resultados aulas prÁticas universidade de sÃo paulo campus de piracicaba centro de energia nuclear...
TRANSCRIPT
RESULTADOS
AULAS PRÁTICAS
UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
CAMPUS DE PIRACICABA
Centro de Energia Nuclear na Agricultura
Laboratório de Biologia Celular e molecular
Disciplina CEN-0333 – Análise Diagnóstica de Organismos
Geneticamente Modificados (OGMs)Responsável: Dra. Siu Mui Tsai
Ap. Técnico: José Elias Gomes
Estagiária: Fabiana S. Cannavan
06/03/2012
Materiais usados na aula prática para detecção de OGMs
KIT TRAIT PARA DETECÇÃO DE PROTEINAS
Proteína da Agrobacterium tumefasciens em Soja, Canola e Algodão: CP4 EPSPS (RR)
Para a credibilidade do teste, todas as fitas devem apresentar a marca, a linha
controle, proveniente da proteína (soja e milho), indicando que houve a correta
migração das proteínas do extrato pela fita e ligação com seus respectivos anticorpos;
Conforme esperado, os grãos geneticamente modificados com o gene CP4
EPSPS nos seus tecidos, indicaram resultado positivo na avaliação das marcas na fita-
teste. Nesses casos, as tiras de fluxo lateral fornecidas no Kit indicaram a formação de
duas marcas: a primeira referente á proteína, e a segunda, exclusiva dos transgênicos;
Grãos de Soja convencional
Grãos de Soja transgênica
O teste é qualitativo e capaz de detectar amostras com nível de
contaminação acima de 1% em apenas 5 minutos. O seu uso é de
extrema praticidade, sendo muito importante para rápida detecção de
alimentos geneticamente modificados em portos e aeroportos.
Para o uso de técnicas moleculares de detecção de OGMs, a turma foi dividida em grupos
Grupo 1
1 – Grãos Soja Convencional
2 – Grãos Soja Convencional
3 – Grãos Soja Convencional
1A – Leite Soja
2A – Proteina Soja Texturizada
(Carne Soja )
1M – Folha Milho Convencional
2M – Folha Milho Transgênica
Grupo 2
4 – Grão Soja convencional
5 – Grãos Soja Convencional
6 – Grãos Soja Convencional
3A – Leite Soja
4A – Proteina Soja Texturizada
(Carne Soja )
3M – Folha Milho Convencional
4M – Folha Milho Transgênica
Grupo 3 Grupo 4
Para o uso de técnicas moleculares de detecção de OGMs, a turma foi dividida em grupos
7 – Grãos Soja Convencional
8 – Grãos Soja Convencional
9 – Grãos Soja Convencional
5A – Leite Soja
6A – Proteina Soja Texturizada
(Carne Soja )
5M – Folha Milho Convencional
6M – Folha Milho Transgênica
10 – Grãos Soja Transgênica
11 – Grãos Soja Transgênica
12 – Grãos Soja Transgênica
7A – Leite Soja
8A – Proteina Soja Texturizada
(Carne Soja )
7M – Folha Milho Convencional
8M – Folha Milho Transgênica
Grupo 5 Grupo 6
Para o uso de técnicas moleculares de detecção de OGMs, a turma foi dividida em grupos
13 – Grãos Soja Transgênica
14 – Grãos Soja Transgênica
15 – Grãos Soja Transgênica
9A – Leite Soja
10A – Proteina Soja Texturizada
(Carne Soja )
9M – Folha Milho Convencional
10M – Folha Milho Transgênica
16 – Grãos Soja Transgênica
17 – Grãos Soja Transgênica
18 – Grãos Soja Transgênica
11A – Leite Soja
12A – Proteina Soja Texturizada
(Carne Soja )
11M – Folha Milho Convencional
12M – Folha Milho Transgênica
13/03/2012
extração do DNA genômico total de grãos de soja – protocolo CTAB de
Doyle&Doyle 1990, modificado;
20/03/2012
Extração de DNA utilizando Sistema de Purificação de DNA para Alimento
Wizard Magnetic Cat. FF3750
27/03/2012
Extração de DNA de tecidos foliares de milho – protocolo CTAB de
Doyle&Doyle 1990, modificado.
Quantificação e pureza das amostras de DNA
mensuradas em espectrofotômetro (Nanodrop 1100) 10/04/2012
Amostras - Grupo1 ng/µl 260/280
1 821.8 1.49
2 1372.2 1.4
3 2035.5 1.36
A1 347.5 1.5
A2 366.8 1.71
1M 618.1 1.96
2M 1451 1.94
Amostras - Grupo2 ng/µl 260/280
4 1462.5 1.23
5 3235.5 1.33
6 3817.5 1.34
3A 367.2 1.6
4A 365.6 1.89
3M 948.6 1.96
4M 523.4 1.96
Amostras - Grupo3 ng/µl 260/280
7 3847.6 1.33
8 3970.5 1.29
9 1977.5 1.36
5A 497 1.65
6A 756 1.73
5M 818.3 1.96
6M 526.8 1.91
Amostras - Grupo4 ng/µl 260/280
10 3761.8 1.33
11 -247.4 1.18
12 1048.6 1.41
7A 766.9 1.71
8A 1346.5 1.79
7M 1744.1 1.96
8M 1191.3 1.97
Quantificação e pureza das amostras de DNA
mensuradas em espectrofotômetro (Nanodrop 1100) 10/04/2012
Amostras - Grupo5 ng/µl 260/280
13 3289.3 1.29
14 4381.2 1.29
15 2308.4 1.29
9A 722.8 1.61
10A 532.6 1.76
9M 1360 1.96
10M 696.9 1.97
Amostras - Grupo6 ng/µl 260/280
16 3127.4 1.32
17 2765.5 1.3
18 2873.2 1.31
11A 525.4 1.58
12A 482.8 1.86
11M 1266.9 1.97
12M 642.9 1.95
12M 864.3 1.5
GRUPO 1
10/04/2012
Quantificação do DNA
1 2 3 1A 2A 1M 2M
GRUPO 2
4 5 6 3A 4A 3M 4M
GRUPO 3
10/04/2012
Quantificação do DNA
7 8 9 5A 6A 5M 6M
GRUPO 4
10 11 12 7A 8A 7M 8M
GRUPO 5
10/04/2012
Quantificação do DNA
13 14 15 9A 10A 9M 10M
GRUPO 6
16 17 18 11A 12A 11M 12M
Grupo 1
1 – Soja 0%
2 – Soja 5%
3 – Grãos de soja convencional
4 – Grãos de soja convencional
5 – Grãos de soja convencional
6 – Leite processado
7 – Carne processada
8 – Folha de milho convencional
9 – Folha de milho transgênico
10 – Controle Negativo
PCR - Primer LEC
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Grupo 2
1 – Soja 0%
2 – Soja 5%
3 – Grãos de soja convencional
4 – Grãos de soja convencional
5 – Grãos de soja convencional
6 – Leite processado
7 – Carne processada
8 – Folha de milho convencional
9 – Folha de milho transgênico
10 – Controle Negativo
PCR - Primer RR
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Grupo 3
1 – Soja 0%
2 – Soja 5%
3 – Grãos de soja convencional
4 – Grãos de soja convencional
5 – Grãos de soja convencional
6 – Leite processado
7 – Carne processada
8 – Folha de milho convencional
9 – Folha de milho transgênico
10 – Controle Negativo
PCR - Primer 35S
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Grupo 4
1 – Soja 0%
2 – Soja 5%
3 – Grãos de soja transgênica
4 – Grãos de soja transgênica
5 – Grãos de soja transgênica
6 – Leite processado
7 – Carne processada
8 – Folha de milho convencional
9 – Folha de milho transgênico
10 – Controle Negativo
PCR - Primer LEC
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Grupo 5
1 – Soja 0%
2 – Soja 5%
3 – Grãos de soja transgênica
4 – Grãos de soja transgênica
5 – Grãos de soja transgênica
6 – Leite processado
7 – Carne processada
8 – Folha de milho convencional
9 – Folha de milho transgênico
10 – Controle Negativo
PCR - Primer RR
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Grupo 6
1 – Soja 0%
2 – Soja 5%
3 – Grãos de soja transgênica
4 – Grãos de soja transgênica
5 – Grãos de soja transgênica
6 – Leite processado
7 – Carne processada
8 – Folha de milho convencional
9 – Folha de milho transgênico
10 – Controle Negativo
PCR - Primer 35S
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10