UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ FACULDADE DE VETERINÁRIA BIOTECNOLOGIA DA REPRODUÇÃO ANIMAL

Colheita e Avaliação Seminal

Vicente José de F. Freitas Laboratório de Fisiologia e Controle da Reprodução www.uece.br/lfcr

Plano de Aula

• Apresentar os conceitos e importância da realização da

técnica.

• Apresentar as diferentes técnicas para colheita do sêmen

nas diferentes espécies domésticas.

•  Discutir os diferentes parâmetros seminais para

avaliação.

• Apresentar considerações finais sobre o tema

Conceitos

Sêmen Suspenção celular contendo espermatozoides e fluído secretado pelas glândulas sexuais acessórias

Porção celular Espermatozoides (produzidos nos túbulos seminíferos)

Porção fluida plasma seminal (transporte e proteção dos espermatozoides)

Métodos

• Vagina artificial

• Eletroejaculação

• Excitação mecânica

• Variação conforme a espécie

Vagina artificial •  Corresponde à melhor técnica de colheita, pois simula a cópula natural.

•  Método utilizado para a maioria das espécies (bovinos, equinos, caprinos, ovinos, caninos, entre outros).

•  A vagina artificial é composta por um tubo rígido com válvula, mucosa de borracha, cone flexível e tubo de colheita, recoberto por capa de térmica.

•  Através da válvula do tubo coloca-se a água a temperatura de 39-45°C e regula-se a pressão.

•  A temperatura interna deve estar entre 39 e 42°C.

•  Vantagens: obtêm sêmen de melhor qualidade e com menor risco de contaminação no ambiente.

•  Desvantagem: necessidade de treino para os machos doadores

Vagina artificial - bovino

Vagina artificial

Manequim fêmea viva

Manequim inanimada

Vagina artificial - equino

Vagina artificial

Manequim fêmea viva

Manequim inanimada

Colheita de sêmen no touro

Eletroejaculação •  Método consiste em induzir a passagem de uma corrente alternada

pela medula ao nível da 4ª. vértebra lombar, este estímulo produz a ejaculação.

•  O eletroejaculador é inserido no reto, com eletrodos em forma de anéis ou longitudinais que irão promover a estimulação elétrica.

•  A eletroejaculação é particularmente indicada para colheita de machos de diferentes espécies nos quais a colheita por vagina artificial não é possível.

•  Desvantagens: estresse no animal e maior diluição seminal quando comparado à colheita com vagina artificial (eletroejaculador aumenta a secreção das glândulas sexuais acessórias).

Eletroejaculação

Colheita de sêmen no touro por eletroejaculação: a) limpeza do reto, b) introdução do eletrodo, c) colheita do sêmen com funil acessório.

a b c

Excitação mecânica •  Método utilizado por L. Spalanzani (1780) para a obtenção de sêmen

de cão.

•  A técnica consiste na excitação manual do corpo do pênis.

•  Mais utilizado em caninos e suínos.

•  Suínos → Método da mão enluvada

•  Desvantagens: método restrito a animais mansos e treinados e oferece um risco potencial de contaminação do sêmen por sujidades do ambiente.

Excitação mecânica - canino

Colheita de sêmen no cão: a) início da excitação, b) manipulação contínua, c) desprezo da primeira fração, d) colheita da fração espermática

a b

c d

Excitação mecânica - canino O sêmen canino é composto de três frações distintas:

• 1ª fração: é constituída por um líquido claro, aquoso, que representa o produto de secreção das glândulas uretrais e seu volume pode variar de 0,25 a 5 ml; • 2ª fração: de cor branca e consistência viscosa, contém os espermatozoides e o volume pode variar de 0,5 a 3 ml; • 3ª fração: clara, aquosa, pouco consistente, cujo volume varia de 3 a 30 ml e representa a secreção prostática.

Excitação mecânica - suíno O sêmen suíno é composto de três frações distintas:

•  Fração pré-espermática: translúcida, •  Fração rica em espermatozoides: esbranquiçada e opaca •  Fração pós-espermática: translúcida

Outros métodos de colheita Colheita de sêmen em:

•  Aves – massagem abdominal •  Camundongos – retirada do epidídimo e ducto deferente •  Peixes – massagem abdominal

Avaliação de sêmen 1) Aspecto e volume: – Coloração uniforme e aparência opaca/cremosa (indica alta concentração espermática). – O volume é utilizado para cálculo da dose espermática (estimativa do número total de células). – Volume médio ejaculado: • Bovino: 5 – 8 mL • Ovino: 0,8 – 1,2 mL • Caprino: 0,8 – 1,2 mL • Suíno: 150 – 200 mL • Equino: 60 – 100 mL • Galo: 0,2 – 0,5 mL

Avaliação de sêmen 2) Motilidade e Vigor: – Estimativa subjetiva da viabilidade e qualidade espermática. – Análise realizada em microscópio óptico. – Avaliação pode ser dificultada em altas concentrações espermáticas; – 10 a 20µL de sêmen são colocados entre lâmina e lamínula. – Motilidade: células móveis são contadas e estimado o percentual. – Vigor: velocidade que as células atravessam o campo e formam ondas; • Motilidade média do ejaculado é 70 a 90%; • Vigor é estimado entre 0 a 5.

Avaliação de sêmen 3) Concentração Espermática: – Pode ser determinada por hemocitômetro e espectrofotômetro. – Sêmen deve ser diluído em formol salina ou água par a facilitar a contagem (10X - 100X); – Rotineiramente é utilizada Câmara de Neubauer para contagem celular. – Concentração média espermática milhões/mL : • Bovino: 800 – 2000 x 106 sptz/mL • Ovino: 2000 – 6000 x 106 sptz/mL • Caprino: 2500 – 5000 x 106 sptz/mL • Suíno: 200 – 300 x 106 sptz/mL • Equino: 150 – 300 x 106 sptz/mL • Galo: 3000 – 7000 x 106 sptz/mL

Avaliação de sêmen 4) Morfologia: – Estimativa do percentual de células normais e das patológicas. – Amostra é diluída e conservada em formol salina. – Avaliação através de esfregaço e coloração (Hematoxilina-eosina ou Giemsa, Rosa de Bengala). – 100 a 200 sptz devem ser avaliados. – Espermatozoides morfologicamente normais: • Bovino: 65 – 95% • Ovino: 80 – 95% • Caprino: 80 – 95% • Suíno: 70 – 90% • Equino: 60 – 90% • Galo: 85 – 90%

Classificação das anormalidades espermáticas: • Primárias: associadas a cabeça e acrossomo; • Secundárias: gotas citoplasmáticas; • Terciárias: defeitos de cauda

Avaliação de sêmen 5) Análise Computadorizada de Motilidade: • Sistema de Análise Espermática Computadorizado – CASA – Sistema automatizado (hardware e software) para visualizar e digitalizar imagens sucessivas dos espermatozoides. – Processa, analisa e fornece informações da cinética individual das células e valores estatísticos – Têm sido propostos e aplicados na tentativa de minimizar os efeitos da avaliação subjetiva do sêmen.

Considerações • O método de colheita de sêmen varia de acordo com a

espécie e pode influenciar na qualidade do ejaculado.

• A avaliação seminal é essencial para garantia da qualidade mínima da amostra e posterior fertilidade.

•  Técnicas modernas de avaliação (CASA) podem tornar mais “qualitativa” o exame dos espermatozoides ejaculados.