Watson e Crick

A=T C=G

% d

esn

atu

raçã

o

Temperatura oCT’m

Desnaturação de DNA

Ligação cooperativa

quando rompida o efeito é

marcante.

% d

esn

atu

raçã

o

Temperatura oCT’m

Desnaturação de DNA

Desnaturação em função do conteúdo de GC

%C

G

T’m

Aumento deTemperatura

ou de pH

resulta em

desnaturação

Separando as fitas!

Reassociando

Temperatura e força iônica

Reassociação

Reassociação depende da concentração das seqüências

% r

eass

ocia

ção

Cot

A velocidade de reassociação depende da complexidade do

DNA

% r

eass

ocia

ção

Cot

Três classes de seqüências de DNA

Cot

% r

eass

ocia

ção

O segredo da Vida...

Como copia...

Replicação de DNA

Ligação fosfodiester

A reação de polimerização é feita pela DNA polimerase e necessita de nucleotídeos trifosfatos, uma extremidade “primer” ou iniciadora, que possui a hidroxila 3’ livre e um molde ou “template” para ser copiado.

A=T C=G ¿G=T? ¿C=A?

DNA polimerase I tem função editorial

“Bolha” de replicação

Como as seqüências são reconhecidas?

Domínio: Dedo de Zinco

Domínio: Hélice-Volta-Hélice

Seqüências simétricas!

homodímerospodem reconhecer a

seqüência

Replicação unidirecionalgera fragmentos:

Fragmentos de Okazaki

Replicação depende de diferentes atividades

enzimáticas!

Maquinaria de Replicação

é um complexo multienzimático!

Topoisomerases são realmente necessárias?

Tipo I Tipo II

Qual a velocidade de replicação?

• Em bactérias : 2000 bases/segundo

• Em eucariotos: 50 bases/segundo

Como fica o final do Cromossomo?

Empacotamento do DNA

Organização da cromatina

Seqüenciamento de DNA

Princípios

Reação com ddNTP

Produtos da reação

Leitura da seqüência