apresentação do lcga dez.2012

DESENVOLVIMENTO DE CÉLULAS GERMINATIVAS

DE TECIDO TESTICULAR EQUINO TRANSPLANTADO

EM CAMUNDONGOS

Germ cell development in equine testis tissue

xenografted into mice

Reproduction Researsh, 2006

Pedro Augusto Cordeiro Borges

Introdução

Enxerto de diferentes espécies em camundongos

Eficiência da espermatogênese

* Eficiente * Ineficiente

- Porcos - Gatos

- Bodes - Macacos

-Touros

Honaramooz,Oatley;Snedaker, 2004; Rathi, 2005

Honaramooz, 2002

2

Introdução

Enxerto de tecido testicular equino não relatado

Modelo in vivo - entendimento da espermatogênese

- tratamentos semelhantes

- animais experimentais

- descendência por ICSI

- cavalos valiosos

castração ou morte

(Cochran et al. 1998)

3

Introdução

Gonadotrofinas crescimento e desenvolvimento testicular

Enxerto em camund. Castrado gonadotrofinas endogenas

LH Leyding testosterona Feedback

Diferenças ↓ eficiência da espermatogênese

Suplementação com gonadotrofinas melhorar a espermatogênese

4

Objetivo

Eficiência da espermatogênese

Efeito da administração de gonadotrofinas

5

Material e Métodos

6

Material e Métodos

• Experimento 1

Standardbred

2 semanas Welsh pony

5 mesesWarmblood

10 meses Quarterhorse

12 mesesThoroughbred

4 anos

7

Material e Métodos

• Experimento 1

Remoção da cápsula e do

tecido conjuntivo

1 – 2 mm

Dulbecco’s

Eagle’s

8

Material e Métodos

• Experimento 1

6 semanas

Imunossuprimidos

9

Material e Métodos

• Experimento 1

Anestesiados e castrados Comissão Institucional de

Usos e Cuidados com os

Animais – Universidade da

Pensilvânia

Base

histológica

10

Material e Métodos

• Experimento 2

Shetland pony

8 meses

Thoroughbred

12 meses

14 semanas após

20 semanas

25 semanas após

10 semanas

PSMG 10 UI

hCG 10 UI

11

• Recuperação e analise dos tecidos transplantados

Material e Métodos

Eutanásia • Inalação de CO2

Fixação • Solução de Bouin’s

Banhos • Etanol 70%

Parafina • Histologia

12

Material e Métodos

• Recuperação e analise dos tecidos transplantados

Todos os túbulos seminíferos avaliados

Maturação lúmen e espermatogênese

Células germinativas morfologia e localização

Túbulos degenerados sem distinção de tipos celulares

13

Material e Métodos

• Recuperação e analise dos tecidos transplantados

Tecidos saudáveis x degenerados

Apenas os saudáveis analisados

Camundongo = unidade experimental

Vesículas seminais pesadas secreção de testosterona

14

Análise estatística

NRC-nude e ICR-scid

Chi-square ou Student

ANOVA

SigmaStat 3.0

Média e Desvio

P< 0,05

15

Resultados

16

Experimento 1

17

Resultados

65 % saudáveis

2-4 vezes maior

% d

e

tecid

os s

audáveis

recupe

rados

Idade do doador

Figura 1. Porcentagem de tecidos saudáveis recuperados por doador, 4 ou 8

meses após o enxerto (n=6 receptores por doador)

84,6%

93,8%

56,3%65%

20,3%

18

• Espermatogênese e desenvolvimento dos túbulos seminíferos

Células intersticiais e poucos cordões

Espermatogônias

Tecidos recuperados (4 e 8 meses) pouco desenvolvidos

- 35, 7% cordões túbulos

- 52 % degenerados

- Espermatogônias

- Após 8 meses lóbulos mais aparente

Resultados

19

ResultadosP

orc

enta

gem

de t

úbulo

s s

em

inífero

s

Tempo em meses

Figura 2. A porcentagem de túbulos

seminíferos contendo o tipo de célula

germinativa indicada é demonstrada para o

tecido proveniente do Welsh pony - 5 meses

Espermatidés alongadas

Espermatides arredondadas

Espermatócitos em paquíteno

Espermatogônia

Sem células germinativas

0 – cachos e arranjo em lóbulos

8 – espermatócitos em paquíteno

4,8 0,8 % de túbulos

degenerados

Welsh pony

5 meses

20

Resultados

Figura 3. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Welsh pony – 5 meses),

antes de transplantado (A), apresentando apenas espermatogônias , e recuperado

após 8 meses (B), apresentando espermatócitos em paquíteno.

Welsh pony

5 meses

21

ResultadosP

orc

enta

gem

de t

úbulo

s s

em

inífero

s

Tempo em meses

Figura 4. A porcentagem de túbulos

seminíferos contendo o tipo de célula

germinativa indicada é demonstrada para o

tecido proveniente do Warmblood 10 meses

Espermatidés alongadas

Espermatides arredondadas

Espermatócitos em paquíteno

Espermatogônia

Sem células germinativas

0 – Espermatócitos em paquíteno

4 – Redução significativa

8 – Espermátides alongadas

7,7 1,5 % de túbulos degenerados

Warmblood

10 meses

22

Resultados

Figura 5. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Warmblood– 10 meses),

antes de transplantado (C), apresentando espermatócitos em paquíteno como o

tipo celular mais maduro, e recuperado após 8 meses (D), apresentando

espermátides alongadas.

Warmblood

10 meses

23

Resultados

Porc

enta

gem

de t

úbu

los s

em

inífero

s

Tempo em meses

Figura 6. A porcentagem de túbulos

seminíferos contendo o tipo de célula

germinativa indicada é demonstrada para o

tecido proveniente do Quarterhorse12 meses

Espermatidés alongadas

Espermatides arredondadas

Espermatócitos em paquíteno

Espermatogônia

Sem células germinativas

0 – Espermátides alongadas

4 – Espermatócitos em paquíteno

8 – Retomada da espermatogênese

6,5 2,2 % de túbulos degenerados

Quarterhorse

12 meses

24

Resultados

Figura 7. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Quarterhorse – 12

meses), antes de transplantado (E), apresentando espermatogênese completa e

recuperado após 8 meses (F), apresentando espermatócitos em paquíteno como o

tipo celular mais maduro.

Quarterhorse

12 meses

25

Resultados

Porc

enta

gem

de t

úbu

los s

em

inífero

s

Tempo em meses

Figura 8. A porcentagem de túbulos

seminíferos contendo o tipo de célula

germinativa indicada é demonstrada para o

tecido proveniente do Thoroughbred 4 anos

Espermatidés alongadas

Espermatides arredondadas

Espermatócitos em paquíteno

Espermatogônia

Sem células germinativas

0 – Espermátides alongadas

4 – Redução significativa

8 – Retomada da espermatogênese

46,8 13,9 % de túbulos degenerados

Thoroughbred

4 anos

26

Resultados

Figura 9. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Thoroughbred – 4 anos),

antes de transplantado (G), apresentando espermatogênese completa e

recuperado após 8 meses (H), apresentando espermatócitos em paquíteno como o

tipo celular mais maduro.

Thoroughbred

4 anos

27

Experimento 2

28

Resultados

• Efeito da gonadotrofina nos tecidos enxertados (experimento 2)

- Antes do transplante

Thoroughbred e Welsh pony espermatogônias

Recuperados 8 meses

10 semanas 20 semanas

- 3 tratados com gonadotrofina

- 3 grupo controle

29

• Welsh pony – 8 meses

Resultados

Porc

enta

gem

de t

úbulo

s s

em

inífero

s

Tempo em meses

Figura 10. A porcentagem de túbulos

seminíferos contendo o tipo de célula

germinativa indicada é demonstrada para o

grupo controle e o grupo tratado com

gonadotrofina, com tecidos provenientes do

doador de 8 meses de idade.

Espermatidés alongadas

Espermatides arredondadas

Espermatócitos em paquíteno

Espermatogônia

Sem células germinativas

0 – Gonócitos

8 – Espermatócitos em paquíteno

8 - Espermatides alongadas

30

Resultados

Figura 11. Aspecto histológico do tecido testicular do doador de 8 meses, antes

do transplante (A) e após recuperação (8 meses), para o grupo controle (B) e

para o grupo tratado com gonadotrofina (C).

Antes Tratado - gonadotrofinaControle

31

• Thoroughbred – 12 meses

Resultados

Porc

enta

gem

de t

úbulo

s s

em

inífero

s

Tempo em meses

Figura 10. A porcentagem de túbulos

seminíferos contendo o tipo de célula

germinativa indicada é demonstrada para o

grupo controle e o grupo tratado com

gonadotrofina, com tecidos provenientes do

doador de 12 meses de idade.

Espermatidés alongadas

Espermatides arredondadas

Espermatócitos em paquíteno

Espermatogônia

Sem células germinativas

0 – Gonócitos

8 – Espermatogônias

8 - Espermatócitos em paquíteno

32

Resultados

Figura 13. Aspecto histológico do tecido testicular do doador de 12 meses, antes

do transplante (D) e após recuperação (8 meses), para o grupo controle (E) e

para o grupo tratado com gonadotrofina (F).

33

• Peso das vesículas seminais

177 30.8 mg 4 meses após o transplante

130.9 27.4 mg 8 meses após o transplante

Sem tecidos saudáveis 15.6 2.7 mg

Tecido equino transplantado produção de testosterona

Administração de gonadotrofina sem significância

Resultados

34

Considerações finais

Espermatogênese até meiose

Gonadotrofinas exógenas

Tecido testicular de equinos – modelo – espermatogênese

Fisiologia e Fisiopatologia

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DESENVOLVIMENTO DE CÉLULAS GERMINATIVAS

DE TECIDO TESTICULAR EQUINO TRANSPLANTADO

EM CAMUNDONGOS

Germ cell development in equine testis tissue

xenografted into mice

Reproduction Researsh, 2006

Pedro Augusto Cordeiro Borges