coleta de urinaColeta de urina• Amostra de urina de jato médio

• Amostra de urina de qualquer jato– Obtida com auxílio de saco coletor– Higienização / colocar saco coletor de forma asséptica– Laboratório recebe saco coletor fechado

MICRORGANISMOS ENVOLVIDOSEnterobactérias: Escherichia coli,

Klebsiella pneumoniae, Proteus spp., Enterobacter spp.

Cocos Gram + : Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus spp.

• Urina coletada por punção suprapúbica

• Volume

• Transporte e acondicionamento– 25-28°C processadas até 2h– Refrigeradas (2-8°C) até 12h / conservante (ácido bórico): 25-28°C até 6h

Coleta de urinaColeta de urina

Pouco utilizada: crianças até 2 anosColher por punção vesical

(agulha e seringa)

Cultura: 2mlUrinálise: 10ml

• SECREÇÃO VAGINAL E CERVICAL

• SECREÇÃO URETRAL

Coleta de secreções genitaisColeta de secreções genitais

solução fisiológica: leveduras e tricomonas

solução fisiológica:

leveduras e tricomonas

• AMOSTRA PARA PESQUISA DE ESTREPTOCOCO BETA –HEMOLÍTICO DO GRUPO B

• Transporte e acondicionamento– 25-28°C: processadas em até 2h– Swab em meio de transporte: 25-28°C por até 6h

Coleta de secreções genitaisColeta de secreções genitais

Sem espéculo

terço distal da vagina

Amostra anorretal

Coleta de secreções genitaisColeta de secreções genitais

Infecções do trato genital/ manifestações clínicas

Agentes etiológicos

Vaginite Candida albicans (secreção espessa, esbranquiçada, prurido perivaginal); Gardnerella

vaginalis; Mycoplasma hominis

Cervicite - corrimento Neisseria gonorroheae; Chlamydia trachomatis

Doença inflamatória pélvica (DIP) N. gonorroheae, C. trachomatis, anaeróbios, bacilos gram negativos, Streptococcus e Micoplasmas

Uretrite – corrimento uretral, disúria N. gonorroheae, C. trachomatis, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum

Epididimite - dor N. gonorroheae, C. trachomatis, enterobactérias, Staphylococcus

Prostatite – disúria e polaciúria. Pode ocorrer bacteriúria persistente em

prostatites crônicas

Enterobacactérias, Staphylococcus, Streptococcus

Coleta de líquidos orgânicosColeta de líquidos orgânicos

• Materiais clínicos– Líquido pleural

– Líquido peritoneal

– Líquido pericárdico

– Líquido sinovial

– Medula óssea

– Líquido cefalorraquidiano

• MEDULA ÓSSEA

• Transporte e acondicionamento– Amostra mantida a 25-28°C por até 6h

Coleta de líquidos orgânicosColeta de líquidos orgânicos

• LÍQUIDO CEFALORRAQUIDIANO (LÍQUOR)– Meningites: bacterianas, virais e fúngicas

Coleta de líquidos orgânicosColeta de líquidos orgânicos

Microrganismo Faixa etáriaEscherichia coli, Streptococcus agalactiae, Listeria monocytogenes, herpes simples vírus 2

Recém-nascido

S. agalactiae. L. monocytogenes, E. coli < 2 meses

Vírus, Haemophilus influenzae, S. pneumoniae, Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae.

< 10 anos

Vírus, N. meningitidis Adulto jovem

S. pneumoniae, N. meningitidis, vírus Adulto

S. pneumoniae, bacilos gram negativos, L. monocytogenes

Idoso

Cryptococcus neoformans, L. monocytogenes Pacientes imunodeprimidos

• Coleta

• Transporte e acondicionamento– Frasco estéril a 25-28°C por até 2h– Volume: 1-2 ml

Coleta de líquidos orgânicosColeta de líquidos orgânicos

• LESÃO ABERTA

• ABSCESSO FECHADO

Coleta de feridas, abscessos e biópsiaColeta de feridas, abscessos e biópsia

Fazer anti-sepsia localAspirar secreção com agulha e seringaNão usar swab !

Não é recomendada coleta de lesões secas ou crostasDescontaminar a região c/ solução fisiológica, álcool 70%, solução de povidona-iodoColetar da região mais profunda e purulenta

MICRORGANISMOS ENVOLVIDOSStreptococcus pyogenes, S. aureus,

Enterobactérias, Pseudomonas aeruginosa, entre outros

• FERIDA DE QUEIMADURA

• PÚSTULA E VESICULA

Coleta de feridas, abscessos e biópsiaColeta de feridas, abscessos e biópsia

Desbridamento e descontaminação da lesãoFragmento de tecido (biópsia): ideal para culturaColetar em swab estéril com meio de transporte

Selecionar pústula intactaFazer anti-sepsia e puncionarSe a lesão for seca, passar swab estéril firmemente sobre a lesão

• Biópsia

• Transporte e acondicionamento– Swab com meio de transporte: 25-28°C até 6h– Aspirados (agulha e seringa): 25-28°C por 2h – Biópsia: 25-28°C por 2h

Coleta de feridas, abscessos e biópsiaColeta de feridas, abscessos e biópsia

Enviar em frasco estéril. Não aceitar amostras em formol!

• ESCAMAS DE PELE

• PÊLOS E CABELOS

Coleta de pele, pêlos e unhasColeta de pele, pêlos e unhas

Cabelo: Retirar cabelos da região de alopécia com pinça flambada

Pêlos c/ lesões inflamatórias: fazer antibioticoterapia prévia

Dermatofitoses

Pitiríase versicolor

• UNHAS

• Transporte e acondicionamento– 25-28ºC: até 2h– Refrigeradas: até 12h

Coleta de pele, pêlos e unhasColeta de pele, pêlos e unhas

Várias unhas lesionadas: coleta individual!

Realizar coleta com tesouras, alicates e curetas dermatológicas estéreis

Onicomicoses:Lesão a partir do limbo da unha: dermatofíticaLesão a partir do leito ungueal: leveduras

Coleta de sangue para hemoculturaColeta de sangue para hemocultura

• Hemocultura : 2 frascos

• Número de amostras

Adulto: 2 ou 3 hemoculturas (24h)

Crianças: 1 hemocultura

• Volume de sangue e intervalo de coleta

– Adultos: em cada punção, de 8 a 10ml de sangue para cada frasco

– Crianças (de 1 a 6 anos): 1 a 5ml de sangue em frascos pediátricos

– Recém-nascidos: 0,5 a 1ml por punção venosa

MICRORGANISMOS ENVOLVIDOSGRAM + : Staphylococcus aureus,

Staphylococcus coagulase negativo, Enterococcus spp., Streptococcus

spp. GRAM - : Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonella

spp., Enterobacter spp., Pseudomonas aeruginosa,

FUNGOS: Candida spp., Cryptococcus neoformans, etc.

anaeróbio

aeróbio

• Coleta

Coleta de sangue para hemoculturaColeta de sangue para hemocultura

• Coleta

Coleta de ponta de cateterColeta de ponta de cateterMICROORGANISMOS ENVOLVIDOS

Staphylococcus coagulase negativo, S. aureus, Enterobactérias, Pseudomonas

aeruginosa, Corynebacterium spp., Candida spp.

Fazer anti-sepsia do local que circunda o cateterRemover assepticamente o cateterCortar 5cm da ponta distal e colocar em frasco seco estéril

Transporte (20-25°C): até 1hRefrigerado: até 12h

Tipos de meios:• Caldo BHI (Brain Heart Infusion)

• Ágar sangue: gram positivos e negativos

• Ágar chocolate: fastidiosos

• Ágar Mac Conkey: gram negativos

• Ágar Salmonella-Shigella

• Caldo tetrationato: enterobactérias

• Ágar entérico Hektoen: enterobactérias

Semeadura de material clínicoSemeadura de material clínico

Ágar sangue

Ágar chocolate

Ágar Mac Conkey

Semeadura de material clínicoSemeadura de material clínico

• Ágar CLED (cistina lactose eletrólito deficiente): urina -gram positivos, gram negativos

• Löwestein jensen: micobactérias

• Ágar Sabouraud (pode ser acrescido de cloranfenicol ou cloranfenicol e cicloheximida): fungos

CLED Löwestein jensen Sabouraud