Instituto Federal Goiano câmpus Urutaí.Curso de Agronomia

Disciplina de Fitopatologia

Apresentador: Rudolf schuiling

Abdelnaser Elashrya,1, Sakiko Okumotob, Shahid Siddiquea,1, Wolfgang Koch,David P. Kreild, e, Holger Bohlmanna,*c

IntroduçãoNematoides

Arabidopsis: Reino: PlantaeDivisão: MagnoliohytaClasse: MagnoliopsidaOrdem: BrassicalesFamília: BrassicaceaeGênero: Arabidopsis

Sincicios: Conjunto de células que se fundem, perdendo parte de sua membrana, e formando uma única massa citoplasmática multinucleada.

ObjetivoAnalisar a importância dos aminoacidos AAP

(aminoacido permease) e o LHT (transportadores de lisina/histidina) no crescimento de nematoides em raizes de Arabidopsis.

Materiais e Métodos Plantas de Arabidopsis (col e Ws) foram cultivadas

em meio de Knop 0,2% com 2% de sacarose [REF 39] para experimentos de infecção de nematóides. As sementes foram superfícialmente esterilizado em molho de hipoclorito de sódio 5% por 10 min seguidos por 3 lavagens com água estéril. As placas foram seladas e incubadas em uma câmara de crescimento a 25C com luz de 16 h e 8 h escuro.

Análise estatística de dados microarray

Clonagem de pAAP4::GUS. O plasmídeo final foi transformado em Agrobacterium GV3101 e introduzidos em Arabidopsis usando plantas transformadas [44]. Plantas transformadas de Arabidopsis foram selecionadas em solo por pulverização com BASTA. Um único representante homozigoto foi selecionada e utilizada neste trabalho.

Citoplasma em 15 dpi foram dissecadas das raizes e imediatamenteimersos em solução fria de fixação (63% de etanol, v/v; 2% de formol, v/v). Após 24h, a citoplasma foi incorporada em agarose de baixo ponto de fusão de 4% e seções espessas de 25 mm foram preparadas usando um vibratome. Depois de uma reação de coloração com nitro azul tetrazolium/5-bromo-4-chloro-3-indolylsubstrato de fosfato, secções transversais foram fotografadas usando ummicroscópio invertido.

Os ensaios de nematóides Cistos de H. schachtii cultivadas na mostarda foram colhidos do estoque in-vitro estéril. Oscistos coletados foram embebidos em 3% ZnCl2 aos 25C por 4 dias. Os juvenis coletados foram utilizados para inocular asplântulas de Arabidopsis 12 dias de idade que foram crescendo no meio de Knop de 0,2% (10 mudas/placa). Comprimento de raiz foi estimado na data de inoculação. Cada mutante, foi testado em, pelo menos 3 experimentos independentes. Duas semanas após a inoculação, o número de machos e fêmeas foi contados em cada prato. O nível de patogenicidade foi calculado com base no número de nematóides masculinos e femininos por cm de raiz. Para a análise estatística foi utilizado Centrion STATGRAPHICSXV (versão 15.2.11) para executar uma ANOVA.

Resultados e Discussão

ConclusõesEnquanto o transporte de açúcar em sincícios tem sido intensamente estudada, Não se sabe muito sobre o transporte de aminoácidos em sincícios. Nossa análise mostrou que os transportadores AAP desempenham uma importante função a este respeito, considerando-se a forte expressão em sincícios e o fato de que alguns mutantes individuais tiveram um efeito significativo sobre o desenvolvimento de nemátoides. Uma vez que a especificidade do AAP para amino ácidos é, em certa medida redundante, será interessante estender esta análise para combinações de mutantes simples e combinar isso com uma análise metabólica.

Referencias

OBRIGADO