Figura 9: Esquema do protocolo de transformação e seleção de duplo-híbrido robotizável baseadas na interação entre as proteínas p53 e largeT. De duas transformações, cada uma contendo 1 g de pISCA (Gal4DL-p53), 1 g de pSEMPRESA (Gal4DA) e 0 ou 100ng de pPRESA (Gal4DA-largeT), foram tomadas alíquotas correspondentes a 0; 1; 5 e 10ng de pPRESA em tubos de cultura SDs líquida sem histidina suplementado com 3AT 0 ou 2,5mM e distribuídos em 96 poços de placa deepwell (400L por poço). O crescimento foi avaliado pela medida de densidade do meio líquido em espectrofotômetro com leitor de placa de ELISA (OD600nm) segundo protocolo de diluições F (Material e Métodos, item 3.15).

SDs sem histidina 3AT 0 ou 2,5mM

1 ng 0 ng 5 ng 10 ng

Transformação 1pISCA (1g)

pSEMPRESA (1g) pPRESA (100ng)

1:100 1:20 1:10

pPRESApISCA + pSEMPRESA

0 ng

1 ng

5 ng

10 ng

controle

4 placas grandes = 1 placa deepwell

22 setores

Transformação 2

pISCA (1g) pSEMPRESA (1g)

pPRESA (0ng)