PROTEÍNASPROTEÍNAS

Albumina do sangue

PROTEÍNASPROTEÍNAS I-Percentagem dos elementos constituinrtesI-Percentagem dos elementos constituinrtes As proteínas possuem os elementos constituintes numa As proteínas possuem os elementos constituintes numa

média de:média de: C = média 52,5 %C = média 52,5 % H = média 6,9 %H = média 6,9 % O = média 21,5%O = média 21,5% N = média 16% N = média 16% S = média 1,35 %S = média 1,35 % O teor médio do elemento N em todas as proteínas de O teor médio do elemento N em todas as proteínas de

origem animal é de 16% e por isso pode determinar-se origem animal é de 16% e por isso pode determinar-se o teor proteico fazendo a determinação do azoto total o teor proteico fazendo a determinação do azoto total expresso em N pela equaçãoexpresso em N pela equação Proteína total (g) =Teor em N x100/16 = Teor em Proteína total (g) =Teor em N x100/16 = Teor em

Nx6,25Nx6,25

PROTEÍNASPROTEÍNAS II-Hidrólise ácidaII-Hidrólise ácida Por acção de uma solução de ácido clorídrico Por acção de uma solução de ácido clorídrico

5,6N, no intervalo entre 105 ºC-110ºC, as 5,6N, no intervalo entre 105 ºC-110ºC, as proteínas sofrem hidrólise libertando os proteínas sofrem hidrólise libertando os aminoácidos constituintes.aminoácidos constituintes.

Os aminoácidos constituintes são depois Os aminoácidos constituintes são depois separados por cromatografia troca-iónica e separados por cromatografia troca-iónica e doseados.doseados.

Por este processo o aminoácido triptofano é Por este processo o aminoácido triptofano é destruído. destruído.

Em vez de se proceder a uma hidrólise total Em vez de se proceder a uma hidrólise total pode, por este processo, fazer-se uma hidrólise pode, por este processo, fazer-se uma hidrólise parcial que permite a determinação da estrutura parcial que permite a determinação da estrutura da proteína.da proteína.

PROTEÍNASPROTEÍNAS III-Hidrólise alcalinaIII-Hidrólise alcalina A hidrólise alcalina origina a destruição dos A hidrólise alcalina origina a destruição dos

amnoácidos cisteína, cistina e arginina eracemiza amnoácidos cisteína, cistina e arginina eracemiza todos os outros aminoácidostodos os outros aminoácidos

IV-Hidrólise enzimáticaIV-Hidrólise enzimática As enzimas proteolíticas ou proteínases As enzimas proteolíticas ou proteínases

catalisam a hidrólise proteicos com libertação ou catalisam a hidrólise proteicos com libertação ou de cadeias poliptídicas ou aminoácidos, a 37ºC e de cadeias poliptídicas ou aminoácidos, a 37ºC e a um pH típico de cada proteína.a um pH típico de cada proteína.

As proteínases são de dois tiposAs proteínases são de dois tipos 1-Endopeptidases1-Endopeptidases 2-Exopeptidases2-Exopeptidases

PROTEÍNASPROTEÍNAS 1-As endopeptidases hidrolisam as 1-As endopeptidases hidrolisam as

proteínas em polipéptidos de tamanho proteínas em polipéptidos de tamanho variável, actuando em ligações peptídicas variável, actuando em ligações peptídicas específicas.específicas.

2-As exopeptidases hidrolisam as 2-As exopeptidases hidrolisam as proteínas libertando aminoácidos, quer proteínas libertando aminoácidos, quer começando pela extremidade começando pela extremidade N-terminalN-terminal ou ou C-terminalC-terminal. .

PROTEÍNASPROTEÍNAS V-Reacções químicas resultantes da presença de V-Reacções químicas resultantes da presença de

certos aminoácidoscertos aminoácidos Nos gruposNos grupos

Fixação de radicais ácidosAcetilaçãoBenzoilaçãoTrif luoroacetilação

Substituição dos H por radicais alifáticos ou aromáticos

Acção do ácido iodoacéticop-cloromercurobenzoatoDinitrofenilaçãoMetilaçãoEtileno-iminação

-SH-Oxidação-COOH-Esterif icação-NH2-Desaminação seguida de diazotação

-NH2-OH-SH

PROTEÍNASPROTEÍNAS O conjunto de reacções químicas permite determinar a O conjunto de reacções químicas permite determinar a

estrutura proteica e estabelecer a relação actividade estrutura proteica e estabelecer a relação actividade fisiológica-estrutura.fisiológica-estrutura.

VI-Reacções corada das proteínasVI-Reacções corada das proteínas 1-Reacção de biureto1-Reacção de biureto 2-Fixação selectiva de corantes2-Fixação selectiva de corantes

2.1 Negro amidado (Amidoschwarz)2.1 Negro amidado (Amidoschwarz) 2.2 Azul de bromofenol2.2 Azul de bromofenol

3-Reacção Xantoproteica3-Reacção Xantoproteica 4-Reacção de Millon4-Reacção de Millon 5-Outras5-Outras

PROTEÍNASPROTEÍNAS

DESNATURALIZAÇÃO PROTEICADESNATURALIZAÇÃO PROTEICA A desnaturalização de uma proteína é a A desnaturalização de uma proteína é a

modificação das suas propriedades físico-modificação das suas propriedades físico-químicas por intermédio dos chamados químicas por intermédio dos chamados Agentes de Desnaturalização.Agentes de Desnaturalização.

Os agentes desnaturalizantes mais comuns Os agentes desnaturalizantes mais comuns são: calor, radiações ultra-violeta, ácidos, são: calor, radiações ultra-violeta, ácidos, bases, sais de metais pesados, solventes bases, sais de metais pesados, solventes orgânicos, ureia e guanidina.orgânicos, ureia e guanidina.

PROTEÍNASPROTEÍNAS Estes agentes destróiem essecialmente as ligações Estes agentes destróiem essecialmente as ligações

hidrofóbicas, por pontes de hidrogénio e ligações iónicas hidrofóbicas, por pontes de hidrogénio e ligações iónicas que se estabelecem para originar as estruturas que se estabelecem para originar as estruturas secondária, terceária e quaternária das proteínas.secondária, terceária e quaternária das proteínas.

A desnaturalização pode ser: A desnaturalização pode ser: 1-Reversível1-Reversível 2-Irreversível2-Irreversível 1-A ribonuclease pode ser desnaturalizada 1-A ribonuclease pode ser desnaturalizada

reversivelmente reduzindo as quatro pontes dissulfureto reversivelmente reduzindo as quatro pontes dissulfureto por acção da ureia a oito grupos tiol.por acção da ureia a oito grupos tiol.

Quando se oxida por meio de oxigénio do ar a enzima Quando se oxida por meio de oxigénio do ar a enzima volta a apresentar a sua actividade normal.volta a apresentar a sua actividade normal.

PROTEÍNASPROTEÍNAS 2-A insulina ao produzir-se a quebra das suas 2-A insulina ao produzir-se a quebra das suas

pontes dissulfureto desnaturaliza-se pontes dissulfureto desnaturaliza-se irreversivelmente.irreversivelmente.

Os principais efeitos da desnaturalização são:Os principais efeitos da desnaturalização são: A) Diminuição da solubilidade no ponto A) Diminuição da solubilidade no ponto

isoeléctricoisoeléctrico B) Perda de actividade biológicaB) Perda de actividade biológica C) Reactividade aumentada dos grupos químicos C) Reactividade aumentada dos grupos químicos

que estavam inibidos pela estrutura terceária da que estavam inibidos pela estrutura terceária da proteínaproteína

PROTEÍNASPROTEÍNAS

D) Aumento dos grupos ionizáveis disponíveisD) Aumento dos grupos ionizáveis disponíveis

E) Aumento da rotação da luz polarizada para a E) Aumento da rotação da luz polarizada para a esquerda (levorotação)esquerda (levorotação)

F) Aumento da assimetria da ,oléculaF) Aumento da assimetria da ,olécula

G) Aumento da susceptibilidade à hidrólise por G) Aumento da susceptibilidade à hidrólise por enzimas hidrolíticasenzimas hidrolíticas

H) Perda de cristabilidadeH) Perda de cristabilidade

I) Cisão de ligação por ponte de hidrogénioI) Cisão de ligação por ponte de hidrogénio