profa.alessandra barone prof ... · diagnóstico laboratorial fase crônica ... inflamação e...

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www.profbio.com.br Profa.Alessandra Barone Prof. Archangelo P. Fernandes

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Page 1: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

wwwprofbiocombr

ProfaAlessandra Barone

Prof Archangelo P Fernandes

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull Filo Sarcomastigophora

bull Classe Zoomastigophorea

bull Ordem Kinetoplastida

bull Famiacutelia Trypanosomatidae

bull Gecircneros Trypanosoma

bull Espeacutecie T cruzi

Trypanosoma cruzi

bull Distribuiccedilatildeo geograacutefica sul dos Estados Unidos ao sul da Argentina

bull Ciclo bioloacutegico em hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro vertebrado

ndash Homem e mamiacuteferos de vaacuterias ordens (silvestres e domiciliares) marsupiais (gambaacutes e cuiacutecas) edentados (tatus tamanduaacutes e preguiccedila) roedores catildees gatos entre outros

bull Hospedeiro invertebrado - Vetores

ndash Insetos hematoacutefagos (machos e fecircmeas) da subfamiacutelia Triatominae

Triatoma infestans

Triatoma infestans

Panstrongylus megistus

Panstrongylus megistus

Rhodnius prolixus

Rhodnius prolixus

Trypanosoma cruzi

bull Formas evolutivas

bull H invertebrado

ndash Epimastigota

ndash Tripomastigota metaciacuteclica

bull H vertebrado

ndash Amastigota ndash intracelulares (ceacutelulas musculares ceacutelulas de Schwann fibroblastos etc)

ndash Tripomastigota sanguiacutenea

Trypanosoma cruzi

bull Ciclo evolutivo ndash O triatomiacuteneo pica o homem e durante o repasto

sanguiacuteneo defeca e urina na pele

ndash Enquanto se alimenta libera no local substacircncias anesteacutesicas que o permitem promover um repasto demorado

ndash Prurido local e entrada das formas tripomastigotas metaciacuteclicas

ndash Fagocitose pelos macroacutefagos teciduais

ndash Transformaccedilatildeo das formas tripomastigotas em amastigotas intracelulares

Trypanosoma cruzi

ndash Divisatildeo das formas amastigotas diferenciaccedilatildeo em tripomastigotas rompimento do macroacutefago e liberaccedilatildeo de novas formas no interstiacutecio

ndash As formas tripomastigotas caem na corrente sanguiacutenea atingindo outras ceacutelulas

ndash Os triatomiacuteneos se infectam ao ingerir formas tripomastigotas sanguiacuteneas do hospedeiro vertebrado

Trypanosoma cruzi

ndash Estocircmago do vetor tripomastigotas se diferenciam em epimastigotas

ndash Intestino do vetor divisatildeo de epimastigotas por fissatildeo binaacuteria simples

ndash Porccedilatildeo final do tubo digestivo epimastigotas se diferenciam em tripomastigota metaciacuteclica forma infectante para o homem e entatildeo satildeo liberados nas fezes e urina do vetor

Tripomastigota

Cinetoplasto posterior ao nuacutecleo

cinetoplasto

Tripomastigota

Epimastigota

Cinetoplasto anterior ao nuacutecleo

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 2: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull Filo Sarcomastigophora

bull Classe Zoomastigophorea

bull Ordem Kinetoplastida

bull Famiacutelia Trypanosomatidae

bull Gecircneros Trypanosoma

bull Espeacutecie T cruzi

Trypanosoma cruzi

bull Distribuiccedilatildeo geograacutefica sul dos Estados Unidos ao sul da Argentina

bull Ciclo bioloacutegico em hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro vertebrado

ndash Homem e mamiacuteferos de vaacuterias ordens (silvestres e domiciliares) marsupiais (gambaacutes e cuiacutecas) edentados (tatus tamanduaacutes e preguiccedila) roedores catildees gatos entre outros

bull Hospedeiro invertebrado - Vetores

ndash Insetos hematoacutefagos (machos e fecircmeas) da subfamiacutelia Triatominae

Triatoma infestans

Triatoma infestans

Panstrongylus megistus

Panstrongylus megistus

Rhodnius prolixus

Rhodnius prolixus

Trypanosoma cruzi

bull Formas evolutivas

bull H invertebrado

ndash Epimastigota

ndash Tripomastigota metaciacuteclica

bull H vertebrado

ndash Amastigota ndash intracelulares (ceacutelulas musculares ceacutelulas de Schwann fibroblastos etc)

ndash Tripomastigota sanguiacutenea

Trypanosoma cruzi

bull Ciclo evolutivo ndash O triatomiacuteneo pica o homem e durante o repasto

sanguiacuteneo defeca e urina na pele

ndash Enquanto se alimenta libera no local substacircncias anesteacutesicas que o permitem promover um repasto demorado

ndash Prurido local e entrada das formas tripomastigotas metaciacuteclicas

ndash Fagocitose pelos macroacutefagos teciduais

ndash Transformaccedilatildeo das formas tripomastigotas em amastigotas intracelulares

Trypanosoma cruzi

ndash Divisatildeo das formas amastigotas diferenciaccedilatildeo em tripomastigotas rompimento do macroacutefago e liberaccedilatildeo de novas formas no interstiacutecio

ndash As formas tripomastigotas caem na corrente sanguiacutenea atingindo outras ceacutelulas

ndash Os triatomiacuteneos se infectam ao ingerir formas tripomastigotas sanguiacuteneas do hospedeiro vertebrado

Trypanosoma cruzi

ndash Estocircmago do vetor tripomastigotas se diferenciam em epimastigotas

ndash Intestino do vetor divisatildeo de epimastigotas por fissatildeo binaacuteria simples

ndash Porccedilatildeo final do tubo digestivo epimastigotas se diferenciam em tripomastigota metaciacuteclica forma infectante para o homem e entatildeo satildeo liberados nas fezes e urina do vetor

Tripomastigota

Cinetoplasto posterior ao nuacutecleo

cinetoplasto

Tripomastigota

Epimastigota

Cinetoplasto anterior ao nuacutecleo

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 3: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Trypanosoma cruzi

bull Distribuiccedilatildeo geograacutefica sul dos Estados Unidos ao sul da Argentina

bull Ciclo bioloacutegico em hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro vertebrado

ndash Homem e mamiacuteferos de vaacuterias ordens (silvestres e domiciliares) marsupiais (gambaacutes e cuiacutecas) edentados (tatus tamanduaacutes e preguiccedila) roedores catildees gatos entre outros

bull Hospedeiro invertebrado - Vetores

ndash Insetos hematoacutefagos (machos e fecircmeas) da subfamiacutelia Triatominae

Triatoma infestans

Triatoma infestans

Panstrongylus megistus

Panstrongylus megistus

Rhodnius prolixus

Rhodnius prolixus

Trypanosoma cruzi

bull Formas evolutivas

bull H invertebrado

ndash Epimastigota

ndash Tripomastigota metaciacuteclica

bull H vertebrado

ndash Amastigota ndash intracelulares (ceacutelulas musculares ceacutelulas de Schwann fibroblastos etc)

ndash Tripomastigota sanguiacutenea

Trypanosoma cruzi

bull Ciclo evolutivo ndash O triatomiacuteneo pica o homem e durante o repasto

sanguiacuteneo defeca e urina na pele

ndash Enquanto se alimenta libera no local substacircncias anesteacutesicas que o permitem promover um repasto demorado

ndash Prurido local e entrada das formas tripomastigotas metaciacuteclicas

ndash Fagocitose pelos macroacutefagos teciduais

ndash Transformaccedilatildeo das formas tripomastigotas em amastigotas intracelulares

Trypanosoma cruzi

ndash Divisatildeo das formas amastigotas diferenciaccedilatildeo em tripomastigotas rompimento do macroacutefago e liberaccedilatildeo de novas formas no interstiacutecio

ndash As formas tripomastigotas caem na corrente sanguiacutenea atingindo outras ceacutelulas

ndash Os triatomiacuteneos se infectam ao ingerir formas tripomastigotas sanguiacuteneas do hospedeiro vertebrado

Trypanosoma cruzi

ndash Estocircmago do vetor tripomastigotas se diferenciam em epimastigotas

ndash Intestino do vetor divisatildeo de epimastigotas por fissatildeo binaacuteria simples

ndash Porccedilatildeo final do tubo digestivo epimastigotas se diferenciam em tripomastigota metaciacuteclica forma infectante para o homem e entatildeo satildeo liberados nas fezes e urina do vetor

Tripomastigota

Cinetoplasto posterior ao nuacutecleo

cinetoplasto

Tripomastigota

Epimastigota

Cinetoplasto anterior ao nuacutecleo

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 4: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Triatoma infestans

Triatoma infestans

Panstrongylus megistus

Panstrongylus megistus

Rhodnius prolixus

Rhodnius prolixus

Trypanosoma cruzi

bull Formas evolutivas

bull H invertebrado

ndash Epimastigota

ndash Tripomastigota metaciacuteclica

bull H vertebrado

ndash Amastigota ndash intracelulares (ceacutelulas musculares ceacutelulas de Schwann fibroblastos etc)

ndash Tripomastigota sanguiacutenea

Trypanosoma cruzi

bull Ciclo evolutivo ndash O triatomiacuteneo pica o homem e durante o repasto

sanguiacuteneo defeca e urina na pele

ndash Enquanto se alimenta libera no local substacircncias anesteacutesicas que o permitem promover um repasto demorado

ndash Prurido local e entrada das formas tripomastigotas metaciacuteclicas

ndash Fagocitose pelos macroacutefagos teciduais

ndash Transformaccedilatildeo das formas tripomastigotas em amastigotas intracelulares

Trypanosoma cruzi

ndash Divisatildeo das formas amastigotas diferenciaccedilatildeo em tripomastigotas rompimento do macroacutefago e liberaccedilatildeo de novas formas no interstiacutecio

ndash As formas tripomastigotas caem na corrente sanguiacutenea atingindo outras ceacutelulas

ndash Os triatomiacuteneos se infectam ao ingerir formas tripomastigotas sanguiacuteneas do hospedeiro vertebrado

Trypanosoma cruzi

ndash Estocircmago do vetor tripomastigotas se diferenciam em epimastigotas

ndash Intestino do vetor divisatildeo de epimastigotas por fissatildeo binaacuteria simples

ndash Porccedilatildeo final do tubo digestivo epimastigotas se diferenciam em tripomastigota metaciacuteclica forma infectante para o homem e entatildeo satildeo liberados nas fezes e urina do vetor

Tripomastigota

Cinetoplasto posterior ao nuacutecleo

cinetoplasto

Tripomastigota

Epimastigota

Cinetoplasto anterior ao nuacutecleo

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 5: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Triatoma infestans

Panstrongylus megistus

Panstrongylus megistus

Rhodnius prolixus

Rhodnius prolixus

Trypanosoma cruzi

bull Formas evolutivas

bull H invertebrado

ndash Epimastigota

ndash Tripomastigota metaciacuteclica

bull H vertebrado

ndash Amastigota ndash intracelulares (ceacutelulas musculares ceacutelulas de Schwann fibroblastos etc)

ndash Tripomastigota sanguiacutenea

Trypanosoma cruzi

bull Ciclo evolutivo ndash O triatomiacuteneo pica o homem e durante o repasto

sanguiacuteneo defeca e urina na pele

ndash Enquanto se alimenta libera no local substacircncias anesteacutesicas que o permitem promover um repasto demorado

ndash Prurido local e entrada das formas tripomastigotas metaciacuteclicas

ndash Fagocitose pelos macroacutefagos teciduais

ndash Transformaccedilatildeo das formas tripomastigotas em amastigotas intracelulares

Trypanosoma cruzi

ndash Divisatildeo das formas amastigotas diferenciaccedilatildeo em tripomastigotas rompimento do macroacutefago e liberaccedilatildeo de novas formas no interstiacutecio

ndash As formas tripomastigotas caem na corrente sanguiacutenea atingindo outras ceacutelulas

ndash Os triatomiacuteneos se infectam ao ingerir formas tripomastigotas sanguiacuteneas do hospedeiro vertebrado

Trypanosoma cruzi

ndash Estocircmago do vetor tripomastigotas se diferenciam em epimastigotas

ndash Intestino do vetor divisatildeo de epimastigotas por fissatildeo binaacuteria simples

ndash Porccedilatildeo final do tubo digestivo epimastigotas se diferenciam em tripomastigota metaciacuteclica forma infectante para o homem e entatildeo satildeo liberados nas fezes e urina do vetor

Tripomastigota

Cinetoplasto posterior ao nuacutecleo

cinetoplasto

Tripomastigota

Epimastigota

Cinetoplasto anterior ao nuacutecleo

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 6: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Panstrongylus megistus

Panstrongylus megistus

Rhodnius prolixus

Rhodnius prolixus

Trypanosoma cruzi

bull Formas evolutivas

bull H invertebrado

ndash Epimastigota

ndash Tripomastigota metaciacuteclica

bull H vertebrado

ndash Amastigota ndash intracelulares (ceacutelulas musculares ceacutelulas de Schwann fibroblastos etc)

ndash Tripomastigota sanguiacutenea

Trypanosoma cruzi

bull Ciclo evolutivo ndash O triatomiacuteneo pica o homem e durante o repasto

sanguiacuteneo defeca e urina na pele

ndash Enquanto se alimenta libera no local substacircncias anesteacutesicas que o permitem promover um repasto demorado

ndash Prurido local e entrada das formas tripomastigotas metaciacuteclicas

ndash Fagocitose pelos macroacutefagos teciduais

ndash Transformaccedilatildeo das formas tripomastigotas em amastigotas intracelulares

Trypanosoma cruzi

ndash Divisatildeo das formas amastigotas diferenciaccedilatildeo em tripomastigotas rompimento do macroacutefago e liberaccedilatildeo de novas formas no interstiacutecio

ndash As formas tripomastigotas caem na corrente sanguiacutenea atingindo outras ceacutelulas

ndash Os triatomiacuteneos se infectam ao ingerir formas tripomastigotas sanguiacuteneas do hospedeiro vertebrado

Trypanosoma cruzi

ndash Estocircmago do vetor tripomastigotas se diferenciam em epimastigotas

ndash Intestino do vetor divisatildeo de epimastigotas por fissatildeo binaacuteria simples

ndash Porccedilatildeo final do tubo digestivo epimastigotas se diferenciam em tripomastigota metaciacuteclica forma infectante para o homem e entatildeo satildeo liberados nas fezes e urina do vetor

Tripomastigota

Cinetoplasto posterior ao nuacutecleo

cinetoplasto

Tripomastigota

Epimastigota

Cinetoplasto anterior ao nuacutecleo

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 7: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Panstrongylus megistus

Rhodnius prolixus

Rhodnius prolixus

Trypanosoma cruzi

bull Formas evolutivas

bull H invertebrado

ndash Epimastigota

ndash Tripomastigota metaciacuteclica

bull H vertebrado

ndash Amastigota ndash intracelulares (ceacutelulas musculares ceacutelulas de Schwann fibroblastos etc)

ndash Tripomastigota sanguiacutenea

Trypanosoma cruzi

bull Ciclo evolutivo ndash O triatomiacuteneo pica o homem e durante o repasto

sanguiacuteneo defeca e urina na pele

ndash Enquanto se alimenta libera no local substacircncias anesteacutesicas que o permitem promover um repasto demorado

ndash Prurido local e entrada das formas tripomastigotas metaciacuteclicas

ndash Fagocitose pelos macroacutefagos teciduais

ndash Transformaccedilatildeo das formas tripomastigotas em amastigotas intracelulares

Trypanosoma cruzi

ndash Divisatildeo das formas amastigotas diferenciaccedilatildeo em tripomastigotas rompimento do macroacutefago e liberaccedilatildeo de novas formas no interstiacutecio

ndash As formas tripomastigotas caem na corrente sanguiacutenea atingindo outras ceacutelulas

ndash Os triatomiacuteneos se infectam ao ingerir formas tripomastigotas sanguiacuteneas do hospedeiro vertebrado

Trypanosoma cruzi

ndash Estocircmago do vetor tripomastigotas se diferenciam em epimastigotas

ndash Intestino do vetor divisatildeo de epimastigotas por fissatildeo binaacuteria simples

ndash Porccedilatildeo final do tubo digestivo epimastigotas se diferenciam em tripomastigota metaciacuteclica forma infectante para o homem e entatildeo satildeo liberados nas fezes e urina do vetor

Tripomastigota

Cinetoplasto posterior ao nuacutecleo

cinetoplasto

Tripomastigota

Epimastigota

Cinetoplasto anterior ao nuacutecleo

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 8: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Rhodnius prolixus

Rhodnius prolixus

Trypanosoma cruzi

bull Formas evolutivas

bull H invertebrado

ndash Epimastigota

ndash Tripomastigota metaciacuteclica

bull H vertebrado

ndash Amastigota ndash intracelulares (ceacutelulas musculares ceacutelulas de Schwann fibroblastos etc)

ndash Tripomastigota sanguiacutenea

Trypanosoma cruzi

bull Ciclo evolutivo ndash O triatomiacuteneo pica o homem e durante o repasto

sanguiacuteneo defeca e urina na pele

ndash Enquanto se alimenta libera no local substacircncias anesteacutesicas que o permitem promover um repasto demorado

ndash Prurido local e entrada das formas tripomastigotas metaciacuteclicas

ndash Fagocitose pelos macroacutefagos teciduais

ndash Transformaccedilatildeo das formas tripomastigotas em amastigotas intracelulares

Trypanosoma cruzi

ndash Divisatildeo das formas amastigotas diferenciaccedilatildeo em tripomastigotas rompimento do macroacutefago e liberaccedilatildeo de novas formas no interstiacutecio

ndash As formas tripomastigotas caem na corrente sanguiacutenea atingindo outras ceacutelulas

ndash Os triatomiacuteneos se infectam ao ingerir formas tripomastigotas sanguiacuteneas do hospedeiro vertebrado

Trypanosoma cruzi

ndash Estocircmago do vetor tripomastigotas se diferenciam em epimastigotas

ndash Intestino do vetor divisatildeo de epimastigotas por fissatildeo binaacuteria simples

ndash Porccedilatildeo final do tubo digestivo epimastigotas se diferenciam em tripomastigota metaciacuteclica forma infectante para o homem e entatildeo satildeo liberados nas fezes e urina do vetor

Tripomastigota

Cinetoplasto posterior ao nuacutecleo

cinetoplasto

Tripomastigota

Epimastigota

Cinetoplasto anterior ao nuacutecleo

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 9: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Rhodnius prolixus

Trypanosoma cruzi

bull Formas evolutivas

bull H invertebrado

ndash Epimastigota

ndash Tripomastigota metaciacuteclica

bull H vertebrado

ndash Amastigota ndash intracelulares (ceacutelulas musculares ceacutelulas de Schwann fibroblastos etc)

ndash Tripomastigota sanguiacutenea

Trypanosoma cruzi

bull Ciclo evolutivo ndash O triatomiacuteneo pica o homem e durante o repasto

sanguiacuteneo defeca e urina na pele

ndash Enquanto se alimenta libera no local substacircncias anesteacutesicas que o permitem promover um repasto demorado

ndash Prurido local e entrada das formas tripomastigotas metaciacuteclicas

ndash Fagocitose pelos macroacutefagos teciduais

ndash Transformaccedilatildeo das formas tripomastigotas em amastigotas intracelulares

Trypanosoma cruzi

ndash Divisatildeo das formas amastigotas diferenciaccedilatildeo em tripomastigotas rompimento do macroacutefago e liberaccedilatildeo de novas formas no interstiacutecio

ndash As formas tripomastigotas caem na corrente sanguiacutenea atingindo outras ceacutelulas

ndash Os triatomiacuteneos se infectam ao ingerir formas tripomastigotas sanguiacuteneas do hospedeiro vertebrado

Trypanosoma cruzi

ndash Estocircmago do vetor tripomastigotas se diferenciam em epimastigotas

ndash Intestino do vetor divisatildeo de epimastigotas por fissatildeo binaacuteria simples

ndash Porccedilatildeo final do tubo digestivo epimastigotas se diferenciam em tripomastigota metaciacuteclica forma infectante para o homem e entatildeo satildeo liberados nas fezes e urina do vetor

Tripomastigota

Cinetoplasto posterior ao nuacutecleo

cinetoplasto

Tripomastigota

Epimastigota

Cinetoplasto anterior ao nuacutecleo

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 10: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Trypanosoma cruzi

bull Formas evolutivas

bull H invertebrado

ndash Epimastigota

ndash Tripomastigota metaciacuteclica

bull H vertebrado

ndash Amastigota ndash intracelulares (ceacutelulas musculares ceacutelulas de Schwann fibroblastos etc)

ndash Tripomastigota sanguiacutenea

Trypanosoma cruzi

bull Ciclo evolutivo ndash O triatomiacuteneo pica o homem e durante o repasto

sanguiacuteneo defeca e urina na pele

ndash Enquanto se alimenta libera no local substacircncias anesteacutesicas que o permitem promover um repasto demorado

ndash Prurido local e entrada das formas tripomastigotas metaciacuteclicas

ndash Fagocitose pelos macroacutefagos teciduais

ndash Transformaccedilatildeo das formas tripomastigotas em amastigotas intracelulares

Trypanosoma cruzi

ndash Divisatildeo das formas amastigotas diferenciaccedilatildeo em tripomastigotas rompimento do macroacutefago e liberaccedilatildeo de novas formas no interstiacutecio

ndash As formas tripomastigotas caem na corrente sanguiacutenea atingindo outras ceacutelulas

ndash Os triatomiacuteneos se infectam ao ingerir formas tripomastigotas sanguiacuteneas do hospedeiro vertebrado

Trypanosoma cruzi

ndash Estocircmago do vetor tripomastigotas se diferenciam em epimastigotas

ndash Intestino do vetor divisatildeo de epimastigotas por fissatildeo binaacuteria simples

ndash Porccedilatildeo final do tubo digestivo epimastigotas se diferenciam em tripomastigota metaciacuteclica forma infectante para o homem e entatildeo satildeo liberados nas fezes e urina do vetor

Tripomastigota

Cinetoplasto posterior ao nuacutecleo

cinetoplasto

Tripomastigota

Epimastigota

Cinetoplasto anterior ao nuacutecleo

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 11: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Trypanosoma cruzi

bull Ciclo evolutivo ndash O triatomiacuteneo pica o homem e durante o repasto

sanguiacuteneo defeca e urina na pele

ndash Enquanto se alimenta libera no local substacircncias anesteacutesicas que o permitem promover um repasto demorado

ndash Prurido local e entrada das formas tripomastigotas metaciacuteclicas

ndash Fagocitose pelos macroacutefagos teciduais

ndash Transformaccedilatildeo das formas tripomastigotas em amastigotas intracelulares

Trypanosoma cruzi

ndash Divisatildeo das formas amastigotas diferenciaccedilatildeo em tripomastigotas rompimento do macroacutefago e liberaccedilatildeo de novas formas no interstiacutecio

ndash As formas tripomastigotas caem na corrente sanguiacutenea atingindo outras ceacutelulas

ndash Os triatomiacuteneos se infectam ao ingerir formas tripomastigotas sanguiacuteneas do hospedeiro vertebrado

Trypanosoma cruzi

ndash Estocircmago do vetor tripomastigotas se diferenciam em epimastigotas

ndash Intestino do vetor divisatildeo de epimastigotas por fissatildeo binaacuteria simples

ndash Porccedilatildeo final do tubo digestivo epimastigotas se diferenciam em tripomastigota metaciacuteclica forma infectante para o homem e entatildeo satildeo liberados nas fezes e urina do vetor

Tripomastigota

Cinetoplasto posterior ao nuacutecleo

cinetoplasto

Tripomastigota

Epimastigota

Cinetoplasto anterior ao nuacutecleo

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 12: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Trypanosoma cruzi

ndash Divisatildeo das formas amastigotas diferenciaccedilatildeo em tripomastigotas rompimento do macroacutefago e liberaccedilatildeo de novas formas no interstiacutecio

ndash As formas tripomastigotas caem na corrente sanguiacutenea atingindo outras ceacutelulas

ndash Os triatomiacuteneos se infectam ao ingerir formas tripomastigotas sanguiacuteneas do hospedeiro vertebrado

Trypanosoma cruzi

ndash Estocircmago do vetor tripomastigotas se diferenciam em epimastigotas

ndash Intestino do vetor divisatildeo de epimastigotas por fissatildeo binaacuteria simples

ndash Porccedilatildeo final do tubo digestivo epimastigotas se diferenciam em tripomastigota metaciacuteclica forma infectante para o homem e entatildeo satildeo liberados nas fezes e urina do vetor

Tripomastigota

Cinetoplasto posterior ao nuacutecleo

cinetoplasto

Tripomastigota

Epimastigota

Cinetoplasto anterior ao nuacutecleo

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 13: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Trypanosoma cruzi

ndash Estocircmago do vetor tripomastigotas se diferenciam em epimastigotas

ndash Intestino do vetor divisatildeo de epimastigotas por fissatildeo binaacuteria simples

ndash Porccedilatildeo final do tubo digestivo epimastigotas se diferenciam em tripomastigota metaciacuteclica forma infectante para o homem e entatildeo satildeo liberados nas fezes e urina do vetor

Tripomastigota

Cinetoplasto posterior ao nuacutecleo

cinetoplasto

Tripomastigota

Epimastigota

Cinetoplasto anterior ao nuacutecleo

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 14: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Tripomastigota

Cinetoplasto posterior ao nuacutecleo

cinetoplasto

Tripomastigota

Epimastigota

Cinetoplasto anterior ao nuacutecleo

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 15: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

cinetoplasto

Tripomastigota

Epimastigota

Cinetoplasto anterior ao nuacutecleo

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 16: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Epimastigota

Cinetoplasto anterior ao nuacutecleo

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 17: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Amastigota

Amastigotas Amastigotas e tripomastigotas

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 18: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Monoacutecito parasitado com as formas amastigotas

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 19: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Doenccedila de Chagas

bull Trypanosoma cruzi (Chagas 1909)

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 20: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Diagnoacutestico laboratorial Fase aguda

bull Alta parasitemia

bull Pesquisa do parasito

ndash Exame de sangue a fresco

ndash Exame de sangue em gota espessa

ndash Esfregaccedilo sanguiacuteneo corado pelo Giemsa

ndash Microhematoacutecrito

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo

ndash Inoculaccedilatildeo em aninais

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 21: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Exame direto a fresco

bull Parasitas abundantes nos primeiros dias e semanas de incubaccedilatildeo

bull Colocar uma gota de sangue entre lacircmina e lamiacutenula e examinar imediatamente apoacutes a coleta para evitar a coagulaccedilatildeo

bull Para retardar a coagulaccedilatildeo adicionar uma gota de soluccedilatildeo salina

bull Analisar em microscoacutepio oacuteptico a presenccedila das formas tripomastigotas

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 22: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Exame de sangue em gota espessa

bull Analisa uma maior quantidade de material bioloacutegico

bull Verifica a presenccedila de formas tripomastigotas sanguiacuteneas ndash Colocar 3 gotas de sangue na lacircmina ndash Com o canto de outra espalhar o material em uma

aacuterea de aproximadamente 1 cm da lacircmina ndash Deixar secar ao ar durante 6 horas Natildeo ultrapassar 36

horas ndash Corar pelo Giemsa Deixar em repouso por 30 min ndash Lavar e examinar

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 23: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

bull Colocar uma gota de sangue na extremidade direita da lacircmina

bull Pegar outra lacircmina segurar por cima com a matildeo direita e com uma inclinaccedilatildeo de 45deg encostar adiante da gota

bull Deixar mesma se espalhar pela superfiacutecie de contato das duas lacircminas

bull Puxar a gota espalhada ateacute o final de lacircmina

bull Secar e corar pelo Giemsa ou Leishman

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 24: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Esfregaccedilo sanguiacuteneo

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 25: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Microhematoacutecrito Creme leucocitaacuterio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 26: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Microhematoacutecrito

bull Colher sangue em tubo capilar

bull Centrifugar em microcentriacutefuga por 5 minutos agrave 10000 rpm

bull Avaliar o microhematocrito em microscopia oacuteptica

bull Verificar a presenccedila das formas tripomastigotas presentes no creme leucocitaacuterio

bull Se positivo realizar esfregaccedilo do creme leucocitaacuterio

bull Fixar com aacutelcool metiacutelico e corar com Gienza Analisar em microscoacutepio oacuteptico

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 27: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Meacutetodo de concentraccedilatildeo

bull Meacutetodo de Strout

ndash Realizar a coleta de sangue em tubo sem anticoagulante

ndash Aguardar a retraccedilatildeo do coaacutegulo Os parasitas concentrar-se-atildeo no soro a medida que ocorrer a retraccedilatildeo do coaacutegulo

ndash O soro eacute centrifugado para anaacutelise do sedimento

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 28: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Inoculaccedilatildeo em animais

bull Inoculaccedilatildeo de sangue ou creme leucocitaacuterio em camundongos jovens

bull Inoculaccedilatildeo intra-peritoneal intra-conjuntival e a via oral

bull Avaliaccedilatildeo das formas de Tcruzi

bull Teacutecnica utilizada em pesquisa

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 29: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Diagnoacutestico laboratorial Fase crocircnica

bull Xenodiagnoacutestico bull Hemocultura bull Reaccedilatildeo de hemaglutinaccedilatildeo indireta bull RIFI bull ELISA bull PCR bull PaGIA bull LMCo bull Pesquisa de anticorpos antitripomastigotas vivos

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 30: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Hemocultura

bull Meio LIT ndash Liver Infusion Triptose

bull Meio NNN ndash McNeal Novy e Nicolle

bull Utilizaccedilatildeo de 30ml de sangue heparinizado

bull Centrifugaccedilatildeo por 30 minutos em 3000 rpm

bull Despreza-se o plasma e o sedimento celular eacute lavado com meio LIT ( Liver Infusion Triptose) para eliminaccedilatildeo de possiacuteveis anticorpos

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 31: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Hemocultura

bull Sedimento distribuiacutedo em 6 tubos com 5 ml de LIT

bull Os tubos satildeo mantidos a 28degC homogeneizados 3x semana e avaliados quinzenalmente ateacute 90 dias

bull Centrifugaccedilatildeo e avaliaccedilatildeo do sedimento de hemaacutecias

bull Leitura realizada pela observaccedilatildeo microscoacutepica de gotas do meio

bull Aumento da positividade para sangue processado imediatamente apoacutes a coleta cultivado em prazo de tempo maior (120 dias) e repeticcedilatildeo da teacutecnica por 3 vezes

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 32: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Wuchereria bancrofti

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 33: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Taxonomia

bull Reino Animalia

bull Filo Nematoda

bull Classe Secernentea

bull Ordem Filariidea

bull Superfamiacutelia Filarioidea

bull FamiacuteliaOnchocercidae

bull GecircnerosWuchereria

bull Espeacutecie Wbancrofti

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 34: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Formas evolutivas

bull Heteroxecircnico

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Hospedeiro intermediaacuterio Culex quinquefasciatus

bull Formas evolutivas ndash HV verme adulto (fecircmea e macho) localizados nos

vasos e gacircnglios linfaacuteticos da regiatildeo abdominal peacutelvica (perna e escroto) mamas e braccedilo

ndash microfilaacuterias eliminadas pelas fecircmeas graacutevidas Saem dos ductos linfaacuteticos e atingem circulaccedilatildeo sanguiacutenea

ndash HI larva L1 L2 e L3 (infectante)

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 35: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Culex quinquefasciatus

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 36: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Morfologia

bull Macho 35 a 4 cm x 01mm com extremidade posterior enrrolada ventralmente

bull Fecircmea 7 a 10cm x 03 mm com vagina exteriorizada em uma vulva localizada proacutexima agrave extremidade anterior

bull Microfilaacuteria Presenccedila de bainha e estilete bucal na parte anterior que as diferencia de outros filariacutedeos sanguiacuteneos Possuem 250 a 300 microm e uma grande qtde de nuacutecleos

bull Larva L3 possui aproximadamente 15 a 20 mm de comprimento

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 37: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Microfilaacuteria

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 38: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Ciclo evolutivo

bull Fecircmea do inseto realiza o hematofagismo noturno e ingere as microfilaacuterias

bull Estocircmago do vetor microfilaacuterias perdem a bainha atravessam a parede do estocircmago e migram para os muacutesculos toraacutecicos ndash L1

bull Apoacutes 20 dias a larva estaacute na forma infectante L3 medindo aproximadamente 2mm

bull Migraccedilatildeo da larva para a proboacutescida concentrando-se no laacutebio do moquito

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 39: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Microfilaacuteria Presenccedila de bainha Cauda pontuda com nuacutecleos grandes largos e bem separados Nuacutecleos caudais em fila uacutenica

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 40: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Ciclo evolutivo

bull Repasto sanguiacuteneo do inseto infectado

ndash As larvas L3 migram do laacutebio do vetor para a pele do HV

ndash Migram para os vasos linfaacuteticos e tornam-se vermes adultos

ndash Apoacutes 8 meses as fecircmeas graacutevidas produzem as primeiras microfilaacuterias

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 41: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Periodicidade

bull Periodicidade noturna das microfilaacuterias

ndash Durante o dia localizam-se nos capilares profundos

ndash Durante a noite vasos sanguiacuteneos perifeacutericos

ndash Pico da microfilaremia meia-noite coincidindo com o horaacuterio de hematofagismo do inseto transmissor

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 42: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Patologia

bull Periacuteodo assintomaacutetico bull Fase aguda bull Processos inflamatoacuterios produzidos por larvas L4 e adultos jovens

que colonizam as vias linfaacuteticas ndash Linfadenites linfonodos inguinais epitrocleanos e axilares com

desenvolvimento de granulomas com calcificaccedilatildeo apoacutes a morte dos vermes

ndash Linfangite inflamaccedilatildeo e dilataccedilatildeo dos vasos linfaacuteticos ndash Febre mal estar ndash Funiculite filariana linfangite do cordatildeo espermaacutetico e varicocele

bull Fase crocircnica ndash Hidrocele ndash Linfedema ndash Quiluacuteria ndash Elefantiacutease

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 43: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Quiluacuteria

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 44: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Patologia

bull Processos obstrutivos ndash Formaccedilatildeo de novelos envolvidos por reaccedilatildeo

inflamatoacuteria e pela formaccedilatildeo de fibrose

ndash Estase e congestatildeo da linfa produzindo linfoedema tecidual

ndash Extravasamento produzindo derrame linfaacutetico ascite linfaacutetica linfuacuteria linforreacuteia linfotoacuterax linfocele etc

ndash A ruptura de vasos linfaacuteticos para o interior do sistema excretor urinaacuterio daacute origem agrave quiluacuteria

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 45: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Patologia

bull Complicaccedilotildees associadas agrave filariose

ndash Elefantiacutease

bull Caracterizada por processo inflamatoacuterio e fibrose crocircnica do oacutergatildeo atingido

bull Hipertrofia da derme do tecido conjuntivo aumento exagerado do volume do oacutergatildeo com queratinizaccedilatildeo e rugosidade

bull A pele perde a elasticidade resseca e se torna sujeita a infecccedilotildees bacterianas

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 46: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Patologia

bull Permanecimento na aacuterea endecircmica

bull Nuacutemero de larvas inoculadas

bull Frequecircncia das re-infecccedilotildees

bull O nuacutemero de acasalamento dos vermes e suas localizaccedilotildees anatocircmicas

bull A sensibilizaccedilatildeo do organismo e a intensidade das reaccedilotildees inflamatoacuterias do paciente

bull As infecccedilotildees bacterianas associadas

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 47: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Diagnoacutestico

bull Pesquisa de microfilaacuterias no sangue perifeacuterico ndash 20 40 ou 60 microL- de preferecircncia entre as 10 h da noite e 4h da manhatilde

ndash Gota espessa Coloraccedilatildeo de Giemsa

ndash Meacutetodos de concentraccedilatildeo Filtraccedilatildeo em membrana de policarbonato milipore ou nucleopore

ndash Meacutetodo de Knott

bull Na fase crocircnica as microfilaacuterias raramente satildeo detectadas no sangue perifeacuterico

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 48: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Gota espessa

bull Possibilita a visualizaccedilatildeo da bainha fato que difere a microfilaria de W bancrofti de outro filariacutedeos sanguiacuteneos

bull Apresenta um baixo custo em comparaccedilatildeo com outras mais avanccediladas como a filtraccedilatildeo de sangue em membrana de policarbonato

bull Possui baixa sensibilidade natildeo indicada em situaccedilotildees em que os parasitados se mostram com baixa microfilaremia ou amicrofilarecircmicos

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 49: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Concentraccedilatildeo

bull Baseia-se na passagem de sangue venoso atraveacutes de uma membrana (Milipore ou Nuclepore) de diacircmetro de 13 a 25 mm e poros de 5 ou 3 μm

bull O material retido na membrana sendo fixado corado e observado ao microscoacutepio

bull Essa teacutecnica assim como a de Knott permite a identificaccedilatildeo de indiviacuteduos com baixiacutessimas parasitemias (quantidade de microfilarias natildeo detectaacuteveis pela teacutecnica de gota espessa)

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 50: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Teacutecnica de Knott

bull Retirar 2 ml de sangue total por punccedilatildeo venosa e colocar imediatamente em um tubo contendo 10 ml de formol a 2

bull Fechar o tubo e misture completamente invertendo-o e agitando-o O formol hemolisa as hemaacutecias mata fixa e distende as microfilaacuterias

bull Centrifugar o sangue a 1500 rpm por 5 minutos

bull Decantar o sobrenadante

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 51: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Teacutecnica de Knott

bull Retirar o sedimento com uma pipeta Pasteur e espalhar a gota espessa sobre uma lacircmina

bull Deixar secar bem e corar com Giemsa

bull Examinar com objetiva de imersatildeo

bull Esta teacutecnica possibilita que o exame microscoacutepico laboratorial seja realizado vaacuterios dias apoacutes a coleta de material realizada no campo

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 52: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Exames de imagem

bull Ultranossografia

ndash Possibilidade de visualizar os movimentos de vermes adultos vivos de W bancrofti em vaso linfaacutetico especificamente em vasos intraescrotais do cordatildeo espermaacutetico

ndash O movimento ativo e ininterrupto dos vermes adultos durante as 24 horas do dia eacute denominado sinal da ldquodanccedila das filaacuteriasrdquo

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 53: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Diagnoacutestico soroloacutegico

bull Teste imunocromatograacutefico desenvolvido pelo ICT Diagnostic - ICT card

ndash Teste qualilativo

ndash Cartatildeo possui ac de antifilaacuteria e o controle eacute formado por ac anti Ig G humano

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 54: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Plasmodium spp

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 55: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Taxonomia

bull Reino Protozoa

bull FiloApicomplexa

bull Classe Sporozoea

bull Ordem Hemosporidiida

bull Famiacutelia Plasmodiidae

bull Gecircneros Plasmodium

bull Espeacutecie Pfalciparum Pvivax Povale e Pmalariae

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 56: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Plasmodium

bull Ciclo bioloacutegico Hospedeiro vertebrado e invertebrado

bull Hospedeiro invertebrado ndash Vetor

ndash Fecircmeas hematoacutefagas do gecircnero Anopheles

ndash Brasil Anopheles (N)darlingi A (N) aquasalis A (N) albitarsis A (K) cruzii e A (K) bellator

ndash Possuem haacutebito noturno penetrando nas casas no crespuacutesculo saindo ao amanhecer

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 57: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Plasmodium

bull Hospedeiro vertebrado homem

bull Transmissatildeo

ndash Vetor

ndash Transfusatildeo de sangue

ndash Compartilhamento de seringas

ndash Acidente com agulhas

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 58: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo preacute-eritrociacutetico

ndash Forma inoculada esporozoiacutetos

ndash A fecircmea do anofelino infectado inocula no homem as formas infectantes localizadas na saliva

ndash Os esporozoiacutetas permancem na circulaccedilatildeo por aproximadamente uma hora

ndash Invadem os hepatoacutecitos e se diferenciam em trofozoiacutetas (criptozoiacuteto)

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 59: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

ndash Esquizogonia e formaccedilatildeo de esquizontes

ndash Divisatildeo nuclear e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos

ndash Aproximadamente 10000 merozoiacutetos por hepatoacutecito

ndash Rompimento do hepatoacutecito e liberaccedilatildeo de merozoiacutetos na circulaccedilatildeo

ndash Duraccedilatildeo do ciclo aprox 1 a 2 semanas

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 60: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Ciclo evolutivo

bull PVivax e Povale

ndash Alguns esporozoiacutetos geneticamente diferentes ficam na forma latente nos hepatoacutecitos permanecendo muitos meses Satildeo classificados como hipnozoiacuteto

ndash Satildeo responsaacuteveis pelas recaiacutedas tardias e formas de malaacuteria com periacuteodo de encubaccedilatildeo longo ndash 6 a 9 meses

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 61: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

FASE HEPAacuteTICA OU EXOERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito

FIacuteGADO

Invasatildeo do hepatoacutecito

Reproduccedilatildeo Assexuada

Esporozoiacutetos Lise dos hepatoacutecitos

Liberaccedilatildeo dos protozoaacuterios na corrente sanguumliacutenea

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 62: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Ciclo evolutivo ndash Hospedeiro Vertebrado

bull Ciclo eritrociacutetico

ndash Os merozoiacutetos invadem as hemaacutecias

ndash Diferenciaccedilatildeo em trofozoiacutetos

ndash Esquizogonia esquizonte

ndash Produccedilatildeo de merozoiacutetos e rompimento da hemaacutecia

ndash Merozoiacutetos invasatildeo de novas hemaacutecias

ndash Apoacutes algumas geraccedilotildees os merozoiacutetos natildeo mais se dividem e se diferenciam em gametoacutecitos ndash micro e macrogametoacutecito

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 63: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

FASE ERITROCIacuteTICA

Hepatoacutecito destruiacutedo pelos protozoaacuterios

Penetraccedilatildeo dos protozoaacuterios

Reproduccedilatildeo assexuada

Protozoaacuterios destroem as hemaacutecias

Diferenciaccedilatildeo em gametoacutecitos

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

Ciclo no hospedeiro invertebrado

Ocorre nas hemaacutecias ou Eritroacutecitos

nas hemaacutecias

Protozoaacuterio no interior da hemaacutecia

Hemaacutecia com gametoacutecito

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 64: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

T trofozoiacuteto Em esquizonte com merozoiacuteto

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 65: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Fase eritrociacutetica

bull Ciclo sanguiacuteneo ndash Pfalciparum P vivax e Povale 48 horas

ndash Pmalariae 72 horas

ndash Fonte de nutriccedilatildeo do Plasmodium no ciclo sanguiacuteneo hemoglobina

ndash Produccedilatildeo do pigmento malaacuterico hemozoiacutena bull Granulaccedilotildees de Schuffner Plasmodium vivax

bull Granulaccedilotildees de Maurer P falciparum

bull Granulaccedilotildees de Ziemann P malariae

ndash Fagocitose pelas ceacutelulas de Kuppffer e macroacutefagos do baccedilo

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 66: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 67: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Trofozoiacutetos Pfalciparum

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 68: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Esquizonte ndash P falciparum

Raros no sangue perifeacuterico Possuem 2 a 24 merozoiacutetos

Ocupam 23 do gloacutebulo vermelho

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 69: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Gametoacutecitos Pfalciparum

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 70: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Ciclo evolutivo Pvivax

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 71: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Esquizonte ndash P vivax

Satildeo grandes e ameboacuteides Cromatina organizada em duas ou mais massas

Possuem 2 a 24 merozoiacutetos com pontos de cromatina

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 72: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Gametoacutecito ndash Pvivax

Macrogametoacutecitos satildeo redondos ou ovais e ocupam toda ceacutelula hospedeira O citoplasma eacute geralmente corado de azul mais escuro e conteacutem pigmento marrom Microgametoacutecitos satildeo geralmente do tamanho de um RBC natildeo infectados com citoplasma corados de azul paacutelido rosa ou cinza

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 73: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Trofozoiacutetos - P malariae

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 74: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Esquizontes ndash P malariae

Aproximadamente 6 a 12 merozoiacutetos com arranjo de rosetas

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 75: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Gametoacutecitos ndash P malariae

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 76: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Ciclo evolutivo ndash HI

bull Ingestatildeo de hemaacutecias contendo gametoacutecitos durante o repasto sanguiacuteneo da fecircmea do anofelino

bull No intestino meacutedio do vetor gametogecircnese ndash Macrogametoacutecito ndash macrogameta feminino ndash Microgametoacutecito o processo de exflagelaccedilatildeo daacute

origem a 8 microgametas masculinos ndash Produccedilatildeo de ovo ou zigoto ndash O ovo encista na camada epitelial do intestino meacutedio

oocisto ndash Esporogonia liberaccedilatildeo de esporozoiacutetos

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 77: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Ciclo evolutivo ndash HInvertebrado

ndash Os esporozoiacutetos satildeo transportados pelo hemolinfa ateacute as glacircndulas salivares do vetor ateacute atingirem o ducto salivar

bull Inoculaccedilatildeo no hospedeiro vertebrado atraveacutes da picada do inseto

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 78: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Hemaacutecia com gametoacutecito

Fecircmeas de Anopheles sugam hemaacutecias com gametoacutecitos

CICLO NO INVERTEBRADO

No tubo digestivo

Zigoto

Penetraccedilatildeo na parede do tubo

digestivo

Migraccedilatildeo para as glacircndulas salivares

Desenvolvimento

Mosquito infectado

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 79: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Diagnoacutestico

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado e espesso corado pelo Giemsa

bull Sangue colhido sem anticoagulante para melhor fixaccedilatildeo em lacircmina

bull Esfregaccedilo sanguiacuteneo espesso eacute mais eficiente para detecccedilatildeo da infecccedilatildeo

bull Esfregaccedilo delgado eacute mais eficiente para diferenciaccedilatildeo morfoloacutegica das espeacutecies

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 80: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo semiquantitativo

ndash Exame de 100 campos microscoacutepicos com resultado expresso pelo sistema de cruzes

Parasitos contados Nuacutemero de campos

microscoacutepicos cruzes

40 a 60 100 +2

1 1 +

2-20 1 ++

21-200 1 +++

+ 200 1 ++++

Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

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Determinaccedilatildeo da densidade parasitaacuteria

bull Meacutetodo quantitativo derivado de anaacutelise semiquantitativa

Contagem de parasitos por campo

Cruzes Parasitos por mm3

40 a 60100 +2 200-300

1 + 301-500

2-20 ++ 501 - 10000

21-200 +++ 10001 ndash 100000

+ 200 ++++ 100000 ou mais

Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

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Diagnoacutestico

bull P falciparum

ndash Parte do ciclo celular aderido ao endoteacutelio capilar Encontro somente de trofozoitos e gametoacutecitos no sangue perifeacuterico

ndash Raramente os esquizontes satildeo encontrados no sangue perifeacuterico

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 83: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Diagnoacutestico ndash Pvivax ndash Encontro de todas as formas de desenvolvimento ndash

trofozoiacuteto jovem maduro esquizontes e gametoacutecitos

ndash Os trofozoiacutetos maduros tecircm geralmente um aspecto irregular com extensotildees ameboacuteides em seu citoplasma

Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

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Diagnoacutestico ndash Pvivax

ndash Os gametoacutecitos femininos coram-se mais intensamente que os masculinos e apresentam nuacutecleo mais compacto geralmente em localizaccedilatildeo perifeacuterica

ndash O pigmento malaacuterico geralmente eacute abundante

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

Page 85: Profa.Alessandra Barone Prof ... · Diagnóstico laboratorial Fase crônica ... inflamação e dilatação dos vasos linfáticos. ... e observado ao microscópio

Diagnoacutestico - Pmalariae

bull Realizado por meio de caracteriacutesticas morfoloacutegicas do parasito

ndash Verificaccedilatildeo em esfregaccedilo sanguiacuteneo delgado

ndash Posiccedilatildeo equatorial do parasito

ndash Desenvolvimento sem deformaccedilatildeo do eritroacutecito

Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

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Diagnoacutestico

bull QBC ndash Teacutecnica que combina concentraccedilatildeo dos parasitos

pela centrifugaccedilatildeo do sangue em em microhematoacutecrito e a coloraccedilatildeo dos aacutecidos nucleacuteicos do parasito pelo fluorcromo laranja de acridina

ndash Utilizaccedilatildeo de tubos especiais e microscopia epifluorescente

ndash Teste raacutepido

ndash Alta sensibilidade

Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

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Diagnoacutestico

bull ParaSight-F ( Becton amp Dickinson)

ndash Teste raacutepido para captura da proteiacutena rica em histidina 2 de Pfalciparum( PfHRP2) e enzimas conservadas de 4 espeacutecies de plasmoacutedio (DHL e aldolase

ndash Utilizaccedilatildeo de fita de nitrocelulose contendo ac monoclonal

ndash Lise de uma gota de sangue

ndash A reaccedilatildeo eacute revelada com adiccedilatildeo de ac policlonal anti-HRP2 conjugado com lipossomas contendo corante

Diagnoacutestico

bull PCR

ndash Sensibilidade e especificidade maior do que o esfregaccedilo sanguiacuteneo

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Diagnoacutestico

bull PCR

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