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Avaliação da Resposta Imune Humoral

Considerações gerais

Quem representa a Imunidade Humoral?

O que deve enfocar a avaliação da Imunidade Humoral?

Concentração de Ig séricaNíveis séricos das sub-classesProdução do anticorpoQuantificação de LB

Desenvolvimento Imunológico da Criança

IMUNOGLOBULINAS

0 sem.10 20 30

Nasc.3 6 9

1 ano3 6 9 12

0

20

4060

80

100120

Níveis deimunoglobulinas

em adultos normais

IgGmaterna

IgGfetal

IgM

IgA

Figura cedida pelo Laboratório de Investigação Médica da LIM 56-Faculdade de Medicina da USP

Cinética da Resposta de Anticorpo

T-dependent Ag; Resposta Secundária

* Specificity

• Lag phase• Log phase• Plateau phase• Decline phase

1o Ag 2o Ag

D a y s A f t e r I m m u n i z a t i o n

A b

T i

t e r

Mudanças qualitativa da Resposta 1o and 2o

• Class variation– 1o - IgM

– 2o - IgG, IgA or IgE 1o Ag 2o Ag

Total Ab

IgM Ab

IgG Ab

D a y s A f t e r I m m u n i z a t i o n

A b

T i

t e r

Mudanças qualitativa da Resposta 1o and 2o Responses

• Class variation• Affinity

– Affinity Maturation

1o Ag

D a y s A f t e r I m m u n i z a t i o n

A f

f I n

I t y

2o Ag

IgG AbIgM Ab

High Dose

Low Dose

Eventos Celulares na Resposta 1a. T-dependent Ags

Lag Clonal selection

Log IgM Class switching

Stationary Decline Memory Cell

Pool

IgM

Memory Cells

IgG

1o Ag

Eventos Celulares na Resposta 2a. T-dependent Ags

Lag phase Virgin cells Memory cells

Log phase Pool size IgG, IgA or IgE

Stationary Decline

Sustained production

IgM

Memory Cells

IgG

IgG

Memory Cells

Memory Pool

Virgin B cell

Cinética da Resposta de Anticorpo T-independent Ags

4 Phases IgM

antibody No

secondary response

1o Ag 2o Ag

D a y s A f t e r I m m u n i z a t i o n

A b

T i

t e r

IgM Ab

Concentração de Ig sérica

Quais Imunoglobulina são pesquisadas? Quais métodos são utilizados?

Imunodifusão radial simplesNefelometriaELISAImunoeletroforese

Imunidade HumoralEletroforese de Proteínas

Figura cedida pelo Laboratório de Investigação Médica da LIM 56-Faculdade de Medicina da USP

Imunidade HumoralELISA

Figura cedida pelo Laboratório de Investigação Médica da LIM 56-Faculdade de Medicina da USP

Dosagem das sub-classes de IgG

Porque pesquisar?

Quais as proporções normais? IgG1(70%), IgG2 (20%), IgG3 (7%), IgG4 (3%)

Quais os métodos utilizados? ELISA RIA

Subclasses de IgG

0 6m 1 1 4 6 8 100

20

40

60

80

100

% a

dulto

idade (anos)

IgG1IgG2IgG3IgG4

Oxelius VA, 1974

Avaliação da produção de anticorpos

Objetivo Verificar a funcionabilidade dos

anticorpos produzidos Métodos

Títulos de iso-hemaglutininas Titulação de anticorpos para recall

antigens -adultos Titulação de anticorpos para antígenos

de desafio -crianças

Avaliação da produção de anticorpos

Antígenos empregados no desafio:

Polissacarídeo de S. pneumoniae Polissacarídeo de H. influenzae Vacina SALK Vacina tetânica Obs: soro coletado antes e depois do

desafio

Imunoglobulinas policlonais

Relacionado com os estados das doenças O aumento no soro pode resultar do

decréscimo do catabolismo e aumento da síntese.

Ensaios: Eletroforese da proteína do soro Imunoeletroforese Determinação das imunoglobulinas individuais

ou das cadeias leves das imunoglobulinas

O aumento de IgG tende a predominar nas respostas crônicas e nas doenças hepáticas;

Aumentos de IgA tendem a predominar nas infecções de peles, aparelhos respiratório, intestinal e renal.

A IgM está relacionada às fases agudas das infecções primárias e às infecções intra-uterinas. Na cirrose biliar primária, a IgM está marcadamente elevada, e algumas vezes de forma conjunta com a IgG.

A IgE normalmente encontra-se elevada na asma e em outros quadros alérgicos, especialmente nas crianças.

As infecções bacterianas crônicas cursam com o aumento de todas as imunoglobulinas.

Imunoglobulinas Monoclonais

produto de um único clone de células plasmáticas, produzindo imunoglobulinas de estrutura idêntica.

são chamadas de paraproteínas e podem ser polímeros, monômeros ou fragmentos da molécula de imunoglobulina.

Mieloma múltiplo (neoplasia dos plasmócitos).

Quantificação dos LB

CD19

CD20

CD21

TECNOLOGIA QUE MEDE MÚLTIPLAS CARACTERÍSTICAS EM UMA CÉLULA QUE MIGRA EM FLUXO.

TAMANHO COMPLEXIDADE OU GRANULOSIDADE FLUORESCÊNCIAS

CITOMETRIA DE FLUXO

Forward Angle Light Scatter

FALS Sensor

Laser

90 Degree Light Scatter

FALS Sensor

90LS Sensor

Laser

Laser

Fluorescence Detectors

Freq

Fluorescence

FALS Sensor

Fluorescence detector(PMT3, PMT4 etc.)

CD3+CD8+CD3+CD8-

CD3-CD8+

Ensaios de linfoproliferação com: IL-4 IL-2 POKEWEED PROTEÍNA ESTAFILOCÓCICA

Outros Ensaios

QUANTIFICAÇÃO DAS IMUNOGLOBULINAS

RESPOSTA Ag ESPECÍFICA

QUANTIFICAÇÃO DAS SUBCLASSES DE IgG

RESPOSTA ANTI-PROTEÍNAS: DIFTERIA, TÉTANO

RESPOSTA ANTI-CARBOHIDRATOS: PNEUMOCOCOS, ISOHEMAGLUTININAS

RESPOSTA CONTRA NEOANTÍGENOS

Resumindo..........