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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO Centro de Ciências da Saúde
Faculdade de Odontologia
Rio de Janeiro 2016
Valéria de Abreu da Silva Bastos
BINÔMIO MÃE-BEBÊ: SAÚDE BUCAL, PERFIL SALIVAR E LEITE MATERNO
UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO Centro de Ciências da Saúde
Faculdade de Odontologia
Rio de Janeiro 2016
BINÔMIO MÃE-BEBÊ: SAÚDE BUCAL, PERFIL SALIVAR E LEITE MATERNO
Valéria de Abreu da Silva Bastos
Tese submetida ao corpo docente da Faculdade de Odontologia da Universidade Federal do Rio de Janeiro como parte dos requisitos para obtenção do título de Doutor em Odontologia (Odontopediatria). Orientadores: Profa Dra Ivete Pomarico Ribeiro de Souza Profa Titular da Disciplina de Odontopediatria da FO/UFRJ
Profa Dra Ana Paula Canedo Valente Profa Associada da Disciplina de Bioquímica do Instituto de Bioquímica Médica/UFRJ
Profa Dra Liana Bastos de Freitas-Fernandes Profa Visitante da Disciplina de Odontopediatria da FO/UFRJ
FICHA CATALOGRÁFICA
Bastos Valéria Abreu.
Binômio mãe-bebê: saúde bucal, perfil salivar e leite materno/ Valéria de Abreu da Silva Bastos. – Rio de Janeiro: UFRJ / Faculdade de Odontologia, 2016.
xviii, 151 f. : il. ; 31 cm
Orientadores: Ivete Pomarico Ribeiro de Souza, Ana Paula Canedo Valente e Liana Bastos Freitas Fernandes
Tese (doutorado) -- UFRJ, Faculdade de Odontologia, 2015.
Referências bibliográficas: f. 92-109.
1. Saliva - metabolismo. 2. Saliva - química. 3. Leite materno. 4. Eletroforese. 5. Espectroscopia de ressonância magnética nuclear- métodos. 6. Biofilme. 7. Mães. 8. Bebês 9. Leite materno. 10. Saúde oral. 11. Cárie dental. 12. Avaliação periodontal. 13. Odontopediatria - Tese. I. Souza, Ivete Pomarico Ribeiro de. II. Valente, Ana Paula Canedo. III. Liana Bastos de Freitas-Fernandes. IV. Universidade Federal do Rio de Janeiro, Faculdade de Odontologia. V. Título.
FOLHA DE APROVAÇÃO
BASTOS, VALÉRIA DE ABREU DA SILVA
"BINÔMIO MÃE-BEBÊ: SAÚDE BUCAL, PERFIL SALIVAR E ALEITAMENTO MATERNO"
Tese de Doutorado submetida ao Programa de Pós-Graduação em Odontologia
(Odontopediatria), Faculdade de Odontologia, Universidade Federal do Rio de
Janeiro-UFRJ, como parte dos requisitos necessários à obtenção do título de
Doutor em Odontologia (Odontopediatria).
Rio de Janeiro, de de 2014
DEDICATÓRIA
Aos meus pais, Vera e Hélio, por serem para mim um exemplo.
À minha filha Carolina, por sua força, amor, carinho e compreensão.
Ao Falcão, por estar sempre ao meu lado, principalmente nos momentos mais difíceis.
AGRADECIMENTOS
A Deus, por me ensinar dia a dia e sempre me levantar dos meus
tropeços.
Às orientadoras:
o À Profa. Dra. Ivete Pomarico Ribeiro de Souza por ter me recebido no
Programa de Pós-Graduação em Odontopediatria da UFRJ, meu
profundo agradecimento, respeito e admiração.
o À Profa. Dra. Liana Bastos Freitas-Fernandes por sua dedicação e
incentivo nos momentos de incerteza.
o À Profa. Dra. Ana Paula Canedo Valente por sua inestimável ajuda no
laboratório de Ressonância Magnética Nuclear.
Aos Professores:
o Dra. Lucianne Cople Maia, Dra. Laura Guimarães Primo, Dra. Glória
Castro, Dr. Marcelo Costa, Dr. João Farinhas, Dra.Luciana Pomarico, Dra.
Andrea Antônio.
o Dra. Maria Encarnação e Dra. Bárbara pelas palavras de carinho e
estímulo extensivo a todos os professores do Curso de Odontopediatria
da UFRJ.
o Dr. Eduardo Feres da Disciplina de Periodontia, Dra. Patricia Riso da
Disciplina de Endodontia.
o Dra Carina Boghossian pela realização de parte dos exames periodontais.
o Ao Dr. Thomaz Chianca pelas orientações em Estatística.
Aos colegas dos Cursos de Especialização, Mestrado e Doutorado da
UFRJ pela amizade e pelo prazer do convívio diário. Em especial, a
Tatiana Fidalgo e Carla Martins pela inestimável ajuda ao longo do
trabalho.
Aos servidores da UFRJ, Mary, Kátia, Andréa, Gina, Robson, Zezé, Luiza,
Rose, Bebel e Patrícia pelo apoio, ajuda e carinho.
Ao João Monteiro por sua ajuda valiosa na computação.
Ao Fabrício, pela ajuda no Laboratório de Bioquímica.
Aos professores Cresus Gouvêa e Aristides Pinheiro da UFF.
Às funcionárias das bibliotecas do CCS – UFRJ e da Odontologia e
Nutrição da UFF.
A todas as mães e bebês que participaram deste estudo, meu profundo
agradecimento.
A todos que, direta ou indiretamente, contribuíram para a realização desta
pesquisa, muito obrigada.
RESUMO BASTOS VAS Binômio mãe-bebê: saúde bucal, perfil salivar e leite materno. Rio de Janeiro, 2015. Tese (Doutorado em Odontologia – Área de concentração: Odontopediatria) – Faculdade de Odontologia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2015. A boa saúde bucal da criança é estabelecida desde o seu nascimento, e o papel da mãe é essencial para a sua obtenção. O diagnóstico, prevenção e tratamento de doenças bucais direcionados para a mulher no período gestacional e pós-gestacional diminui o risco da mãe ter doenças com o potencial impacto em sua respectiva criança. O objetivo desse estudo foi avaliar se há evidência científica que comprove a transmissibilidade de Streptococcus mutans da mãe para o bebê (Artigo1) e avaliar a saúde bucal, perfil salivar da mãe e do bebê e as características do leite materno (Artigo 2). Para o primeiro estudo foi realizada uma revisão sistemática da literatura nas bases PubMed, Cochrane Library e Biblioteca Virtual em Saúde e como critério de inclusão foram selecionados os artigos que tinham análises genéticas para a confirmação de cepas idênticas entre mãe e filho. Para o segundo estudo sobre a avaliação da condição bucal e dos biofluidos corpóreos foram recrutadas 47 mães e seus respectivos bebês. Os participantes foram submetidos a uma entrevista e foi coletada saliva total não estimulada e amostras de leite materno. Foi realizado exame intrabucal da mucosa da mãe e dos bebês. No exame intrabucal da mãe foi verificado se tinha presença de placa, gengivite, cálculo, sangramento à sondagem e supuração. A bolsa periodontal e o nível de inserção foram mensurados. O índice de cárie foi realizado em todos os participantes. As amostras biológicas foram analisadas por espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear (RMN). Foram analisadas proteína total e eletroforese das amostras representativas de saliva de pares de mães e bebês. Ao final da pesquisa da literatura foram selecionados 36 estudos. Esta avaliação demonstrou que a mãe era responsável pela transmissão de Streptococcus mutans para seus filhos, principalmente quando a mãe era o cuidador principal. Os resultados do artigo 2 mostraram que a média de idade das mães foi de 27 anos. Com relação as condições bucais das mães observou-se uma média de 8,20 do índice CPO-D; 72,4 % apresentavam gengivite e 62 % tinham biofilme dental visível. O exame intra-oral dos bebês demonstrou que 4,18% apresentavam candidíase e 2,08% nódulo de Bohn. A análise de eletroforese mostrou diferenças entre a quantidade de proteínas na saliva de mães e bebês. Quanto à análise de 1H RMN das amostras de saliva, notou-se diferença entre mães e bebês em relação à intensidade de metabólitos como n-butirato, propionato, etanol, acetato, além da lactose, que dominou a saliva de bebês quando comparada com a de mães. Bebês edêndulos também apresentavam menor quantidade de ácidos orgânicos comparados aos que apresentavam dentes erupcionados. Conclui-se que as mães apresentavam baixa atividade de cárie atual, porém com relevante história pregressa de cárie, o que pode ter um impacto sobre a saúde bucal de seus respectivos filhos. Foi encontrada grande quantidade de açucares no leite materno, com destaque para a lactose. DESCRITORES: Mãe, Bebê, Saúde Bucal, Perfil Salivar, Leite Materno, Espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear, Eletroforese.
SUMMARY
BASTOS VAS Binômio mãe-bebê: saúde bucal, perfil salivar e leite materno. Rio de Janeiro, 2015. Tese (Doutorado em Odontologia – Área de concentração: Odontopediatria) – Faculdade de Odontologia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2015. Child`s oral health is determined from the birth and their mother play a role in this matter. The diagnosis, prevention and treatment of oral diseases targeted for women during pregnancy and post-pregnancy reduces the risk of the mother having diseases which have a potential impact on their respective children. The aim of this study was to evaluate whether there scientific evidence that proves transmission of Streptococcus mutans from mother to baby (Manuscript 1) and assess the oral health and salivary profile of the baby's mother and the characteristics of breast milk (Manuscript 2). For the first objective a systematic review of the literature in PubMed and Cochrane Library Virtual Health Library (VHL) was performed using the terms "dental caries" and "transmission. The assessment of oral health status and saliva were recruited 47 mothers and their babies. Participants underwent an interview and intraoral examination and mothers and babies were submitted to unstimulated whole saliva collection and breast milk samples were also acquired. Then intraoral examination of the mother was evaluated the presence and absence of plaque, gingivitis, calculus, bleeding on probing and suppuration. Pocket depth and attachment level was measured. Index caries was done for all participants.The biologic samples were analyzed by Nuclear Magnetic Resonance (NMR) spectroscopy. Total protein was analyzed and electrophoresis of representative samples of saliva pairs of mothers and babies. For systematic review, 36 studies were selected. This review demostrated that the mother was responsible for the transmission of Streptococcus mutans to their children, especially when the mother was the primary caregiver. The article the mother average age was 27 years, 53.8% were overweight and 97.8 % belong to the group that received less than five minimal salary. Sixty four percentage of the women breastfeeding their babies and 70% babies were delivered by cesarean. Regarding oral conditions, it was observed 1.7 of decayed teeth, 16.4 missing teeth; 72.4% with gingivitis and 62 % with dental biofilm. The intraoral examination showed that babies had oral candidiasis 4.18% and 2.08% Bohn nodule. The electrophoresis analysis showed differences in the protein quantity in the saliva of mothers and babies. As for the 1H NMR analysis of saliva samples, it was noted difference between mothers and infants in relation to the intensity of metabolites such as n-butyrate, propionate, ethanol, acetate and lactose which dominated the saliva of infants compared to mothers. Babies without teeth also presented lower intensities of organic acid compared to those that had erupted teeth. It is concluded that mothers had low actual caries activity, however with important past caries history and this may have an impact on the oral hygiene of their children. KEY-WORDS: mother, Baby, Oral Health, Salivary Profile, Human Milk, Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy, Eletroforese.
RESUMÉ
BASTOS VAS Binômio mãe-bebê: saúde bucal, perfil salivar e leite materno. Rio de Janeiro, 2015. Tese (Doutorado em Odontologia – Área de concentração: Odontopediatria) – Faculdade de Odontologia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2015. La bonne santé bucco-dentaire de l'enfant est déterminée à partir de la naissance, et le rôle de la mère est essentielle à son obtention. Le diagnostic, la prévention et le traitement des maladies bucco-dentaires chez les femmes enceintes et après la grossesse réduisent le risque des maladies de la mère qui pourraient affecter leurs enfants. L'objectif de cette étude est d'évaluer l'existence de preuves scientifiques de la transférabilité des Streptococcus mutans de la mère à l'enfant (manuscrit 1) et d'évaluer les caractéristiques du lait maternel et de la santé bucco-dentaire (manuscrit 2). D'abord, une revue systématique de la littérature dans les bibliothèques virtuelles PubMed et Cochrane Library (VHL) a été effectuée en utilisant les termes «caries» et «transmission. Pour l'évaluation de l'état de santé bucco-dentaire et salivaire, 47 mères et leurs bébés ont été recrutés. Les participants ont répondu à un questionnaire et ont passé l'examen intra-oral. Ensuite, la salive non stimulée des mères et des bébés et des échantillons de lait maternel ont été récoltés. Les échantillons ont été analysés par spectroscopie RMN. Les échantillons représentatifs de paires mères-bébés ont été analysées par rapport aux protéines totales et par électrophorèse.. Pour l'examen systématique, 36 études ont été sélectionnées. Cet examen a révélé que la mère était responsable de la transmission de Streptococcus mutans à son enfant, surtout lorsque la mère était le principal dispensateur de soins. L'âge moyen était de 27 ans et 40% étaient en surpoids. En ce qui concerne les affections buccales observées chez les mères, 1,7% présentaient de dents cariées, de 28,4% à 60,4% de la gingivite et biofilm dentaire. L'examen intra-buccal a montré que 4,18% de bébés avaient du muguet buccal et 2,08% du nœud de Bohn. L'analyse par électrophorèse a montré des différences dans le profil des protéines de la salive des mères et des bébés. En ce qui concerne l'analyse par RMN de 1H des échantillons de salive, une différence entre la mère et le nourrisson a été observé par rapport à l'intensité du signal de métabolites tels que le n-butyrate, le propionate, l'éthanol, l'acétate, ainsi que de la lactose, qui a dominé la salive des nourrissons par rapport à celles de mères. Bébés édenté ont aussi présentés des quantités plus faibles des acides organiques par rapport à ceux qui avaient de dents éclatés. Nous avons conclu que, malgré une bonne santé bucco-dentaire chez les mères, elles avaient présentés de caries précédemment et cela peut avoir un impact sur l'hygiène bucco-dentaire de leurs enfants. Mots-clés: Mère, Enfant, La Santé Bucco-Dentaire, Profil Salivaire, Le Lait Maternel, Spectroscopie Par Résonance Magnétique Nucléaire, Electrophorèse.
LISTA DE FIGURAS
Artigo 1
Figure 1: Flow diagram of the literature search. ...............................................38
Figure 2: Distribution of transmission rates by different techniques (A) (p = 0.39;
ANOVA test) and percentage of transmission according to the years (B) (p =
0.57; t test). ......................................................................................................39
Artigo 2
Figure 1: Eletrophoretic pattern of representative saliva samples from mothers (A) and their babies (B). ................................................................................... 62
Figure 3: 1H NMR saliva spectra differences among children with (A and B) and without (C and D) teeth. ................................................................................... 64
Figure 4: 1H NMR saliva spectra of children without teeth with exclusive (A and B) and mixed (C and D) breast milk. ................................................................ 64
Figure 5: 1H NMR saliva spectra of mothers with (A and B) and without (C and D) oral disease...................................................................................................... 65
Figure 6: 1H NMR breast milk spectra from 3 mothers indicating large amount of lactose. ............................................................................................................ 65
LISTA DE TABELAS
Artigo 1
Table 1: The search strategy depicted according to each database selected in
this study. .........................................................................................................36
Table 2: Quality assessment and bias risk of the selected studies. ..................41
Table 3: Description of the selected studies. ....................................................43
Artigo 2
Table 1: Demographic data which characterize the mother and babies and oral health condition. ............................................................................................... 61
Table 2: Oral findings of mothers and their babies. .......................................... 62
LISTA DE SIGLAS
AP-PCR Arbitrarily primed polymerase chain reaction
BVS Biblioteca Virtual em Saúde
CPMG Carr–Purcell–Meiboom–Gill
CPO-D/DMFT Cariado, perdido, obturado – dente permanente/Decayed missing,filled
ceod/dmft Cariado, perdido, obturado – dente decíduo/Decayed missing,filled
DNA Ácido desoxirribonucleico
D2O Deuterium oxide
DP Doença periodontal
DSS Sodium 2,2-Dimethyl-2-Silspentane-5-Sulfonate
DV Disto vestibular
DL Disto lingual
ECC Early Chilhood Caries
FO-UERJ Faculdade de Odontologia da Universidade Estadual do Rio de Janeiro
FO-UFRJ Faculdade de Odontologia da Universidade Federal do Rio de Janeiro
GS_MS Espectrometria de Massa por Gás Cromatografia
HPLC Cromatografia Líquida de Alta Eficiência
IMC/BMI Índice de Massa Corporal/body mass index
IP/PI Índice de Placa/plaque index
IC/CI Índice de Cálculo/calculus index
IG/GI Índice Gengival/gengival index
IS Índice de Sangramento
ISS/SI Índice de Sangramento/ bleeding on probing
IESC Instituto de Estudos em Saúde Coletiva
Kdal Kilodalton
L Lingual
MV Mesiovestibular
ML Mesio lingual
MLST Multilocus sequence typing
mL Mililitro
mM Milimol
mr Massa Molecular Relativa
NA Não se aplica
NCL/CAL Nível Clinico de Inserção/Clinical attachment loss
PECO Patient Exposition Comparison Outcome
PBS/PPD Profundidade de Bolsa a Sondagem//Pocket depth
1D 1H-NMR-RMN One dimensional hydrogen spectrum of Nuclear Magnetic Resonance - Ressonância Magnética Nuclear
1H-NMR Hydrogen Spectrum of Nuclear Magnetic Resonance
RFLP Restriction Fragment Legth Polymorphism
TCLE Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
TOCSY 1H-1H Total Correlation
V Vestibular
χ2 Qui quadrado
LISTA DE SÍMBOLOS
δ Chemical Shift (Deslocamento químico)
= Igual
± Mais ou menos
> Maior que
< Menor que
+ Minor problem
++ Major problem
0 No problem
µl Microlitro
Sumário
1. INTRODUÇÃO .......................................................................................... 17
1.1 Saúde bucal da mãe e do bebê ....................................................18
1.2 Características gerais dos componentes salivares .......................20
1.3 Características gerais do leite materno .........................................21
2. PROPOSIÇÃO .......................................................................................... 25
2.1 OBJETIVO GERAL .......................................................................25
2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS .........................................................25
3. DELILIAMENTO DA PESQUISA ............................................................... 26
4. DESENVOLVIMENTO DA PESQUISA ..................................................... 32
4.1 ARTIGO 1: Mother-to-child transmission of Streptococcus mutans: A systematic review ..........................................................................................33
4.2 ARTIGO 2: Salivary profile and oral health from babies and mothers on breastfeeding period.................................................................................54
5. DISCUSSÃO ............................................................................................. 74
6. CONCLUSÕES ......................................................................................... 80
7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS .......................................................... 81
8. ANEXOS ................................................................................................... 88
17
1. INTRODUÇÃO
Os estudos que relacionam a saúde bucal do binômio mãe-bebê têm valor
devido à necessidade de desmonstrar a condição de saúde bucal entre eles. A
saúde bucal da criança é estabelecida desde o seu nascimento e o papel da mãe
é essencial para a sua obtenção. O diagnóstico, prevenção e tratamento de
doenças bucais direcionados para a mulher no período gestacional e pós-
gestacional pode diminuir o risco da mãe ter doenças, com o potencial impacto
em suas respectivas crianças (Keirse e Plutzer, 2010). A inadequação do estado
nutricional materno tem grande influência nas condições do concepto ao nascer,
pois o período gestacional é uma fase na qual as exigências nutricionais são
elevadas, visando permitir os ajustes fisiológicos no organismo materno para o
desenvolvimento fetal (Codato, Nakama et al., 2008; Accioly, Saunders et al.,
2010). Neste sentido podemos ter em mente que o presente trabalho descreve
o estado bucal da mãe e seu respectivo bebê.
Ainda que o tratamento odontológico seja seguro na gestação, muitas
mulheres têm receio de procurar o cirurgião-dentista adiando o problema e
agravando suas consequências, que podem ser drásticas não só para ela mas
também para o seu bebê. Além disso, muitos cirurgiões-dentistas relutam em
atender gestantes. A saúde bucal da mãe tem sido um fator importante devido à
proximidade física no cuidado diário do seu bebê (Huebner e Riedy, 2010). A
manutenção da saúde bucal da criança tem como estratégia geral a redução dos
níveis de Streptococcus mutans da mãe, diminuindo a colonização em crianças,
segundo abordagem discutida na American Academy of Pediatric Dentistry
(AAPD, 2011). A literatura relata que os S. mutans possuem um amplo espectro
de virulência (Klein, Florio et al., 2004; Argimon e Caufield, 2011), o que pode
interferir na evolução da cárie dentária. Nesse contexto, diversos são os
trabalhos que objetivaram avaliar a origem da transmissão de S. mutans da mãe
para o bebê, sendo este tema controverso na literatura (Davey e Rogers, 1984;
Li, Wang et al., 2000; Ersin, Kocabas et al., 2004; Klein, Florio et al., 2004;
Hames-Kocabas, Ucar et al., 2008). Não existe evidência científica de que a cepa
18
do S.mutans seja transmitida da mãe para sua respectiva criança. Esta possível
transmissão pode ocorrer por meios diretos e indiretos. O meio direto ocorre
através da saliva e os indiretos, através do compartilhamento de utensílios como
copos, colheres, escovas e o hábito de soprar a colher para esfriar a comida do
bebê. A maneira pela qual a criança adquire bactérias patogênicas tem sido
estudada, verificando-se cepas idênticas da mãe e de seu bebê (Li, Wang et al.,
2000). Dentre muitos fatores que influenciam a transmissão, tem sido apontado
que a prática de amamentação aumenta a fidelidade do S. mutans da mãe com
o do seu bebê (Li, Wang et al., 2000).
A cárie dentária é definida como uma doença multifatorial, ou seja, para sua
instalação diversos fatores estão presentes ao longo de determinado período de
tempo. Especificamente no caso da microbiota, sabe-se que ela não é fator
determinante para o estabelecimento da cárie (Barber e Wilkins, 2002).
1.1 Saúde bucal da mãe e do bebê
Conhecer a saúde do binômio mãe–bebê é fundamental para a
implementação de ações de prevenção em saúde bucal em uma população
(Tabosa, 2010). A cobertura odontológica está inserida nas práticas coletivas de
saúde e assim, a promoção da saúde bucal se sobrepõe ao procedimento
técnico, pois as ações da atenção básica visam minimizar os riscos que possam
gerar doenças para o indivíduo (OMS, 1996).
A gestação causa mudanças hormonais e vasculares nas mulheres e a
gengivite tem sido apontada como uma das manifestações bucais comuns
(López-Jornet, Camacho-Alonso et al., 2014). As lesões de cárie também podem
ocorrer principalmente quando a higienização bucal é negligenciada e há
ingestão frequente de alimentos cariogênicos (Rosell, Montandon Pompeu et al.,
1999).
A prevalência de 41,1 % da doença periodontal entre as puérperas é um
indicador da necessidade de cuidados específicos para estas mulheres (Santos,
2010). Um estudo da prevalência de doença periodontal descreve a presença
de 30 % de sítios com profundidade de bolsa entre puérperas (Resende, Pinto
et al., 2011). A literatura demonstra a relação entre a doença periodontal da mãe
19
e o nascimento de bebê prematuro (Offenbacher, Katz et al., 1996). Desde
então, surgiram relatos na literatura relacionando a presença de doença
periodontal à pré-eclampsia, aos partos prematuros e ao baixo peso do bebê ao
nascer. A colonização de bactéria periodontal-patogênica da criança aumenta
com a idade, e estes microorganismos são similares aos da mãe (Offenbacher,
Katz et al., 1996; Pahkla, Jogi et al., 2010). Já foi estudado o impacto da condição
periodontal materna na detecção de patógenos periodontais em recém-nascidos
e a transmissão de patógenos da flora microbiana periodontal da mãe para filho
(Van Loveren, Buijs et al., 2000; Hames-Kocabas, Ucar et al., 2008). Castilho et
al. (2013), demonstraram, em revisão sitemática da literatura, que hábitos de
saúde oral dos pais influenciam a saúde bucal dos filhos, concluindo que também
se deve dar atenção ao estilo de vida e sua relação com a saúde bucal (Castilho,
Mialhe et al., 2013). Tem sido discutido que indicadores como periodontite,
hábito inadequado de higiene bucal e microflora periodontal da mãe são alguns
fatores de risco para a criança desenvolver futuramente comprometimento
periodontal (Pahkla, Jogi et al., 2010).
O exame clínico da cavidade oral dos bebês permite o diagnóstico de
alterações com o objetivo de estabelecer o tratamento precoce. Na grande
maioria das vezes, estas alterações são inócuas e resolvem-se com o tempo.
Entretanto, existem casos que são passíveis de intervenção, merecendo total
atenção do profissional (Tinoco-Araujo, Araujo et al., 2013).
Alterações inócuas não requerem intervenção, por exemplo os Cistos de
Inclusão como Nódulos de Bohn, Pérolas de Epstein e os Cistos da Lâmina
Dentária. Dentre os passíveis de intervenção podemos exemplificar os Cistos de
Erupção, os Dentes Natais e Neonatais, as Fendas Labiais e Palatinas, dentre
outros (Flinck, Paludan et al., 1994). Pode-se citar também a Candidíase Oral.
Esta é provocada pelas Candida spp, entre elas a Candida albicans e aparece
como placas brancas na mucosa bucal, lingua, palato e orofaringe. Acomete
lactentes e crianças que estão utilizando antibióticos ou corticóide inalado.
Aparece na cavidade bucal de cerca de 5% dos recém-nascidos, sendo uma
das doenças oportunistas mais frequentes. O tratamento de escolha consiste na
20
utilização de antifúngicos como a nistatina sob a forma de suspensão aplicadas
diretamente sobre a lesão (Tinoco-Araujo, Araujo et al., 2013).
1.2 Características gerais dos componentes salivares
A saliva é um biofluido aquoso, transparente, que é secretado
pelas glândulas salivares para a cavidade bucal. É proveniente das glândulas
salivares maiores – parótidas, submandibulares e sublinguais; das glândulas
salivares menores e do fluido gengival (Edgar, Dawes et al., 2010). A saliva total
é constituída por componentes orgânicos e inorgânicos. A água representa 99%
da composição total da saliva. Os compostos inorgânicos presentes na saliva
são representados por íons, como cálcio, sódio, cloretos, fosfatos e bicarbonatos
(Turner e Sugiya, 2002). Os compostos orgânicos da saliva têm componentes
não proteicos e proteicos. Os componentes orgânicos não proteicos são
representados pelo ácido úrico, que é o principal agente anti-oxidante do fluido
salivar (Chiappin, Antonelli et al., 2007), a bilirrubina, a creatinina, a glicose, as
aminas salivares, e os representantes lipídicos como o colesterol e os ácidos
graxos (Fidalgo, Abreu et al., 2012). Estes componentes se caracterizam por
possuírem baixo peso molecular, e por isso não podem ser incluídos no grupo
proteico (Chiappin, Antonelli et al., 2007). Os componentes proteicos da saliva
apresentam moléculas de alto peso molecular como, por exemplo, mucinas,
enzimas e imunoglobulinas; e baixo peso molecular tal como proteina rica em
prolina (PRP) e estaterinas (Wong, 2006; Chiappin, Antonelli et al., 2007;
Parisotto, King et al., 2011).
A saliva desempenha diversas funções relacionadas à manutenção da
cavidade bucal. As múltiplas funções do fluido salivar são diretamente
influenciadas pelos seus componentes específicos (Pedersen, Bardow et al.,
2002). Os componentes inorgânicos têm várias funções específicas ligadas à
mineralização dentária e controle do pH da saliva. A saliva humana possui um
amplo grupo de constituintes proteicos para a manutenção da cavidade oral, e
apresenta um imenso potencial informativo para a detecção de doenças
sistêmicas (Xie, Lu et al., 2005). A interpretação qualitativa e quantitativa dos
componentes da saliva poderá determinar as desordens sistêmicas (Dawes,
21
1975; Streckfus, Bigler et al., 2006; Wong, 2006; Neyraud, Tremblay-Franco et
al., 2013).
Em relação às doenças da cavidade bucal, já foram identificados
componentes salivares de baixo peso molecular alterados em crianças
sistemicamente saudáveis com cárie e sem cárie. As análises da saliva de
crianças, através da ressonância magnética nuclear (RMN) combinadas com
análise de componentes principais, definiram um perfil metabólico de crianças
saudáveis com e sem cárie, independentemente dos hábitos de higiene, fatores
sócio-econômicos e ingestão de alimentos. Metabólitos como propionato,
sacarose, hidroxibutirato, ácidos graxos e lipídeos apresentaram-se em
quantidades distintas entre crianças com e sem cárie (Fidalgo, Abreu et al., 2012;
Fidalgo, Freitas-Fernandes et al., 2013).
1.3 Características gerais do leite materno
O leite humano é uma mistura complexa de nutrientes, proporcionando ao
lactente adequada alimentação e proteção suficientes para seu crescimento e
desenvolvimento. O leite humano varia em sua composição de uma mãe para
outra, de um período de lactação para outro, durante o período do dia e entre as
mamas. As variações de mãe para mãe são afetadas por fatores como a idade
materna, paridade, saúde e classe social, bem como a idade gestacional e o
estado nutricional da mãe (Accioly, Saunders et al., 2010). Porém, para Carvalho
e Tamez (2002), a composição do leite parece ser independente do estado
nutricional da mãe, a menos que haja uma subnutrição grave na qual o volume
do leite vai decaindo até cessar totalmente, o que ocorre em casos extremos.
O leite materno é composto por misturas altamente complexas, sendo
atualmente caracterizado por mais de 200 constituintes (Worthington-Roberts e
Williams, 1997), tais como carboidratos, gorduras, proteínas, compostos
nitrogenados não-protéicos, vitaminas, minerais, enzimas, imunoglobulinas,
hormônio, fatores de crescimento e substâncias bioativas (Wauben, Atkinson et
al., 1998; Agostoni, Marangoni et al., 2001). Dentre estes, podem ser citados
lactose, proteína total, caseína, proteína do soro, alfa-lactoalbumina e gordura
total. As vitaminas mais comumente encontradas no leite materno são as
22
lipossolúveis, como a vitamina A, D, E e K e as vitaminas hidrossolúveis, tais
como tiamina, riboflavina, niacina, folato, vitaminas B6 e B12. Dentre o conteúdo
mineral, cita-se o cálcio, fósforo, magnésio, sódio, potássio e cloro e traços de
cromo, cobre, flúor, iodo, ferro, manganês, selênio e zinco (Accioly, Saunders et
al., 2010).
O leite materno tem como protetores imunológicos componentes como
linfócitos T, linfócitos B, macrófagos e leucócitos polimorfos nucleares
(neutrófilos e eosinófilos) e, fatores de proteção como as lactoferrinas, fatores
bífidos, fator antiestafilocócitos, lactoperoxidase, complemento C3 e C4,
interferon, lisozima e proteína fixadora de B12 (Braun, 1976; Jelliffe e Jelliffe,
1981).
O aleitamento materno exclusivo nos primeiros 6 meses de vida mostra
que, além de ser nutricionalmente adequado, confere proteção anti-infecciosa à
criança, melhora o desenvolvimento psicomotor, além de oferecer vantagens
para a mãe, como prolongar a amenorreia lactacional e acelerar a perda de peso
adquirido durante a gestação (Hanson e Winberg, 1972; Jelliffe e Jelliffe, 1981;
Daga e Daga, 1985; Agostoni, Marangoni et al., 2001; Nishitani, Miyamura et al.,
2009).
Existem fortes evidências de que o aleitamento materno esteja associado
a taxas mais baixas de incidência de doenças infecciosas durante a infância,
em países industrializados e em desenvolvimento. Além disso, o aleitamento
materno exclusivo, nos primeiros 6 meses de vida, está associado com um terço
do risco de desenvolver otite média e a metade do risco de apresentar doença
pulmonar obstrutiva. Há indicações de que o aleitamento materno produz efeitos,
a longo prazo, na saúde e desenvolvimento de lactentes, embora ainda não se
conheçam os mecanismos responsáveis por esses efeitos. As pesquisas
procuram identificar componentes do leite humano aos quais se podem atribuir
estes achados, inclusive fatores bioativos como propriedades que promovem o
crescimento e a capacidade imunológica (Hanson e Winberg, 1972; Jelliffe e
Jelliffe, 1981; Daga e Daga, 1985; Agostoni, Marangoni et al., 2001; Nishitani,
Miyamura et al., 2009; Accioly, Saunders et al., 2010).
23
A partir dos seis meses, o uso exclusivo de leite materno não supre todas
as necessidades nutricionais da criança, sendo necessária a introdução de
alimentos complementares (MS, 2002; Monte e Giugliane, 2004; Sarni, 2004). É
nesta idade que a criança atinge um estágio de desenvolvimento geral
neurológico (mastigação, deglutição, digestão e excreção), que a habilita a
receber outro tipo de alimento além do leite materno (Monte e Giugliane, 2004).
A mamadeira aumenta o risco de infecção, especialmente por ser um foco
de contaminação pela bactéria E. coli (MS, 2002). O desenvolvimento de alergias
alimentares também é um risco da alimentação complementar, particularmente
quando há história familiar de atopia (Martin Esteban, Pascual et al., 1998). Além
de suprir as necessidades nutricionais, a introdução da alimentação
complementar a partir dos seis meses aproxima progressivamente a criança dos
hábitos alimentares de quem cuida dela, e exige esforço adaptativo a uma nova
fase do ciclo de vida, na qual lhe são apresentados novos sabores, cores,
aromas e texturas.
1.4 Métodos para estudar o perfil salivar e leite materno
Dentre as análises de determinação da proteína total da saliva e do leite
materno, encontra-se a análise pelo perfil eletroforético das proteínas salivares,
através da detecção da massa molecular relativa (Mr) em gel de poliacrilamida
desnaturante (SDS-PAGE). O perfil eletroforético de amostras de saliva e leite
materno já foi descrito na literatura (Kunz e Lonnerdal, 1990; Freitas-Fernandes,
Rundegren et al., 1998, Bergandi, Defabianis et al., 2007).
As moléculas de baixo peso molecular podem ser analisadas através da
cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) (Linke e Moss, 1992), da
espectrometria de massa por gás cromatografia (GC-MS) (De Paoli e Bell, 2008)
e da ressonâcia magnética nuclear (Fidalgo, Freitas-Fernandes et al., 2013);
para a identificação de alterações moleculares salivares entre pacientes com
quadros clínicos específicos.
Através da técnica analítica espectroscópica de 1H RMN (espectro de
hidrogênio 1 D de ressonância magnética nuclear) pode ser identificada e
24
quantificada, simultaneamente, uma ampla gama de compostos orgânicos de
baixo peso molecular, que propiciam uma visão integrada dos perfis de
metabólitos (Zhang, Sun et al., 2012). Comparada com outras técnicas analíticas
de alta resolução, como as proteômicas (Carty, Siwy et al., 2011), a 1H RMN tem
se tornado uma ferramenta útil no estudo de fluidos corporais e tem forte
potencial para ser usada no diagnóstico não invasivo de doenças que
representam significativos problemas de saúde pública (Brindle, Antti et al.,
2002; Zhang, Sun et al., 2012), tais como hipertensão, diabetes e insuficiência
renal crônica (Yoon, Jankowski et al., 2004; De Meyer, Sinnaeve et al., 2008). A
espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear tem sido uma ferramenta
utilizada em estudos de metaboloma, com o objetivo de estabelecer padrões
metabólicos relacionados a determinada condição, sendo possível vislumbrar
diferenças entre saliva de crianças com e sem cárie (Fidalgo, Freitas-Fernandes
et al., 2013). Metabólitos do leite podem ser provenientes de diversas origens
celulares indicando a variabilidade do perfil de metabólitos (Hanson e Winberg,
1972; Lavric e Dolar, 1976; Ehrenkranz, Ackerman et al., 1984; Wauben,
Atkinson et al., 1998; Agostoni, Marangoni et al., 2001; O'connor, Khan et al.,
2008).
A avaliação de aspectos da transmissão de S. Mutans, das condições
bucais e o perfil salivar das mães e bebês, bem como de componentes do leite
materno é um importante avanço visando a implementação de medidas
preventivas para este segmento da população, no caso, o binômio mãe e bebê.
O entendimento do perfil da saliva pode apresentar indicadores como presença
de produtos bacterianos, sendo assim um possível parâmetro para avaliar a
transmissibilidade.
25
2. PROPOSIÇÃO
2.1 OBJETIVO GERAL
Avaliar evidências da transmissão de S. mutans entre mãe e bebê, a saúde
bucal e perfil de metabólitos salivares de baixo peso molecular da mãe, no
período de amamentação e do bebê. Analisar também as características do
leite materno.
2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Verificar, através de uma revisão sistemática da literatura, se existe
evidência científica da transmissão do S. mutans da mãe para o bebê.
Caracterizar a condição bucal das mães no período de amamentação e de
seus bebês.
Descrever componentes salivares das mães e seus bebês, além de
analisar os metabólitos do leite materno.
26
3. DELINIAMENTO DA PESQUISA
A presente pesquisa teve como proposição desenvolver dois artigos,
sendo objetivo do primeiro estudar se há evidência de transmissão do S. mutans
da mãe para o bebê. Apesar de ser um assunto amplamente explorado na
literatura, ainda não há evidência científica que suporte tal transmissibilidade. O
segundo artigo visou caracterizar a saúde bucal do bebê e de sua mãe no
período de lactação, assim como o perfil salivar e de determinados componentes
do leite materno.
3.1 Artigo 1
No primeiro estudo, para avaliar se havia evidência sobre a
transmissibilidade de S. mutans de mães para seus bebês, foi realizada uma
revisão sistemática na literatura, utilizando a estratégia do PECO onde (P) são
os pacientes (do inglês “patients”) mães e bebês, (E) exposição (do inglês
“exposition”) pelo S. mutans, (C) comparação (do inglês “comparison”) através
de análises genéticas e (O) são os desfechos (do inglês “outcome”) resultantes
das análises genéticas. Para tanto, foi realizada uma busca sistemática e
manual da literatura nas bases de dados PubMed, Biblioteca Virtual em Saúde
e Cochrane. A elegibilidade dos estudos foi determinada após a leitura dos
resumos dos artigos identificados a partir dos bancos de dados eletrônicos. Os
fatores de exclusão foram artigos em duplicata ou caso clínico, artigo de revisão,
artigos de opinião, cartas, assim como estudos com pacientes portador de
alteração bucal ou que estivessem recebendo medidas preventivas e mães que
fizessem uso de goma de mascar a base de xylitol ou antimicrobianos.
3.2 Artigo 2
O segundo estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa local
(Anexo 1, fl. 88). A anuência e o consentimento para participação dos sujeitos
no estudo foi expresso através das assinaturas do Termo de Consentimento
Livre e Esclarecido (TCLE Anexo 2, fl. 89) pelos participantes do estudo.
O estudo realizado foi do tipo transversal, onde analisou-se as condições
de saúde bucal e o perfil de metabólitos salivares de 47 mulheres e seus
respectivos bebês ( 0 a 28 meses). A amostra, essa foi selecionada por
conveniência em dois hospitais públicos no município do rio de janeiro_como o
27
Hospital Fernando Magalhães e Hospital Federal de Bonsucesso e na Clínica de
Odontopediatria da Faculdade de Odontologia da UFRJ.
Foram incluídas no estudo mães que estavam amamentando e não eram
fumantes. Quanto aos bebês, esses foram incluídos ao se apresentavam sem
evidência clínica de comprometimento sistêmico.
Uma entrevista foi conduzida com as mães (lactantes), coletando dados
de identificação e realizando a anamnese (Anexo 3, fl. 92 a 96). Além disso,
foram coletadas informações sobre fatores socioeconômicos (ABEP, 2008),
foram mensurados o peso e a altura (Welm, W-200A, Brasil) das mães, e
calculado o Índice de Massa Corporal (IMC) (Deurenberg, Deurenberg Yap et
al., 1999). Os dados dos bebês (lactentes) (Anexo 4, fl. 97) foram obtidos a
seguir, constando de identificação, data do nascimento, peso, registro de
anomalias em tecidos moles e dentes presentes. Os dados obtidos foram
registrados em fichas individuais.
Depois do questionário e assinaturas dos termos, cada mãe recebeu um
tubo com gelo para sua coleta da saliva, que foi feita após jejum por duas horas
das mães. Foram coletados 2 mL de saliva total não estimulada das mães
através da expectoração da saliva em um tubo graduado. Para a coleta salivar
dos bebês, uma pipeta (TediaPet, 100-1000L, Brasil) foi empregada para
coletar 0,5 mL de saliva total não estimulada depositada no assoalho da boca
destes sujeitos uma hora depois do aleitamento. Durante o período de coleta,
mães e bebês foram confortavelmente acomodados em uma sala arejada e
iluminada. Deve-se destacar que, imediatamente após a coleta salivar, as
amostras de saliva foram centrifugadas a 4°C a 10 000g por 60 minutos, a fim
de separar o sobrenadante (Cientec, CT – 15 000R, Brasil), no laboratório da
Faculdade de Odontologia da UFRJ. O sobrenadante da amostra salivar da mãe
foi transferido em alíquotas de 600 L para três tubos plásticos com tampa
(Ependorffs, Hamburg, Germany) e o do bebê em alíquotas de 200 L. As
amostras foram armazenadas a -80°C para posterior análise bioquímica, por 1H
RMN (Silwood, Lynch et al., 2002), no Centro Nacional de Ressonância
Magnética Nuclear Jiri Jonas – Instituto de Bioquímica Médica da UFRJ. O leite
materno foi coletado pelas próprias mães, por ordenha manual, em um tubo
28
falcon que foi imerso em gelo. O leite coletado pela mãe de imediato foi
centrifugado, da mesma maneira que foram tratadas as amostras de saliva para
remover gorduras e impurezas presentes.
Em seguida,as mães foram submetidas a exame intra-bucal, o qual foi
realizado por um examinador calibrado para avaliação de cárie e doença
periodontal (Kappa = 0,84 e 0,83, respectivamente). A calibração foi feita a partir
da repetição dos exames de três pacientes comparando com examinador
treinado. No exame das mães foi avaliada a presença de doenças cárie e
periodontal. Para este fim, foi empregado o índice de dentes cariados, perdidos
e obturados (CPO-D) conforme os critérios propostos pela Organização Mundial
de Saúde (OMS,1997) (Anexo 3, pág. 92). O exame periodontal foi realizado em
todos os dentes, com exceção dos terceiros molares, e incluiu avaliação de
presença de placa (IP), gengivite (IG), cálculo dental (IC), supuração (IS),
sangramento à sondagem (ISS), mensuração da profundidade de bolsa a
sondagem (PBS) e nível clínico de inserção (NCI). A análise de placa foi
calculada de acordo com O´Leary (O'Leary, Drake et al., 1972). Estes critérios
foram avaliados em seis sítios por dente (MV, V, DV, ML, L, DL) com o emprego
de espelho bucal e sonda milimetrada (Hu-Friedy, Carolina do Norte, EUA).
Sobre o diagnóstico clínico de doença periodontal, foram considerados
com saúde periodontal os indivíduos com < 10% dos sítios com sangramento à
sondagem e que não apresentavam PBS ou NCI > 3 mm. A PBS ou NCI = 4 mm
sem sangramento à sondagem caracteriza indivíduos com saúde periodontal.
Foram classificados como portadores de gengivite aqueles indivíduos com >
10% dos sítios com sangramento à sondagem e que não apresentavam PBS ou
NCI. No entanto, indivíduos com PBS ou NCI = 4 mm em até 5% dos sítios sem
sangramento a sondagem também foram considerados como portadores de
gengivite. Para o diagnóstico de periodontite crônica o indivíduo precisava
apresentar > 10% dos dentes com PBS e/ ou NCI de 5 mm e sangramento à
sondagem concomitantemente. Já a periodontite agressiva generalizada foi
caracterizada por acometimento de 30% dos dentes com PBS e/ ou NCI 5 mm
com sangramento à sondagem concomitantemente e incluindo, pelo menos, um
incisivo e um primeiro molar (Da Silva-Boghossian, Do Souto et al., 2011).
29
Quadro 1 - Quadro esquematizado do índice periodontal de acordo com Da Silva-Boghossian,
Do Souto et al., 2011
Saúde ˂10% ISS PBS ou NCI >3mm
Saúde ISS=0 PBS ou NCI=4mm
Gengivite >10% ISS PBS ou NCI=0
Gengivite ≥5% ISS PBS ou NCI=4mm
Periodontite crônica >10% ISS PBS ou NCI =5mm
Periodontite agressiva ≥30% ISS* PBS ou NCI ≥5mm
*incluindo pelo menos 1 incisivo e 1 primeiro molar
O exame intra bucal dos bebês teve início pelas mucosas sendo avaliada
a presença de alterações. Ao término do exame dos tecidos moles, era realizada
a verificação do número de dentes presentes e se havia alguma lesão de cárie
(ceo-d)( OMS, 1997).
Concluído o exame clínico, as mães receberam um kit com escova dental,
dentifrício e fio dental, além de instrução de higiene bucal para as próprias e seus
bebês. Aquelas mães com necessidade de tratamento odontológico foram
encaminhadas para serem atendidas na Clínica Integrada da FO/UFRJ,
enquanto os bebês foram atendidos na clínica de bebês da Disciplina de
Odontopediatria da FO/UFRJ.
Para análise por 1H RMN, a amostra final da saliva das mães foi preparada
através da mistura de 0,450 mL do sobrenadante salivar, 0,050 mL de água
deuterada (D2O; Cambridge Isotope Laboratories inc., USA) e 0,010 mL de
dodecil sulfato de sódio 4,4-dimetil-4-silapentane-1-sulfônico a 20 mM (DSS;
Sigma-Aldrich, Milwaukee, USA). O D2O serve de referência para o alinhamento
do campo magnético com a amostra (lock) e o DSS para o deslocamento químico
de hidrogênio, =0.00 ppm. A amostra final da saliva dos bebês foi preparada
através da mistura de 0,170 mL do sobrenadante salivar, 0,0189 mL de água
deuterada, e 0,038 mL de dodecil sulfato de sódio 4,4-dimetil-4-silapentane-1-
sulfônico (DSS) a 20 mM, mantendo a mesma proporção de D2O e DSS das
amostras da saliva das mães. O preparo das amostras do leite foi realizado
misturando 0,400 mL de sobrenadante de leite, 0,20 mL D2O e 0,010 mL de DSS.
Os espectros foram obtidos em um aparelho de 1H RMN 600 MHz (Bruker
Biospin, Rheinstetten, Germany) a 25°C (Piotto, Saudek et al., 1992; Silwood,
30
Lynch et al., 2002; Bertram, Eggers et al., 2009) por meio da sequência de pulsos
CPMG (Carr–Purcell–Meiboom–Gill). Utilizou-se a seqüência de pulso PRESAT
para a pressaturação do sinal da água (localizado a 4,7 ppm) e melhora da
qualidade do sinal. Algumas amostras foram submetidas à técnica 1H-1H-TOCSY
para confirmação do assinalamento e avaliação de ambigüidades.
Amostras representativas de saliva de pares de mães e bebês, assim
como amostras de leite, foram selecionadas para mensuração de concentração
de proteína total e confecção de gel de eletroforese de sódio dodecil sulfato-
poliacrilamida a 12%. A dosagem da concentração de proteína total foi realizada
através do método de Bradford (BIO-RAD, Richmond, CA, USA) e a albumina de
soro bovino, como proteína padrão (Bradford, 1976). A concentração de proteína
total foi mensurada por espectrofotometria através de espectrofotômetro
(Beckman Coulter Inc., Brea CA, USA) determinando o O.D. em comprimento de
onda de 595 nm. Todas as amostras foram analisadas em triplicata.
Para a confecção do gel de eletroforese as amostras salivares e do leite
materno foram preparadas com 15 µL de solução de tampão de amostra
adicionadas a um tubo com o equivalente a 10 µg de proteína total para cada
amostra. Em seguida, as amostras foram colocadas diretamente nos poços do
gel. A tensão constante de 120 V foi usada para o desenvolvimento da separação
eletroforética e o gel foi corado com Coomassie azul brilhante R-250 e em
seguida com nitrato de prata (Oakley, Kirsch et al., 1980; Freitas-Fernandes,
Rundegren et al., 1998; Ghafouri, Tagesson et al., 2003).
Para a análise estatística, os dados obtidos através de entrevista e exame
intra-bucal – tais como idade, IMC, CPO-D e os resultados do exame periodontal
– foram incluídos no programa estatístico SPSS 16.0 (SPSS Inc, MN, EUA).
Foram empregados o teste χ2, com nível de significância de 5% (p < 0,05) e a
frequência absoluta e relativa foram descritas, além da média e o desvio padrão.
Quanto à análise estatística dos dados de 1H RMN, previamente à análise, cada
espectro foi submetido ao ajuste de linha de base usando o software Topspin
(Bruker BioSpin, Rheinstetten, Alemanha). Para os assinalamentos foi
31
preconizado o protocolo recomendado por Silwood, Lynch et al., (2002) e o
banco de dados Human Metabolome Database1.
1 Human Metabolome Database (http://hmdb.ca/) é um banco de dados que contém
informações detalhadas sobre mais de 7900 metabólitos encontrados no corpo humano. Destina-se a ser utilizado para aplicação em metabolômica, química clínica, descoberta de biomarcadores e educação geral. O banco de dados contém link ou dados como: 1- características químicas, 2- características clínicas e 3-biologia molecular/bioquímica de dados.
32
4. DESENVOLVIMENTO DA PESQUISA
4.1 ARTIGO 1: Mother-to-child transmission of Streptococcus mutans: A
systematic review. VAS Bastos1, LB Freitas-Fernandes1, TKS Fidalgo1, C Martins
1, CT Mattos 2 , IPR Souza1 , LC Maia1
4.2 ARTIGO 2: Salivary profile and oral health from babies and mothers on
breastfeeding period. VAS Bastos1, LB Freitas-Fernandes1, C Martins 1, TKS
Fidalgo1, Pereira L1, Pomarico L1 , C Boghossian2, Feres E3, Almeida F4, Valente
AP1, IPR Souza1.
33
4.1 ARTIGO 1: Mother-to-child transmission of Streptococcus mutans: A
systematic review
Valéria de Abreu da Silva Bastos1
Liana Bastos Freitas-Fernandes1
Tatiana Kelly da Silva Fidalgo1
Carla Martins 1
Claudia Trindade Mattos 2
Ivete Pomarico Ribeiro de Souza1
Lucianne Cople Maia1
1Department of Pediatric Dentistry and Orthodontics, School of Dentistry,
Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brazil;
2Department of Dental Clinics, Universidade Federal Fluminense, Niterói, Brazil
Corespondence author
Lucianne Cople Maia
Email: [email protected]
Disciplina de Odontopediatria da FO-UFRJ
Caixa Postal: 68066 - Cidade Universitária - CCS
CEP.: 21941-971 - Rio de Janeiro – RJ – Brasil
34
ABSTRACT
Clinical question. A systematic review was performed with the purpose of
answering the question of whether there is scientific evidence of transmission of
Streptococcus mutans from mother to child.
Review methods. The database search was performed by two reviewers who
included studies published between January 1950 to May 2014, following
Pubmed, Cochrane e VHL. The strategy included observational studies that
assessed vertical transmission of S. mutans from mothers to children by analysis
of genetic strains. The eligibility criteria, based on the PECO strategy, were:
observational human studies whose subjects were mother and child pairs (P)
contaminated by S. mutans (E); comparison by the presence and absence of S.
mutans (C); and the molecular analyses used to identify the presence of S.
mutans transmission (O) were bacteriocin typing, serotyping, ribotyping,
Arbitrarily primed polymerase chain reaction (AP-PCR), multilocus sequence
typing (MLST), chromosomal DNA fingerprinting, or chromosomal DNA
restriction fragment length polymorphism (RFLP). The quality and risk of bias of
the included studies were evaluated.
Main results. One hundred and sixty-seven non-duplicated studies were found.
However, after revewing the full articles and application of eligibility criteria, 36
papers were selected for this systematic review. This review found that the
mother was responsible for transmission of S. mutans to their children,
particularly when the mother was the primary caregiver.
Conclusion. The present systematic review found evidence of vertical
transmission of S. mutans from mother to child, as there was an association
between S. mutans found in mothers and their respective children.
Key words: Streptococcus mutans; transmission; child, mother.
35
INTRODUCTION
The source from which an uninfected infant acquires cariogenic pathogens
has been the subject of intense investigation. Determination of how children
become colonized with cariogenic microorganisms and whether this colonization
occurs is important for understanding bacterial transmission.1-4 Regarding the
mechanism of Streptococcus mutans transmission, it has been suggested that
intimate contact such as sharing food or utensils is a contributing factor for vertical
transmission from mother to child.3
Transmission from mother to child is common sense. This question began
to be explored over 30 years ago and has received significant attention since
then.1It is well established in the literature that dental caries is a multifactorial
disease and depends on the other factors besides the presence of Streptococcus
mutans to develop.1,2,4 However, the knowledge of the Streptococcus mutans
strains is important since the microorganisms virulence is varied, also the
virulence will determine if dental caries rate evolution, being more or less
aggressive.5
Transmission of cariogenic microorganisms between mother and child
shown by matching strains has been Streptococcus mutans observed in many
studies.6-19 Innovative methods such as PCR and DNA fingerprinting at our
disposal nowadays provide reliable results, as demonstrated in many
studies.14,20-29 Although the large number of studies concerning transmission,
until this time there is no systematic reviews that support this evident. This
systematic review was accomplished in order to answer the following question:
is there scientific evidence of mother-to-child S. mutans transmission?
METHODS
Data collection
A systematic search of the literature published between January 1950 to
May 2014 was conducted on PubMed using the MeSH terms “dental caries“
[MesH Major Topic] AND “transmission” [subheading] and “dental caries”
36
[title/abstract] AND transmission [title/abstract]; in Cochrane Library databases.
We searched for “dental caries” AND “transmission“ in the title/abstract/keywords
and in the Virtual Health Library (VHL). We used the terms “dental caries “ AND
“transmission”, as shown in Table 1.
There was no restriction on language. We excluded duplicate papers, case
reports, case series, review articles, opinion articles, and letters, as well as
studies of children with oral defects, children with ongoing preventive/restorative
treatment, and mothers who used antimicrobial substances, such as
chlorhexidine and xylitol gum.
Table 1: The search strategy depicted according to each database selected in this study.
Base Search strategy
PUBMED ((("dental caries"[MeSH Major Topic]) AND transmission[MeSH Subheading])) OR (("dental caries"[Title/Abstract]) AND transmission[Title/Abstract])
Cochrane Library "dental caries" AND transmission [title/abstract/keywords]
VHL "dental caries" AND transmission AND db:("LILACS" OR "BBO" OR "IBECS")
Study selection
All electronically identified records were scanned by title and abstract. Two
authors (VASB and TKSF) read the articles independently in order to determine
the methodological quality of trials and the retrieved data. In cases of
discrepancies, a decision was made by consensus with a third author (LCM). Full
texts were obtained for all articles identified and judged as being potentially
relevant. Manual search was performed in the references of the included studies.
Eligibility criteria
The eligibility criteria were based on the PECO strategy:30 observational
human studies whose subjects were mother and child pairs (P) contaminated by
S. mutans (E); exposed to the presence and absence of S. mutans (C); and the
molecular analyses used to identify the presence of S. mutans transmission (O)
were bacteriocin typing, serotyping, ribotyping, AP-PCR, multilocus sequence
37
typing (MLST), chromosomal DNA fingerprinting, or chromosomal DNA
restriction fragment length polymorphism (RFLP).
Data analysis
An assessment of quality and risk of bias of the included studies was
carried out according to the guidelines described by Fowkers and Fulton31 and
Fidalgo et al.32 The checklist includes questions on study design, study sample,
characteristics of control group, quality of measurements and outcomes,
completeness, and distorting influences. When checking the criteria for each
study, we assigned problems for each criterion as major (++) or minor (+) in terms
of their expected effect on the results and a decision was made as to whether the
methods were adequate to produce useful information or not. Where the question
did not apply, the category was characterised as “NA”. To make a judgment and
to determine the value of the study, we posed three questions about bias,
confounding, and chance. The answer to each question could be “Yes” or “No”.
If the answer to the question was “No”, the paper was probably quite sound.
Extraction of data on methods, participants, and outcomes were performed
by two researchers (VASB and TKSF). Authors were contacted when necessary
to clarify details that were not detailed. It was evaluated the transmission
comparing the rates before and after the year 2000 and the kind of technique of
analysis, applying t test and ANOVA, respectively. The transmission rates were
included in the SPSS program (SPSS Inx, Il, USA), for the intervals of
transmission, it was chosen the lower value.
RESULTS
After reading 183 summaries that following up the inclusion criteria; 36
articles were selected according to PECO. These remaining 36 articles were
evaluated according to quality assessment and bias risk of the selected studies.
Electronic searches retrieved 167 non-duplicate records and 22 additional papers
were identified through the reference lists. After checking the title, abstract, and
full text of the identified studies, only 36 studies were selected for this systematic
review. The other 153 studies were excluded based on the following criteria:
38
horizontal transmission (n = 2); preventive measures (n = 48); transmission not
mentioned (n = 30); lack of genetic data (n = 5), review article (n = 38); case
report (n = 1); unhealthy subjects, children with cleft palate (n = 1); other
microorganism (n = 14); and animal study (n = 9). The authors of
Chinese/Japanese studies (n = 5) were asked for details of the articles. However,
none of them responded properly (Figure 1).
Figure 1: Flow diagram of the literature search.
Thirty-six studies were selected with at least one genetical analysis of
strains of S. mutans: 13 studies applied AP-PCR;11,14,19,20,22,25,26,28,29,33-36 10
studies used DNA fingerprinting;10,14,21,23,29,37-41 8 bacteriocin typing;6,7,9,15-17,42,43
4 serotyping/ribotyping;8,12,23,44 1 Cnm PCR;18 2 MLST;13,35 1 RFLP;20 1 plasmid
DNA.9 Eleven used more than one technique, despite the sample size. Some
studies evaluated testing accuracy and repeatability of observations or checked
calibration. All genetic tests described in the papers included microbiological
repetition. However, none of them reported blinding. Nineteen of the 36 selected
papers had performed some statistical treatment. The Figure 2A shows that it
39
was not found statistical difference in transmission rate when the kind of
technique was evaluated (p = 0.39; ANOVA test).
Studies from the 1970s and 1980s had a smaller sample size than those
published after 2000. Despite the improvement of microbiological methods of
analysis, the transmission was similar throughout the years (p = 0.57; t test), as
shown in Figure 2B. Six publications do not mention the percentage of
transmission. Thirteen studies showed level of transmission of 70% or above.
Among the 19 studies that had done statistical analysis, 12 presented a p-value.
DMF-t index data of the mother and the dmf-t children were described in 18
studies.12-14,19-22,25,28,33,34,36-41,45
Figure 2: Distribution of transmission rates by different techniques (A) (p = 0.39; ANOVA test)
and percentage of transmission according to the years (B) (p = 0.57; t test).
40
A critical appraisal of the quality of the studies and their bias control was
made in accordance with a detailed checklist (Table 2), following the guidelines
described by Fowkes and Fulton31 and Fidalgo et al.32 In general, the quality
assessment of the included studies showed that 28 studies presented bias6-12,14-
16,18-20,23-26,29,33-38,42-45 such as confounding factors like babies without teeth
together with the group of children with teeth,7,8,16,18-20,24,26,28,29,33,34,37,38,42-44 and
studies that did not mention intake of antibiotic from the mothers or babies. 6-12,14-
16,18-20,23-26,29,33,35-37,42-45 Another confounding factor found was that, for example,
including 2-month-old children without tooth in the mouth in the same group as
older children with primary dentition.45 In addition, in another study, the age of the
group was not mentioned, which may have influenced the results.42 Most of the
confounding factors found in the studies were not describing the plaque or caries
index, dietary habbits, and other problems.6-26,28,29,33-38,40,42-45 Furthermore, none
of these studies were randomised, and are therefore of low quality. None the
factors discussed above influenced the results of those studies, because all of
them have done as well as confirmed by genetic methods vertical transmission
of S. mutans from mother to child.
Table 3 summarises the participants, year, country, sample size, method
of identification of S. mutans in mother/child pair, statistical test, if there was a
significant difference, and maternal transmission of S. mutans, as well as the age
of the children. The age of the children varied among studies. In 24 studies, the
age groups were from 3 weeks to 3 years, in 11 studies from 4 to 12 years, and
in 1 study from 13 to 15 years.
41
Table 2: Quality assessment and bias risk of the selected studies.
Authors and year of publication
Study design approprite to objective?
Study sample representative
Control group acceptable?
Quality of measurementsand
outcomes? Completeness? Distorting influences? Summary questions
Obje
tive c
om
mon d
esig
n
Pre
vale
nce c
ross s
ectional
Pro
gn
osnis
cohot
Tre
atm
ent
contr
olle
d t
rial
cause C
oh
ort
, case-c
ontr
ol, c
ross-s
ectional
Sourc
e o
f sam
ple
Sam
plin
g m
eth
od
Sam
ple
siz
e
Entr
y c
rite
ria/e
clu
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ns
Non-r
espo
nd
ents
Definitio
n o
f contr
ols
Sourc
e o
f contr
ols
Matc
hin
g/r
an
dom
izatio
n
Com
para
ble
chara
cte
ristc
s
Valid
ity
Repro
ducib
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Blin
dn
ess
Qualit
y c
ontr
ol
Com
plia
nce
Dro
p o
uts
Death
s
Mis
sin
g d
ata
Extr
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us t
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ents
Conta
min
atio
n
Cha
ng
es o
ver
tim
e
Confo
un
din
g f
acto
rs
Dis
tort
ion r
educed b
y a
naly
sis
Bia
s
Are
the r
esults e
rronesouly
bia
sed in a
cert
ain
dir
ection?
C
onfo
un
din
g
Are
there
any s
eri
ous c
onfo
udin
g o
r oth
er
dis
tort
ing
influences?
C
ha
nce
Is t
hat
the r
esults o
ccurr
ed b
y c
hance
Berkowitz et al. (1975)7 0 - - - - 0 0 + 0 0 - - - - - - - 0 0 NA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Berkowitz et al. (1975)8 0 - - - - 0 0 + 0 0 - - - - 0 0 NA 0 0 0 NA 0 NA + + 0 + 0 Yes No No
Rogers et al. (1977)16 0 - - - - 0 0 + 0 0 - - - - 0 0 NA 0 0 0 0
NA 0 0
NA + 0 + 0 Yes No No
Davey et al. (1984)43 0 - - - - 0 0 + 0 0 - - - - 0 0 NA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Berkowit et al. (1985)6 0 - - - - 0 0
0 0 0 0 - - - - 0 0 NA 0 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Masuda et al. (1985)15 0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NA 0 0 0 NNA
0 NA + 0 + 0 Yes No No
Caulfield, et al. (1988)9 0 - - - - 0 0 + 0 0 - - - - 0 0 NA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Caufield et al. (1988)10 0 - - - - 0 0 + 0 0 - - - - - 0 0 NA 0 00 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Azevedo et al. (1994)42 0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Li et al. (1995)37 0 - - - - 0 0 0
0 0
0 0 - - - - 0 0 NNA 0 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Grönroos et al. (1998)12 0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NNA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Emanuelsson et al.(1998)41
0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NNA 0 0 0 NA 0 NA + 0 0 0 No No No
Emanuelsson et al. (1998)40
0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NNA 0 0 0 NA 0 NA + 0 0 0 No No No
Kosai et al. (1999)23 0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NNA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
42
Li et al. (2000)14 0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - - 0 0 NA 0 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Redmo et al. (2000)21 0 - - - - 0 0 + 0 0 - - - - 0 0 NA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 No No No
Van Loveren et al. (2000)17
0 - - - - 0 0 + 0 0 - - - - - 0 0 NA 0 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 No No No
Emanuelsson et al. (2001)39
0 - - - - 0 0 + 0 0 - - - - - 0 0 NA 0 00 0 NA 0 NA + 0 + 0 No No No
Tedjosasongko et al. (2002)45
0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NNA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Spolidorio et al. (2003)29 0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NNA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Kohler et al. (2003)44 0 - - - - 0 0 + 0 0 - - - - - 0 0 NA 0 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Klein et al. (2003)50 0 - - - - 0 0 + 0 0 - - - - - 0 0 NA 0 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Lindquist et al. (2004)24 0 - - - - 0 0 + 0 0 -- - - - 0 0 NA 0 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Ersin et al. (2004)11 0 - - - - 0 0 + 0 0 - - - - - 0 0 NA 0 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Li et al. (2005)34 0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Nakano et al. (2007)35 0 - - - - 0 0 + 0 0 - - - - - 0 0 NA 0 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Rubira ( 2007)28 0 - - - - 0 0 + 0 0 - - - - 0 0 NA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 No No No
Hames-Kocabas et al. (2008)22
0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NNA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 No No No
Lapirattanakul et al. (2008)13
0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NNA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 No No No
Carlettto-Körber et al. (2008)19
0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Alves et al. (2009)20 0 - - - - 0 0 + 0 0 - - - - - 0 0 NA 0 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Pabón et al. (2009)38 0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Mitchell et al. (2009)25 0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NNA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Nomura et al. (2009)18 0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NNA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Taenpaisan et al. (2012)26 0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
Pieralise et al. (2013)36 0 - - - - 0 0 0 0 0 - - - - 0 0 NA 0 0 0 NA 0 NA + 0 + 0 Yes No No
++, Major problem; +, minor problem; 0, no problem, NA, not applicable. *Quality assessment according to the guidelines described by Fowkes and Fulton( 31) for appraising a medical article.
43
Table 3: Description of the selected studies.
Autors Binomy
Mother/Child Children`s
age
Method of identificatiom of
S. mutans streptococci
Statistic Test Statistic
Difference Maternal
transmission Percentual of transmission
Berkowitz et al. (1975)7 9 Binomy
mother/child 3 weeks to 14 months
Serotype No No Yes -
Berkowitz et al. (1975)8 4 infants/4 mothers 8 to 14 months
Bacteriocin Typing No No Yes -
Rogers et al. (1977)16 10 Bionomy/mother/
child 6 months to 1 year
Bacteriocin typing No No Yes -
Davey et al. (1984)43 10 families 6 months to 1 year
Biochemical micromethod /
Bacteriocin typing No No Yes -
Berkowit et al. (1985)6 20 Binomy
Mother/child 10 to 16 months
Bacteriocin typing No p˂0.05 Yes 90%
Masuda et al. (1985)15 10 Mother/15
children 3 to 11 years
Bacteriocin typing No No Yes 54%
Caulfield, et al. (1988)9 3 Binomy
Mother/Child 14,7
months DNA fingersprinting No No Yes -
Caufield et al. (1988)10 12 Binomy
Mother/child
24 months to 12 years
Plasmid DNA/bacteriocin
typing
Fisher exact test
p˂0.05 Yes 75%
Azevedo et al. (1994)42 22 Binomy
Mother/child No Bacteriocin typing No No Yes 59%
Li et al. (1995)37 34 Binomy
Mother/child 0 to 3 years
Cromosomal DNA isolation/DNA fingerprinting
Chi-square Fisher exact
test p˂0.05 Yes 70,6%
Grönroos et al. (1998)12 20 Binomy
mother/child 18 months to 3 years
Ribotyping/ serotyping
Mann-Whitney U
test p˂0.05 Yes 64%
Emanuelsson et al.(1998)41
25 binomy Mother/child 19 fathers
36 +/-5 months
Chromosomal DNA fingerprinting
No No Yes 24%
Emanuelsson et al. (1998)40
18 families 3 years Chromosomal DNA
fingerprinting No No Yes 22,22%
44
Kosai et al. (1999)23 20 pair of
parents/36 children 1 month to 10 years
DNA fingerprinting / serotyping
Chi-square Fisher exact
test No
Yes
51,4%
Li et al. (2000)14 48 Mother/50 child 24 monts to 3 years
AP-PCR/Chromosomal DNA fingerprintig
Chi-square Fisher exact
test p˂0.05 Yes 44,7%
Redmo et al. (2000)21 11 families 3 years+-5
months Chromossomal
DNA fingersprinting No No Yes 54,54%
Van Loveren et al. (2000)17 12 binomy/mother/
Children 24 monts to 5 years
Bacteriocin activity No No Yes
58,33%
Emanuelsson et al. (2001)39
13 pairs of parents/10 children
3 years Genotyping
Cromossomal DNA fingerprinting
No No Yes 7,69%
Tedjosasongko et al. (2002)45
14 pairs of parents-6 caretakers/39
children
2 to 25 months
Chromosomal DNA probe assay
Student's test No Yes 33,3%
Spolidorio et al. (2003)29 22 Binomy
Mother/child 5 to 18 months
AP-PCR/Chomosomal DNA fingerprinting
Simple matcching coefficient
No Yes 54,5%
Kohler et al. (2003)44 16
BinomyMother/Child 6 months
Ribotypes/genptype similarity
No No Yes 87,5%
Klein et al. (2003)50 16 Binomy
Mother/child 5.9
Months AP-PCR
Chi-square Fisher exact
test p˂0.05 Yes 81,25%
Lindquist et al. (2004)24
Binomy 12 Mother/15
children
6 months to 7 years
Genomic Fingerprinting/ hybridization
ANOVA, Scheffes's
test p<0.05 Yes 70%
Ersin et al. (2004)11 8 Binomy
Mother/child
24 to 36 months
AP-PCR No No Yes 100%
Li et al. (2005)34 37 Binomy
Mother/child 2 months to 4 years
AP-PCR
Anova , Spearman's correlation coeficient ,
MannWhitney U test Chi-
Anova/ Chisquare
p˂0.05 Mann Whitney
P˂0.05
Yes 83,3%-100%
45
square Fisher exact test
Nakano et al. (2007)35 8 Binomy
Mother/Child 24 months to 9 years
MLST MLST based dendogram
No Yes 99,1-100%
Rubira ( 2007)28 14 Binomy
Mother/Child 7 months AP-PCR
Spearman's test
P˂0.05 Yes 100%
Hames-Kocabas et al. (2008)22
49 Mothers/56children
33,8 months
AP-PCR
Mann Whitney,
Spearman’s test
p˂0,05 Yes 24%
Lapirattanakul et al. (2008)13
20 Binomy Mother/child
26 months to 10 years
MLST T test No Yes 70%
Carlettto-Körber et al. (2008)19
24 Binomy Mother/Child
6-18 months
AP-PCR No No Yes 47,05%
Alves et al. (2009)20 16 Binomy
Mother/child 5 to 13 months
AP-PCR Cromosomal RFLP
Chi-square No Yes 50%
Pabón et al. (2009)38 60 Binomy
Mother/Child 0-7months DNA fingersprinting No No Yes 62,5%
Mitchell et al. (2009)25 23 Binomy
Mother/child 18 months to 6 years
AP- PCR Genotyping
Binomial distribuition
p<0.05 Yes 41%
Nomura et al. (2009)18 55 Binomy
Mother/child
24 months to 15 years
Cnm gene/AP-PCR Fisher
exact test p˂0.05 Yes 72%
Taenpaisan et al. (2012)26 37 Binomy
Mother/Child 12-48
months AP-PCR
Chi-square test
No Yes 76%
Pieralise et al. (2013)36 56 Binomy
Mother/Child 4-5 years AP-PCR
Chi-square test
No No No
46
DISCUSSION
This systematic review was performed in order to answer the question of
whether there is a scientific evidence of S. mutans transmission from mother to
child using methods of genetic identification to demonstrate matching strains. The
results indicate evidence of transmission from mother to child, since mother and
child S. mutans strains were proven to be identical.6-26,28,29,33-35,37-45
However, there was large variation in the percentage of transmission of
cariogenic microorganisms from mother to child, due the different genetic
techniques employed, as shown in Table 3. Transmission was observed despite
of sample size of the studies and regardless of the type of genetic technique
used.
Mutans transmission was assessed by genetic analysis and was
demonstrated in this systematic review.6-26,28,29,33-35,37-45 Interfamilial
transmission of S. mutans has been studied using serotype classification,6
bateriocin activity profiles,17 chromosomal DNA fingerprinting,39 ribotyping,44 an
arbitrarily primed PCR method,14 and multilocus sequence typing,35 with the
results of most of those studies indicating mother-to-child transmission. There
has been an improvement in the methods applied through the years, but evidence
of transmission was found independently of the sample size and genetic analyses
performed. Measures testing the accuracy and repeatability of the observers or
checking the calibration were seen. All genetic tests described in the papers
included microbiological repetition. However, none of the studies included in the
analysis were done blind. One limitation of sixteen studies was the absence of
the statistical analyses, but 20 of them had performed some statistical treatment.
The studies differ in their presentation of the level of caries from the mother
as well as their oral hygiene status, consumption of sugar, and use of antibiotics.
For instance, the studies with xylitol gum were excluded since its antimicrobial
activity.46,47 Sixteen studies described caries condition of the mother or infant,
which was not correlated with the level of S. mutans in saliva.13,14,18-22,28,33,34,37-
41,45
One of the exclusion criteria for this systematic review was children with
oral defects. Children with palatal cleft are expected to show early colonisation of
47
S. mutans, facilitated by the acrylic plate, although no transmission of S. mutans
from mother to child is expected as a consequence of the intense preventive
measures that cleft lip and/or palate children and their mothers are exposed to.48
Thus, the inclusion of studies on children with cleft palate could represent a bias
for this systematic review.
We noticed in this systematic review that S. mutans transmission from
mother to child occurred regardless of the child age. It remains unclear why the
mouth of a child is colonized by bacteria and if the mode of delivery affects the
acquisition of S. mutans in infants.34 Caesarean delivery accelerates initial
acquisition of S. mutans may be due to less exposure to the maternal microbiota
at birth. Vaginally delivered newborns come into contact with a larger amount of
bacteria and these must compete with other microorganisms for colonisation sites
and nutrients.49 Children delivered by Caesarean increase the acquisition of S.
mutans at an earlier age because of their biological potential niches for
adherence of bacteria into the mouth.34
In the overall view of the literature, the age of the children varied from a
couple of weeks to adolescence. The age of the child probably influenced
transmission from mother to child because most of the studies dealt with young
children. The studies did not discuss the influence of contributing factors on
transmission, like sharing food or utensils. Pieralise et al., 36 showed no S. mutans
transmission in children ages from 4 to 5 years old, the advanced age in
comparison to the others studies may have been a confounding variable, since
the children stay in contact with many caregivers. Our findings demonstrated that
children below 6 months of age presented similar rates of S. mutans transmission
from mother to child.7,33,42,44
Li et al.14 showed that intimate contact by breastfeeding influenced the
transmission of S. mutans. It was also observed that S. mutans transmission was
significantly higher in baby girls in comparison with baby boys,37 probably
because girls have earlier tooth eruption. It seems that tooth eruption contributes
to adhesion of S. mutans to oral surfaces, particularly because of the increase of
surfaces available for bacteria adherence. It is still not known why bacteria
actually appear in the mouth of children. Some studies have shown the presence
48
of bacteria even in children without any teeth. 7,33,42,44 It is possible that age could
play a role in the amount of S. mutans in saliva, with a progressively increase in
the amount of bacteria during childhood. It is important to bear in mind that the
amount of S. mutans in saliva reflects their adherence in the oral cavity.
It must be emphasised that the transmission of S. mutans is influenced by
the properties of the bacteria, host factors such as saliva components, teeth,
immunity, and diet, in addition to socioeconomic and environmental factors.45 All
studies showed transmission of S. mutans from mother to child, but intrafamilial
transmission was also seen.11,16,17,20,22,23,25,39-42,44,45 In most of the studies,
transmission of S. mutans from the mother to her child was confirmed when the
mother was the primary caregiver.1,6,8,9,12-15,24,29,33-35,43 These results may reflect
the susceptibility of children to their mother’s bacteria and also the different
intrafamilial spreading of S. Mutans.39-41 Social trends over the past few decades
might be changing the uniqueness of the mother-child relationship in early
childhood. Fathers are more involved in personal childcare than they were in the
1950’s, when some of these studies were published. Many more mothers are
now working full-time jobs. Scores of children have alternate caregivers, often
unrelated to the child, who spend significant, intimate time with that child. Kozai
et al. 23 demonstrated that a significant percentage of children receive their strains
of S. mutans from their fathers. In addition, a considerable percentage of bacterial
strains are from an unknown source.
Although S. mutans constitutes one of the aetiological factors for dental
caries development, the level of S. mutans transmission does not directly imply
the development of caries in infants, considering that this disease is related to
multifactorial factors (such as dietary and oral hygiene habits). Furthermore, it
must also be considered that as S. mutans transmission from mother to child
occurs, other pathological microorganisms can also be transmitted. It is
importante to emphasises the need of improve oral health of caregivers and
mothers. Preventive measures should be applied to the whole family to improve
oral hygiene habbits, based on instructions for oral health promotion. In the
current systematic review, we included the MeSH term “dental caries” in the
search strategy because the inclusion of this term in associated with the term
49
“transmission” provided a greater number of studies since, in the past, it was
believed that the acquisition of S. mutans directly implied the development of
caries in infants.
Finally, it is important to point out that most of the studies had a good study
design. There is a plausible explanation for the variation found within the studies
such as close contact of the mother with their child. Future investigations could
include longitudinal studies to understand the evolution of the transmission and
study the correlation between caries level of mothers and the rate of transmission.
The internal validity discussed is in line with the result such as the cause/effect
relationship of the transmission despite of sample size or even the type of the
genetic test. As to the external validity, in most of the studies, children/mothers
were selected in everyday situations, that is, in hospitals, at school, or in a special
preventive center.8,15,38,40
Based on this systematic review, it is possible to conclude that there is
scientific evidence of caregivers and, especially, mother-to-child S. mutans
transmission, particularly when the mother is the primary caregiver. Thus, oral
health professionals would have to consider the caries history of the mother as a
risk factor for a child patient. It is suggested that we might even consider bacterial
testing of the caregivers when determining caries risk for the child. Also, it should
be highlighted the necessity of longitudinal controlled studies for transmission
evaluation assessment.
CONCLUSION
The present systematic review found evidence of vertical transmission of S.
mutans from mother to child, as there was an association between S. mutans
found in mothers and their respective children.
REFERENCES
1 Berkowitz RJ, Turner J, Green P. Maternal salivary levels of Streptococcus mutans and primary oral infection of infants. Arch Oral Biol 1981;26(2):147-149.
2 Bradshaw DJ, Lynch RJ. Diet and the microbial aetiology of dental caries: new paradigms. Int Dent J 2013;63 Suppl 264-72.
50
3 Douglass JM, Li Y, Tinanoff N. Association of mutans streptococci between caregivers and their children. Pediatr Dent 2008;30(5):375-387.
4 Milgrom P, Huebner CE, Mancl L, Garson G, Grembowski D. Counseling on Early Childhood Caries transmission by dentists. J Public Health Dent 2013;73(2):151-157.
5 Argimon S, Caufield PW. Distribution of putative virulence genes in Streptococcus mutans strains does not correlate with caries experience. J Clin Microbiol 2011;49(3):984-992.
6 Berkowitz RJ, Jones P. Mouth-to-mouth transmission of the bacterium Streptococcus mutans between mother and child. Arch Oral Biol 1985;30(4):377-379.
7 Berkowitz RJ, Jordan HV. Similarity of bacteriocins of Streptococcus mutans from mother and infant. Arch Oral Biol 1975;20(11):725-730.
8 Berkowitz RJ, Jordan HV, White G. The early establishment of Streptococcus mutans in the mouths of infants. Arch Oral Biol 1975;20(3):171-174.
9 Caufield PW, Ratanapridakul K, Allen DN, Cutter GR. Plasmid-containing strains of Streptococcus mutans cluster within family and racial cohorts: implications for natural transmission. Infect Immun 1988;56(12):3216-3220.
10 Caufield PW, Walker TM. Genetic diversity within Streptococcus mutans evident from chromosomal DNA restriction fragment polymorphisms. J Clin Microbiol 1989;27(2):274-278.
11 Ersin NK, Kocabas EH, Alpoz AR, Uzel A. Transmission of Streptococcus mutans in a group of Turkish families. Oral Microbiol Immunol 2004;19(6):408-410.
12 Gronroos L, Saarela M, Matto J, Tanner-Salo U, Vuorela A, Alaluusua S. Mutacin production by Streptococcus mutans may promote transmission of bacteria from mother to child. Infect Immun 1998;66(6):2595-2600.
13 Lapirattanakul J, Nakano K, Nomura R, Hamada S, Nakagawa I, Ooshima T. Demonstration of mother-to-child transmission of Streptococcus mutans using multilocus sequence typing. Caries Res 2008;42(6):466-474.
14 Li Y, Wang W, Caufield PW. The fidelity of mutans streptococci transmission and caries status correlate with breast-feeding experience among Chinese families. Caries Res 2000;34(2):123-132.
15 Masuda N, Shimamoto T, Kitamura K, Sobue S, Hamada S. Transmission of Streptococcus mutans in some selected families. Microbios 1985;44(181S):223-232.
16 Rogers AH. Evidence for the transmissibility of human dental caries. Aust Dent J 1977;22(1):53-56.
51
17 van Loveren C, Buijs JF, ten Cate JM. Similarity of bacteriocin activity profiles of mutans streptococci within the family when the children acquire the strains after the age of 5. Caries Res 2000;34(6):481-485.
18 Nomura R, Nakano K, Taniguchi N, Lapirattanakul J, Nemoto J, Grönroos L et al. Molecular and clinical analyses of the gene encoding the collagen-biding adhesin of Strptococcus mutans. . J Med Microbiol 2009;58(2):469-475.
19 Carlettto-Körber FPM, Gonzales-Ittig RE, LS C. Transmissión y homologia de streotococcus mutans en binomios madre-niño. Claves de odontologia 2008;15(62):9-15.
20 Alves AC, Nogueira RD, Stipp RN, Pampolini F, Moraes AB, Goncalves RB et al. Prospective study of potential sources of Streptococcus mutans transmission in nursery school children. J Med Microbiol 2009;58(Pt 4):476-481.
21 Emanuelsson IR, Thornqvist E. Genotypes of mutans streptococci tend to persist in their host for several years. Caries Res 2000;34(2):133-139.
22 Hames-Kocabas EE, Ucar F, Kocatas Ersin N, Uzel A, Alpoz AR. Colonization and vertical transmission of Streptococcus mutans in Turkish children. Microbiol Res 2008;163(2):168-172.
23 Kozai K, Nakayama R, Tedjosasongko U, Kuwahara S, Suzuki J, Okada M et al. Intrafamilial distribution of mutans streptococci in Japanese families and possibility of father-to-child transmission. Microbiol Immunol 1999;43(2):99-106.
24 Lindquist B, Emilson CG. Colonization of Streptococcus mutans and Streptococcus sobrinus genotypes and caries development in children to mothers harboring both species. Caries Res 2004;38(2):95-103.
25 Mitchell SC, Ruby JD, Moser S, Momeni S, Smith A, Osgood R et al. Maternal transmission of mutans Streptococci in severe-early childhood caries. Pediatr Dent 2009;31(3):193-201.
26 Teanpaisan R, Chaethong W, Piwat S, Thitasomakul S. Vertical transmission of mutans streptococci and lactobacillus in Thai families. Pediatr Dent 2012;34(2):e24-29.
27 Pabón MCM, AR C. Estudo de las cepas de streptococcus do grupo mutans presents nos binomios madre-hijo. Rev Fac Odontol Univ Antioq 2009;21(2):177-185.
28 Rubira CMF. Estudo longitudinal sobre similariedade, transmissão e estabilidade de colonização de Streptococcus mutans em famílias brasileiras.Thesis. Bauru: USP; 2007.
29 Spolidorio DMP, Höfling JF, Pizzolitto AC, Rosa EA, Negrini TC, Spolidorio LC. Genetic Polymorphism of Streptococcus Mutans in Brazilian Family Members. Braz J Microbiol 2003;34(3): 213-217.
52
30 da Costa Santos CM, de Mattos Pimenta CA, Nobre MR. The PICO strategy for the research question construction and evidence search. Rev Lat Am Enfermagem 2007;15(3):508-511.
31 Fowkes FG, Fulton PM. Critical appraisal of published research: introductory guidelines. Bmj 1991;302(6785):1136-1140.
32 Fidalgo TKS, Ammari M, Freitas-Fernandes LB, Mattos CT, Souza IPR, Maia LC. The relationship between unspecific s-IgA and dental caries: a systematic review and meta-analysis. J Dent 2014;42(in press).
33 Klein MI, Florio FM, Pereira AC, Hofling JF, Goncalves RB. Longitudinal study of transmission, diversity, and stability of Streptococcus mutans and Streptococcus sobrinus genotypes in Brazilian nursery children. J Clin Microbiol 2004;42(10):4620-4626.
34 Li Y, Caufield PW, Dasanayake AP, Wiener HW, Vermund SH. Mode of delivery and other maternal factors influence the acquisition of Streptococcus mutans in infants. J Dent Res 2005;84(9):806-811.
35 Nakano K, Lapirattanakul J, Nomura R, Nemoto H, Alaluusua S, Gronroos L et al. Streptococcus mutans clonal variation revealed by multilocus sequence typing. J Clin Microbiol 2007;45(8):2616-2625.
36 Pieralise FJS, Maciel SM, Andrade FB, Garcia JE, RC. P-F. Detection of Streptococcus mutans of the spaP gene and dental caries in mother/child pairs. Rev Gaúcha Odontol 2013;61(2):205-211.
37 Li Y, Caufield PW. The fidelity of initial acquisition of mutans streptococci by infants from their mothers. J Dent Res 1995;74(2):681-685.
38 Pabón MCM, Ciodaro AR. Estudo de las cepas de streptococcus do grupo mutans presents nos binomios madre-hijo. Rev Fac Odontol Univ Antioq 2009;21(2):177-185.
39 Redmo Emanuelsson IM, Thornqvist E. Distribution of mutans streptococci in families: a longitudinal study. Acta Odontol Scand 2001;59(2):93-98.
40 Redmo Emanuelsson IM, Wang XM. Demonstration of identical strains of mutans streptococci within Chinese families by genotyping. Eur J Oral Sci 1998;106(3):788-794.
41 Emanuelsson IR, Li Y, Bratthall D. Genotyping shows different strains of mutans streptococci between father and child and within parental pairs in Swedish families. Oral Microbiol Immunol 1998;13(5):271-277.
42 Azevedo RV, Zelante F. Streptococci of the mutans group: confirmation of intrafamilial transmission by mutacin typing. Braz Dent J 1994;5(1):27-34.
43 Davey AL, Rogers AH. Multiple types of the bacterium Streptococcus mutans in the human mouth and their intra-family transmission. Arch Oral Biol 1984;29(6):453-460.
53
44 Kohler B, Lundberg AB, Birkhed D, Papapanou PN. Longitudinal study of intrafamilial mutans streptococci ribotypes. Eur J Oral Sci 2003;111(5):383-389.
45 Tedjosasongko U, Kozai K. Initial acquisition and transmission of mutans streptococci in children at day nursery. ASDC J Dent Child 2002;69(3):284-288, 234-285.
46 Antonio AG, Pierro VS, Maia LC. Caries preventive effects of xylitol-based candies and lozenges: a systematic review. J Public Health Dent 2011;71(2):117-124.
47 Bader JD, Vollmer WM, Shugars DA, Gilbert GH, Amaechi BT, Brown JP et al. Results from the Xylitol for Adult Caries Trial (X-ACT). J Am Dent Assoc 2013;144(1):21-30.
48 de Soet JJ, Bokhout B, Buijs JF, van Loveren C, de Graaff J, Prahl-Andersen B. Transmission of mutans streptococci between mothers and children with cleft lip and/or palate. Cleft Palate Craniofac J 1998;35(5):460-464.
49 Gibbons RJ. Bacterial adhesion to oral tissues: a model for infectious diseases. J Dent Res 1989;68(5):750-760.
50 Klein M. Transmissão, diversidade e estabilidade de genótipos de Streptococcus mutans e de Streptococcus sobrinus: estudo longitudinal em crianças. Tese. Piracicaba: Unicamp; 2003.
54
4.2 ARTIGO 2: Salivary profile and oral health from babies and mothers on breastfeeding period
VAS Bastos1, LB Freitas-Fernandes1 , TKS Fidalgo1, C Martins1 , Pereira L1,
Pomarico L1 , C Boghossian2, Feres E2, Almeida F4, Valente AP4, IPR Souza1
1- Department of Pediatric Dentistry and Orthodontics, School of Dentistry,
Universidade Federal do Rio de Janeiro
2- Division of Graduate Periodontics, School of Dentistry, Universidade
Federal do Rio de Janeiro
3- Biochemistry Institute, CNRMN, National Center of Magnetic Resonance,
Universidade Federal do Rio de Janeiro
Correspondence to: Dr Ivete Pomarico Ribeiro de Souza, Disciplina de
Odontopediatria da FO-UFRJ, Caixa Postal: 68066 - Cidade Universitária - CCS,
CEP.: 21941-971 - Rio de Janeiro – RJ – Brasil, Phone: + 55 21 25622101
E-mail: [email protected]
55
ABSTRACT
The aim of this study is to describe the oral health condition as well as saliva
profile from women and their respective babies in breastfeeding period including
breast milk. Forty seven mothers were interviewed and demographic data was
recorded. The pairs of mother-baby received intra oral examination. The mothers
examination started with oral mucosa, oral hygiene status by O´Leary,
periodontal examination and DMF-T Index and in order to stablish the mother
bucal condition. The babies had their oral mucosa and teeth examined (dmft).
Babies and mothers’ salivary sample and mother’s breastmilk were collected and
analysed by 1H-NMR thought a 600MHz spectrometer. Representative samples
from saliva and breast milk were selected according to age group for SDS-PAGE
electrophoresis analysis. The data were tabulated and analised in a statistical
program (SPSS).The result revealed that the mean age was 27 years old and
53.9 % of mothers were overweight. Women bucal conditions reveled 8.20 of
DMF-T, 72.4% of gingivitis and 62% of dental plaque presence. The babies’s
intraoral exam demonstrated presence of candidiasis and bohn nodule in 4.18%
and 2.08% of babies, respectively and no caries. 1H NMR spectrum showed that
oldest babies increased levels of lactate, ethanol, acetate, propionate, n-butyrate
and n-acetyl sugars and reduced levels of sugar. The 1H NMR analysis of salivary
samples from mothers showed metabolites such as propionate, ethanol, lactate,
acetate, butyrate, N-Acetil, besides sugar region. The 1H NMR breastmilk from
mothers demonstrated high intensity of lactose in sugar region. It was concluded
that mothers had low actual caries activity, however with important past caries
history. This may have an impact on the oral health of their children. Also, it was
possible to determine the salivary and breast milk profile from mother and salivary
profile from babies.
Key-words: Oral health, children, saliva, electrophorese, NMR.
56
1 INTRODUCTION
Women’s oral health may improve their quality of life but also has a
potential to modulate the transmission of pathogenic bacteria from mothers to
their children.1-3 Gingivitis is one of the most common clinical periodontal
condition, having diferent occurrence among women during pregnancy and
breastfeeding period.4,5 Although it is well known that oral hygiene level is related
with gingival health6 and a satisfactory oral hygiene may promote periodontal
health, the frequence of preventive measures during pregnancy as well as after
postpartum period many times is neglected by women. It is known that women
during postpartum developes dental caries and periodontal diseases. 4,5
Breast milk is broad area of possible investigation and deal with
composition of the milk seems that diet, genetics, number and stage of lactation
influence it. The metabolites in the milk was studied indicated metabolic activity
in the mammary gland. Chemical compound of milk have bioactive compounds
with a potential undersdanding of milk biomarkers.26,35,36
Saliva has been recently proposed to be a successful source of biological
information for early diagnosis of various systemic diseases.7-10 It is easily
accessible, has low infectious nature and can be sampled in a non-invasively
way. Salivary samples analyzed by 1H NMR exhibit changes in their metabolite
profile when in presence of dental caries11, corroborating to several evidences of
a direct relationship between clinical condition and salivary components.
Accordingly, saliva has been used as a source of biomarkers for different oral
and systemic conditions.12
Further development of salivary diagnostic systems may provide broader
access to accurate health assessment even to lower income populations.
Puerperal woman and newborn children are population groups of vulnerable and
frequently neglected health conditions. The lack of this information regard of this
study group may dificulties to design health programme for this particulary group.
This study would also understanding oral health conditions and saliva profile from
mothers and their babies. Thus the aim of this study is to describe the oral health
condition as well as saliva profile from women in breastfeeding period and their
respective babies including the breast milk.
57
2 MATERIAL AND METHODS
Sample Subjects
After approval of the Local Ethical Committee, 47 pairs of mothers and
babies were selected from two maternity hospitals and a outpatient public clinic
(Rio de Janeiro, Brazil). It was considered for this study just no smoking women
who had had babies in the earlier few months. In addition, the babies should be
clinically healthy. Each woman signed a written consent authorizing her own
participation and also her babies participation – as legal guardians – in the study.
Data Collection
The study was cross-sectional, which analyzed the oral health status and
profile of salivary metabolites of 47 women and their babies ( 0-28 months). With
regard to the size of the sample that was selected for convenience. In the case
of the mother- baby pair, as the public network such as the Hospital Fernando
Magalhães, Federal Hospital of Bom Sucesso and the Faculty of Dentistry, UFRJ
are landmarks in the city of Rio de Janeiro to meet babies. Mothers and babies
anamnesis were performed in order to obtain information about age and socio
economic conditions (ABEP, 2008) as well as general health, delivery type, Body
mass index (BMI) and breastfeeding. All participants were collected 2 mL of
unstimulated saliva by spitting it into a graduated collection tube on ice. Mothers
were required to refrain from eating and drinking for 2 hours and infants for 1 hour
before saliva collection. Regarding to the infants, a pipette was deposited at the
mouth floor to collect 0.5 mL of unstimulated whole saliva. Thereafter the
breastmilk was collected. During the collection period the individuals were
confortably seated in a ventilated and lighted room. All salivary samples were
centrifuged at 4oC and 10,000g for 60 minutes (Cientec, CT-15000R, Brazil) and
the supernatants were stored at 80°C until NMR analysis as recommended by
Silwood.13
The intra-oral exam was performed by a calibrated examiner and
periodontal exam was performed (Kappa=0.83), DMF-T suggested by the World
Health Organization14 (Kappa=0.84). The mothers examination started with
mucosa examination, followed by periodontal examination, which included the
58
presence of plaque (PI), gingival (GI), calculus (CI) and suppuration (SI) index,
bleeding on probing (BOP), probing pocket depth (PPD) and clinical attachment
loss (CAL) recorded at six sites per teeth in all teeth (except at third molars).
Thereafter data from DMF-T were collected14. It was considered with dental
plaque subject with 25% of the surfaces with plaque, as suggested by O’Leary
index.15 Clinical diagnosis of periodontal status was established for all subjects
based on the following criteria: periodontally healthy < 10 % of sites with BOP, no
PD or CAL > 3mm; although PD or CAL= 4mm in up to 5% of the sites without
BOP was allowed; gingivitis > 10 % of sites with BOP, no PD or CAL > 3 mm;
although PD or CAL = 4 mm in up to 5% of the sites without BOP was allowed;
chronic periodontitis > 10 % of teeth with PD and /or CAL > 5 mm and BOP. 16
Generalized aggressive periodontitis was characterized by involvement of 30%
of teeth with PPD and / or CAL > 5 mm with bleeding on probing concurrently and
including at least one incisor and first molar (Da Silva-Boghossian, Do Souto et
al ., 2011).
Regarding to the babies, the oral examination consisted of buccal mucosa
analyses to identified any mucosa changes, and thereafter the amount of teeth
and caries index were registred.
NMR Measurents
Mothers´s salivary samples were prepared by mixing 0.450 mL of salivary
supernatant, 0.050 mL of deuterium oxide (99.8% D2O, which provided a field
frequency lock) and 0.010 mL of sodium dodecyl sulfate 4,4-dimethyl-4-
silapentane-1-sulfonic acid (DSS) 20 mM for chemical shift reference of 1H
spectra, =0.00 ppm. On the other hand, the infants´s salivary samples were
prepared by mixing 0.170 mL of salivary supernatant, 0.0189 mL of deuterium
oxide and 0.0038 mL of DSS 20 mM (maintaining the same proportion of
mothers´s salivary samples for D2O and DSS preparation). The human milk
samples were prepared by mixing 0.400 mL of salivary supernatant, 0.20 mL of
deuterium oxide and 0.010 mL of sodium dodecyl sulfate 4,4-dimethyl-4-
silapentane-1-sulfonic acid (DSS) 10 mM for chemical shift reference of 1H
spectra, =0.00 ppm. The field-frequency was set by detecting the D2O signal.
For the NMR spectra acquisition it was used a Bruker 600MHz Advance
59
spectrometer (Bruker Biospin, Rheinstetten, Germany) equipped with a 5 mm
high-resolution probe and operating at a frequency of 600 (1H) MHz.13 All spectra
were obtained at 25°C with water suppression by presaturation.17-18
The CPMG (Carr-Purcell-Meiboom-Gill) pulse sequence was used to
suppress signals from proteins and other macromolecules through a T2 filter,
using 1024 scans for mothers´s salivary samples and 2048 scans for infants´s.
1H-1H total correlation (TOCSY) experiments were conducted with acquisition
parameters of 256 T1 increments (each with magnitude of 2048 data points), a
spectral width 12,019 Hz in each dimension and a mixing time of 70 min. NMR
signals were determined by an established range of frequency resonances
(chemical shifts), expressed in ppm, which were defined by the differences of
resonances of a specific substance and a well-marked standard substance. The
major signals could be unambiguously assigned based on TOCSY and based on
Silwood et al13 and the Human Metabolome Database (http://www.hmdb.ca).18
Electrophoresis Analysis
Salivary representative samples from mothers and babies were selected
for electrophoresis analysis as well as breast milk samples. Total protein
concentration was quantified based on Bradford protocol19(BIO-RAD, Richmond,
CA, USA) and, subsequently, the salivary samples were prepared and analyzed
by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) using
the 12% running gel and 4% stacking gel. Mothers’s and babies salivary samples,
as well as, breast milk samples were analyzed separately in three different
electrophoresis gels. The molecular weight standard (BIO-RAD, California, USA)
was applied in all gels with molecular weight from 260 kDa until 15 kDa.
Electrophoresis was done at 120 V for around 2-3 hours and then it was stained.
SDS-PAGE was carried out according to Schwartz et al.20 All gels were stained
using Coomassie blue followed silver nitrate.
Statistical Analysis
Mothers´s and babies data – such as age, DMF-T Index and the results
from periodontal exams – were computed on SPSS software (SPSS Inc, MN,
60
USA 16.0). The frequencies, besides mean and standard deviation, were
described and Chi-square test was used for statistical analyses with a 5%
significant level (p-value ≤ 0.05). The analysis done were the dental plaque agaist
frequence of brushing / dental plaque agaist gingivitis. For analysis of the NMR
data, each spectral was submitted to baseline adjustment by Topspin software
(Bruker Biospin, Rheinstetten, Germany) and the metabolite data were
descriptive analysed.
3 RESULTS
The mean S.D. age of the mothers (n=47) and babies (n=48) was 27.6
6.34 years old and 132.8 165.7 days old, respectivelly. One mother have twin.
Among the babies, 56% were male and 44% female. Thirty nine (81.25%) babies
were edentulous, while nine (18.75%) babies presented a total of 74 teeth varies
from 2 to 16 teeths.None of them have dental caries. Three babies presented oral
alterations, such as candidiasis (n=2) and Bohn nodule (n=1). More information
(weight, mothers BMI, economic classification, parturition and breastfeeding) is
shown at Table 1.
Considering the oral condition, the presence of dental plaque was
observed in 62% of mothers and 72,4 % presented gingivitis (Table 2). No
difference was found between the correlation of dental plaque and frequence of
dental brushing as well as the gingivitis. The DMF-T Index was 8.20 ( 6.39) and
the decayed component was 1.71 ( 1.94), indicating low actual caries activity
and high caries history.
The electrophoresis analysis showed that the patterns of salivary proteins
by SDS-PAGE revealed similarity between mothers and babies proteins.
However, it is possible to observe higher intensities in the mother salivary
proteins, mainly in region of ~70, ~35 and ~15 KDa, as showed in the Figure 1.
The patterns of human milk is possible to be observed in Figure 2, demonstrating
similariry among the mothers and increased protein concentration in ~70 and ~35
KDa.
61
Table 1: Demographic data which characterize the mother and babies and oral health condition.
Variables Mothers
(n = 47)
Babies
(n = 48)
Age ( SD)*
Mothers in years
Infants in days
27.6 ( 6.3) 132.8 ( 165.7)
Gender (%)
Male
Female
--- 56.2 %
43.8 %
Income
< 5 salaries 97.8 % ---
5 – 10 salaries 0.0 % ---
10 – 15 salaries 0.0 % ---
> 15 salaries 2.2 % ---
Economic classification21
B2 (score 23 – 28)
C1 (score 18 – 22)
C2 (score 14 – 17)
D (score < 14)
2.2 %
42.2 %
48.9 %
6.7 %
---
---
---
---
Weight – Kg ( SD)* 66.6 ( 18.2) 3.3 ( 6.2)
BMI ( SD)* 26.1 ( 5.8) ---
Classification of BMI
Under weight 5.10 % ---
Normal weight 41.0 % ---
Overweight 33.4 % ---
Class I obesity 12.8 % ---
Class II obesity 5.1 % ---
Class III obesity 2.6 % ---
Breastfeeding (exclusive) 64.6 % ---
Parturition
Vaginal birth 29.2 % ---
Cesarean section 70.8 % ---
*Standard deviation; BMI – Body mass index.
62
Table 2: Oral findings of mothers and their babies.
Variables Mothers Group (n = 47)
Frequency of tooth brushing (times a day)
2.7 0.8
Plaque presence (% women) 62.0
Gengival index (% sites) 28,4
Presence of Calculus 6,1
Pocket depth (mm) 2.0
Bleeding on probing (% sites) 22
Attachment level (mm) 2.1
Suppuration (% sites) 0.0
Gingivitis (% women) 72.4%
Periodontitis (% women) 0%
DMFT ( SD)* 8.2 ( 6.39)
Decayed teeth 1.71
Missing teeth 16.4
Filled teeth 9.9
Variables Babies Group (n = 48)
Number of teeth ( SD)* Babies without teeth Babies with teeth
3.2 6.3 39 9
Dmft 0.0
Oral healthy (%) 93.8
Alterations
Candidiasis (%) 4.2
Bohn nodule (%) 2.1
*Standard deviation. **at least one site with pocket depth >4
Figure 1: Eletrophoretic pattern of representative saliva samples from mothers (A) and their babies (B).
63
Figure 2: Eletrophoretic pattern of representative human milk samples.
Figure 3 showed that babies with teeth present increasing levels of lactate,
ethanol, acetate, propionate, n-butyrate and n-acetyl sugars and reduced levels
of sugar. The representative saliva spectrum from babies with one month old
without teeth. Figure 4 demonstrated spectra of children without teeth with
exclusive and mixed breast milk, showing the presence of milk in saliva. Figure 5
shows 1H-NMR analysis of salivary samples from orally healthy and unhealthy
mothers showing alterations in metabolites such as propionate, ethanol, lactate,
acetate, butyrate, N-Acetyl sugar, and sugar region. Figure 6 illustrates the 1H-
64
NMR breastfeeding milk from 3 mothers demonstrating the high intensity of
lactose in sugar region.
Figure 3: 1H NMR saliva spectra differences among children with (A and B) and without (C and D) teeth.
Figure 4: 1H NMR saliva spectra of children without teeth with exclusive (A and B) and mixed (C and D) breast milk.
65
Figure 5: 1H NMR saliva spectra of mothers with (A and B) and without (C and D) oral disease.
Figure 6: 1H NMR breast milk spectra from 3 mothers indicating large amount of lactose.
66
5 DISCUSSION
Better hygiene is one of the important measure for the maternal mortality
decrease.22 In this way, it must be highlighted that oral hygiene is the an important
step in mantainence of oral health, especially during pregnance and
breastfeeding period.23-25 Despite of the young age, 53.9 % of women presented
overweight (33.4%) or obesity (20.5 %) and most of them belong to a group of
lower income. Threre is a tread globally of increasing overweight among women
particularly in American ones. The obesity play a role on contribuition of increase
diabetes, cardiovascular and non communicable diseases. 26
The mothers have a particular characteristic on bucal condition. This study
have described the level of dental plaque, periodontal and caries diseases. High
amount of plaque and gingivitis were observed in our study group, and the level
of plaque found does not corresponds to the frequency of oral hygiene habits.
The subjects claim that brushing their teeth however remain to have a lot of
plaque. Mothers of young children it would be expected to present better behavior
toward oral healh. 4-6,24,25,27 This behaviour may have an impact on oral care of
their respective child. Most of the mother knowns the importance of cleaning
child’s mouth, however it is seems that this habit is not well done. Eventually,
mother should be motivated to clean baby month. It is suggested that mothers
that neglect her own oral health, also don’t properly care about their baby mouth.
It seems that baby cleaning habbit may prevent some oportunisc flora. Most of
the women from the present study do not have the knowedge of the need of it. It
is important that the cleaning of children’s mouth started during young age.
Futhermore this habbit is the key for mother-children oral hygiene behavior.
Gingivitis is the most frequent periodontal disease observed among the
women during breastfeeding period.4,5 Considering hormonal changes in women
body, gingivitis were observed in high levels. In fact, it is important to remain that
probing depth, calculus or bleeding on probing sites were recorded for each
women. We have following classification that was considered gingivitis when
more than 10 % of the sites have bleeding sites with lower pocket depth.. The
level of gingivitis in this group is in line with previous investigations.4-6,24,27 The
gingivitis level corresponds to the amount of plaque observed. According to the
67
applied criteria in this study, we could not classify any patient as periodontite one.
The lower value observed in our samples regarded to probing pocket depth (PPD)
and or clinical attachment loss (CAL) with bleeding on probing indicate this result.
There is a indication that salivary metabolites profile from womem with gingivitis
differ from health subjects.
Although the decayed component was low, the missing teeth was high,
indicating an important caries history. Maybe, the low number remaining teeth
explain the low decayed component. In addition, the treatment of mother bucal
needs and the prevention of oral disease in early childhood improves bucal health
condition and influence the quality of life.
The babies oral conditions were mostly healthy, however one child
presented Bohn nodule and two children presented candidiase. The candidiase
is one lesion commonly observed in young children mouth.28 It is important to
note that the twins in our sample were the ones with this condition. The mother
was not awarded of the necessity of mouth cleaning or even if these condition
needs to be treat. The twins babies were treated and recovered oral health, in
this case saliva possibly was the responsible to contaminate one child to another.
Thereafter, mother understood the impact of baby mouth cleaning particularly
within and after breastfeeding period.
It is known that young child flow rate is eighteen times lower than older
children or adult ones.29 The reduced saliva flow rate in babies is a factor of
bacteria retention on different oral surfaces which favor growth of bacteria. It is
also observed lower amount of protein composition from baby saliva in
comparison with adult ones. Further investigation could quantify the amount of
protein contained in babies saliva samples. The understanding of baby saliva
could play a role in this started point on colonization of bacteria in young
children’s mouth.
We have demonstrated simililarities from the components presented in
women saliva when compared with their baby. However, it seems that baby saliva
presented less amount of components as well as a large amount of sugar, such
as lactose, probably provide from breast milk. It was also found a modification of
68
proton spectrum from two weeks in comparison with that one month and six
month babies which presented changes in the levels of lactate, ethanol, acetate,
propionate, n-butyrate and n-acetyl sugars and reduced levels of sugar. The
reduced amount of sugar probably are related with the modification of child intake
of food, since the first month of life children receive exclusive breast milk and
after six months other nutrient are included in the diet. It should be pointed out
that large amount sugar areas in the spectrum could influence the accuracy of
detection of the other components in baby saliva spectrum. Thus, further
analyses should be done to explore better these metabolites in the spectra.
Youngest children presented higher concentration of organic acids from
microorganisms metabolism.11 These children presented more erupted teeth and
higher area of enamel for microorganisms colonization, increasing the acid
production, as can be observed. On the other hand, youngest babies presented
increased intensity in the sugar region, due to the breastfeeding, and low levels
of acid production due to the absence of teeth. Humans milk is important to the
diet during infancy. 25-29 Lipid and lactose are two major caloric nutrients and also
others different bioactive compounds such as immunoglobulin, peptides,
nucleotides, oligosaccharides and metabolites.26,30-39 The composition of milk
influenced by a range of different factors such as diet, genetics, number and
stage of lactation. All these factors play a role in properties of milk. The
metabolites in the milk often reflect metabolic activity in the mammary gland.
Chemical compound of milk is important for our understanding of its nutricional
value, including bioactive compounds and potential undersdanding milk
biomarkers.26,35,36 For example, choline is one of the constituent of cell
membrane, and a precursor of the neurotransmitter acetylcholineare present in
milk composition.40-43 The identifications of total choline content in human
colostrums at birth was observed to be lower than mature milk, seven days after
postpartum. This compound was correlated with the acceleration in growth that
the neonate experiences at this time point.43
The NMR analyzes and electrophoresis showed differences between
saliva of mothers and their respective babies. The edentulous infants have less
69
organic acids in saliva than their mothers. The saliva from babies with exclusive
breastfeeding and breast milk showed a large amount of sugar especially lactose.
6 CONCLUSION
It was concluded that mothers had low current caries activity, but with
relevant previous history of cavities, which can have an impact on the oral
health of their babies.
The analysis of NMR of saliva samples showed differences between
mothers and babies and the intensity of metabolites such as n- butyrate ,
propionate , ethanol beyond the lactose that dominated the saliva of babies
when compared to mothers. The breastmilk metabolites profile indicated large
amount of lactose.
Acknowledgments
The authors acknowledge the financial support from the following
agencies: National Institute of Science and Technology of Structural Biology and
Bioimaging (INCT-INBEB), CNPq, FAPERJ, FINEP, and CAPES.
REFERENCES
1 Hames-Kocabas EE, Ucar F, Kocatas Ersin N, Uzel A, Alpoz AR. Colonization
and vertical transmission of Streptococcus mutans in Turkish children. Microbiol
Res 2008;163(2):168-172.
2 van Loveren C, Buijs JF, ten Cate JM. Similarity of bacteriocin activity profiles
of mutans streptococci within the family when the children acquire the strains
after the age of 5. Caries Res 2000;34(6):481-485.
3 Davey AL, Rogers AH. Multiple types of the bacterium Streptococcus mutans
in the human mouth and their intra-family transmission. Arch Oral Biol
1984;29(6):453-460.
70
4 Carrillo-de-Albornoz A, Figuero E, Herrera D, Bascones-Martinez A. Gingival
changes during pregnancy: II. Influence of hormonal variations on the subgingival
biofilm. J Clin Periodontol 2010;37(3):230-240.
5 Barak S, Oettinger-Barak O, Oettinger M, Machtei EE, Peled M, Ohel G.
Common oral manifestations during pregnancy: a review. Obstet Gynecol Surv
2003;58(9):624-628.
6 Rudiger SG, Carlen A, Meurman JH, Kari K, Olsson J. Dental biofilms at healthy
and inflamed gingival margins. J Clin Periodontol 2002;29(6):524-530.
7 Nagler R, Bahar G, Shpitzer T, Feinmesser R. Concomitant analysis of salivary
tumor markers--a new diagnostic tool for oral cancer. Clin Cancer Res
2006;12(13):3979-3984.
8 Shpitzer T, Bahar G, Feinmesser R, Nagler RM. A comprehensive salivary
analysis for oral cancer diagnosis. J Cancer Res Clin Oncol 2007;133(9):613-
617.
9 Yoon MS, Jankowski V, Montag S, Zidek W, Henning L, Schluter H et al.
Characterisation of advanced glycation endproducts in saliva from patients with
diabetes mellitus. Biochem Biophys Res Commun 2004;323(2):377-381.
10 Chiappin S, Antonelli G, Gatti R, De Palo EF. Saliva specimen: a new
laboratory tool for diagnostic and basic investigation. Clin Chim Acta 2007;383(1-
2):30-40.
11 Fidalgo TKS, Freitas-Fernandes LB, Angeli R, Muniz AMS, Gonsalves E,
Santos R et al. Salivary metabolite signatures of children with and without dental
caries lesions. Metabolomics 2013;9(3):657-666.
12 Wong DT. Salivary diagnostics powered by nanotechnologies, proteomics and
genomics. J Am Dent Assoc 2006;137(3):313-321.
13 Silwood CJ, Lynch E, Claxson AW, Grootveld MC. 1H and (13)C NMR
spectroscopic analysis of human saliva. J Dent Res 2002;81(6):422-427.
71
14 Word Health Organization. Oral health surveys,basics methods. Geneva:
Word Health Organiza-tion; 1997
15 O´Leary TJ & Drake RB. The plaque controle record. J Periodontol 1972;
43:38.
16 Da Silva-Boghossian, CM, R. M. Do Souto, et al. Association of red complex,
A. actinomycetemcomitans and non-oral bacteria with periodontal diseases. Arch
Oral Biol, 2011; 56:(9): 899-906.
17 Bertram HC, Eggers N, Eller N. Potential of human saliva for nuclear magnetic
resonance-based metabolomics and for health-related biomarker identification.
Anal Chem 2009; 81(21):9188-9193.
18 Piotto M, Saudek V, Sklenar V. Gradient-tailored excitation for single-quantum
NMR spectroscopy of aqueous solutions. J Biomol NMR 1992;2(6):661-665.
19 Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram
quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem
1976;72248-254.
20 Schwartz SS, Zhu WX, Sreebny LM. Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide
gel electrophoresis of human whole saliva. Arch Oral Biol 1995;40(10):949-958.
21 Associação Brasileira de Empresas de Pesquisa (ABEP). Critério de
Classificação Econômica. Brasil, São paulo, 2008. Acesso em 27 jul.2014.
22 Campbell OM and WJ Graham on behalf of Lancet maternal Survival series
steering group, 2006. Strategies for reducing maternal mortality:getting on with
what works. Lancet 368: 1284-1299.
23 Kowash MB, Pinfield A, Smith J, Curzon ME. Effectiveness on oral health of
a long-term health education programme for mothers with young children. Br Dent
J 2000;188(4):201-205.
24 Medeiros PB, Otero SA, Frencken JE, Bronkhorst EM, Leal SC. Effectiveness
of an oral health program for mothers and their infants. Int J Paediatr Dent 2014.
72
25 Feldens CA, Giugliani ER, Duncan BB, Drachler Mde L, Vitolo MR. Long-term
effectiveness of a nutritional program in reducing early childhood caries: a
randomized trial. Community Dent Oral Epidemiol 2010;38(4):324-332.
26 WHO –control of non communicable diseases apps. Who.
Int/iris/bitstream/10665/126760/4/rdr 49_cnd. Pdf (2015).
27 Pahkla ER, Jogi E, Nurk A, Pisarev H, Koppel T, Naaber P et al. Periodontal
disease in mothers indicates risk in their children. Int J Paediatr Dent
2010;20(1):24-30.
28 Tinoco-Araujo JE, Araujo DF, Barbosa PG, Santos PS, Medeiros AM. Invasive
candidiasis and oral manifestations in premature newborns. Einstein (Sao Paulo)
2013;11(1):71-75.
29 Dezan CC, Nicolau J, Souza DN, Walter LR. Flow rate, amylase activity, and
protein and sialic acid concentrations of saliva from children aged 18, 30 and 42
months attending a baby clinic. Arch Oral Biol 2002;47(6):423-427.
30 O'Connor DL, Khan S, Weishuhn K, Vaughan J, Jefferies A, Campbell DM et
al. Growth and nutrient intakes of human milk-fed preterm infants provided with
extra energy and nutrients after hospital discharge. Pediatrics 2008;121(4):766-
776.
31 Shehadeh N, Aslih N, Shihab S, Werman MJ, Sheinman R, Shamir R. Human
milk beyond one year post-partum: lower content of protein, calcium, and
saturated very long-chain fatty acids. J Pediatr 2006;148(1):122-124.
32 Daga SR, Daga AS. Impact of breast milk on the cost-effectiveness of the
special care unit for the newborn. J Trop Pediatr 1985;31(2):121-123.
33 Gartner LM, Morton J, Lawrence RA, Naylor AJ, O'Hare D, Schanler RJ et al.
Breastfeeding and the use of human milk. Pediatrics 2005;115(2):496-506.
34 Hanson LA, Winberg J. Breast milk and defence against infection in the
newborn. Arch Dis Child 1972;47(256):845-848.
73
35 Ehrenkranz RA, Ackerman BA, Nelli CM. Total lipid content and fatty acid
composition of preterm human milk. J Pediatr Gastroenterol Nutr 1984;3(5):755-
758.
36 Lavric M, Dolar J. [Human milk - variations in lactose, potassium, sodium and
total lipid concentrations and in fatty acids composition of lactating women in early
puerperium]. Jugosl Ginekol Opstet 1976;16(3):203-207.
37 Martin Esteban M, Pascual CY, Garcia Ara MC. [Prevention of food allergy].
Allergol Immunopathol (Madr) 1998;26(3):97-101.
38 Braun OH. [The protective effect of human milk against infections and its
potential causes (author's transl)]. Klin Padiatr 1976;188(4):297-310.
39 Agostoni C, Marangoni F, Lammardo AM, Giovannini M, Riva E, Galli C.
Breastfeeding duration, milk fat composition and developmental indices at 1 year
of life among breastfed infants. Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids
2001;64(2):105-109.
40 Wauben IP, Atkinson SA, Shah JK, Paes B. Growth and body composition of
preterm infants: influence of nutrient fortification of mother's milk in hospital and
breastfeeding post-hospital discharge. Acta Paediatr 1998;87(7):780-785.
42 Bitman J, Wood DL, Mehta NR, Hamosh P, Hamosh M. Comparison of the
phospholipid composition of breast milk from mothers of term and preterm infants
during lactation. Am J Clin Nutr 1984;40(5):1103-1119.
43 Holmes HC, Snodgrass GJ, Iles RA. Changes in the choline content of human
breast milk in the first 3 weeks after birth. Eur J Pediatr 2000;159(3):198-204.
74
5. DISCUSSÃO
O presente trabalho avaliou aspectos da saúde bucal da mãe e seu
respectivo bebê, considerando que o comportamento sobre saúde bucal das
mães pode produzir impacto na higiene bucal da criança (Kowash, Pinfield et al.,
2000; Feldens, Giugliani et al., 2010; Medeiros, Otero et al., 2014), bem como na
sua saúde bucal. Neste sentido, ressalta-se a importância de higienizar a
cavidade bucal das crianças desde tenra idade. Alguns desses aspectos têm
sido discutidos, como evidências científicas da transmissão do S. mutans de mãe
para filho, especialmente quando a mãe é o principal cuidador (Van Loveren,
Buijs et al., 2000; Hames-Kocabas, Ucar et al., 2008). O conhecimento do perfil
salivar mãe-bebê é descrito no presente estudo através dos metabólitos da
saliva, esta desempenha um papel importante na colonização de microganismos
na cavidade bucal. Ainda não está bem estabelecido como ocorre a colonização
bacteriana inicial em bebês. Descrever o perfil salivar de crianças desta faixa
etária pode elucidar a disponibilidade de componentes salivares que são
importantes na adesão bacteriana.
Na revisão sitemática realizada (Artigo1) foi observada variação na
percentagem de transmissão de microrganismos cariogênicos da mãe para filho,
devido às diferentes técnicas de análises genéticas (Davey e Rogers, 1984; Li,
Wang et al., 2000; Van Loveren, Buijs et al., 2000; Hames-Kocabas, Ucar et al.,
2008). A transmissão foi observada independente do tamanho da amostra ou
mesmo do tipo de técnica genética utilizada. Ao longo dos anos, as técnicas
foram aprimoradas, contudo, a evidência de transmissão persiste (Berkowitz,
Jordan et al., 1975; Azevedo e Zelante, 1994; Kohler, Lundberg et al., 2003;
Klein, Florio et al., 2004).
Todos os testes genéticos descritos nos artigos incluídos na revisão
sitemática tiveram repetição microbiológica. No entanto, nenhum estudo incluído
nas análises foi realizado de forma cega. Repetição microbiológica aumenta a
qualidade metodológica enquanto não realizar os exames de forma cega pode
induzir a erros. Dezesseis artigos não mostraram análise estatística, mas vinte
deles apresentaram algum tipo de estatística. Apenas 17 estudos descreveram
75
condição de cárie da mãe ou da criança, porém sem correlacionar com o nível
de S. mutans na saliva.
Nos estudos avaliados na revisão sistemática da literatura, a idade das
crianças variou de semanas até a adolescência. A idade da criança
provavelmente influencia a transmissão de mãe para filho. Os estudos não
discutem a influência de fatores que contribuem para a transmissão, como a
partilha de alimentos ou utensílios e mostraram que o contato íntimo com a
amamentação influenciou a transmissão de S. mutans (Li, Wang et al., 2000). A
amamentação prolongada pode ser um fator predisponente para influenciar a
fidelidade de aquisição de S. mutans. Foi observado que as crianças com menos
de 6 meses de idade apresentaram taxas semelhantes de transmissão de S.
mutans de mãe para filho (Berkowitz, Jordan et al., 1975; Azevedo e Zelante,
1994; Kohler, Lundberg et al., 2003; Klein, Florio et al., 2004). A transmissão da
mãe para filho é senso comum. Vale lembrar que o estabelecimento de cárie
dentária é multifatorial (Berkowitz, Turner et al., 1981; Bradshaw e Lynch, 2013).
É possível que a erupção dentária contribua para a aderência de S.
mutans em superfícies bucais, especialmente por causa do aumento das
superfícies disponíveis para adesão bacteriana. Contudo, ainda não se sabe por
que as bactérias realmente colonizam a cavidade bucal das crianças. Alguns
estudos têm demonstrado a presença de bactérias, mesmo em crianças sem
dentes (Berkowitz, Jordan et al., 1975; Azevedo e Zelante, 1994; Kohler,
Lundberg et al., 2003; Klein, Florio et al., 2004). É possível que a idade possa
desempenhar um papel na quantidade de S. mutans na saliva, com um aumento
progressivo do número de bactérias durante a infância. É importante ter em
mente que a quantidade de S. mutans na saliva reflete sua adesão na cavidade
bucal. Foi visto que o parto-cesariana favorece a aquisição inicial de S. mutans
(Li, Wang et al 2000). Recém-nascidos de parto normal entram em contato com
uma maior quantidade de bactérias e estas têm que competir com outros
microorganismos pelos sítios de colonização (Gibbons, 1989).
De outra forma é apontado que a transmissão de S. mutans é influenciada
pelas propriedades da bactéria, fatores do hospedeiro – como os componentes
da saliva – dentes, imunidade e dieta, além de fatores socioeconômicos e
76
ambientais (Tedjosasongko e Kozai, 2002). Todos os estudos, exceto o de
Pieralises, Maciel et al. (2013) mostraram transmissão de S. mutans de mãe para
filho, mas a transmissão intrafamiliar também foi vista ( Ersin, Kocabas et al.,
2004; Hames-Kocabas, Ucar et al., 2008). Na maioria dos estudos, a
transmissão de S. mutans de mãe para seu filho foi confirmada quando a mãe
era o principal cuidador (Berkowitz, Jordan et al., 1975; Berkowitz, Turner et al.,
1981; Davey e Rogers, 1984; Li, Wang et al., 2000; Nakano, Lapirattanakul et
al., 2007). Esses resultados podem refletir a susceptibilidade das crianças a
bactérias de suas mães e também a disseminação S. mutans intrafamiliar
diferente (Emanuelsson, Li et al., 1998; Redmo Emanuelsson e Thornqvist,
2001).
Embora o S. mutans constitua um dos fatores etiológicos para o
desenvolvimento de cárie dentária, o nível de transmissão de S. mutans não
implica diretamente no desenvolvimento da cárie em lactentes, já que esta
doença é multifatorial. A transmissão dos S. mutans de mãe para filho ocorre e
outros microorganismos patológicos também podem ser transmitidos. Isso
enfatiza a importância da saúde bucal da mãe e dos cuidadores (Pahkla, Jogi et
al., 2010). As medidas preventivas devem ser aplicadas a toda a família para
melhorar hábitos de higiene bucal.
No estudo 2 avaliou-se a saúde bucal do bebê e de sua mãe. Os bebês
estudados apresentaram condições bucais saudáveis, entretanto constatou-se a
presença de nódulo de Bohn em uma criança e outras duas crianças tinham
Candidíase.
Sabe-se que o fluxo salivar de recém nascidos é dezoito vezes menor do
que o observado em crianças mais velhas ou nos adultos (Wu, Ke et al., 2008).
O fluxo salivar reduzido em bebês é um fator de retenção de bactérias em
diferentes superfícies bucais, o que favorece o crescimento bacteriano
(Frasseto, Parisotto et al., 2012). Observa-se também menor quantidade de
proteínas na saliva do bebê, em comparação com os adultos, porém o perfil
proteico é similar. A compreensão do perfil de metabólitos salivares pode estar
relacionada com a colonização microbiana na cavidade do bebê, e assim
ressalta-se a importância de seu conhecimento.
77
Em relação a análise salivar e do leite, foram demonstradas similaridades
dos componentes de baixo peso apresentados entre a saliva de mulheres. O
assinalamento dos componetes salivares encontrados nestes espectros
mostram similaridades com dados da literatura onde a análise da saliva de
adultos foi descrita (Silwood et al., 1999). Os espectros de ressonância da saliva
dos bebês têm menos quantidade de componentes, provavelmente devido à
grande quantidade de açúcares proveniente do leite materno. Devido à frequêcia
de amamentação da criança nesta faixa etária possivelmente a saliva do bebê
está diluída em leite materno. Adicionalmente, foi impossível a realização do
cálculo amostral porque parte desse estudo apresenta análises laboratoriais
complexas como Ressonância Magnética Nuclear e Eletroforese, o que torna
impossível o processamento de um número elevado de amostras. Também foi
encontrada uma modificação do espectro de prótons dos bebês de duas
semanas em comparação com os que tinham dois e seis meses. Os bebês
apresentaram níveis de mudanças de lactato, etanol, acetato, propionato, n-
butirato e N-acetil açúcares e redução dos níveis de açúcar. A quantidade
variável de açúcar está provavelmente relacionada à modificação da ingestão de
alimentos que a criança tem no primeiro mês de vida, no qual é exclusivo o
consumo de leite materno, e depois de seis meses outros nutrientes são
incluídos na dieta. As grandes áreas de açúcar mostradas no espectro podem
influenciar na detecção precisa dos outros componentes no espectro salivar do
bebê. Assim, para um maior detalhamento da composição e quantidade dos
componentes, uma análise mais aprofundada deve ser feita fracionando a
amostra de saliva de bebê.
A saliva da criança com duas semanas de vida ou meses apresenta
fatores relevantes que poderão influenciar na composição final da saliva total. As
crianças que apresentam mais dentes erupcionados têm maior área de esmalte
para a colonização de microrganismos, aumentando a produção de ácido
(Fidalgo, Freitas-Fernandes et al., 2013). Por outro lado, os bebês menores
apresentam um aumento dos níveis na respectiva região de açúcar no espectro
de saliva, devido à amamentação e baixos níveis de produção de ácido devido
à ausência de dentes.
78
O leite materno é de suma importância para a dieta durante a infância
(Nishitani, Miyamura et al., 2009). Os lipídios e a lactose são dois dos principais
nutrientes calóricos do leite e também outros compostos bioativos como
imunoglobulinas, peptidios, nucleotídeos, oligossacarídeos e metabólitos. A
composição do leite é influenciada por uma gama de diferentes fatores, como
dieta, genética, número e fase de lactação. Todos estes fatores desempenham
um papel importante nas propriedades do leite e seu valor nutricional incluindo
compostos bioativos e potenciais biomarcadores (Agostoni, Marangoni et al.,
2001). A colina, por exemplo, é um dos constituintes da membrana celular e um
precursor do neurotransmissor acetilcolina está presente na composição do leite
(Bitman, Wood et al., 1984; Holmes, Snodgrass et al., 2000). O conteúdo total
de colina no colostro humano é menor do que o observado no leite sete dias
após o parto, o que está correlacionado com a aceleração do crescimento
neonatal (Holmes, Snodgrass et al., 2000).
As mães têm uma característica em particular na condição bucal. Neste
estudo foram descritos os índices de cárie e doença periodontal. O índice de
cárie dentária foi baixo entre as mulheres, mas observou-se perda dentária
elevada. A amostra analisada foi de conveniência e limitou a escolha à mulheres
que frequentavam unidade pública de saúde. Isso explica o grande número de
mulheres com baixa renda. Espera-se que uma mãe de criança tão pequena
tenha um comportamento adequado sobre saúde oral, pois esta conduta pode
ter um impacto sobre a higiene bucal de seus respectivos filhos. A maior parte
das mães não tem hábito de higienizar a boca do bebê. Eventualmente, a mãe
deve ser motivada para limpar a boca de seus bebês pois estas mães mantêm
a sua própria boca com grande quantidade de biofilme, e possivelmente
negligenciam a limpeza da boca do bebê (López-Jornet, Camacho-Alonso et al.,
2014; Medeiros, Otero et al., 2014). É importante que o desenvolvimento do
hábito de limpar a boca aconteça desde tenra idade.
A gengivite é a doença periodontal mais frequente entre as mulheres
durante o período de amamentação (Carrillo-De-Albornoz, Figuero et al., 2010).
É importante ressaltar que foram detectados alguns sítios com profundidade à
sondagem, cálculo ou sangramento à sondagem. No entanto, os critérios
79
utilizados neste estudo não classificaram qualquer mulher com periodontite. O
nível de gengivite neste grupo está de acordo com outros achados da literatura
(Rudiger, Carlen et al., 2002; Barak, Oettinger-Barak et al., 2003; Carrillo-De-
Albornoz, Figuero et al., 2010). A quantidade de biofilme não está de acordo com
a frequência dos hábitos de higiene oral. As mães afirmam que escovam os
dentes, mas a presença de biofilme é muito alta.
Pode-se atribuir essa incoerência à ferramenta usada no estudo, pois
quando questionada, a mãe fornece a resposta desejada, o que não traduz a
realidade. Ademais, a reposta atende ao aspecto quantitativo da escovação e
não ao qualitativo que pode ser aferida pelo índice de placa. Essas mães
precisam ser orientadas e motivadas frequentemente para a promoção de
saúde, uma vez que o binômio mãe-bebê é indissociável, como pode ser
observado na revisão sistemática.
80
6. CONCLUSÕES
Há evidência científica da transmissão do S. mutans da mãe para o bebês,
quando a mãe é a principal cuidadora.
As mães, no período de amamentação, apresentaram má condição de
saúde bucal, com relevante história pregressa de cárie e elevada
quantidade de gengivite e biofilme. Os bebês apresentaram boa saúde
bucal com ausência de cárie.
Foram descritos os componentes salivares de alto e baixo peso molecular
das mães e de seus bebês, demonstrando diferença do perfil da mãe em
relação ao seu bebê.
Foi descrito o perfil de metabólitos de baixo peso molecular do leite materno
demonstrando grande quantidade açúcares, com destaque para a lactose.
81
7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Aapd. Guideline on infant oral health care. Pediatr Dent, v.34, n.5, Sep-Oct, p.148-52. 2011.
Accioly, E., C. Saunders, et al. Nutrição em Obstetrícia e Pediatria. 2 ed. Rio de Janeiro: Cultura Médica: Guanabara Koogan. 2010.
Agostoni, C., F. Marangoni, et al. Breastfeeding duration, milk fat composition and developmental indices at 1 year of life among breastfed infants. Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids, v.64, n.2, Feb, p.105-9. 2001.
Argimon, S. e P. W. Caufield. Distribution of putative virulence genes in Streptococcus mutans strains does not correlate with caries experience. J Clin Microbiol, v.49, n.3, Mar, p.984-92. 2011.
Azevedo, R. V. e F. Zelante. Streptococci of the mutans group: confirmation of intrafamilial transmission by mutacin typing. Braz Dent J, v.5, n.1, p.27-34. 1994.
Barak, S., O. Oettinger-Barak, et al. Common oral manifestations during pregnancy: a review. Obstet Gynecol Surv, v.58, n.9, Sep, p.624-8. 2003.
Barber, L. R. e E. M. Wilkins. Evidence-based prevention, management, and monitoring of dental caries. J Dent Hyg, v.76, n.4, Fall, p.270-5. 2002.
Bergandi, L., P. Defabianis, et al. Absence of soluble CD14 in saliva of young patients with dental caries. Eur J Oral Sci, v.115, n.2, Apr, p.93-6. 2007.
Berkowitz, R. J., H. V. Jordan, et al. The early establishment of Streptococcus mutans in the mouths of infants. Arch Oral Biol, v.20, n.3, Mar, p.171-4. 1975.
Berkowitz, R. J., J. Turner, et al. Maternal salivary levels of Streptococcus mutans and primary oral infection of infants. Arch Oral Biol, v.26, n.2, p.147-9. 1981.
Bertram, H. C., N. Eggers, et al. Potential of human saliva for nuclear magnetic resonance-based metabolomics and for health-related biomarker identification. Anal Chem, v.81, n.21, Nov 1, p.9188-93. 2009.
Bitman, J., D. L. Wood, et al. Comparison of the phospholipid composition of breast milk from mothers of term and preterm infants during lactation. Am J Clin Nutr, v.40, n.5, Nov, p.1103-19. 1984.
Bradford, M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem, v.72, May 7, p.248-54. 1976.
Bradshaw, D. J. e R. J. Lynch. Diet and the microbial aetiology of dental caries: new paradigms. Int Dent J, v.63 Suppl 2, Dec, p.64-72. 2013.
82
Braun, O. H. [The protective effect of human milk against infections and its potential causes (author's transl)]. Klin Padiatr, v.188, n.4, Jul, p.297-310. 1976.
Brindle, J. T., H. Antti, et al. Rapid and noninvasive diagnosis of the presence and severity of coronary heart disease using 1H-NMR-based metabonomics. Nat Med, v.8, n.12, Dec, p.1439-44. 2002.
Carrillo-De-Albornoz, A., E. Figuero, et al. Gingival changes during pregnancy: II. Influence of hormonal variations on the subgingival biofilm. J Clin Periodontol, v.37, n.3, Mar, p.230-40. 2010.
Carty, D. M., J. Siwy, et al. Urinary proteomics for prediction of preeclampsia. Hypertension, v.57, n.3, Mar, p.561-9. 2011.
Carvalho, R. M. e R. N. Tamez. Amamentação: bases científicas para a prática profissional. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan.p.430. 2002.
Castilho, A. R., F. L. Mialhe, et al. Influence of family environment on children's oral health: a systematic review. J Pediatr (Rio J), v.89, n.2, Mar-Apr, p.116-23. 2013.
Chiappin, S., G. Antonelli, et al. Saliva specimen: a new laboratory tool for diagnostic and basic investigation. Clin Chim Acta, v.383, n.1-2, Aug, p.30-40. 2007.
Codato, L. A. B., L. Nakama, et al. Percepções de gestantes sobre atenção odontológica durante a gravidez. Ciênc. Saúde Coletiva, Rio de janeiro, v.13,n.3, p.1075-1080. 2008.
Da Silva-Boghossian, C. M., R. M. Do Souto, et al. Association of red complex, A. actinomycetemcomitans and non-oral bacteria with periodontal diseases. Arch Oral Biol, v.56, n.9, Sep, p.899-906. 2011.
Daga, S. R. e A. S. Daga. Impact of breast milk on the cost-effectiveness of the special care unit for the newborn. J Trop Pediatr, v.31, n.2, Apr, p.121-3. 1985.
Davey, A. L. e A. H. Rogers. Multiple types of the bacterium Streptococcus mutans in the human mouth and their intra-family transmission. Arch Oral Biol, v.29, n.6, p.453-60. 1984.
Dawes, C. Circadian rhythms in the flow rate and composition of unstimulated and stimulated human submandibular saliva. J Physiol, v.244, n.2, Jan, p.535-48. 1975.
De Meyer, T., D. Sinnaeve, et al. NMR-based characterization of metabolic alterations in hypertension using an adaptive, intelligent binning algorithm. Anal Chem, v.80, n.10, May 15, p.3783-90. 2008.
De Paoli, G. e S. Bell. A rapid GC-MS determination of gamma-hydroxybutyrate in saliva. J Anal Toxicol, v.32, n.4, May, p.298-302. 2008.
83
Deurenberg, P., M. Deurenberg Yap, et al. The impact of body build on the relationship between body mass index and percent body fat. Int J Obes Relat Metab Disord, v.23, n.5, May, p.537-42. 1999.
Edgar, M., C. Dawes, et al. Saliva e saúde bucal. 3 ed.São Paulo:Santos,2010 145 p.:il. 2010.
Ehrenkranz, R. A., B. A. Ackerman, et al. Total lipid content and fatty acid composition of preterm human milk. J Pediatr Gastroenterol Nutr, v.3, n.5, Nov, p.755-8. 1984.
Emanuelsson, I. R., Y. Li, et al. Genotyping shows different strains of mutans streptococci between father and child and within parental pairs in Swedish families. Oral Microbiol Immunol, v.13, n.5, Oct, p.271-7. 1998.
Ersin, N. K., E. H. Kocabas, et al. Transmission of Streptococcus mutans in a group of Turkish families. Oral Microbiol Immunol, v.19, n.6, Dec, p.408-10. 2004.
Feldens, C. A., E. R. Giugliani, et al. Long-term effectiveness of a nutritional program in reducing early childhood caries: a randomized trial. Community Dent Oral Epidemiol, v.38, n.4, Aug, p.324-32. 2010.
Fidalgo, T. K. S., V. Abreu, et al. Do salivary lipids influence dental caries susceptibility? A systematic review. Open access scientific reports, v.1, n.12, p.1-4. 2012.
Fidalgo, T. K. S., L. B. Freitas-Fernandes, et al. Salivary metabolite signatures of children with and without dental caries lesions. Metabolomics, v.9, n.3, p.657-666. 2013.
Flinck, A., A. Paludan, et al. Oral findings in a group of newborn Swedish children. Int J Paediatr Dent, v.4, n.2, Jun, p.67-73. 1994.
Frasseto, F., T. M. Parisotto, et al. Relationship among salivary carbonic anhydrase VI activity and flow rate, biofilm pH and caries in primary dentition. Caries Res, v.46, n.3, p.194-200. 2012.
Freitas-Fernandes, L. B., J. Rundegren, et al. Delmopinol hydrochloride- and chlorhexidine digluconate-induced precipitation of salivary proteins of different molecular weights. Acta Odontol Scand, v.56, n.1, Feb, p.2-8. 1998.
Gartner, L. M., J. Morton, et al. Breastfeeding and the use of human milk. Pediatrics, v.115, n.2, Feb, p.496-506. 2005.
Ghafouri, B., C. Tagesson, et al. Mapping of proteins in human saliva using two-dimensional gel electrophoresis and peptide mass fingerprinting. Proteomics, v.3, n.6, Jun, p.1003-15. 2003.
Gibbons, R. J. Bacterial adhesion to oral tissues: a model for infectious diseases. J Dent Res, v.68, n.5, May, p.750-60. 1989.
84
Hames-Kocabas, E. E., F. Ucar, et al. Colonization and vertical transmission of Streptococcus mutans in Turkish children. Microbiol Res, v.163, n.2, p.168-72. 2008.
Hanson, L. A. e J. Winberg. Breast milk and defence against infection in the newborn. Arch Dis Child, v.47, n.256, Dec, p.845-8. 1972.
Holmes, H. C., G. J. Snodgrass, et al. Changes in the choline content of human breast milk in the first 3 weeks after birth. Eur J Pediatr, v.159, n.3, Mar, p.198-204. 2000.
Huebner, C. E. e C. A. Riedy. Behavioral determinants of brushing young children's teeth: implications for anticipatory guidance. Pediatr Dent, v.32, n.1, Jan-Feb, p.48-55. 2010.
Jelliffe, D. B. e E. F. Jelliffe. Breast milk and infection. Lancet, v.2, n.8243, Aug 22, p.419. 1981.
Keirse, M. J. e K. Plutzer. Women's attitudes to and perceptions of oral health and dental care during pregnancy. J Perinat Med, v.38, n.1, p.3-8. 2010.
Klein, M. I., F. M. Florio, et al. Longitudinal study of transmission, diversity, and stability of Streptococcus mutans and Streptococcus sobrinus genotypes in Brazilian nursery children. J Clin Microbiol, v.42, n.10, Oct, p.4620-6. 2004.
Kohler, B., A. B. Lundberg, et al. Longitudinal study of intrafamilial mutans streptococci ribotypes. Eur J Oral Sci, v.111, n.5, Oct, p.383-9. 2003.
Kowash, M. B., A. Pinfield, et al. Effectiveness on oral health of a long-term health education programme for mothers with young children. Br Dent J, v.188, n.4, Feb 26, p.201-5. 2000.
Kozai, K., R. Nakayama, et al. Intrafamilial distribution of mutans streptococci in Japanese families and possibility of father-to-child transmission. Microbiol Immunol, v.43, n.2, p.99-106. 1999.
Kunz, C. e B. Lonnerdal. Human-milk proteins: analysis of casein and casein subunits by anion-exchange chromatography, gel electrophoresis, and specific staining methods. Am J Clin Nutr, v.51, n.1, Jan, p.37-46. 1990.
Lavric, M. e J. Dolar. [Human milk - variations in lactose, potassium, sodium and total lipid concentrations and in fatty acids composition of lactating women in early puerperium]. Jugosl Ginekol Opstet, v.16, n.3, May-Jun, p.203-7. 1976.
Li, Y., W. Wang, et al. The fidelity of mutans streptococci transmission and caries status correlate with breast-feeding experience among Chinese families. Caries Res, v.34, n.2, Mar-Apr, p.123-32. 2000.
Linke, H. A. e S. J. Moss. Quantitation of carbohydrate sweeteners and organic acids in human oral fluid using HPLC analysis. Z Ernahrungswiss, v.31, n.2, Jun, p.147-54. 1992.
85
López-Jornet, P., F. Camacho-Alonso, et al. Oral and dental heath in pregnant woman. NYS Dent J. 38-41. 2014.
Martin Esteban, M., C. Y. Pascual, et al. [Prevention of food allergy]. Allergol Immunopathol (Madr), v.26, n.3, May-Jun, p.97-101. 1998.
Medeiros, P. B., S. A. Otero, et al. Effectiveness of an oral health program for mothers and their infants. Int J Paediatr Dent, Jan 7. 2014.
Monte, C. M. e E. R. J. Giugliane. Recomendações para alimentação complementar da criança em aleitamento materno. Jornal de Pediatria 80(5 Supl): S131-S141. 2004.
MS. Secretaria de Política de Saúde. Organização Pan Americana de Saúde.Guia alimentar para crianças menores de dois anos. Brasília: Ministério da Saúde. 2002.
Nakano, K., J. Lapirattanakul, et al. Streptococcus mutans clonal variation revealed by multilocus sequence typing. J Clin Microbiol, v.45, n.8, Aug, p.2616-25. 2007.
Neyraud, E., M. Tremblay-Franco, et al. Relationships between the metabolome and the fatty acid composition of human saliva; effects of stimulation. Metabolomics, v.9, n.1, p.213-222. 2013.
Nishitani, S., T. Miyamura, et al. The calming effect of a maternal breast milk odor on the human newborn infant. Neurosci Res, v.63, n.1, Jan, p.66-71. 2009.
O'Connor, D. L., S. Khan, et al. Growth and nutrient intakes of human milk-fed preterm infants provided with extra energy and nutrients after hospital discharge. Pediatrics, v.121, n.4, Apr, p.766-76. 2008.
O'Leary, T. J., R. B. Drake, et al. The plaque control record. J Periodontol, v.43, n.1, Jan, p.38. 1972.
Oakley, B. R., D. R. Kirsch, et al. A simplified ultrasensitive silver stain for detecting proteins in polyacrylamide gels. Anal Biochem, v.105, n.2, Jul 1, p.361-3. 1980.
Offenbacher, S., V. Katz, et al. Periodontal infection as a possible risk factor for preterm low birth weight. J Periodontol, v.67, n.10 Suppl, Oct, p.1103-13. 1996.
Oms. Amamentação e Medicação Materna: Recomendações sobre drogas da 8ª Lista Básica de Medicamentos da OMS. Organização Mundial da Saúde. São Paulo: Instituto de Saúde: IBFAN. Brasil. 1996.
Pahkla, E. R., E. Jogi, et al. Periodontal disease in mothers indicates risk in their children. Int J Paediatr Dent, v.20, n.1, Jan, p.24-30. 2010.
Parisotto, T. M., W. F. King, et al. Immunological and microbiologic changes during caries development in young children. Caries Res, v.45, n.4, p.377-85. 2011.
86
Pedersen, A. M., A. Bardow, et al. Saliva and gastrointestinal functions of taste, mastication, swallowing and digestion. Oral Dis, v.8, n.3, May, p.117-29. 2002.
Petersen, P. E. The World Oral Health Report 2003: continuous improvement of oral health in the 21st century--the approach of the WHO Global Oral Health Programme. Community Dent Oral Epidemiol, v.31 Suppl 1, Dec, p.3-23. 2003.
Piotto, M., V. Saudek, et al. Gradient-tailored excitation for single-quantum NMR spectroscopy of aqueous solutions. J Biomol NMR, v.2, n.6, Nov, p.661-5. 1992.
Redmo Emanuelsson, I. M. e E. Thornqvist. Distribution of mutans streptococci in families: a longitudinal study. Acta Odontol Scand, v.59, n.2, Apr, p.93-8. 2001.
Resende, M., E. Pinto, et al. Doença periodontal. tabaco e parto pré-termo. Acta Med Port, v.24(S2): 419-430. 2011.
Rogers, A. H. Evidence for the transmissibility of human dental caries. Aust Dent J, v.22, n.1, Feb, p.53-6. 1977.
Rosell, F. L., Montandon Pompeu, et al. Registro periodontal simplificado em gestantes. Saúde Pública. São Paulo.v.33,n.2,p.157-162,abr. 1999.
Rudiger, S. G., A. Carlen, et al. Dental biofilms at healthy and inflamed gingival margins. J Clin Periodontol, v.29, n.6, Jun, p.524-30. 2002.
Santos, C. A. L. Prevalência e fatores associados à doença periodontal em puérpuras. Tese de Mestrado. Londrina. 2010.
Sarni, R. S. Alimentação da criança nos primeiros anos de vida.Temas de nutrição em pediatria do Departamento de Nutrição da Sociedade Brasileira de Pediatria, 3. 2004.
Shehadeh, N., N. Aslih, et al. Human milk beyond one year post-partum: lower content of protein, calcium, and saturated very long-chain fatty acids. J Pediatr, v.148, n.1, Jan, p.122-4. 2006.
Silwood, C. J., E. Lynch, et al. 1H and (13)C NMR spectroscopic analysis of human saliva. J Dent Res, v.81, n.6, Jun, p.422-7. 2002.
Streckfus, C. F., L. R. Bigler, et al. The use of surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry to detect putative breast cancer markers in saliva: a feasibility study. J Oral Pathol Med, v.35, n.5, May, p.292-300. 2006.
Tabosa, F. L. Educação em saúde: contribuição à saúde bucal do binômio mãe-filho. Monografia apresentada ao Curso de Especialização em Gestão de Sistemas de Saúde do Departamento de Saúde Coletiva. Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães. Recife. 2010.
87
Tedjosasongko, U. e K. Kozai. Initial acquisition and transmission of mutans streptococci in children at day nursery. ASDC J Dent Child, v.69, n.3, Sep-Dec, p.284-8, 234-5. 2002.
Tinoco-Araujo, J. E., D. F. Araujo, et al. Invasive candidiasis and oral manifestations in premature newborns. Einstein (Sao Paulo), v.11, n.1, Jan-Mar, p.71-5. 2013.
Turner, R. J. e H. Sugiya. Understanding salivary fluid and protein secretion. Oral Dis, v.8, n.1, Jan, p.3-11. 2002.
Van Loveren, C., J. F. Buijs, et al. Similarity of bacteriocin activity profiles of mutans streptococci within the family when the children acquire the strains after the age of 5. Caries Res, v.34, n.6, Nov-Dec, p.481-5. 2000.
Wauben, I. P., S. A. Atkinson, et al. Growth and body composition of preterm infants: influence of nutrient fortification of mother's milk in hospital and breastfeeding post-hospital discharge. Acta Paediatr, v.87, n.7, Jul, p.780-5. 1998.
Word Health Organization. Oral health surveys,basics methods. Geneva: Word Health Organization; 1997
Wong, D. T. Salivary diagnostics powered by nanotechnologies, proteomics and genomics. J Am Dent Assoc, v.137, n.3, Mar, p.313-21. 2006.
Worthington-Roberts, B. e S. R. Williams. Nutrition in pregnancy and lactation 6 ed.New York:WCB Mc Graw Hill.p.51. 1997.
Wu, K. P., J. Y. Ke, et al. Relationship between unstimulated salivary flow rate and saliva composition of healthy children in Taiwan. Chang Gung Med J, v.31, n.3, May-Jun, p.281-6. 2008.
Xie, X., J. Lu, et al. Systematic discovery of regulatory motifs in human promoters and 3' UTRs by comparison of several mammals. Nature, v.434, n.7031, Mar 17, p.338-45. 2005.
Yoon, M. S., V. Jankowski, et al. Characterisation of advanced glycation endproducts in saliva from patients with diabetes mellitus. Biochem Biophys Res Commun, v.323, n.2, Oct 15, p.377-81. 2004.
Zhang, A., H. Sun, et al. Modern analytical techniques in metabolomics analysis. Analyst, v.137, n.2, Jan 21, p.293-300. 2012.
88
8. ANEXOS
89
ANEXO 1
90
ANEXO 2
INFLUÊNCIA DA INGESTÃO DE SOLUÇÃO CONCENTRADA DE SACAROSE SOBRE OS METABÓLITOS DO LEITE MATERNO E SALIVA ATRAVÉS DO MÉTODO DE
RESSONÂNCIA MAGNÉTICA NUCLEAR
Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
Prezado responsável,
As Disciplinas de Odontopediatria e Periodontia da Faculdade de Odontologia e o Centro Nacional de Ressonância Magnética Nuclear do Instituto de Bioquímica da UFRJ estão estudando a saliva e o leite materno de lactantes (mães) e lactentes (bebês). Para isso, será necessário colher um pouco destes fluidos para analisar a alteração dos componentes dos mesmos após a ingestão do leite adoçado. Será feito também um exame clínico da cavidade bucal das mães para verificar a presença de cáries dentárias e doenças na gengiva para verificar possiveis alterações na saliva. Caso a participante da pesquisa necessite de tratamento odontológico, ela será encaminhada para a Clínica de Dentística ou Periodontia – FO/UFRJ.O estudo está em consonância com o estabelecido na Resolução do CNS 196/96. A participação é voluntária e em casos de desistência, a lactante/lactente não sofrerá prejuízos em relação ao atendimento odontológico. A coleta do leite materno e saliva levará cerca de duas horas. As informações sobre cada lactante /lactente retiradas de suas fichas médicas são confidenciais e sigilosas, sendo que a identidade de cada participante só será utilizada por membros da equipe da pesquisa. É importante lembrar que os procedimentos realizados pelos próprios dentistas para coletar a saliva e o leite não causarão, de maneira alguma, nenhum dano à lactante/lactente. A lactante poderá solicitar sua saída ou da lactente do estudo em qualquer momento e neste caso, os responsáveis pelo projeto se comprometem a não utilizar as informações obtidas.Qualquer comunicação necessária será feita através de carta ou telegrama. Em caso de dúvidas ou necessidades, o responsável poderá entrar em contato com:
CEP/ IPPMG
Cep: 20211-901 Tel: (21) 2503-2024/2026; [email protected]
Dra. Ivete Pomarico Ribeiro de Souza ([email protected]); Dra. Valeria de Abreu da Silva Bastos, Dra. Tatiana Kelly da Silva Fidalgo, Dra. Liana Bastos Freitas Fernandes. Tel: (21) 2562-2098
Prof. Titular de Odontopediatria-UFRJ; Pesquisadoras da FO-UFRJ.
Estou ciente do que foi proposto acima e autorizo a participação:
------------------------------------------------ ------------------------------------------
Nome da lactante (mãe) Nome do lactente (bebê)
-------------------------------------------------------- ----------------------------------------------
(Assinatura do Responsável) (Assinatura do Pesquisador) Data: ---/---/---
91
Anexo 3
FICHA DA LACTANTE
Identificação:
Nome: ________________________________________________________
Data de Nascimento: ______________________Idade: _________________
Endereço:_______________________________________________________
Contato fone: ___________________________________________________
Ocupação: ______________________________________________________
Anamnese:
1. História médica pregressa:
____________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
2. Gestação e parto:
____________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
3. Dieta: _______________________________________________________________
______________________________________________________________________
4. Medicação: _______________________________________________________________
__________________________________________________________________________
5. Higiene bucal: _____________________________________________________________
__________________________________________________________________________
92
6. Outras informações:
____________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
Exame clínico:
Exame dental
CPOD: _____________________________
Anomalias Dentárias:
Anomalias dentárias encontradas: ________________________________________________
Região: _______________________________________________________________
Observações: _______________________________________________________________
93
Exame Periodontal
VESTIBULAR
D V M
D V M
D V M
D V M
D V M
D V M
D V M
M V D
M V D
M V D
M V D
M V D
M V D
M V D
17 16 15 14 13 12 11 21 22 23 24 25 26 27
PL
IG
PBS
NCI
SANG
SUP
Cálculo
PALATINA
D P M
D P M
D P M
D P M
D P M
D P M
D P M
M D V
M D V
M D V
M D V
M D V
M D V
M D V
PL
IG
PBS
NCI
SANG
SUP
Cálculo
VESTIBULAR
D V M
D V M
D V M
D V M
D V M
D V M
D V M
M V D
M V D
M V D
M V D
M V D
M V D
M V D
37 36 35 34 33 32 31 41 42 43 44 45 46 47
PL
IG
PBS
NCI
SANG
SUP
Cálculo
LINGUAL
D L M
D L M
D L M
D L M
D L M
D L M
D L M
M L D
M L D
M L D
M L D
M L D
M L D
M L D
PL
IG
PBS
NCI
SANG
SUP
Cálculo
94
Critério de Classificação Econômica Brasil/2008
Posse de itens
Item
Quantidade de Itens
0 1 2 3 4
Televisão em cores 0 1 2 3 4
Rádio 0 1 2 3 4
Banheiro 0 4 5 6 7
Automóvel 0 4 7 9 9
Empregada Mensalista 0 3 4 4 4
Máquina de lavar 0 2 2 2 2
Videocassete e/ou DVD 0 2 2 2 2
Geladeira 0 4 4 4 4
Freezer (independente da geladeira) 0 2 2 2 2
Grau de instrução do Chefe de Família:
Analfabeto/ até 3º série fundamental
0
4ª série fundamental 1
Fundamental completo 2
Médio completo 4
Superior completo 8
95
Classificação Econômica: _________
Classe Pontos
A1 42 - 46
A2 35 – 41
B1 29 – 34
B2 23 – 28
C1 18 – 22
C2 14 – 17
D 8 – 13
E 0 - 7
Número de pessoas que moram na mesma casa: _______
Renda Familiar (salários): _____________
96
Anexo 4
FICHA DO LACTENTE
Identificação:
Nome: _______________________________________________________________
Sexo: _________________________________
Data de nascimento: ________________ Idade (dias): ___________________
Peso ao nascimento: ______________________
Medicação: _______________________________________________________________
Anomalias Dentárias:
Anomalias dentárias encontradas: ________________________________________________
Região: _______________________________________________________________
Observações: _____________________________________________________________
Odontograma do bebê
55 54 53 52 51 61 62 63 64 65
85 84 83 82 81 71 72 73 74 75