citogenética erlane ribeiro - fmj. citogenética tradicional sangue líquido amniótico vilosidade...

Citogenética

Erlane Ribeiro - FMJ

Citogenética tradicional

• Sangue• Líquido amniótico• Vilosidade coriônica• Pele• Restos ovulares• S. X-frágil• Síndrome com instabilidade cromossômica

(anemia de Fanconi, S. Bloom, S. Robert)

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Indicações para estudo cromossômico

• Suspeita de doença cromossômica• Genitália ambígua• Natimorto sem causa explicável • Mulheres de baixa estatura e amenorréia

primária• MFC no pré-natal• Homens com ginecomastia / microrquidia• Retardo mental não explicável• Estudo do câncer

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População Freqüência (%)

Zigotos 10-30

Embriões pré-implantados 20-25

Natimortos (>28 semanas) 5-6

Nativivos 0,5-1

Mortes infantis 5-7

Malformação congênita 4-8

Cardiopatia 13

Retardo mental, exceto X frágil 3-35

Infertilidade masculina 2-15

Aborto de repetição (>3) 2-5

Modificado de Mange & Mange, 1999.

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ABREVIATURA SIGNIFICADO EXEMPLO

del deleção 46 XX del (5p)

+ ganhp 47 XY +21

- perda 45 XX, -14, -21, +t(14q21q)

t translocação 46 XX t(2,8)(q21;p13)

r anel 46 X, r(X)

mar marcador 46 XX +mar

der cromossomo derivado Der (1)

dic dicêntrico Dic (X;Y)

i isocromossomo 46 X, i(Xq)

mat origem materna 47 XY, +der (15) mat

pat origem paterna 47 XY, +der (4) pat

inv inversão Inv (5)(p15q21)

fra sítio frágil 46 Y, fra (X)(q27.3)

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Translocações robertsonianas

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Translocações recíprocas

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Deleções

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Duplicações

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Inversões

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Inserções

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Isocromossomos

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Cromossomos dicêntricos

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Cromossomo em anel

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cromátides

metacêntrico submetacêntrico

telômero

satélitepedículo

p

q

centrômero

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Exames invasivos

• Punção de VC– 11-13 sem

• Amniocentese precoce– 12-14 sem

• Amniocentese tradicional– 15-18 sem

• Cordocentese– > 18 sem

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Dificuldades

• Artesanal

• Treinamento de pessoal

• Estudo de células vivas

• Qualidade da coleta

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Insucesso de culturas

• Coleta inadequada– Quantidade insuficiente– Contaminação

• Células inviáveis• Variação na estufa (temperatura ou

CO2)• Reagentes/tóxicos

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Coleta de material

• LA– 2 seringas estéreis e

descartáveis– Mínimo 20 ml– Deixar o material na

seringa– Não usar seringa BD– Consentimento

informado

• PVC– 10 mg de vilo aspirado

em seringa com meio de cultura e heparina

– Consentimento informado

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Coleta de material

• Sangue de cordão– 5 ml em seringa

heparinizada– Manter na seringa– Consentimento

informado

• Restos fetais (aborto)– Coleta de forma

asséptica– Manter em SF estéril

ou meio de cultura– Rotina

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Punção de Vilosidade Coriônica

• Após 20 anos – redução dos problemas

• Menor risco de perda gestacional

• Menor risco de anomalias por disrupção

• Menor contaminação

• Maior confiabilidade

• Melhor qualidade do exame

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Coleta de Líquido Amniótico

• Menor risco de perda fetal

• Melhor qualidade de bandas

• Menor risco de contaminação materna

• Menor risco de pseudomosaicismo

• Maior volume de LA

• Crescimento celular mais rápido

• Sobrenadante utilizado em vários estudos

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FISH

• Alagille• Angelman• CMT I• Cri Du Chat• DiGeorge• HCSR• Ictiose ligada ao X (def.

esteróide sulfatase)• Kallman• Langer-Giedion• Lisencefalia isolada• S Miller-Dieker

• P. Willi• Retinoblastoma• Rubinstein – Taybi• Smith – Magenis• Velocardiofacial• Williams• Wolf-Hirschhorn

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FISH

• Resultado com 24-48 horas

• Identifica 90% das anomalias cromossômicas no pré-natal– 13, 18, 21, X, Y

• Não detecta mosaicismos, translocações

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Citogenética especial

• Análise subtelomérica para regiões associadas ao retardo mental

• Análise centromérica

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Hibridização genômica comparativa (HGC)

• Técnica de citogenética molecular desenvolvida para rastrear ganho ou perda cromossômica em tumores

• DNA teste (verde) hibridiza com DNA referência (vermelho). As imagens dos sinais fluorescentes são capturadas. A razão verde/vermelho é quantificada

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HGC

• Vantagens– Análise de todo genoma em um só teste– Rapidez (até 72 horas)

• Desvantagens– Alto custo– Não detecta mosaicismos, translocações

balanceadas

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