UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAISINSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

PÓS-GRADUAÇÃO EM MICROBIOLOGIA

Indicadores Indicadores microbiológicos de microbiológicos de Qualidade de águaQualidade de água

Luciana Rocha Brandão

Mestranda em Microbiologia/ ICB-UFMG

Indicadores de qualidade de Indicadores de qualidade de águaágua

Bactérias: Bactérias: Escherichia coliEscherichia coli Protozoários: Cistos (Protozoários: Cistos (GiardiaGiardia) e oocistos ) e oocistos

((CryptosporidiumCryptosporidium)) Algas: cianobactériasAlgas: cianobactérias VírusVírus Ovos de helmintosOvos de helmintos

Grupo coliforme: coliformes totais e Grupo coliforme: coliformes totais e fecaisfecais

indicadores de escolha para monitorar qualidade da água;indicadores de escolha para monitorar qualidade da água;

Presença→ riscos à saúde → SalmonellaSalmonella, , ShigellaShigella, , VibrioVibrio, , MycobacteriumMycobacterium, , PasteurellaPasteurella, , LeptospiraLeptospira e vírus entéricos e vírus entéricos

Fermentam lactoseFermentam lactose→ gás, ácido, aldeído à 35°C em 24-48h→ gás, ácido, aldeído à 35°C em 24-48h

Coliformes termotolerantes:E.coli Klebisiella

Grupo coliforme: totais e fecais

Coliformes fecais: E.coli

gêneros: Citrobacter, Escherichia, Enterobacter e

Klebsiella

Citrobacter, Enterobacter e Klebsiella: vegetação e solo

Coliformes fecaisColiformes fecais

Sub-grupo: coliformes totais → Escherichia coli

Contaminação fecal oriundas de animais de sangue quente

Metodologia: temperatura de 44,5 +0.2°C, fator seletivo (termotolerantes)

Enzimas específicas

Escherichia coli

Outros indicadores microbiológicosOutros indicadores microbiológicos

Bactérias que utilizam nutrientes orgânicos

A contagem de bactérias heterotróficas→ medida empírica;

presença em maior ou menor quantidade → grau de poluição da água → enriquecimento MO.

1-Bactérias Heterotróficas

Outros indicadores microbiológicosOutros indicadores microbiológicos

Bioindicador referenciado na Bioindicador referenciado na legislação legislação

CONAMA 274/2000CONAMA 274/2000 Melhores indicadores para águas Melhores indicadores para águas

marinhas marinhas → Tolerância a altas → Tolerância a altas concentrações de salconcentrações de sal

Grupo Streptococcus fecaisGrupo Streptococcus fecais→ → Streptococcus faecalis, S. faecium, S. Streptococcus faecalis, S. faecium, S. galinarum e S. avium;galinarum e S. avium;

contaminação fecal humana X fezes contaminação fecal humana X fezes

outros animaisoutros animais

2-Estreptococcus fecais

3-Pseudomonas aeruginosa3-Pseudomonas aeruginosa

Solo, água, matéria orgânica em decomposição;Solo, água, matéria orgânica em decomposição;

Microbiota do intestino e pele de seres humanos;Microbiota do intestino e pele de seres humanos;

PPatógeno oportunista atógeno oportunista - infecções auditivas em usuários de águas recreativas - infecções auditivas em usuários de águas recreativas contaminadascontaminadas- surtos de gatroenterites veiculadas por água - - surtos de gatroenterites veiculadas por água - imunodeprimidosimunodeprimidos

capacidade de crescer em ambientes oligotróficoscapacidade de crescer em ambientes oligotróficos

4 - Staphylococcus aureus

Pele e mucosa (nariz, garganta) do homem: Diversas infecções

Não estão relacionados com contaminação fecal;

Sobrevivem mais tempo na água;

Ambientes aquáticos – intensa utilização para fins recreacionais - contagens de S. aureus

Indicadoras de poluição: ambientes de água doce, quanto marinhos;

número e espécie → tipo e pureza da água;

Ocorrência e distribuição→ presença de poluição orgânica;

complemento a contagem de coliformes;

Gêneros comuns: Gêneros comuns: Aureobasidium, Candida, Cryptococcus, Aureobasidium, Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, SaccharomycesRhodotorula, Saccharomyces e e TrichosporonTrichosporon

Maioria associada a plantas, solos ou fontes de poluição orgânica Maioria associada a plantas, solos ou fontes de poluição orgânica

5- Leveduras

Lagos não poluídos (<10 UFC/100 ml)

Lagos mesotróficos ( 10 – 50 UFC/100 ml)

Águas – esgoto - seguras para recreação (50 – 100 UFC/100 ml)

Águas eutrofizadas (>100 UFC/100ml)

(Hagler & Ahearn,1987)

LegislaçãoLegislação

Água potável: obedecer ao padrão de potabilidade, não oferecer riscos à saúde humana

Padrões de Balneabilidade determinados pelo CONAMA, através da Padrões de Balneabilidade determinados pelo CONAMA, através da

Resolução nº 357, de 17 de março de 2005Resolução nº 357, de 17 de março de 2005..

CategoriaCategoria Coliformes Coliformes fecais/100mlfecais/100ml

Escherichia Escherichia coli/100mlcoli/100ml

Enterococcus/Enterococcus/

100ml100ml

ExcelenteExcelente até 250até 250 até 200até 200 até 25 até 25

Muito boa Muito boa até 500até 500 até 400até 400 Até 50 Até 50

SatisfatóriaSatisfatória até 1000até 1000 até 800até 800 Até 100 Até 100

ImprópriaImprópria > 2500> 2500 > 2000> 2000 > 400 > 400

MetodologiaMetodologia

Coleta:

Coletar a amostra em recipiente esterilizado;

Até 4/5 da capacidade do frasco;

Água com cloro: 0,1 ml de tiossulfato a 10%;

Água bruta que contenha metais pesados: 0,3 ml EDTA a 15%.

Contagem de Coliforme – técnica dos Contagem de Coliforme – técnica dos tubos múltiplostubos múltiplos

1- Caldo lactosado 35/370C/ 24-48 h

2- Caldo Verde Brilhante e Bile 2% 35/370C/ 24-48 h

3- Caldo Ec 44,50C- 24 h

Amostra de água

10 ml 1 ml 0,1 ml

Água: três séries de cinco tubos

Fermentação Caldo Lauril Triptose

Formação de Gás

Confirmação: Fermentação com Caldo Verde Brilhante Lactose

- + +

Gás

Fermentação: Caldo lactosado Confirmação: Caldo verde brilhante

E.coli: fluorecência (UV)

Metodologia da Membrana Filtrante Metodologia da Membrana Filtrante (MF)(MF)

Filtragem da amostra

Substrato Cromogênico/fluorogênicoSubstrato Cromogênico/fluorogênico

Teste P/ATeste P/A

Adição do meio com substrato à amostra

Incubação por 24h.Resultados:

Incolor:Negativo;

Amarelo:Coliforme total +;

Azul:Coliforme E. coli +

Teste QuantitativoTeste Quantitativo1

2

3

4 Mesmas placas amarelas submetidas a luz ultra-violeta

(UV)

Resultado Azul Ecoli

Se (-) e amarelo C. Total

5

6

Tabelas de NMP

Resultados em numeros/100 ml

Contagens de bactérias heterotróficasContagens de bactérias heterotróficas

Ágar padrão para contagem (HPCA).Ágar padrão para contagem (HPCA).Incubação: aerobiose por 24-48 horas a 35Incubação: aerobiose por 24-48 horas a 3500CC

Quantificação:UFC/ml Quantificação:UFC/ml (Greenberg et al., 1998)(Greenberg et al., 1998)

1,0ml

“Pour Plate”HPCA

Diluições

STANDART METHODS FOR THE EXAMINATION OF WATER STANDART METHODS FOR THE EXAMINATION OF WATER AND WASTEWATER.AND WASTEWATER. American Public Health Association (APHA) - American Public Health Association (APHA) - 20th ed., Baltimore. Maryland. USA. 1998. 20th ed., Baltimore. Maryland. USA. 1998.

PORTARIA 518, de 25 de março de 2004, publicada no Diário PORTARIA 518, de 25 de março de 2004, publicada no Diário Oficial da União. Agência Nacional de Vigilância Sanitária: Oficial da União. Agência Nacional de Vigilância Sanitária: Ministério da Saúde, Brasil.Ministério da Saúde, Brasil.

RESOLUÇÂO CONAMA n° 357 de 17 de 17 de março de 2005RESOLUÇÂO CONAMA n° 357 de 17 de 17 de março de 2005